CC BY
22УДК: 619:616.98:636.52/.58
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ
МОНИТОРИНГ НАПРЯЖЕННОСТИ ИММУНИТЕТА ПРИ ВИРУСНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПТИЦ
Белявцева Е.А., кандидат ветеринарных наук, доцент; Гуренко И.А., кандидат ветеринарных наук, доцент; Балала К.Д., обучающийся, Институт «Агротехнологическая академия» ФГАО ВО «Крымский федеральный университет имени В.И.Вернадского».
В процессе работы проведен анализ эпизоотической ситуации в птицехозяйстве по вирусным респираторным болезням птиц: инфекционному бронхиту, инфекционному ла-ринготрахеиту, ньюкаслской болезни, гриппу птиц. Установлено, что эпизоотическая ситуация является стабильной и контролируемой за счет плановых профилактических вакцинаций. изучены результаты серологических исследований сыворотки крови от птицы в разные сроки ее выращивания. Напряженность иммунитета к ньюкаслской болезни составила 100-80 % при среднеарифметических титрах 5,6-3,5 log соответственно. Напряженность иммунитета к вирусу инфекционного ларинготрахеита в разные сроки исследования составила 91,6-95 % при среднеарифметических титрах 2,8-3,5 log. Напряженность иммунитета к вирусу инфекционно-
SEROLOGICAL MONITORING OF IMMUNITY INTENSITY IN VIRAL RESPIRATORY DISEASES OF BIRDS
Belyavtseva E.A., Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor; Gurenko I.A., Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor; Balala K.D., student, Institute «Agrotechnological academy» of the FSAEI HE «V.I. Vernadsky Crimean Federal University».
In the process of work, an analysis of the epizootic situation in the poultry industry was carried out on viral respiratory diseases of birds: infectious bronchitis, infectious laryngotracheitis, Newcastle disease, avian influenza. It has been established that the epizootic situation is stable and controlled due to routine preventive vaccinations. the results of serological studies of blood serum from poultry at different times of its cultivation were studied. The intensity of immunity to Newcastle disease was 100-80 % with atrihmetic mean titers of 5.6-3.5 log, respectively. The intensity of immunity to the infectious laryngotracheitis virus at different study dates was 91.6-95% with arithmetic mean titers of 2.8-3.5 log. The intensity of immunity to the infectious bronchitis virus in an adult bird was 92-100 %. To control the epizootic situation for bird flu, the farm conducts routine
221
го бронхита у взрослой птицы была serological monitoring for the presence 92-100 %. Для контроля эпизооти- of seropositivity. According to the results ческой ситуации по птичьему грип- of studies, positively reacting samples пу в хозяйстве проводят плановый with the antigen of the avian influenza серологический контроль на наличие virus were not detected. серопозитивности. По результатам исследований положительно реагирующих проб с антигеном вируса птичьего гриппа не выявлено.
Ключевые слова: вирусные респи- Key words: viral respiratory раторные болезни, куры, схема вакци- diseases, chickens, vaccination scheme, нации, напряженность иммунитета, immunity МатЩ prevention. профилактика.
Введение. Развитие птицеводческой отрасли в Российской Федерации происходит в основном за счет создания крупномасштабных птицеводческих предприятий, оснащенных современным оборудованием. Вместе с тем осуществляют производственную деятельность и небольшие предприятия по выращиванию птицы. Для эффективного ведения птицеводства, сохранности птицы, поддержания эпизоотического благополучия на фермах не зависимо от их форм собственности и технологии содержания, применяют профилактические вакцинации. Вирусные респираторные заболевания птицы передаются воздушно-капельным путем, при контакте с больными особями, с оборудованием, инвентарем и циркулируют среди непривитого птицепоголовья, среди дикой и синантропной птицы, тем самым длительно сохраняясь в окружающей среде, поддерживая эпизоотическую напряженность [1, 2].
Ньюкаслская болезнь, птичий грипп, инфекционный бронхит, инфекционный ларинготрахеит представляют угрозу для птицехозяйств за счет неконтролируемой изменчивости штаммов при переходе с одной биологической системы на другую, снижения резистентности птицы в результате несбалансированного кормления, нарушения ветеринарно-санитарных условий содержания [3, 4]. Поэтому актуальными являются вопросы контроля эпизоотической ситуации путем проведения упреждающих, плановых серологических исследований напряженности поствакцинального иммунитета в разные периоды выращивания и содержания птицы.
Материал и методы исследований. В наших исследованиях изучена напряженность иммунитета у птицы в системе вакцинопрофилактики вирусных респираторных болезней.
В обследуемом птицехозяйстве птица в количестве 8 000 голов кур-несушек кросса хайсекс белый, возраст птицы 270 дней содержится в типовом птичнике.
Изучение напряженности иммунитета по ньюкаслской болезни. Для специ-
222
фической профилактики ньюкаслской болезни в хозяйстве используется живая вакцина МА-5+Clon 30. Вакцина двойного действия, содержит ослабленный штамм Ма 5 (Massachusets) вируса инфекционного бронхита и лентогенный штамм Clon 30 вируса ньюкаслской болезни. Вакцинация осуществляется с помощью крупно-капельного спрея. Рабочий раствор вакцины готовят непосредственно перед применением. В качестве растворителя используют чистую питьевую воду, свободную от ионов хлора и железа. При иммунизации птицы вакцину разводят из расчета 1000 доз на 0,5-1,0 л.
С целью определения уровня материнских антител у цыплят в семидневном возрасте отбирали сыворотку крови и направляли в ГБУ «Региональная государственная ветеринарная лаборатория Республики Крым». При исследовании 10 проб крови в реакции задержки гемагглютинации установлено, что в 9 пробах сыворотки крови выявлены антитела к ньюкаслской болезни в разведении 1:4 и одна проба - 1:8. Поэтому в соответствии с утвержденной схемой вакцинации, прививку проводили в 23-х дневном возрасте. Через 12-14 дней после вакцинации для определения уровня титров поствакцинальных антител, кровь отбирали из подкрыльцовой вены, отстаивали и полученную сыворотку в количестве 25 проб направляли в для исследования в лабораторию.
Результаты и обсуждение. Нами были проанализированы результаты экспертиз исследований сыворотки крови, проведенных ГБУ «Региональная государственная ветеринарная лаборатория Республики Крым» и составлены иммунограммы напряженности иммунитета к ньюкаслской болезни.
Иммунограмма напряженности иммунитета к ньюкаслской болезни в 37 дней представлена на рисунке 1.
4 8 16 32 64
Разведение сыворотки
Рисунок 1. Динамика титров специфических антител к ньюкаслской болезни у птицы в возрасте 37 дней
Проведя анализ, было установлено, что при исследовании сыворотки крови в 37 дней (птица вакцинирована в 23 дня) в количестве 25 проб напряженность иммунитета составила 92 %, причем сывороток крови в разведении 1:4
223
было 2 пробы; 1:8 - 3 пробы; 1:16 - 5 проб; 1:32 - 8 проб; 1:64 - 7 проб при среднеарифметических титрах 4,6 log.
Иммунограмма напряженности иммунитета к ньюкаслской болезни в 59 дней представлена на рисунке 2.
1:16 1:32 64 128
Разведение сыворотки
Рисунок 2. Динамика титров специфических антител в сыворотке крови к ньюкаслской болезни у птицы в возрасте 59 дней
Проведя анализ, было установлено, что при исследовании сыворотки крови в 59 дней (птица вакцинирована в 45 дней) напряженность иммунитета составила 100 %, причем сывороток крови в разведении 1:16 - 3 пробы; 1:32 - 11 проб; 1:64 - 3 пробы; 1:128 - 8 проб. Среднеарифметический титр составил 5,6 log.
Иммунограмма напряженности иммунитета к ньюкаслской болезни в 84 дня представлена на рисунке 3.
2 4 8 16 32
Разведение сыворотки
Рисунок 3. Динамика титров антител к ньюкаслской болезни у птицы в возрасте 84 дня
Проведя анализ, выло установлено, что при исследовании сыворотки крови в 84 дня (птица вакцинирована в 70 дней) напряженность иммунитета составила
224
80 %, причем сывороток крови в разведении 1:2 - 1 проба; 1:4 - 4 пробы; 1:8 - 5 проб; 1:16 - 8 проб; 1:32 - 7 проб. Среднеарифметический титр составил 3,5 log. Имммунограмма наглядно показывает, что уровень антител начинает снижаться, кроме того появляются не диагностические титры в разведениях сыворотки 1:2 - 1:4 (1-2 log), которые не обеспечивают полноценной защиты от «полевого» вируса. Снижение напряженности иммунитета в возрасте 80-85 дней, возможно, связано с нагрузкой на иммунную систему птицы различных вакцинных антигенов, которые могут быть причиной, так называемого «вакцинального» стресса.
С целью недопущения снижения напряженности иммунитета и создания депо антигена в организме в возрасте 95 дней была проведена заключительная вакцинация инактивированной вакциной, которая содержит инактивиро-ванные вирус ньюкаслской болезни, вирус инфекционного бронхита и вирус синдрома снижения яйценоскости. Вводят вакцину внутримышечно в области грудной мышцы. Иммунитет формируется через 21 сутки после однократного введения вакцины, сохраняется в течение всего периода яйцекладки.
Вакцину вводили птице в возрасте 95 дней, внутримышечно, согласно наставлению в область грудной мышцы в дозе 0,5 мл на одну голову. Результаты исследования сыворотки крови (по 25 проб) после иммунизации птицы инактивированной вакциной (табл.1).
Таблица 1. Напряженность иммунитета у птицы
к ньюкаслской болезни после применения инактивированной вакцины
« ад о
е я д Разведение сыворотки / титры антител, log т
^ и т й и я л е р С е
ы, ц и т п н р з о В 1:4 / 2 1:8/ 3 1: 16/ 4 1:32/ 5 1:64/ 6 1:128/ 7 1:256/ 8 1: 512/ 9 1:1024/10 1:2048/11 т и н у м м К %
110 - - - 8 2 5 5 3 2 - 6,9 100
155 - - - 2 10 8 3 1 1 - 6,7 100
230 - - - 2 5 10 9 1 1 - 8,0 100
При анализе данных, приведенных в таблице 1 установлено, что в исследуемые сроки не наблюдалось тенденции к снижению иммунитета. После применения инактивированной вакцины в 110 дней напряженность иммунитета составила 100% при среднеарифметических титрах 6,9 log. В возрасте 155 дней групповой иммунитет был на уровне 100 % при среднеарифметических титрах 6,7 log; в 230 дней групповой иммунитет — 100%, при среднеарифметических титрах 8,0 log.
На рисунке 4 представлена динамика напряженности иммунитета к у птицы к ньюкаслской болезни после применения инактивированной вакцины.
225
» 100
г 80
г 40
Возраст птицы, дни
Рисунок 4. Динамика напряженности иммунитета после применения инактивированной вакцины
На рисунке 4 наглядно видно, что 100-процентный иммунитет был сформирован через 2-3 недели после вакцинации и сохранялся весь период наблюдения.
Изучение эпизоотической ситуации по гриппу птиц. Грипп птиц - острое контагиозное заболевание, поэтому упреждающие диагностические и профилактические меры имеют важное значение. Диагностические исследования сыворотки крови на грипп птиц проводятся в ГБУ «Региональная государственная ветеринарная лаборатория Республики Крым». Исследования сыворотки крови на серопозитивность к вирусу гриппа проводили в те же сроки, что и на наличие специфических антител к вирусу ньюкаслской болезни. При исследовании методом иммуно-ферментного анализа серопозитивности к вирусу птичьего гриппа сероварианта Н5 N установлено не было, т.е. все пробы были отрицательны.
Анализ напряженности иммунитета к вирусу инфекционного бронхита. Профилактика инфекционного бронхита начинается в суточном возрасте путем нанесения вакцины спрей-методом в условиях инкубатория. При этом используется вакцина из штамма Массачусетс. Вторую вакцинацию проводят в возрасте 23 дня серологический контроль в через 14 дней. Третья ревакцинация в возрасте 45 дней. Четвертая ревакцинация - в возрасте 70 дней.
При переводе птицы в «деловую молодку» в возрасте 95 дней проводится прививка инактивированной поливалентной вакциной против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита и синдрома снижения яйценоскости. Инъекцию поводят внутримышечно в области грудной мышцы.
После каждой прививки кровь для серологического контроля отбиралась через 14 дней.
В таблице 3 представлен анализ данных по серологическому контролю эффективности вакцинаций птицы против инфекционного бронхита.
226
Таблица 3. Напряженность иммунитета у птицы к вирусу инфекционного бронхита
Возраст птицы, дней Количество проб, шт Разведение сыворотки / титр антител, log Средний титр антител, log % иммунитета
1:2 / 1 1:4 / 2 1:8/ 3 1: 16/ 4 1:32/ 5 1:64/ 6 1:128/ 7 1:256/ 8
1 10 1 6 2 1 - - - - 1,0 30
13 10 1 5 4 - - - - - 1,2 40
36 20 - 3 15 2 - - - - 2,5 85
60 10 - 2 7 1 - - - - 2,9 80
87 10 - 1 3 4 1 - - - 3,0 90
112 10 - 1 - - 4 4 1 - 4,5 90
127 25 - 4 3 - 12 2 4 - 4,4 92
176 25 - 2 4 9 8 2 - - 4,0 92
181 21 - - 1 5 9 5 1 - 5,0 100
237 10 - - 1 2 2 - 2 3 5,6 100
Как свидетельствуют данные таблицы 3 напряженность поствакцинального иммунитета к инфекционному бронхиту находится на достаточно высоком уровне. Так, при исследовании наличия материнских антител в диагностических титрах в сыворотке крови суточных цыплят установлено у 30 % исследованных проб. После вакцинации цыплят в условиях инкубатория спрей-методом через две недели установлен незначительный прирост антител до 40 %. Далее, после вакцинации цыплят в возрасте 23 дня, напряженность иммунитета составила 85 %. После вакцинации в 45-дневном возрасте - средний титр антител составил 2,9 log.
После прививки в 70-ти дневном возрасте напряженность иммунитета к инфекционному бронхиту была достаточно высокой и составила 90%. В соответствии со схемой вакцинации в 95-ти дневном возрасте куры были привиты инактивированной вакциной, в состав которой входит обезвреженный вирус инфекционного бронхита. Использование инактивированных вакцин в птицеводстве очень актуально, так как у птицы формируется длительный напряженный иммунитет и уход от живых вакцин позволяет стабилизировать эпизоотическую обстановку. При анализе экспертиз с результатами серологических исследований установлено, что в исследуемые сроки 127, 176, 181 и 237 дней напряженность составила 92, 92, 100 и 100 % соответственно.
227
На рисунке 5 представлена динамика последовательного нарастания напряженности иммунитета в зависимости от проведенных ревакцинаций и возраста птицы.
Напряженность иммунитета, %
Рисунок 5. Динамика напряженности иммунитета к вирусу инфекционного бронхита
Как видно на рисунке 5 последовательные ревакцинации индуцируют напряженный иммунитет к вирусу инфекционного бронхита, и гарантируют защиту против «полевых» вирусов.
Анализ напряженности иммунитета к вирусу инфекционного ларинготра-хеита. Инфекционный ларинготрахеит (ИЛТ) прививается однократно в возрасте 55-60 дней путем закапывания вакцины окулярно. Вакцинацию против ИЛТ проводят одновременно вместе с прививкой против оспы.
В таблице 4 представлены результаты анализа экспертиз серологических исследований сыворотки крови на напряженность иммунитета к вирусу инфекционного ларинготрахеита.
Таблица 4. Напряженность иммунитета у птицы к вирусу инфекционного ларинготрахеита
й т
<а Я д в б, о Разведение сыворотки / титры антител, р к ад Л \0 Н 0х с,
ы ц и т п н р з о В р п о в т с <ц ч и л & 1:2 / 1 1:4 / 2 1:8/ 3 1: 16/ 4 1:32/ 5 1:64/ 6 1:128/ 7 8 О Н ^ й л, ие « £ ч е & « £ а оа нт й а 8 § о ^ ни
87 12 - 1 11 - - - - 2,8 91,6
176 20 - 1 7 11 1 - - 3,5 95
228
Как видно из данных таблицы 4 напряженность иммунитета к инфекционному ларинготрахеиту в возрасте 87 дней составила 91,6 %. При повторном исследовании сыворотки крови от птицы в возрасте 176 дней напряженность иммунитета составила 95 % при среднем титре 3,5 log.
Таким образом, проведение вакцинаций и контроль напряженности иммунитета является основным в профилактике вирусных заболеваний птицы, в том числе и респираторных.
Выводы:
1. При изучении эпизоотической ситуации по вирусным респираторным болезням птицы установлено, что в обследуемом птицехозяйстве она является стабильной и контролируемой за счет плановых профилактических вакцинаций. За весь период выращивания птица привита против ньюкаслской болезни (штамм Клон-30) - четырехкратно; инфекционного бронхита (штамм Масачу-сетс) - четырехкратно; инфекционного ларинготрахеита (штамм Nobilis ILT) -однократно живыми вакцинами и однократно - инактивированными вакцинами. Против высоко патогенного гриппа птиц куры не прививаются.
2. Напряженность иммунитета к вирусу ньюкаслской болезни у птицы в возрасте 37 дней составила 92 %, при средних титрах 4,6 log, в возрасте 53 дня - 100 % (4,6 log); в возрасте 84 дня - 80% (3,5 log). Напряженность иммунитета после введения инактивированной вакцины в 110 дней составила 100% (6,9 log). При исследовании сывороток крови серопозитивности к вирусу гриппа птиц установлено не было.
3. Напряженность иммунитета к вирусу инфекционного бронхита в 60-дневном возрасте у птицы составила 80 % при средних титрах 2,9 log; в 87 дней - 90 % - 3,0 log; в 112 дней - 90 % при средних титрах 4,5 log.
4. Напряженность иммунитета к вирусу инфекционного ларинготрахеита в 87 дневном возрасте составила 91,6 % при средних титрах 2,8 log; в 176 дневном возрасте - 95 % при средних титрах 3,5 log.
Список использованных источников:
1. Бакулов И.А. Особо опасные болезни животных: справочник/ И.А. акулов [и др.]//ВНИИВВиМ, ГНУ ИЭВСиДВ. Покров-Новосибирск. - 2002. - 184 с.
2. Бирман Б.Я. Эпизоотическая ситуация в мировом и отечественном птицеводстве и задачи по обеспечению эпизоотического благополучия птицеводства России/ Б.Я.Бирман, И.В.Насонов/ Ж-л «Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и са-
References:
1. Bakulov I.A. Especially dangerous animal diseases: a guide / I.A.Bakulov [et al.] VNIIVViM, GNU IEVSiDV. Pokrov-Novosibirsk. -2002. - 184 p.
2. Birman B.Y. Epizootic situation in the world and domestic poultry farming and the tasks of ensuring the epizootic well-being of poultry farming in Russia / B.Y. Birman, I.V. Nasonov / J-l "Epizootology, immunobiology, pharmacology and sanitation". - 2005. -
229
нитария». - 2005. - № 2 - С.2-4.
3. Воротилова Н. Г. Эпизоотоло-гический мониторинг инфекционных болезней птиц в Республике Крым / Н.Г. Воротилова [и др.] // Известия сельскохозяйственной науки Тавриды. - 2015. - № 3 (166). - С. 81-92.
4. Гадзевич Д.В. Анализ эпизоотической ситуации по гриппу птиц и нью-каслской болезни в Республике Крым/ Д.В.Гадзевич [и др.] //Материалы межд. науч.конф. «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику». ФГБУ «ВНИИЗЖ. - 2016. - С.74-79.
No. 2 - P.2-4.
3. Vorotilova N. G. Epizootological monitoring of infectious diseases of birds in the Republic of Crimea / N.G. Vorotilova [et al.] // Izvestiya sel'skogo nauki Tavrida - 2015. -№ 3 (166). - P. 81-92.
4. Gadzevich D.V. Analysis of the epizootic situation on avian influenza and Newcastle disease in the Republic of Crimea / D.V. Gadzevich [et al.] Materials interd.nauch.conf. "Achievements of young scientists in veterinary practice". FGBI "ARRIAH. - 2016. - P.74-79.
Сведения об авторах:
Белявцева Елена Анатольевна - кандидат ветеринарных наук, доцент, доцент кафедры хирургии и акушерства Института «Агротехно-логическая академия» ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского», e-mail: Elena2010simf@mail.ru, 295492, Россия, Республика Крым, г. Симферополь, п. Аграрное, Институт «Агро-технологическая академия» ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского».
Гуренко Ирина Анатольевна -кандидат ветеринарных наук, доцент, заведующий кафедрой хирургии и акушерства Института «Агротехно-логическая академия» ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского», e-mail: gur76@mail.ru, 295492, Россия, Республика Крым, г. Симферополь, п. Аграрное, Институт «Агротехноло-гическая академия» ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского».
Балала Карина Денисовна - обучающийся факультета ветеринарной
Information about the authors:
Belyavtseva Elena Anatolyevna -Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor of the Institute «Agrotecnological academy» of the FSAEI HE «V.I. Vernadsky Crimean Federal University», e-mail: Elena2010simf@mail.ru, Institute
"Agrotechnological Academy" of the "V.I. Vernadsky Crimean Federal University", Agrarnoye v., Simferopol, Republic of Crimea, 295492, Russia.
Gurenko Irina Anatolyevna -Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor of the Institute "Agrotecnological academy" of the FSAEI HE «V.I. Vernadsky Crimean Federal University», e-mail: gur76@ mail.ru, Institute "Agrotechnological Academy" of the "V.I. Vernadsky Crimean Federal University", Agrarnoye v., Simferopol, Republic of Crimea, 295492, Russia.
Balala Karina Denisovna - a 4th year student of the Faculty of Veterinary
230
медицины Института «Агротехно-логическая академия» «КФУ имени В.И.Вернадского», e-mail: hoyka. log@gmail.com, 295492, Россия, Республика Крым, г. Симферополь, п. Аграрное, Институт «Агротехноло-гическая академия» ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского».
Medicine of Institute "Agrotecnology academy" FSAEI HE "V.I. Vernadsky Crimean Federal University", e-mail: hoyka.log@gmail.com, Institute
"Agrotechnological Academy" of the "V.I. Vernadsky Crimean Federal University", Agrarnoye v., Simferopol, Republic of Crimea, 295492, Russia.
231
