CC BY
518
БИОХИМИЯ
(SSISS) between October 1997 and December 2005. 2008. http:// www.hpa.org.uk/HPA/Topics/InfectiousDiseases/In fectionsAZ /1202115536296/
13. Haidar R., DerBoghossian A., Atieth B. Int. J. Infect. Dis. 2010; 14 (9): e752-8.
14. Walter G., Kemmerer M., Kapler C., Hofman R. Dtsch Arztebl Int. 2012; 109 (14): 257-64.
15. TaylorE., WebsterTh.J. Int. J. Nanomed. 2011; 6: 1463-73.
REFERENCES
1. Hofmann G. Chronische osteitis. Infectionen der knochen und Gelenke München. Jena 2004. Urban& Fisher: 59-83.
2. Ciampolini J, HardingK.G. Postgrad. Med. J. 2000; 76 (898): 479-83.
3. Hovard Jones A.R., Isaacs D. J. Paediatr. Child. Health. 2010; 46 (12): 736-41.
4. ArnoldS.R., EliasD., Buckingham et al. J. Pediatr. Orthop. 2006; 26 (6): 703-8.
5. Berendt T, ByrenI. Clin. Med. 2004; 4 (6): 510-8.
6. LazzariniL., Mader J.T., Calhoun J.H. J. Bone Joint Surg. Am. 2004; 86-A (10): 2305-18.
7. Montanaro L., Speziale P., Campoccia et al. Review Future Microbiology. 2011; 6 (11): 1329-49.
8. LinnikS.A., HaritonovA.A., ShokhinD.V., Zharovskih O.S. Early arthroplasty for deep prosthetic joins infecrion. In: Actual issues of Orthopaedics. Achievements, Prospects. Proc. 1-st Scientific-practical Conferece. M., 2012: 83-4 (in Russian).
9. Prokhorenko V.M., Pavlov V.V. Infectious complications in orthopedics. In: Prokhorenko V.M., Pavlov V.V. Infectious complications during endoprosthetic replacement of the hip joint. Novosibirsk; 2010.
10. Lew D.P., WaldvogelF.A. Lancet. 2004; 364 (9431): 369-79.
11. Weichert S., SharlandM., Clarke N.M., Faust S.N. Curr. Opin. Infect. Dis. 2008; 21 (3): 258-62.
12. U.K. Health Protection Agency. Surgical Site Infection - National-aggregated data on Surgical Site Infections for hospitals that have participated in Surgical Site Infection Surveillance Scheme (SSISS) between October 1997 and December 2005. 2008. http://www.hpa.org. uk/HPA/Topics/InfectiousDiseases/In fectionsAZ /1202115536296/
13. Haidar R., Der Boghossian A., Atieth B. Int. J. Infect. Dis. 2010; 14 (9): e752-8.
14. Walter G., Kemmerer M., Kapler C., Hofman R. Dtsch. Arztebl. Int. 2012; 109 (14): 257-64.
15. TaylorE, Webster Th.J. Int. J. Nanomed. 2011; 6: 1463-73.
Поступила 23.04.13
© КОЛЛЕКТИв АвТОРОв, 2013 УДК 616.98:579.834.114]-078.33
Т.А. Чеканова1' 2, М.Л. Маркелов1' 2, Л.С. Карань1, М.А. Ушакова3, Е.А. Пудова1' 2, А.С. Ромашкина4, Н.П. Кирдяшкина1, 2, И.Н. Манзенюк1, А.И. Сажин1, Е.С. Снарская4, Л.П.Ананьева3, Г.А. Шипулин1
НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ В СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ИКСОДОВЫХ КЛЕЩЕВЫХ БОРРЕЛИОЗОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММУНОЧИПА
1ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора; 2ФГБУ НИИ медицины труда РАМН; 3ФГБУ НИИ ревматологии РАМН, Москва; 4ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России
Новый набор реагентов в формате иммуночипа для мультиплексного серологического анализа клещевого боррелиоза «Иммуночипборрелиоз» продемонстрировал высокую диагностическую чувствительность и специфичность. Процент выявления специфических иммуноглобулинов в «Иммуночипборрелиоз» был выше по сравнению со скрининговыми результатами в иммуноферментном анализе. Показана высокая корреляция результатов тестирования в иммуночипе с данными иммунного блоттинга.
Ключевые слова: иммуночип, боррелиоз, иммунный блоттинг, чувствительность, специфичность
T.A. Tchekanova, M.L. Markelov, L.S. Karan, M.A. Ushakova, E.A. Pudova, A.S. Romashkina, N.P. Kirdiyashkina, I.N. Manzeniyuk, A.I. Sajin, E.S. Snarskaya, L.P. Ananiyeva, G.A. Shipulin
THE NEW POSSIBILITIES IN SEROLOGIC DIAGNOSTIC OF IXODES MITE-BORNE BORRELIOSIS USING IMMUNOCHIP
The new kit of reagents in format of the immunochip "ImmunoChip Borreliosis" for multiplex serologic analysis of mite-borne borreliosis demonstrated high diagnostic sensitivity and specificity. The percentage of detection of specific immunoglobulins was higher in "ImmunoChip Borreliosis" as compared with screening results in immune enzyme analysis. The high correlation between results of testing in immunochip and data of immune blotting is demonstrated ю
Key words: immunochip, borreliosis, immune blotting, .sensitivity, specificity
Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) занимает лидирующее положение по распространенности среди трансмиссивных природно-очаговых заболеваний на территории РФ. Для постановки диагноза ИКБ важны сбор эпидемиологического анамнеза, наличие клинических проявлений заболевания, главным из которых является мигрирующая эритема. Диагностика
Для корреспонденции:
Чеканова Татьяна Александровна, канд. биол. наук, ст. науч. сотр. Адрес: 111123, Москва, ул. Новогиреевская, д. 3а E-mail: tchekanova74@mail.ru
ранней стадии ИКБ, особенно безэритемных форм заболевания, частота выявления которых, по данным разных авторов, варьирует от 10 до 50% и более в зависимости от природного очага [1, 3-7, 10, 11], представляет ощутимые трудности.
Сложность диагностики безэритемных форм ИКБ, сходность клинических проявлений ИКБ с некоторыми другими клещевыми инфекциями вызывают необходимость проведения лабораторной верификации диагноза. Серологическое исследование на наличие антител (АТ) к боррелиям признается приоритетным, при этом специфический гуморальный иммунный ответ человека на инфекцию может быть представлен АТ к большому спектру антигенов ВоггеНа burgdorferi sensu lato и
1 эррей
р100 В.garinii рЮО В. afzelii VlsE B.garinii VlsE B. afzelii p58 B. afzelii p41 B.garinii p41 В afzelii M а Р к e P г P а H и Ц ы э P P e я
рЮО ß garinii рЮО Balzeiii VlsE B.garinii VlsE S. afzelii p58 B. afzelii p41 B.garinii p41 В afzelii
рЗЭ В garinii ВВК32 В.garinii BBK32 В.afzelii OspC B.garinii OspC B. afzelii p17 B.garinii p17 3.afzelii
р39 В garinii ВВК32 В garinii BBK32 В afzelii OspC B.garinii OspC B. afzelii p17 B.garinii p17 В afzelii
Внутренний контроль (1дС/анти-1дС человека) в разной концентрации
Внутренний контроль (1дС/анти-1дС человека) в разной концентрации
Внутренний контроль (1дМ/анти-1дМ человека) в разной концентрации
Внутренний контроль (1дМ/анти-1дМ человека) в разной концентрации
Маркер границы эррея
Схема иммуносорбента, расположение антигенов и вспомогательных спотов на 1 эррее (в центре), пример флюоресцентных профилей при тестировании образцов на канале Cy5/Red (справа).
варьировать в зависимости от стадии заболевания и геновида возбудителя. С целью повышения эффективности серологической диагностики Центр по контролю и профилактике заболеваний СБС (США) рекомендует все положительные образцы первичного скрининга, полученные методами иммунофер-ментного анализа (ИФА) или непрямой реакции иммунофлюо-ресценции (НРИФ), дополнительно подвергать исследованию в подтверждающем тесте в формате иммунного блоттинга (ИБ). Окончательно серологическое тестирование на наличие АТ к боррелиям считается положительным, если и скрининго-вый, и подтверждающий тесты продемонстрировали позитивные результаты [12]. На практике в РФ такой 2-шаговый метод тестирования используют редко [2]. Несмотря на то что ИФА превосходит по чувствительности и специфичности НРИФ, использование иммуноферментных наборов, содержащих ограниченный набор антигенов в составе иммуносорбента, повышает риск получения ложноотрицательных результатов при изучении образцов сыворотки/плазмы крови пациентов, особенно взятых в ранний период инфицированности. В ИБ спектр антигенов представлен шире, поэтому ИБ признается верифицирующим (подтверждающим) методом, но из-за его высокой стоимости не имеет широкого распространения.
Не вызывает сомнения то, что применение на стадии первичного скрининга диагностических тест-систем нового поколения с низкой себестоимостью, предназначенных для дифференциального выявления АТ классов О и
М (]^М) к широкому спектру антигенов возбудителей бор-релиоза, откроет перспективы в лабораторной диагностике субклинических и безэритемных форм ИКБ.
Цель данной работы состоит в изучении диагностической чувствительности и специфичности нового теста иммуно-чипа для мультиплексного серологического анализа ИКБ, а также оценке скрининговых и верифицирующих возможностей набора «Иммуночипборрелиоз» в сравнении с тест-системами подобного назначения, зарегистрированными в РФ.
Материалы и методы. В работе использовали набор реагентов «Иммуночипборрелиоз» производства ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) [8, 9]. Данный набор реагентов позволяет за одну постановку дифференцированно выявлять большой
спектр АТ IgG и IgM к антигенам боррелий B. afzelii и B. garinii - основным патогенным геновидам, широко распространенным на территории РФ. Набор реагентов содержит четыре иммуносорбента для постановки 48 клинических/контрольных образцов: концентрат конъюгата, положительный и отрицательный контрольные образцы, растворы для разведения образцов, концентрата конъюгата и промывки иммуносорбента.
Иммуносорбент представлен микроскопным слайдом размером 25 x 75 мм. На одном слайде расположены 12 эрреев. Каждый эррей представляет собой ограниченную зону для анализа одного клинического/контрольного образца, в пределах которой иммобилизованы методом бесконтактной печати 14 диагностически значимых рекомбинантных высокоочищен-ных антигенов производства ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора в повторах (p100 B. garinii, p100 B. afzelii, VlsE B. garinii, VlsE B. afzelii, p58 B. afzelii, p41 B. garinii, p41 B. afzelii, р39 B. afzelii, ВВК32 B. garinii, ВВК32 B. afzelii, OspC B. garinii, OspC B. afzelii, p17 B. garinii, p17 B. afzelii), а также вспомогательные споты для оценки валидности проведения анализа (препараты IgG/IgM, анти-IgG/анти-IgM человека в различной концентрации, маркер границы эррея - бычий сывороточный альбумин, конъюгированный флюорофорами Су3 и Cy5). Схема иммуносорбента (слайда), расположение антигенов и вспомогательных спотов на 1 эррее, пример флюоресцентных профилей образцов на канале Cy5/Red приведены на рисунке.
На первой стадии в эрреях проводят инкубацию клинических/контрольных образцов в конечном разведении 1:10. Имеющиеся в образцах специфичные к боррелиям АТ IgG и/или IgM связываются с антигенами на иммуносорбен-те. На второй стадии образовавшийся иммунный комплекс антиген-АТ выявляют с помощью инкубации с конъюгатом, представляющим собой смесь АТ к IgG и IgM человека, меченных флюорофорами Су5 и Су3 соответственно.
Оценку результатов тестирования с помощью набора реагентов «Иммуночипборрелиоз» провели с помощью флюоресцентного сканера MArS производства "Ditabis", Германия по двум каналам: Cy5/Red (оценка специфических АТ IgG), Су3/ Green (оценка специфических АТ к антигенам боррелий IgM), согласно правилам интерпретации результатов (табл. 1). Дополнительно для анализа полученных результатов использова-
Таблица 1
Правила интерпретации результатов тестирования в наборе "иммуночипборрелиоз"
Результат исследования в иммуно-чипе
Канал Cy3/Green - оценка специфических АТ М
Канал Су3/КЫ -оценка специфических АТ О
Отрицательный
Положительный
Неопределенный (сомнительный)
Не обнаружены АТ ни к одному из антигенов или обнаружены АТ только к антигенам группы р100
Обнаружены АТ к антигенам группы OspC или обнаружены АТ как минимум к антигенам двух групп р41, VlsE, р17
Обнаружены АТ только к одной из групп антигенов р41, VlsE, р17 (в
сочетании или без с АТ к антигенам групп р58, р39, ВВК32 или выявлены АТ к любому количеству групп антигенов из списка: р58, р39, ВВК32
Не обнаружены АТ ни к одному из антигенов или обнаружены АТ только к антигенам группы р17
Обнаружены АТ к антигенам группы VlsE или обнаружены АТ как минимум к антигенам двух групп р100, р58, р41, р39, ВВК32,
OspC, р17 Обнаружены АТ только к одной группе антигенов р100, р58, р41, р39, ВВК32, OspC
Примечание. Под группой антигенов понимают наименование белка без учета принадлежности к геновиду, в частности р100, VlsE, р41, р58, ВВК32, р39, OspC, р17. При выявлении АТ определенного класса (^О или IgM в зависимости от канала сканера) даже к одному антигену геновида В. afzeШ или В. garimi из двух, представленных в группе, окончательный ответ на наличие АТ к группе по данному каналу считается положительным.
ли специализированное программное обеспечение ШЗТАГ разработанное в ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.
Для изучения чувствительности набора реагентов «Иммуночипборрелиоз» в зависимости от клинической стадии ИКБ исследовали:
- 51 образец сыворотки крови пациентов с подтвержденным клинически и острым течением ИКБ (I клиническая стадия), среди которых у 45 (88,2%) отмечали мигрирующую эритему;
- 55 образцов сыворотки крови пациентов с подострым течением ИКБ (II клиническая стадия, продолжительность заболевания от 3 до 6 мес), среди которых у 43 (78,2%) в начале заболевания наблюдали мигрирующую эритему, у 15 - неврологические симптомы, у 25 - артрит, у остальных -различные органные поражения (множественные артралгии, изменения со стороны сердечно-сосудистой системы);
- 56 образцов сыворотки крови пациентов с хроническим течением ИКБ; у 52 (92,9%) в начале заболевания выявили
Таблица 2
Выявление (в %) специфических АТ к боррелиям ^С и/или ^М у больных ИКБ на разных клинических стадиях (диагностическая чувствительность иммуночипа)
Стадия ИКБ IgM IgG IgM и/ или IgG
положи- неопреде- положи- нео-
тельный ленный тельный преде-
резуль- результат резуль- ленный
тат тат результат
I(n = 51) 56,8 11,8 47,1 16,7 80,4
= 5 ) 60,0 3,6 78,8 9,1 92,7
III (n = 56) 35,7 5,4 96,4 1,8 100
Таблица 3
Результаты сравнительного анализа тест-систем в форматах иммуночипа и ИФА в отношении выявления специфических АТ к боррелиям (п = 78, 1-я группа)
Тест-система
Количество образцов с наличием АТ ^М
Количество образцов с наличием АТ ^О
ИФА-тест-системы IgG/IgM, MEDIPAN GmbH, Германия
"Иммуночипборрелиоз", ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора
52 (66,7%)
45 (57,6%) образцов
- положительный результат,
8 (10,3%) образцов
- неопределенный результат,
итого (положительная иммунореак-тивность) для 53 (67,9%) образцов
27 (34,6%)
36 (46, 2%) образцов
- положительный результат,
12 (15,4%) образцов
- неопределенный результат,
итого (положительная иммунореактивность) для 48 (61,6%) образцов
развитие мигрирующей эритемы, у 26 - склеродермию, у 10 - Лайм-артрит, у 6 - неврологическую симптоматику, у 8 - хронический атрофический акродерматит; результаты исследования приведены в табл. 2.
При анализе диагностической чувствительности имму-ночипа в сравнении с зарегистрированными в РФ наборами реагентов подобного назначения исследовали следующие коллекции образцов:
- 1-я группа - 78 образцов сыворотки крови пациентов, наблюдавшихся в ФГБУ НИИ ревматологии РАМН с 20092012 гг, в анамнезе которых отмечено присасывание клеща; все образцы проверены на наличие специфических АТ к
Таблица 4
Сравнительный анализ тест-систем в форматах иммуночипа иФА, иБ в отношении выявления антител к боррелиям в сыворотках крови пациентов с клинически подтвержденным диагнозом ИКБ (п = 19, 2-я группа)
Тест-система
Количество образцов с наличием АТ ^М
Количество образцов с наличием АТ ^О
ИФА-тест-системы IgG/ IgM, "MEDIPAN GmbH", Германия ИФА-тест-системы IgG/IgM, ООО "Омникс", Россия
Иммуноблотт IgG/ IgM, "MEDIPAN GmbH", Германия
"Иммуночип боррелиоз" ФБУН ЦНИИЭ Роспо-требнадзора
15 (78,9%)
11 (57,9%)
Обнаружены АТ для 13 (68,4%) образцов неопределенный результат для 6 (31,3%) образцов,
итого (положительная иммунореактив-ность) для 19 (100%) образцов
Обнаружены АТ для 13 (68,4%) образцов неопределенный результат для 6 (31,3%) образцов
итого (положительная иммунореактив-ность) для 19 (100%) образцов
13 (68,4%)
10 (52,6%)
Обнаружены АТ для 8 (42,1%) образцов неопределенный результат для 4 (21%) образцов
итого (положительная иммунореак-тивность) для 12 (63,1%) образцов Обнаружены АТ для 12 (63,2%) образцов, неопределенный результат для 1 (5,3%) образца
итого (положительная иммунореак-тивность) для 13 (68,4%) образцов
Таблица
Количество положительных результатов при тестировании сывороток крови (3-я группа клинического материала) в наборе "иммуночипборре-лиоз" и тесте "Borrelia LIAisoN serology Line"
Тест-система 1 стадия ИКБ (n = 19) II и III стадии ИКБ (n = 22)
IgM IgG IgM и/или IgG IgM IgG IgM и/или IgG
"Borrelia LIAISON Serology Line", "DiaSorin", Италия 4 8 12 13 16 19
"Иммуночипборрелиоз", ФБУН ЦНИИЭ Росспо-требнадзора 11 9 13 16 19 20
Таблица 6
Результаты изучения дискордантных образцов ^вороток крови пациентов с ранней стадией иКБ на наличие АТ ^м
Образец Результаты тестирования в тест-системах
"Borrelia "Иммуночипборре- "recom Blot BorreliaNB IgM,
LIAISON лиоз" (выявляемый IgG" (количество баллов -
Serology Line" спектр АТ) выявляемый спектр АТ)
947-2 Отрицатель- Положительный Отрицательный (4 балла
ный (^Е B. р41 B. afzelii, р17 B. afzelii) - p41i B. afzelii, p41i B. garinii)
989-3 Положительный (OspC B. garinii) Положительный (8 баллов - OspC)
902-2 Положительный (OspC B. garinii, OspC B. afzelii) Положительный (8 баллов - OspC)
903-1 Положительный ^ЫЕ B. garinii, OspC B. garinii) Отрицательный (3 балла - VlsE)
934-3 Положительный (р100 B. afzelii, р41 B. afzelii, р39 B. afzelii, OspC B. garinii, р17 B. afzelii, р17 B. garinii) Положительный (11 баллов - VlsE, OspC)
945-2 Положительный (р41 B. afZelii, р41 B. afZelii, OspC B. afZelii, OspC B. garinii) Отрицательный (4 балла - p41i B. afzelii, p41i B. garinii)
1319-2 Положительный (р41 B. afzelii, р41 B. afzelii, OspC B. afzelii OspC B. garinii) Сомнительный (5 баллов -p41, p41i B. afzelii, p41i B. garinii)
боррелиям IgM и IgG в наборе реагентов «Иммуночипборрелиоз», а также в ИФА-тест-системах «Anti-Borrelia-IgM» и «Anti-Borrelia-IgG» ("MEDIPAN GmbH", Германия);
- 2-я группа - 19 образцов сыворотки крови пациентов с клинически подтвержденным диагнозом ИКБ проверены на наличие АТ IgM и IgG к боррелиям в наборе реагентов "Иммуночипборрелиоз", в ИФА - "Боррелиоз-ИФА-IgM" и "Боррелиоз-ИФА-IgG" (ООО "Омникс", Россия), "Anti-Borrelia-IgM" и "Anti-Borrelia-IgG" ("MEDIPAN GmbH", Германия), а также в ИБ "Anti-Borrelia-Blot-IgM" и "Anti-Borrelia-Blot-IgG" ("MEDIPAN GmbH", Германия);
- 3-я группа - 19 образцов сывороток крови пациентов 1 стадии ИКБ и 22 сыворотки крови пациентов с диссемини-рованной и хронической стадиями (II и III стадии ИКБ) использовали в сравнительных исследованиях между набором реагентов "Иммуночипборрелиоз" и тестом "Borrelia LIAISON Serology Line" ("DiaSorin", Италия) с детекцией на хемилюми-несцентном анализаторе LIAISON; дискордантные результаты дополнительно исследовали в ИБ "recom Blot BorreliaNB IgM, IgG" ("MICROGEN GmbH", Германия).
5 Для оценки диагностической специфичности набора реагентов в формате иммуночипа сформировали контрольную группу, включающую 495 образцов сывороток/плазмы крови. В данной контрольной группе 250 образцов получены от практически здоровых доноров, никогда не отмечавших ранее присасывание клещей; 50 образцов - от беременных и больных, страдающих аутоиммунными заболеваниями; от пациентов, страдающих спирохе-тозами иной от боррелиоза этиологии, в частности 130 образцов получены от больных сифилисом и 65 образцов от больных лептоспирозом.
Результаты и обсуждение. Исследования показали, что уровень обнаружения специфических АТ IgM с помощью набора реагентов «Иммуно-Чип Боррелиоз» в сыворотках крови пациентов (n = 51) с подтвержденным диагнозом ИКБ, I клиническая стадия, составил 56,8%, а АТ IgG - 47,1%. Выявление IgG и/или IgM позволило подтвердить серологический диагноз ИКБ для 80,4% пациентов в этой группе (см. табл. 2). При использовании набора «Иммуночипборрелиоз» процент выявления специфических иммуноглобулинов у пациентов на ранней стадии заболевания превосходит диагностическую чувствительность зарегистрированных ранее в РФ тест-систем подобного назначения [4-6].
Процент обнаружения с помощью иммуночипа АТ IgM к боррелиям в сыворотках крови у пациентов с подострой стадией ИКБ (II клиническая стадия; n = 55) составил 60% без учета неопределенных результатов, АТ IgG - 78,8%, IgM и/или IgG - 92,7%.
Диагностическая чувствительность иммуночи-па (выявление АТ IgG и/или IgM) при исследовании 56 образцов сыворотки крови от пациентов с хроническим течением ИКБ составила 100%.
При изучении коллекции сывороток крови (78 образцов, 1-я группа) пациентов НИИ ревматологии РАМН, отмечавших ранее присасывание клеща, установили, что положительная иммунореактив-ность в отношении выявления специфических АТ IgM с помощью набора реагентов «Иммуночипбор-релиоз» c учетом также неопределенных результатов достигала 67,9%, а АТ IgG - 61,6%, что несколько выше по сравнению с ИФА-тест-системами подобного назначения производства "MEDIPAN GmbH" (табл. 3).
Сравнительные результаты тестирования 19 образцов сывороток крови пациентов с клиническим диагнозом ИКБ (2-я группа сывороток коллекции клинического материала) с помощью иммуночипа с данными ИФА двух производителей и ИБ представлены в табл. 4.
Положительная иммунореактивность, выявленная с помощью иммуночипа, в отношении выявления АТ IgM не отличалась от таковой в ИБ. Процент обнаружения специфических иммуноглобулинов к боррелиям класса IgG в наборе "Иммуночипборрелиоз" показал одинаковый результат с ИФА ("MEDIPAN GmbH", Германия), однако по данным ИБ того же производителя верифицированы 12 позитивных результатов скрининга из 13.
Данные сравнительных исследований чувствительности иммуночипа и теста «Borrelia LIAISON Serology Line» сведены в табл. 5.
Изучение дискордантных образцов, показавших положительный результат при исследовании с помощью набора реагентов "Иммуночипборрелиоз" и отрицательный в тест-системе "Borrelia LIAISON Serology Line", провели методом ИБ с использованием набора "recom Blot BorreliaNB IgM, IgG". При проверке 7 образцов сыворотки крови пациентов с I клинической стадией ИКБ, содержащих АТ IgM по результатам анализа в "Иммуночипборрелиоз", но не показавших
положительной иммунореактивности в тест-системе "Borrelia LIAISON Serology Line", в 3 сыворотках, согласно результатам интерпретации ИБ, выявили специфические IgM. 1 результат в ИБ был неопределенным. Остальные 3 образца в ИБ ноказа-ли отрицательный результат, несмотря на выявление AT IgM к антигенам VlsE и р41, что но правилам интерпретации к тест-системе "recom Blot BorreliaNB IgM, IgG" не позволило засчитать эти результаты как положительные или даже сомнительные, так как набранное количество баллов ниже 5 (табл. 6).
Результаты анализа сывороток крови человека контрольной группы с помощью иммуночипа показали отсутствие специфических IgM и IgG для 97,2% образцов (диагностическая специфичность набора).
Новый способ серологической дифференциальной диагностики ИКБ с помощью набора реагентов в формате иммуночи-на «Иммуночипборрелиоз» высокочувствителен и снецифи-чен, прост в выполнении. При проведении анализа с помощью иммуночипа на широкий спектр антигенов боррелий IgG и IgM требуется минимальный объем материала (10 мкл образца сыворотки/плазмы крови или спинномозговой жидкости человека). Исследование спинномозговой жидкости при подозрении на нейроборрелиоз следует проводить одновременно с образцом сыворотки/плазмы крови пациента.
Процент выявления специфических иммуноглобулинов в наборе реагентов «ИммуноЧип Боррелиоз» выше по сравнению со скрининговыми результатами в ИФЛ. Это объясняется тем, что иммуносорбент иммуночипа содержит существенно больший спектр дискретно расположенных диагностически значимых антигенов. Высокая корреляция результатов с данными ИБ свидетельствует о том, что «Иммуночипборрелиоз» может успешно применяться в клинической практике как для скрининга, так и для верификации результатов в диагностике ИКБ. Набор реагентов «Иммуночипборрелиоз» получил регистрационное удостоверение Росздравнадзора РФ № ФСР 2012/13999 от 29.10.2012 г. «Иммуночипборрелиоз» является первым набором реагентов, зарегистрированным в формате иммуночипа на территории РФ.
ЛИTEPATУPA
1. Aнаньева Л.П. Иксодовые клещевые боррелиозы (лаймская болезнь). Экология, клиническая картина и этиология. Tерапевти-ческий архив. 2000; 5: 72-8.
2. Баранова С.Н., Спирин H.H., Шипова Е.Г., Степанов И.О. Поражение нервной системы на отдаленных стадиях Лайм-боррелиоза. Журнал неврологии и психиатрии. 2010; 2: 90-6.
3. Добкина М.Н. Характер изменения и исходы иксодового клещевого боррелиоза в условиях различной антибактериальной терапии: Aвтореф. дис. ... канд. мед. наук. 2004.
4. Манзенюк И.Н., Воробьева М.С., Apyмова E.A., Баранова Е.В., Евсегнеев С.И., Aнаньева Л.П. Препараты для диагностики заболеваний, вызываемых возбудителями иксодовых клещевых боррелиозов (болезнь Лайма). Сообщение 1. Сравнительное изучение иммуноферментных тест-систем 1 поколения, направленных на выявление антител к Borrelia burgdorferi sensu lato. Am^TOrara и химиотерапия. 2004; 6: 12-4.
5. Манзенюк И.Н., ВоробьеваМ.С., Никитюк Н.М., Apyмова E.A., Aнаньева Л.П., Баранова С.Г. и др. Препараты для диагностики заболеваний, вызываемых возбудителями иксодовых клещевых боррелиозов (болезнь Лайма). Сообщение 2. Сравнительная оценка рекомбинантных тест-систем (rELISA), используемых в серодиагностике иксодовых боррелиозов. Am^rnrara и химиотерапия. 2004; 8: 25-8.
6.МанзенюкИ.Н., ВоробьеваМ.С., КозаренкоA.A., AндpейчyкЮЛ. Препараты для диагностики заболеваний, вызываемых возбудителями иксодовых клещевых боррелиозов (болезнь Лайма). Сообщение 3. Сравнительное изучение иммуноферментных тест-систем, используемых для выявления IgM к Borrelia burgdorferi sensu lato. Am^rnra™ и химиотерапия. 2004; 11: 12-5.
7. Супрун Д.A. Иксодовые клещевые боррелиозы (клинико-лабораторная диагностика и лечение в раннем периоде инфекционного процесса: Aвтореф. дис. ... канд. мед. наук. СПб.; 2006.
8. Чеканова Т.А., Маркелов М.Л., Карань Л.С., Пудова Е.А., Кир-дяшкинаН.П., Гоптарь И.А. и др. Новый способ серологической диагностики иксодового клещевого боррелиоза с помощью тест-системы в формате иммуночипа. В кн.: Сборник трудов VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010». М.; 2010: 278-83.
9. Чеканова Т.А., Маркелов М.Л., Карань Л.С., Пудова Е.А., Кир-дяшкинаН.П., СудьинаА.Е. и др. Новый способ серологической диагностики Лайм-боррелиоза с помощью иммуночипа. Инфекция и иммунитет. В кн.: Материалы X Всероссийского съезда научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М.; 2012; 2 (1-2): 339.
10. Черникова А.А. Клинико-патогенетические особенности клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза у детей в Приморье: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Владивосток; 2010.
11. Эпидемиология, этиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика иксодовых клещевых боррелиозов. Рекомендации для врачей. СПб; 2000.
12. CDC 1995. Recommendations for test performance and interpretation from the second National Conference on Serologic Diagnosis of Lyme Disease. MMWR Morb. Mortal. Wkly. - Rep. 44. - P. 590-1.
REFERENCES
1. Anan'eva L.P. Ticks Lyme borreliosis (Lyme disease). Ecology, the clinical picture and etiology. Therapevticheskiy arkhiv. 2000; 5: 72-8 (in Russian).
2. BaranovaS.N., SpirinN.N., ShipovaE.G., StepanovI.O. Lesions of the nervous sistems in remote stages of Lyme borreliosis. Zhurnal necrologii i psikhiatrii. 2010; 2: 90-6 (in Russian).
3. Dobkina M.N. The nature of the changes and outcomes of Ixodes tick-borne borreliosis in different antibacterial therapy: ph.D. med. sci. Diss. Novosibirsk; 2004 (in Russian).
4. Manzenyuk I.N., Vorobyeva M.S., Arumova E.A., Baranova E.V., Evsegneev S.I., Anan'eva L.P. Preparations for serological diagnostics of diseases caused by pathogens of Ixodes tick-borne borreliosis (Lyme disease). Post 1. A comparative study of the enzyme immuno-assay systems 1st generation, aimed at the detection of antibodies to Borrelia burgdorferi sensu lato. Antibiotiki i khimioterapiya. 2004; 6: 12-4 (in Russian).
5. Manzenyuk I.N., Vorob'eva M.S., Nikityuk N.M., Arumova E.A., Anan'evaL.P., Baranova S.G. Preparations for serological diagnostics of diseases caused by pathogens of Ixodes tick-borne borreliosis (Lyme disease). Post 2. A comparative evaluation of recombinant kits (rELISA), used in the serodiagnostics of Ixodes borreliosis. Antibiotiki i khimioterapiya. 2004; 8: 25-8 (in Russian).
6. ManzenyukI.N., Vorob'eva M.S., Kozarenko A.A., Andreychuk YuA. Preparations for serological diagnostics of diseases caused by pathogens of Ixodes tick-borne borreliosis (Lyme disease). Post 3. A comparative study of ELISA kits used to detect IgM to Borrelia burgdorferi sensu lato. Antibiotiki i khimioterapiya. 2004; 11: 12-5 (in Russian).
7. Suprun D.A. Ticks Lyme borreliosis: clinical and laboratory diagnosis and treatment early in the infection process: Ph.D. med. sci. Diss. St. Petersburg; 2006 (in Russian).
8. Chekanova T.A., MarkelovM.L., Karan' L.S., PudovaE.A., Kirdyash-kinaN.P., Goptar'I.A. et al. A new way of serological diagnostics of Ixodes tick-borne borreliosis using an immunochip format. In: Proc. 7th All-Russian scientific-practical conference "Molecular Diagnostics - 2010". Moscow; 2010: 278-83 (in Russian).
9. Chekanova T.A., MarkelovM.L., Karan' L.S., PudovaE.A., Kirdyash-kinaN.P., Sud'inaA.E. et al. A new way of serological diagnostics of Lyme borreliosis by immunochip. In: Infection and Immunity: Proc. 10th th Congress of the All-Russian scientific-practical Society epidemiologists, microbiologists and parasitologists. Moscow; 2012; 2 (1-2): 339 (in Russian).
10. ChernikovaA.A. Clinical and pathogenetic features of tick-borne encephalitis and Ixodes tick-borne borreliosis in children of Primorsky Krai: Ph.D. med. sci. Diss. Vladivostok; 2010 (in Russian).
11. Epidemiology, etiology, clinical features, diagnosis, treatment and prevention of Ixodes tick-borne borreliosis. Recommendations for doctors. St. Petersburg; 2000 (in Russian).
12. CDC 1995. Recommendations for test performance and interpretation from the second National Conference on Serologic Diagnosis of Lyme Disease. MMWR Morb. Mortal. Wkly. - Rep. 44. - P. 590-1.
Поступила 04.03.13
