CC BY
65
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
методом ПЦР; коагулазотипирование (kit Denka Seiken, Tokyo, Japan). Определяли наличие 43 генов вирулентности методом ПЦР: 3 лейкоцидина, 5 гемолизинов, 17 энтеротоксинов, 3 эксфолиатина, 14 адгезинов и ACME-arsA ген. Чувствительность к 38 антибиотикам — методом серийных разведений в плотной среде, в соответствии с рекомендациями CLSI.
Из 254 выделенных S. aureus 4 (1,57%) штамма являлись PVL негативными MRSA (по 1 штамму от медицинского работника и студента, 2 штамма — от больных). Все выделенные MRSA принадлежали к ST8, spa1 (t008), SCCmec IV.3.1.1., coa III, agr 1, характеризовались наличием лейкоцидина lukED, гемолизинов, энтеротоксина sea, адгезинов (за исключением cna, bbp). МПК для оксациллина составила 32 мг/мл; имипенема — 0,125—0,5 мг/мл. Выделенные штаммы оказались резистентными к ципрофлокса-цину, левофлоксацину, хлорамфениколу.
Таким образом, на территории г. Красноярска выявили циркуляцию одного клона внебольничных MRSA, характеризующихся устойчивостью к фтор-хинолонам и хлорамфениколу.
ТРУДНОСТИ ВЕРИФИКАЦИИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТОКСОПЛАЗМОЗА
Н.Р. Цаава, Т.В. Старкова
Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского ГБОУ ВПО ПМГМУ им. И.М. Сеченова, Москва
Распространение токсоплазмоза среди населения планеты варьирует от 15—85%, в зависимости от возраста и географического местоположения. На территории Российской Федерации (по разным и весьма неполным данным) инвазированность населения составляет в среднем 30—35%.
Часто инфекция протекает бессимптомно. Манифестные формы болезни у лиц со сниженным иммунитетом и у части внутриутробно инфицированных новорожденных, наблюдаются с поражением нервной системы, лимфатических узлов, мышц, в том числе миокарда, глаз, печени, селезенки и других органов.
Несмотря на определенные успехи достигнутые в области разработоки лабораторной диагностики токсоплазмоза, в частности широкого использования иммуноферментного анализа (ИФА), проблема диагностики этого заболевания по-прежнему остается актуальна. Основная проблема — верификация диагноза врожденного токсоплазмоза, а также у пациентов с иммунодефицитом.
Специфическим маркером острой инфекции считается обнаружение IgM, однако, в определенных случаях специфические антитела этого класса могут сохраняться в течение длительного времени (несколько месяцев или, в более редких случаях, в течение многих лет).
При мониторинге острого и хронического ток-соплазмоза, а также для оценки эффективности лечения следует определять IgA, но и они могут сохраняться в течение года и более после завершения острой фазы заболевания.
Для диагностики токсоплазмоза был разработан метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), для обнаружения паразита в различных образцах биологических жидкостей человека (амниотиче-ской жидкости, крови, спинномозговой жидкости
и т.д.). Обнаружение токсоплазмы в крови человека затруднительно, поскольку, в хронической фазе заболевания паразитемия отсутствует. Результаты обнаружения токсоплазм в амниотической жидкости пациента достаточно достоверны, что связано с наличием в ней большого числа паразитов.
Таким образом, для установления диагноза «ток-соплазмоз» целесообразно использовать комплексный подход к лабораторной диагностике токсоплаз-моза с использованием нескольких методов — ИФА и ПЦР.
РОЛЬ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ В ОБЕСПЕЧЕНИИ ИНФЕКЦИОННОГО КОНТРОЛЯ В МНОГОПРОФИЛЬНОМ СТАЦИОНАРЕ
П.А. Цебренко, А.Ю. Кузнецова, Л.Ф. Герасимчик, О.Л. Скопенко, Л.М. Котик
МБУЗ «Медико-санитарная часть «Северсталь», г. Череповец
«Медсанчасть «Северсталь» является многопрофильным стационаром с отделениями хирургического, терапевтического и акушерского профиля. Для осуществления качественного инфекционного контроля необходима точная идентификация возбудителей нозокомиальных инфекций и мониторинг их антибиотикорезистентности. С 2004 г. в лаборатории внедрена профессиональная система микробиологического мониторинга «Микроб-2», позволяющая формировать базу данных и тестировать профили резистентности выделенной микрофлоры в каждом отделении стационара.
Формирование базы данных фенотипов выделенных штаммов позволяет госпитальному эпидемиологу проводить ежедневный мониторинг эпид-ситуации, что невозможно при рутинных методах. Анализ результатов сообщается клиническому фармакологу, заведующим отделениями в виде таблиц для практического использования при выборе антибактериальной терапии. За период с 2005 по 2011 гг. база данных микроорганизмов, выделенных из патологического материала от пациентов, составила более 48 000 изолятов. Эпидемиологический анализ данных мониторинга в стационаре показал, что этиологическая структура возбудителей зависит от профиля отделения. Лидирующей в отделениях реанимации является грамотрицатель-ная микрофлора — 57% (Enterobacteriaceae — 75%, Acinetobacter spp.— 11%, P. аeruginosa — 9%), среди грамположительных микроорганизмов преобладают Enterococcus spp. — 43%. В отделениях хирургического профиля преобладает грамположительная микрофлора 56% (из них S. aureus — 30%, Enterococcus spp. — 16%, Streptococcus spp. — 7%), на долю грамо-трицательных микроорганизмов приходится 33% (из них Enterobacteriaceae — 63%, P. аeruginosa — 17%, Acinetobacter spp. — 15%). В отделениях родовспоможения ведущей является грамположительная микрофлора — 78% (из них S. aureus — 10%, стрептококки группы В — 4%). При анализе данных мониторинга была установлена смена ведущих возбудителей нозокомиальных инфекций в ОРИТ: в 2005 г. преобладала грамположительная микрофлора (59%), а начиная с 2006 г. — грамотрицательная микрофлора (52%). При анализе данных обнаружены MRSA (2005 г. — 17%, 2011 г. — 34,9%), энтеробактерии продуценты ESBL (2005 г. — 5%, 2011 г. — 18,9%), резистентность P. aeruginosa к карбапенемам (2005 г. — 33%, 2011 г. — 37,1%).
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
Вывод. Правильный алгоритм совместных действий эпидемиологов и микробиологов позволяет своевременно и эффективно проводить необходимые мероприятия программе инфекционного контроля.
МОНИТОРИНГОВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ КОКЛЮША В СВЯЗИ С УСИЛЕНИЕМ МЕРОПРИЯТИЙ ПО ОГРАНИЧЕНИЮ РАСПРОСТРАНЕНИЯ КОКЛЮША СРЕДИ ОРГАНИЗОВАННЫХ ДЕТЕЙ Г.Я. Ценева1, И.Б. Блиман2, Т.Е. Быстрая2 'ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург; Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Санкт-Петербург» в Адмиралтейском, Василеостровском и Центральном районах, Санкт-Петербург
В филиале №4 ФБУЗ предложено институтом им. Пастера проводить мониторинговые исследования возбудителя коклюша в связи с усилением мероприятий по ограничению распространения коклюша среди организованных детей.
С 2008 по 2011 гг. прослеживается рост заболеваемости коклюшем: 2008 г. — 81 случай; 2009 г. — 116; 2010 г. — 122 и 2011 г. — 171 случай. Высеваемость в среднем составила 3% — 5%. Обследование кашляющих проводится в сроки от 3-х недель и более от начала заболевания, что объясняет низкую высеваемость.
Возрастная структура обследуемых с кашлем следующая: до года — 2%; от 1 до 6 лет — 61%; 7 лет и старше — 37%. Основная масса обследованных это дети от 3-х до 7-и лет и старше, как правило, на 86% привитые и, обследованы в поздние сроки, что крайне затрудняет выделение коклюшного микроба.
Бактериологический метод выделения коклюшного микроба информативен только в ранние сроки заболевания (от 1 до 14 дней от начала болезни). Актуальность приобретают экспресс-методы обследования кашляющих больных, так как позволяют выделить коклюшный микроб на поздних сроках заболевания и на фоне антибиотикотерапии. Это ИФА, ПЦР, серологический метод.
Только качественное обследование на коклюш позволяет дать правильную оценку распространения возбудителя среди населения и эффективно проводить эпидемиологический надзор за коклюшной инфекцией.
НОВЫЙ СПОСОБ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИКСОДОВОГО КЛЕЩЕВОГО БОРРЕЛИОЗА С ПОМОЩЬЮ ИММУНОЧИПА
Т.А. Чеканова, М.Л. Маркелов, Л.С. Карань, Е.А. Пудова, Н.П. Кирдяшкина, А.Е. Судьина,
A.И. Сажин, И.Н. Манзенюк, Г.А. Шипулин
ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва
Разработана тест-система в формате иммуночипа для серодиагностики иксодового клещевого борре-лиоза (ИКБ), позволяющая дифференциально выявлять антитела классов G и M к антигенам борре-лий B. afzelii и B. garinii. В состав иммуносорбента включены 14 антигенов: p100 B. garinii, p100 B. afzelii, p41 B. garinii, p41 B. afzelii, ВВК32 B. garinii, ВВК32 B. afzelii, p17 B. garinii, p17 B. afzelii, OspC B. garinii, OspC
B. afzelii, р39 B. afzelii, p58 B. afzelii, УкЕ B. afzelii, УкЕ B. garinii, которые иммобилизованы в виде индиви-
дуальных спотов на микроскопных слайдах с модифицированной химической поверхностью. На одном слайде — 12 эрреев для анализа 12 клинических/контрольных образцов. Благодаря конъюгату, состоящему из смеси антител к IgG человека и антител к IgM человека, меченых Су5 и Cy3 соответственно, и учету результатов с помощью многоканального флуоресцентного сканера возможно дифференциальное выявление антител. Общее время инкубации в чипе с образцами и конъюгатом — 1 час, для проведения анализа требуется 10 мкл сыворотки/плазмы крови.
Для оценки чувствительности иммуночипа изучены образцы сывороток/плазмы крови от 79 пациентов, взятых в срок до 1 месяца с момента присасывания клеща, и образцы сывороток крови от 150 больных с диссеминированной и хронической стадиями (2 и 3 стадии) ИКБ. Для оценки специфичности иммуночипа сформирована контрольная группа из 495 сывороток крови (250 образцов — от практически здоровых доноров, не отмечавших ранее присасывание клеща, 50 образцов — от беременных и больных с аутоиммунными заболеваниями; 130 образцов — от больных сифилисом; 65 образцов — от больных лептоспирозом).
Обнаружение в иммуночипе антител класса M среди пациентов, отнесенных к 1-й стадии ИКБ, достигало 60,1%, а антител класса G — 31,6%. Выявление специфических IgG и IgM позволило подтвердить серологический диагноз Лайм-боррелиоза для 87,3% пациентов в этой группе. Выявление IgM в группе пациентов 2 и 3 стадией ИКБ достигало 51,4%, антител класса G — 88,6%, при этом суммарное выявление антител в чипе — 98,1%. Анализ в иммуно-чипе сывороток контрольной группы показал отсутствие специфических IgM и IgG для 97,2% образцов. Подана заявка на получение патента РФ.
СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА TORCH-ИНФЕКЦИЙ В НОВОМ ФОРМАТЕ ИММУНОЧИПА
Т.А. Чеканова, М.Л. Маркелов, Е.А. Пудова, Н.П. Кирдяшкина, А.Е. Судьина, А.И. Сажин, Г.А. Шипулин
ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва
Для серологической диагностики TORCH-инфекций существует большой спектр иммунофер-ментных тест-систем. Вместе с тем, не существует коммерческой тест-системы для дифференциального выявления антител разных классов к спектру наиболее значимых антигенов возбудителей инфекций в одном анализе. Таким образом, для выявления антител классов G и М, по крайней мере, к основным классическим возбудителям инфекций комплекса TORCH, требуется использование не менее восьми разных наборов, что существенно отражается не только на объеме анализируемого образца, но и увеличивает стоимость анализа и время исследования.
Иммуночипы с флуоресцентной детекцией результатов позволяют повысить информативность исследований за счет возможности раздельного выявления антител разных классов к широкому спектру антигенов возбудителей инфекций. Нами разработан иммуночип для серодиагностики TORCH-инфекций, позволяющий выявлять в одном анализе антитела классов G и М к антигенам: GRA1 (p24), GRA7 (p29), MIC3, SAG1 (p30) Toxoplasma
