CC BY
38
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
Вывод. Правильный алгоритм совместных действий эпидемиологов и микробиологов позволяет своевременно и эффективно проводить необходимые мероприятия программе инфекционного контроля.
МОНИТОРИНГОВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ КОКЛЮША В СВЯЗИ С УСИЛЕНИЕМ МЕРОПРИЯТИЙ ПО ОГРАНИЧЕНИЮ РАСПРОСТРАНЕНИЯ КОКЛЮША СРЕДИ ОРГАНИЗОВАННЫХ ДЕТЕЙ Г.Я. Ценева1, И.Б. Блиман2, Т.Е. Быстрая2 'ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург; Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Санкт-Петербург» в Адмиралтейском, Василеостровском и Центральном районах, Санкт-Петербург
В филиале №4 ФБУЗ предложено институтом им. Пастера проводить мониторинговые исследования возбудителя коклюша в связи с усилением мероприятий по ограничению распространения коклюша среди организованных детей.
С 2008 по 2011 гг. прослеживается рост заболеваемости коклюшем: 2008 г. — 81 случай; 2009 г. — 116; 2010 г. — 122 и 2011 г. — 171 случай. Высеваемость в среднем составила 3% — 5%. Обследование кашляющих проводится в сроки от 3-х недель и более от начала заболевания, что объясняет низкую высеваемость.
Возрастная структура обследуемых с кашлем следующая: до года — 2%; от 1 до 6 лет — 61%; 7 лет и старше — 37%. Основная масса обследованных это дети от 3-х до 7-и лет и старше, как правило, на 86% привитые и, обследованы в поздние сроки, что крайне затрудняет выделение коклюшного микроба.
Бактериологический метод выделения коклюшного микроба информативен только в ранние сроки заболевания (от 1 до 14 дней от начала болезни). Актуальность приобретают экспресс-методы обследования кашляющих больных, так как позволяют выделить коклюшный микроб на поздних сроках заболевания и на фоне антибиотикотерапии. Это ИФА, ПЦР, серологический метод.
Только качественное обследование на коклюш позволяет дать правильную оценку распространения возбудителя среди населения и эффективно проводить эпидемиологический надзор за коклюшной инфекцией.
НОВЫЙ СПОСОБ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИКСОДОВОГО КЛЕЩЕВОГО БОРРЕЛИОЗА С ПОМОЩЬЮ ИММУНОЧИПА
Т.А. Чеканова, М.Л. Маркелов, Л.С. Карань, Е.А. Пудова, Н.П. Кирдяшкина, А.Е. Судьина,
A.И. Сажин, И.Н. Манзенюк, Г.А. Шипулин
ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва
Разработана тест-система в формате иммуночипа для серодиагностики иксодового клещевого борре-лиоза (ИКБ), позволяющая дифференциально выявлять антитела классов G и M к антигенам борре-лий B. afzelii и B. garinii. В состав иммуносорбента включены 14 антигенов: p100 B. garinii, p100 B. afzelii, p41 B. garinii, p41 B. afzelii, ВВК32 B. garinii, ВВК32 B. afzelii, p17 B. garinii, p17 B. afzelii, OspC B. garinii, OspC
B. afzelii, р39 B. afzelii, p58 B. afzelii, УкЕ B. afzelii, УкЕ B. garinii, которые иммобилизованы в виде индиви-
дуальных спотов на микроскопных слайдах с модифицированной химической поверхностью. На одном слайде — 12 эрреев для анализа 12 клинических/контрольных образцов. Благодаря конъюгату, состоящему из смеси антител к IgG человека и антител к IgM человека, меченых Су5 и Cy3 соответственно, и учету результатов с помощью многоканального флуоресцентного сканера возможно дифференциальное выявление антител. Общее время инкубации в чипе с образцами и конъюгатом — 1 час, для проведения анализа требуется 10 мкл сыворотки/плазмы крови.
Для оценки чувствительности иммуночипа изучены образцы сывороток/плазмы крови от 79 пациентов, взятых в срок до 1 месяца с момента присасывания клеща, и образцы сывороток крови от 150 больных с диссеминированной и хронической стадиями (2 и 3 стадии) ИКБ. Для оценки специфичности иммуночипа сформирована контрольная группа из 495 сывороток крови (250 образцов — от практически здоровых доноров, не отмечавших ранее присасывание клеща, 50 образцов — от беременных и больных с аутоиммунными заболеваниями; 130 образцов — от больных сифилисом; 65 образцов — от больных лептоспирозом).
Обнаружение в иммуночипе антител класса M среди пациентов, отнесенных к 1-й стадии ИКБ, достигало 60,1%, а антител класса G — 31,6%. Выявление специфических IgG и IgM позволило подтвердить серологический диагноз Лайм-боррелиоза для 87,3% пациентов в этой группе. Выявление IgM в группе пациентов 2 и 3 стадией ИКБ достигало 51,4%, антител класса G — 88,6%, при этом суммарное выявление антител в чипе — 98,1%. Анализ в иммуно-чипе сывороток контрольной группы показал отсутствие специфических IgM и IgG для 97,2% образцов. Подана заявка на получение патента РФ.
СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА TORCH-ИНФЕКЦИЙ В НОВОМ ФОРМАТЕ ИММУНОЧИПА
Т.А. Чеканова, М.Л. Маркелов, Е.А. Пудова, Н.П. Кирдяшкина, А.Е. Судьина, А.И. Сажин, Г.А. Шипулин
ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва
Для серологической диагностики TORCH-инфекций существует большой спектр иммунофер-ментных тест-систем. Вместе с тем, не существует коммерческой тест-системы для дифференциального выявления антител разных классов к спектру наиболее значимых антигенов возбудителей инфекций в одном анализе. Таким образом, для выявления антител классов G и М, по крайней мере, к основным классическим возбудителям инфекций комплекса TORCH, требуется использование не менее восьми разных наборов, что существенно отражается не только на объеме анализируемого образца, но и увеличивает стоимость анализа и время исследования.
Иммуночипы с флуоресцентной детекцией результатов позволяют повысить информативность исследований за счет возможности раздельного выявления антител разных классов к широкому спектру антигенов возбудителей инфекций. Нами разработан иммуночип для серодиагностики TORCH-инфекций, позволяющий выявлять в одном анализе антитела классов G и М к антигенам: GRA1 (p24), GRA7 (p29), MIC3, SAG1 (p30) Toxoplasma
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
gondii; E1, E2, core вируса краснухи; pp 28, pp 38, pp 52, pp 65, pp 150, protein mosaic цитомегаловируса; VP1 и VP2 парвовируса B19; gD1, gG1 вируса герпеса
1 типа; gD2, gG2 вируса герпеса 2 типа; p18 (capside), p54 (ENA), EBNA вируса Эпштейна—Барр.
Использование конъюгата, состоящего из смеси антител к IgG человека и антител к IgM человека, модифицированных флуорофорами Су5 и Cy3 соответственно, и учет результатов с помощью многоканального флуоресцентного сканера позволяют проводить дифференциальное выявление антител классов G и M. Таким образом, предложенный иммуночип позволяет заменить постановку комплексного анализа с применением 14 тест-систем подобного назначения в формате ИФА. Общее время инкубаций с исследуемыми образцами и конъюгатом не превышает 1 час, для проведения анализа требуется не более 10 мкл сыворотки/плазмы крови.
Нами сформирована коллекция сывороток крови пациентов, содержащих и не содержащих антитела классов G и M, к возбудителям TORCH-инфекций на основании данных ИФА, полученных от врачей клинической практики Центра молекулярной диагностики. Продемонстрированы высокие показатели чувствительности и специфичности иммуночипа.
ОПЫТ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ НОВЫХ ВАРИАНТОВ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ В ДЕТЕКЦИИ CHLAMYDIA TRACHOMATIS
А.В. Чемерис1, Д.А. Чемерис1, В.В. Федотова2, А.Р. Мавзютов2
1Институт биохимии и генетики УНЦ РАН;
2 ГБОУ ВПО БГМУМинздравсоцразвития России, г. Уфа
С Chlamydia trachomatis связывают инфекционные процессы, при которых поражается преимущественно цилиндрический эпителий слизистых урогенитального тракта, носоглотки и конъюнктивы глаз. Вне зависимости от локализации течение заболевания отличается тяжестью ввиду облигат-ного внутриклеточного паразитизма возбудителя, длительностью течения и выраженностью осложнений, для предотвращения которых необходимо своевременное назначение достаточно специфических антибактериальных препаратов. Указанное предопределяет срочность и точность лабораторной диагностики.
Наиболее специфичным и чувствительным методом, широко применяемым для диагностики всех вариантов хламидиоза в настоящее время, является ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации. Однако этот метод имеет ряд известных недостатков, что послужило мотивацией для наших исследований.
В частности для видовой мультиплексной детекции и идентификации всех вариантов C. trachomatis нами впервые были подобраны и применены универсальные праймеры комплементарные фрагменту гена 16S рРНК, отличающиеся возможностью их «отжига» встык. Это позволило без снижения чувствительности и специфичности метода существенно сократить продолжительность каждого цикла амплификации ввиду образования целевого ампликона вследствие полимеризации ДНК и формирования очень короткого участка новой ее цепи. Размер амплифицируемого фрагмента гена 16S рРНК для C. trachomatis составил 45 пар нуклеоти-дов. В дальнейшем представленная система была ис-
пытана на 60 положительных контрольных образцах (соскобы из уретры у мужчин и цервикального канала у женщин), подтвержденных стандартной ПЦР. В 100% случаев были получены положительные результаты при существенном сокращении продолжительности исследования. Таким образом, создана основа для разработки и внедрения нового лабораторного метода.
Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009—2013 гг., в рамках реализации мероприятия № 1.2.1. ГК № П385 от 30.07.2009.
СПОСОБНОСТЬ АНТАГОНИСТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ШТАММОВ ЛАКТОБАЦИЛЛ ФОРМИРОВАТЬ БИОПЛЕНКИ
Ю.В. Червинец, В.М. Червинец, А.М. Самоукина, Е.С. Михайлова, Е.А. Беляева
ГБОУ ВПО Тверская ГМА Минздравсоцразвития России
Актуальность. Биопленки — сообщество микроорганизмов, прикрепленных к поверхности определенного биотопа (O'Toole G, 2000). Известно, что микроорганизмы претерпевают огромные изменения во время их перехода от планктонных организмов (свободно плавающих) в клеточные, как часть единого комплекса. Эти изменения отражены в новых фенотипических характеристиках, образованных биопленками бактерий, и возникают в ответ на различные экологические сигналы. На сегодняшний день исследования показывают, что переход от планктонного роста в биопленки является строго регулируемым процессом. Сформированная биопленка как новая система служит для изучения микробного развития.
Цель: определить способность антагонистически активных штаммов лактобацилл разных биотопов желудочно-кишечного тракта формировать биопленки.
Материал и методы. Материалом для исследования служило 20 антагонистически активных штаммов лактобацилл, выделенных из полости рта, желудка и кишечника 300 здоровых людей разных возрастных групп (мужчин — 140, женщин — 160). Тестирование лактобацилл на способность формировать биопленки проводили в стерильных пластиковых чашках Петри (диаметром 90 мм) со стеклышками по методике, описанной Романовой Ю.М., 2006.
Результаты. При тестировании лактобацилл на способность образовывать биопленки выявлено, что лактобациллы располагаются тесно прилегающими друг к другу скоплениями на дне чашек Петри и покровных стеклах. Определение оптической плотности (ОП) клеток лактобацилл показало, что ОП лактобацилл, выделенных из полости рта, образовавших биопленку на чашке, была на порядок выше (от 0,037 до 0,225), чем на стекле (от 0 до 0,076). У всех лактобацилл, выделенных из желудка, выявлена биопленка, ОП которой на чашке колебалась от 0,124 до 0,191, а на стекле — от 0,033 до 0,063. Лактобациллы, выделенные из кишечника, формировали биопленку на чашке Петри, ОП клеток колебалась от 0,144 до 0,449. Только у 3 штаммов лакто-бацилл кишечника выявлена биопленка на стекле, оптическая плотность: от 0,018 до 0,056.
Выводы. У всех антагонистически активных штаммов лактобацилл выявлена способность формировать биопленку. Оптические плотности лак-тобацилл, выделенных из различных биотопов,
