CC BY
21forms of ownership manufacturing crop products.
Key words: algorithm, mathematical model, micronutrient fertilizers, crop productivity, soil indicators, fertility, database, software complex.
1. Aristarkhov, A.N. Vliyanie mikroehlementov na produktsionnye protsessy yachmenya yarovogo [Tekst] /A.N. Aristarkhov, VP. Tolstousov, A.F. Kharitonov, N.K. Efimova, N.N. Bushuev//Agrokhimiya. - 2010. - № 9. - S. 36 - 50.
2.Zubkova, T.A. Vliyanie kompleksnykh mikroudobrenij na urozhajnost' i kachestvo yachmenya yarovogo [Tekst]/ T.A. Zubkova, V.A. Gulidova //Zemledelie. - 2012. - № 8. - S. 44 - 45.
3. Lyubchenko, V.B. Sokhranenie balansa mikroehlementov v pochve - odin iz faktorov povysheniya urozhajnosti [Tekst] /V.B. Lyubchenko, S.V Mitrofanov, V.S. Nikitin, N.B. Gorokhova //Innovatsii v APK: stimuly i bar'ery: sbornik statej po materialam uchastnikov mezhdunarodnoj nauchno - praktich. konf. - M.: Izd-vo «Nauchnyj konsul'tant», 2017. - S. 183 - 186.
4. Nikitin, V.S.Formirovanie algoritma rascheta doz kompleksnykh udobrenij na osnove guminovykh pod planiruemuyu urozhajnost' [Tekst]/ V.S. Nikitin // Tekhnika i oborudovanie dlya sela, 2016. - №5. - S. 20 - 23.
5. Nikitin V.S.Matematicheskaya model' pochvennogo pitaniya sel'skokhozyajstvennykh kul'tur nechernozemnoj zony Tsentral'nogo regiona Rossijskoj Federatsii [Tekst] /V.S. Nikitin // Problemy mekhanizatsii agrokhimicheskogo obespecheniya sel'skogo khozyajstva: sb. nauch. tr. - Ryazan': Izd-vo GNU VNIMS Rossel'khozakademii, 2013. - S. 121 - 125.
6. Romanenko, G.A. Udobreniya. Znachenie, ehffektivnost' primeneniya: spravoch. posobie [Tekst] / G.A. Romanenko, A.I. Tyutyunikov, V.G. Sychev. - M.: TSINAO, 1998. - 376 s.
НОВАК Михаил Дмитриевич, д-р биол. наук, профессор кафедры эпизоотологии, микробиологии и паразитологии, [email protected]
НОВАК Александра Ивановна, д-р биол. наук, профессор кафедры зоотехнии и биологии, [email protected]
НАЗАРОВА Светлана Анатольевна, аспирант кафедры эпизоотологии, микробиологии и паразитологии, [email protected]
Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева Представлены современные подходы в тактике диагностики токсоплазмоза животных. Основой эпидемического и эпизоотического благополучия является ретроспективный мониторинг заболеваемости токсоплазмозом, анализ результатов сероэпизоотологического, паразитологического исследований, биопробы на лабораторных животных и комплексные профилактические, ветери-нарно-санитарные мероприятия в животноводческих хозяйствах и на мясоперерабатывающих предприятиях. Актуальным направлением является разработка экспресс- тестов для выявления токсоплазм в мясе, молоке и получаемых из них продуктах на перерабатывающих предприятиях. На зараженность токсоплазмами с помощью РНГА исследовали сыворотки крови крупного рогатого скота и свиней. В работе применяли растворимый и корпускулярный антигены Toxoplasma gondii штамма RH. Тест-системы с антигенными эритроцитарными диагностикумами на основе тро-фозоитов токсоплазм изготавливали в научном Центре лабораторных исследований при ФГБОУ Во РГАТУ. Для диагностики токсоплазмоза показана возможность применения РНГА с антигенами Toxoplasma gondii, полученными путем многократного замораживания-оттаивания и дезинтеграции детергентом тритон Х-100. Активность токсоплазменных антигенов (Аг) в РНГА различается в зависимости от способа приготовления: корпускулярные Аг не пригодны из-за неспецифической агглютинации; растворимый комплексный мембрано-цитоплазменный антиген характеризуется высокой специфичностью; мембранные фракции Аг Toxoplasma gondii, полученные при обработке детергентом, максимально активны. Диагностический титр при исследовании на токсоплазмоз в РНГА - 1:80, в меньших разведениях выражены антигенные связи с таксономически близкими паразитическими простейшими рода Sarcocystis. Перекрестные реакции в РНГА между Toxoplasma gondii и Sarcocystis spp. при использовании сверхпороговых разведений сывороток крови не выявлены. Серологический скрининг на токсоплазмоз при помощи РНГА позволил обнаружить антитела к Toxoplasma gondii у 25,7 % крупного рогатого скота и 42 % свиней.
Literatura
УДК 576.89:639.3
СЕРОЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИИ МОНИТОРИНГ ПРИ ТОКСОПЛАЗМОЗЕ
© Новак М. Д., Новак А. И., Назарова С. А., 2018 г
Ключевые слова: токсоплазмоз, Toxoplasma gondii, свиньи, крупный рогатый скот, серологическая диагностика, реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), биологическая проба, послеубойные исследования.
Введение
Несмотря на панзоотический характер эпизоотического процесса при токсоплазмозе, клинически выраженные формы заболевания среди людей и животных достаточно редкие. Как правило, это случаи реактивации латентного и хронического токсоплазмоза вследствие иммунодефицитных состояний различной этиологии и смешанных форм с хронически протекающими инфекциями.
Первостепенное значение в распространении возбудителя токсоплазмоза (Toxoplasma gondii) имеют кошки (дефинитивные хозяева), у которых специфические антитела обнаруживают в 35-62% случаев. Пролиферативные стадии токсоплазм (трофозоиты, цисты, псевдоцисты) установлены у многих видов млекопитающих и птиц, в том числе сельскохозяйственных животных. В Болгарии [4] при серологическом скрининге и с помощью аллергической внутрикожной пробы выявлено 5-20% коров, серопозитивных и положительно реагирующих на токсоплазмоз. Аналогичные данные по распространенности токсоплазмоза получил Б.А. Тимофеев [7] при обследовании коров в Тверской, Московской и других областях Центральной части России. В Германии и Австрии диагноз на токсоплазмоз подтвержден при исследовании 18% коз, 23% овец, 15,5% свиней, 16,5% кур. T. Hagiwara, Y. Katsube [12] токсоплазмы обнаружили в 4 % проб диафрагмы от 98 туш клинически здоровых свиней, а также в 1% проб свинины из мясных лавок Токио. При исследовании экстракта из свинины с помощью метода Себин-Фельдмана выяснена его высокая эффективность в диагностике токсоплазмоза.
Отечественными учеными H.B. Градковской, Л.И. Грачевой, Н.А. Захаровой [2] установлена корреляция результатов РНГА, НРИФ и ИФА при исследовании на токсоплазмоз сывороток крови людей. Авторами описан способ приготовления токсоплазменного антигена и методика постановки иммуноферментного анализа. ИФА - наиболее достоверный, информативный и чувствительный тест по сравнению с другими [6].
C. Marenzi et al. [15] изучали распространение токсоплазмоза среди овец и коз. Для исследования использовали реакцию прямой агглютинации (РА), латексагглютинации (РЛА), РНГА, РСК и метод Се-бин-Фельдмана с красителем. У серопозитивных животных титры антител в реакции с красителем составляли 1:50-1:4000, в РА - 1:40-1:20480. У мышей, зараженных гомогенатом мышечной ткани из проб сердца и языка, в РА уровень антител соответственно составлял 1:2048 и 1:128.
В Малайзии на антитела к токсоплазмам исследованы сыворотки крови 132 коров, 107 коз, 106 овец, 122 свиней и 48 кур. Исследования проводили с помощью НРИФ и РНГА (Tox Ha). Положительные результаты получены соответственно в 0; 17,8; 22,6; 15,6; 16,6 % случаев.
Реактивация латентного или хронически про-
текающего токсоплазмоза часто является причиной слабой напряженности иммунитета [11]. S. Bretagne et al. [9] показана роль полимеразной цепной реакции (ПЦР) в диагностике рецидивов токсоплазмоза у реципиентов после пересадки костного мозга, смертность которых от генерализованной формы болезни достигает 70-100%, несмотря на специфическую терапию. ПЦР -молекулярно-биологический метод диагностики, позволяющий достаточно точно определить врожденный токсоплазмоз. Известны случаи токсоплазмоза ассоциированного с ВИЧ-инфекцией. Исследования проведены с помощью ИФА, НРИФ и реакции торможения гемагглютинации [5, 10, 13, 16].
Методом биопробы трофозоиты Т. gondii выделены из крови, спинномозговой жидкости, брон-хоальвеолярных смывов и мокроты людей [12]. Выяснена более высокая активность антигенов тахизоитов токсоплазм, полученных на культуре клеток, по сравнению с таковыми из перитонеаль-ного экссудата экспериментально зараженных белых мышей [1].
A.M. Tenter, A.M. Johnson [18] при тестировании сывороток крови на токсоплазмоз в ИФА использовали рекомбинантный паразитарный белок -нуклеозидтрифосфатгидролазу. Специфичность метода составила 92-98 %, что соответствует таковой, наблюдаемой при использовании антигенов эндозоитов Тохор^та gondii. С помощью метода иммунофлуоресценции определены антигенные различия между цистозоитами (брадизоитами) и эндозоитами (тахизоитами) Т. gondii. Иммунные сыворотки к брадизоитам реагируют только с ними, тогда как сыворотки к тахизоитам показывают положительный результат как с тахи-, так и с брадизоитами [14].
ИФА, НРИФ и РНГА обладают значительными преимуществами по сравнению с другими серологическими методами, так как сочетают высокую чувствительность, специфичность, несложную технику выполнения [6, 17, 18]. Достоверность результатов зависит от способа получения антигенов. Активность антигенов тахизоитов Т. gondii выше, чем брадизоитов. Наибольшей активностью обладают антигены тахизоитов, полученных на культуре клеток.
Известны различные стадии токсоплазмоза, как клинически выраженного заболевания: глазной, церебральный, хронический, внутриутробный [14]. Описаны симптомы токсоплазмоза у овец, коз и свиней. У новорожденных ягнят и козлят наблюдаются признаки менингоэнцефали-та и нарушения дыхания; абортированные плоды мумифицированы и частично мацерированы [8]. Крупный рогатый скот наиболее устойчив к экспериментальному заражению токсоплазмами. Для свиней при токсоплазмозе характерны не только аборты, но и рождение поросят с различными уродствами и гермафродитизмом, а также
нежизнеспособных.
При реактивации токсоплазмоза в период беременности у женщин отмечают аборты, у новорожденных - поражения центральной нервной системы, глаз (гидроцефалия, энцефаломиелит, менингоэнцефалит, кератит, хориоретинит) [3].
Устойчивость ооцист токсоплазм к неблагоприятным факторам внешней среды обуславливает высокую напряженность эпизоотического и эпидемического процесса [6].
Данные по эпизоотологической и эпидемиологической географии токсоплазмоза, различной патогенности штаммов Toxoplasma gondii, по разнообразию антигенного спектра пролифератив-ных стадий (тахи-, брадизоитов) и эффективности серологических, молекулярно-биологических методов представляют методологическую основу комплексной диагностики и профилактики. Современный мониторинг с использованием инновационных технологий позволяет предупреждать спорадические случаи, энзоотии и эндемии ток-соплазмоза. Актуальным является разработка экспресс-тестов для выявления токсоплазм в молоке, мясе и в получаемых из них продуктах на перерабатывающих предприятиях.
Материалы и методы исследований
На зараженность токсоплазмами с помощью РНГА исследовали сыворотки крови крупного рогатого скота и свиней. В работе применяли растворимый и корпускулярный антигены Toxoptasma gondii шт. RH. Тест-системы с антигенными эри-троцитарными диагностикумами из Toxoplasma gondii штамма RH готовили в лаборатории паразитологии ФГБОУ ВО РГАТУ.
Эритроцитарные диагностикумы для скрининга на токсоплазмоз изготавливали на основе свободных пролиферативных форм токсоплазм, выделенных из брюшного экссудата белых мышей и очищенных путем четырехкратного центрифугирования в фосфатно-солевом буфере (рН=7,2-7,4). Концентрированную суспензию трофозоитов Toxoplasma подвергали разрушению многократным замораживанием и оттаиванием, а также путем воздействия детергентом тритон Х-100.
Эритроциты барана (один из компонентов РНГА) формалинизировали по Вайнбаху. Для получения эритроцитов кровь брали во флакон с раствором Олсвера (1:1,2). В день приготовления диагностикума эритроциты трижды отмывали в забуференном физиологическом растворе - ФСБ (рН=7,2-7,4). Взвесь эритроцитов барана в фосфатном буфере (рН=7,2) 2,5% концентрации соединяли с равным объемом раствора танина (1:20000). Смесь инкубировали 10 мин. при температуре 37 °С, после чего двукратно отмывали центрифугированием в забуференном физиологическом растворе (рН=7,2) в течение 10 мин. при 2000 об./мин. Надосадок удаляли, эритроциты однократно отмывали забуференным физиологическим раствором (рН=7,2) и готовили из них 2,5% взвесь в фосфатно-солевом буфере (рН=7,2).
Эритроциты после обработки танином соединяли с антигеном (количество белка 50-70 мкг/мл) в равных объемах и помещали на 18-20 ч в термостат при температуре 37 °С. Для фиксации антигена на эритроцитах за 1 ч до окончания сенсибилизации к суспензии добавляли 1 % формалина.
После инкубации диагностикум дважды в течение 10 мин. отмывали от избытка антигена кроличьей сывороткой, разведенной 1:250 физиологическим раствором рН=7,2, третий раз - фос-фатно-солевым буфером рН=7,2, и осадок взвешивали в первоначальном объеме, т.е. получали 2,5% концентрацию эритроцитов. Для хранения к токсоплазменному антигенному эритроцитарному диагностикуму добавляли раствор формалина в конечной концентрации 1 %.
Перед постановкой реакции непрямой гемаг-глютинации для инактивации комплемента исследуемые сыворотки крови помещали в термостат при температуре 56 °С на 30 мин. В день постановки РНГА проводили разведения сывороток крови от 1:20 до 1:2560. Исследуемую сыворотку разводили забуференным физиологическим раствором (рН=7,2) или кроличьей сывороткой 1:100. В горизонтальные ряды лунок планшета с помощью автоматической пипетки вносили по 25 мкл каждого разведения сыворотки, затем в каждую лунку такой же объем сенсибилизированных ток-соплазменным антигеном эритроцитов барана (2:1). Инкубацию проводили при комнатной температуре в течение двух часов. При постановке реакции непрямой гемагглютинации на токсоплаз-моз применяли следующие контроли:
1 - эритроциты, обработанные танином и сенсибилизированные токсоплазменным антигеном + нормальная кроличья сыворотка в разведении 1:100 (контроль на спонтанную агглютинацию эритроцитов);
2 - забуференный физиологический раствор (рН=7,2) + эритроциты (контроль на спонтанную агглютинацию);
3 - эритроциты, обработанные танином + иммунная гетерологичная сыворотка против Sarcocystis, разведенная нормальной кроличьей сывороткой 1:100 (контроль на специфичность).
Учет результатов реакции непрямой гемагглютинации проводили по диаметру зоны агглютинированных эритроцитов: положительный результат - 3 мм и более, отрицательный - 2 мм.
Реакцию непрямой гемагглютинации в разведениях сыворотки крови 1:20-1:40 считали неспецифической, а в титрах 1:80 и выше оценивали как положительный результат на токсоплазмоз.
Результаты исследований и обсуждение
Специфичность реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) определяли, используя антигенные эритроцитарные диагностикумы, полученные на основе токсоплазменных и саркоцистных иммуно-реагентов. Результаты представлены в таблице.
Таблица - Специфичность антигенных токсоплазменных диагностикумов в РНГА
Иммунные и испытуемые (спонт.) сыворотки РНГА
ТАгЭД САгЭД
Токс. свин. 1:640 0
Токс. свин. 1:320 0
Токс. к.р.с. 1:1280 1:40
Токс. крол. 1:2560 1:80
Сарк. крол. 1:40 1:5120
Условные обозначения: ТАгЭД - токсоплаз-менный антигенный эритроцитарный диагности-кум; «Токс. крол.» - иммунная токсоплазменная кроличья сыворотка; «токс. свин.» - сыворотка спонтанно зараженной токсоплазмами свиньи; «токс. к.р.с.» - сыворотка спонтанно зараженного токсоплазмами крупного рогатого скота; САгЭД -саркоцистный антигенный эритроцитарный диа-гностикум; спонт. - сыворотки крови от спонтанно зараженных животных; «0» - отрицательный результат.
Учитывая антигенное родство паразитических простейших Toxoplasma gondii и Sarcocystis spp. при постановке реакции непрямой гемагглютина-ции на токсоплазмоз следует предполагать вероятное присутствие в сыворотке крови животных саркоцистных антител. Особенно часто сарко-цистами инвазирован крупный рогатый скот. При этом титр токсоплазменных антител 1:40 нельзя считать диагностическим. Диагноз на токсоплазмоз можно считать достоверным при положительных результатах в титрах 1:80 - 1:160 и выше.
В выполненных экспериментальных исследо-
ваниях перекрестные иммунологические реакции между Toxoplasma gondii и Sarcocystis обнаружены при использовании токсоплазменного антигенного эритроцитарного диагностикума и наличии в исследуемых сыворотках крови антител к проли-феративным формам саркоцист (меронты, метро-циты, промежуточные клетки, мерозоиты) в титрах 1:40. В обратном варианте скрининг токсоплаз-менных сывороток с применением саркоцистного антигена в РНГА позволил установить отрицательный результат.
Серологический скрининг на токсоплазмоз свиней и крупного рогатого скота, проведеный в нескольких хозяйствах Центрального района Российской Федерации, показал следующие результаты: антитела к Toxoplasma gondii выявлены в РНГА у 25,7% крупного рогатого скота и 42% свиней. В группах молодняка 5-12 мес. на токсоплазмоз серопозитивны 11,5%, среди быков и телок 13-24 мес. - 21,8%, взрослого скота - 17,8-29,7%. Результаты исследований крупного рогатого скота в различные сезоны года показали увеличение количества серопозитивных животных в весенне-летний период. Весной и летом экстенсивность инвазии составила соответственно 53,3 и 55-70%.
Исследования на токсоплазмоз в РНГА и методом хроматографии позволили обнаружить антитела к Toxoplasma gondii у свиноматок, хряков, ремонтных свинок, животных на откорме и дора-щивании.
Наиболее высокие показатели экстенсивности инвазии при токсоплазмозе отмечены среди подсвинков на откорме в возрасте 9-10 мес. - 61,5% и свиноматок 2-4 лет - 38%. Хряки 2-4 лет, поросята на доращивании 2-3 мес. и ремонтные свинки 6-12 мес. оказались серопозитивны в РНГА соответственно на 8, 34 и 37,5% (рис. 1).
Рис. 1 - Возрастная динамика токсоплазмоза свиней
При выборочном исследовании проб головного лых мышах диагноз на токсоплазмоз подтвержден мозга, селезенки и лимфатических узлов от под- в трех из восьми случаев (рис. 2). свинков методом биопробы на лабораторных бе-
* jZ> »
У V
Рис. 2 - Трофозоиты Toxoplasma gondii из брюшного экссудата мышей (результаты биопробы)
Для токсоплазмоза свиней свойственна сезонная динамика. Результаты серологических исследований в зимний (19-25%), весенний (21-61%), летний (19-59%) и осенний (15-17 %) сезоны года свидетельствуют о возрастании числа серопози-тивных животных в весенне-летний период.
Максимальные показатели серопозитивности на токсоплазмоз у свиней в мае - 61%, а значения титров антител к Toxoplasma gondii также возрастают в апреле-мае (1:640, 1:1280).
При серологическом исследовании на токсоплазмоз коров 3-8 лет получены следующие результаты: серопозитивны 22,2% в титрах 1:80-1:б4о при отсутствии саркоцистных антител, получены одновременно положительные результаты на токсоплазмоз (1:160-1:1280) и саркоцистоз (1:80-1:320) - 72,2%. В группе молодняка до 1,5 лет: положительные результаты на токсоплазмоз установлены в титрах 1:80-1:640 при отсутствии саркоцистных антител - 18%, серопозитивны на токсоплазмоз (1:160 - 1:640) и саркоцистоз (1:801:320) - 59,2%.
Результаты РНГА на токсоплазмоз свиней,
крупного рогатого скота показаны на рисунке 3. В связи с тем, что Toxoplasma gondii имеет антигенное родство с Sarcocystis, необходимо учитывать возможность перекрестных положительных реакций на токсоплазмоз у животных, зараженных саркоцистами. Титр антител 1:80 при постановке реакции непрямой гемагглютинации на токсоплазмоз является пороговым, поэтому не считается диагностическим при наличии положительного результата на саркоцистоз. Соотношение титров антител на токсоплазмоз и саркоцистоз определяли при исследовании крупного рогатого скота. Уровень токсоплазменных антител 1:40 у 23,4% животных не оценивали как диагностический, так как в сыворотках крови одновременно присутствовали саркоцистные антитела в титрах от 1:80 до 1:640. Положительные результаты РНГА на токсоплазмоз при отрицательных на саркоцистоз отмечены у 9,9% животных, титры 1:80-1:1280. Смешанная инвазия установлена в 67% случаев по соотношению титров токсоплазменных антител 1:160-1:1280 и саркоцистных - 1:80-1:640.
а б
Рис. 3 - Результаты РНГА на токсоплазмоз животных: а - свиней (положительны сыворотки крови № 1 - 1:1280, № 3 и 5 - 1:2560); б - крупного рогатого скота (положительны сыворотки крови № 3 - 1:2560, № 4 - 1:1280).
Отсутствие положительных результатов РНГА на токсоплазмоз в разведениях сывороток крови от 1:40 до 1:320 объясняется торможением реакции агглютинации вследствие блокирования активных антигенных рецепторов на эритроцитах циркулирующими иммунными комплексами (ЦИК) с последующим прекращением этого эффекта в больших разведениях. Полученные данные подтверждают реактивацию латентной формы токсоплазмоза у свиней и крупного рогатого скота в весенний сезон, что обусловлено иммунодефицитным состоянием (снижением клеточно-гуморального иммунитета) и сопровождается наличием в крови животных как свободных специфических антител, так антигенов и ЦИК. Рецидивы заболевания возникают при разрушении псевдоцист токсоплазм и циркуляции в крови тахизоитов, для которых свойственна высокая антигенная активность и вирулентность.
При серологическом тестировании животных вышеуказанных видов в осенний и зимний периоды антигены и ЦИК в крови, как правило, не выявляются. Латентные формы и хроническое течение токсоплазмоза характеризуется невысоким уровнем антител (1:80-1:160), так как брадизоиты цист Toxoplasma gondii не обладают активными антигенными свойствами.
Кроме РНГА, для выявления антител и антигенов в сыворотках крови крупного рогатого скота и свиней использовали хроматографический экспресс-тест с красителем на нитроцеллюлозной мембране. Корреляция результатов исследований в двух вышеуказанных тестах составила 97,5 %. Преимуществом хроматографического метода является возможность обнаружения антигенов токсоплазм в головном мозге, миокарде, тканях паренхиматозных органов и скелетных мышцах. Такие скрининговые исследования востребованы на мясоперерабатывающих предприятиях, бойнях.
Большинство штаммов токсоплазм цистоген-ные, т.е. формируют цисты в головном и спинном мозге. Кроме цист с паразитофорной вакуолью в центральной нервной системе, встречаются колонии токсоплазм (псевдоцисты) в сердце, печени, селезенке, лимфатических узлах, скелетных мышцах. Пролиферация токсоплазм в форме трофозо-итов, образование псевдоцист во внутренних органах отмечается в ранние сроки инвазии, а цисты Toxoplasma gondii - при латентной форме и длительном хроническом течении заболевания.
Необходимо иметь представление о реальной зараженности токсоплазмами животных, являющихся источником возбудителя для человека. Растворимые саркоцистные антигены содержатся в коровьем молоке, это предполагает присутствие значительного количества антител в виде иммунных комплексов. О наличии саркоцистных антител в сыворотках крови людей сообщают многие зарубежные ученые. Становятся понятными довольно часто встречающиеся ложноположительные результаты (РСК, НРИФ, РНГА) на токсоплазмоз у людей. Основной причиной их является естественная иммунизация содержащимися в молоке саркоцистными антигенами, филогенетически
близкими к токсоплазменным.
Учитывая эпидемическое значение токсоплазмоза, экономический ущерб, причиняемый животноводческим предприятиям, необходимо своевременно проводить диагностические исследования с использованием современных иммунодиагно-стических тестов (РНГА, НРИФ, ИФА и др.), выявлять источники инвазии и проводить комплексные профилактические мероприятия с учетом эпизо-отологической и эпидемиологической географии, механизма и множественных путей передачи возбудителя.
Выводы
Для диагностики токсоплазмоза показана возможность применения РНГА с антигенами Toxoplasma gondii, полученными путем многократно замораживания-оттаивания и дезинтеграции детергентом тритон Х-100.
Активность токсоплазменных антигенов (Аг) в РНГА различается в зависимости от способа приготовления: корпускулярные Аг не пригодны из-за неспецифической агглютинации; растворимый комплексный мембрано-цитоплазменный антиген является специфичным, а мембранные фракции Аг Toxoplasma gondii, полученные при обработке детергентом, максимально активны - 1:25601:5120.
С помощью хроматографического экспресс-теста можно обнаруживать как токсоплазмен-ные антитела в сыворотке крови, так и антигены Toxoplasma gondii в тканях и органах при проведении исследований в условиях мясоперерабатывающих предприятий. Корреляция результатов хроматографического метода и РНГА составляет 97,5%.
Перекрестные реакции в РНГА между Toxoplasma gondii и Sarcocystis при использовании сверхпороговых разведений сывороток крови не выявлены. Диагностический титр при исследовании на токсоплазмоз в РНГА - 1:80.
Серологический скрининг на токсоплазмоз при помощи РНГА позволил обнаружить антитела к Toxoplasma gondii у 25,7 % крупного рогатого скота и 42 % свиней.
Список литературы
1.Гладкова, С.Е. Иммунохимическое изучение антигенов тахизоитов Toxoplasma gondii, полученных в различных системах культивирования [Текст] / С.Е. Гладкова, Н.И. Бормотов, Л.М. Дедко-ва, С.С. Решетников, Т.Б. Курлаева, Е.Ф. Беланов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1998. - № 1. - С. 20-23.
2.Градковская, Н.В. Использование иммуноферментного анализа в диагностике токсоплазмоза [Текст] / Н.В. Градковская, Л.И. Грачева, Н.А. Захарова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1985. - № 4. - С. 69-72.
3.Грачева, Л.И. Проблема токсоплазмоза [Текст] / Л.И. Грачева // Педиатрия. - 1999. - № 4. - С. 83-86.
4.Курдова, Р. Остра и латентна токсоплазмоза при HIV инфектирани лица [Текст] / Р. Курдова, Т. Духовникова, Д. Бешков, И. Диков, Н. Цветкова, П.
Рачев // Инфектология. - 1996. - Вып. 33. - № 1. - С. 25-27.
5.Лукьянова, Т.А. Серодиагностика токсо-плазмоза методом иммуноферментного анализа [Текст] / Т.А. Лукьянова // Педиатрия. - 1996. - №
4. - С. 30-32.
6.Новак, М.Д. Токсоплазмоз [Текст] / М.Д. Но-вак, А.И. Новак, С.Н. Королева // Кострома: Издательство КГСХА, 2005. - 98 с.
7.Тимофеев, Б.А. Токсоплазмоз крупного рогатого скота: автореф. дисс. ... доктора вет. наук: 03.00.19 [Текст] / Ставрополь, 1975. - 44 с.
8. Arthur, M.J. IFAT detection of Ig G specific to toxoplasma in thoracic fluids from aborted lambs: Evalution on routine diagnostic submissions [Текст] / M.J. Arthur, D.A. Blewett // Veter. Rec. - 1988. - V. 122. - № 2. - P. 29-31.
9. Bretagne, S. Late toxoplasmosis evidenced by PCR in marrow transplant recipient [Текст] / S. Bretagne, J.M. Costa, M. Kuentz, D. Simon, M. Vidaud, I. Fortel, J.P. Vernant, C. Cordonnier / Bone Marrow Transplant. - 1995. - 15, № 5. - Р. 809-811.
10. Conti, C. Diagnose von Toxoplasma gondii - infectionen bei AIDS-patienten mit der Gewebekulturtechnik [Текст] / C. Conti, R. Romani,
5. Magno, S. Delia / Clin. Lab. - 1996. - 42, № 3. - Р 204-205.
11. Deckert-Schluter, M. Different subsets of immune cells mediate the intracerebral immune response to Toxoplasma gondii in athymic nude and euthymic immunocompetent Lewis rats [Текст] / M. Deckert-Schluter, A. Hein, R. Dorries, D. Schluter // Abstr. 40th Annu. Meet. Dtsch Ges. Neuropathol. Und Neuroanat., Tubingen, Oct. 11-14, 1995. - Clin. Neuropathol. - 1995. - 14, № 5. - Р. 254.
12. Hagiwara, T. Detection of Toxoplasma infection in pork by Sabin-Feldman s dye test with meat extract [Текст] / T. Hagiwara, Y. Katsube // Japan. J. Veter. Sc. - 1981. - V. 43. - № 5. - P. 763-765.
13. Hellerbrand, C. Untersuchunden uber die Bedeutung der Serologie fur die Diagnose und Profilaxe der Toxoplasmoseen zephalitis bei HIVinfizierten Patienten: diss. ... dok. med. science: 03.00.19 [Текст] / Fak. Med. Techn. Univ., Munchen, 1994. - 101 s.
14.Lund, M.N. Antigenic differences between endozoites and cystozoites of Toxoplasma gondii [Текст] / M.N. Lund, L. Jacobs // J. Parasitol. - 1983.
- V. 69. - № 5. - P. 806-808.
15. Marenzi, C. Toxoplasmosi in ovini e caprini allevati in provincia di Varese: indagini siero-immunologiche e isolamento di toxoplasma gondii da organi e tessuti [Текст] / C. Marenzi, F. Avezza, M. Finazzi, D. Rothauer, F. Turri // Arch. vet. ital. - 1985.
- V. 36. - № 3. - P. 53-60.
16. Marty, P. Prenatal diagnosis of severe fetal toxoplasmosis a resuet of toxoplasmic reactivation in an HIV-1 seropositive woman [Текст] / P. Marty, A. Bondain, A. Ranal, P. Thulliez, D. Wasfi, J.C. Lambert, Y. Le Fichoux, J.Y. Gillet / Prenat. Diagn. - 1994. - 14, № 5. - Р. 414-415.
17 Miller, R.F. Disseminated Toxoplasma gondii infection presenting with a fulminant pneumonia [Текст] / R.F. Miller, S.B. Lucas, M.T. Bateman // Genitourin. Med. - 1996. - 72, № 2. - Р. 139-143.
18. Tenter, A.M. An ELISA for toxoplasmosis using recombinant nucleoside triphosphate hydrolase [Текст] / A.M. Tenter, A.M. Johnson // Bull. Soc. fr. Parasitol. - 1990. - V. 8. - № 2. - P. 936.
SEROEPIDEMIOLOGICAL MONITORING FOR TOXOPLASMOSIS
Novak Mikhail D., Doctor of biology, Professor, professor of department of epizootology, microbiology and parasitology, [email protected].
Novak Alexandra I., Doctor of biology, professor of department of zootechnia and biology Nazarova Svetlana A., graduate student of department of epizootology, microbiology and parasitology. [email protected]
Ryazan State Agrotechnological University named after P.A. Kostychev
Contemporary approaches in tactics of diagnosis toxoplasmosis animals. The basis of epidemic and epizootic welfare is a retrospective monitoring of the incidence of toxoplasmosis, analysis of results seroepidemiological, parasitological studies on laboratory animals bioprobe and comprehensive preventive veterinary-sanitary measures in livestock farms and meat processing plants. Current direction is to develop rapid tests to identify Toxoplasma gondii in meat, milk and derived products in the processing plants. Toxoplasmosis to the infestation with Phragmites investigated the blood serum of cattle and pigs. There was used a soluble and corpuscular antigens of Toxoplasma gondii strain RH. Test with antigenic erythrocytic diagnosticums on the basis of Toxoplasma trophozoites produced in a research Center laboratory research for of RGATU. For the diagnosis of toxoplasmosis is shown the possibility of using Phragmites with antigens of Toxoplasma gondii obtained by repeatedly freezing and thawing and disintegration of the detergent Triton X-100. For the diagnosis of toxoplasmosis is shown the possibility of using Phragmites with antigens of Toxoplasma gondii obtained by repeatedly freezing and thawing and disintegration of the detergent Triton X-100. Activity toxoplasmosis antigens (Ag) in Phragmites varies depending on the method of preparation: particulate Ag are not suitable due to nonspecific agglutination; soluble complex membrane-cytoplasmic antigen is characterized by high specificity; membrane fraction Ag of Toxoplasma gondii, obtained by treatment with detergent, the most active. The diagnostic titer in the study on toxoplasmosis in Phragmites - 1:80, in smaller dilutions are expressed antigenic connection with taxonomically close parasitic protozoan of the genus Sarcocystis. Cross-reactions in Phragmites between Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp. when using higher diagnostic titer dilutions of blood serum were not identified. Serological screening for toxoplasmosis by using Phragmites allowed to detect antibodies to Toxoplasma gondii from 25,7% of cattle and 42 % of pigs.
Key words: toxoplasmosis, Toxoplasma gondii, pigs, cattle, serum diagnostics, reaction of indirect hemagglutination (RIHA), bioassay method in laboratory animals, veterinary examination after the slaughter of animals.Modern approaches are presented in tactics of diagnostics and prophylaxis oftoxoplasmosis of animals. Basis of epidemic and epizootic prosperity is the retrospective monitoring of morbidity by a toxoplasmosis, analysis of results of seroepizootology and parasitology researches, bioassays on laboratory animals and complex prophylactic, veterinary gygien events in live farming and on meet enterprises.
1.Gladkova. S.E. Immunokhimicheskoye izucheniye antigenovtakhizoitov Toxoplasma gondii. poluchennykh vrazlichnykh sistemakh kultivirovaniya[Tekst]/S.E. Gladkova. N.I. Bormotov. L.M. Dedkova. S.S. Reshetnikov. T.B. Kurlayeva. E.F. Belanov//Meditsinskaya parazitologiya iparazitarnyye bolezni. - 1998. - № 1. - S. 20-23.
2.Gpadkovskaya. N.V. Ispolzovaniye immunofepmentnogo analiza v diagnostike toksoplazmoza [Tekst] / N.V. Gpadkovskaya. L.I. Gpacheva. N.A. Zakhapova //Zhupnal mikpobiologii. epidemiologii i immunobiologii.
- 1985. - № 4. - S. 69-72.
3.Gracheva. L.I. Problema toksoplazmoza [Tekst]/L.I. Gracheva //Pediatriya. - 1999. - № 4. - S. 83-86.
4.Kurdova. R. Ostra i latentna toksoplazmoza pri HIVinfektirani litsa [Tekst]/R. Kurdova. T. Dukhovnikova. D. Beshkov. I. Dikov. N. Tsvetkova. P. Rachev//Infektologiya. - 1996. - Vyp. 33. - № 1. - S. 25-27.
5.Lukianova. T.A. Serodiagnostika toksoplazmoza metodom immunofermentnogo analiza [Tekst] / T.A. Lukianova // Pediatriya. - 1996. - № 4. - S. 30-32.
6.Novak. M.D. Toksoplazmoz [Tekst] / M.D. Novak. A.I. Novak. S.N. Koroleva // Kostroma: Izdatelstvo KGSKhA. 2005. - 98 s.
7.Timofeyev. B.A. Toksoplazmoz krupnogo rogatogo skota: avtoref. diss. ... doktora vet. nauk: 03.00.19 [Tekst]/ Stavropol. 1975. - 44 s.
8.Arthur, M.J. IFAT detection of Ig G specific to toxoplasma in thoracic fluids from aborted lambs: Evalution on routine diagnostic submissions [Текст] / M.J. Arthur, D.A. Blewett //Veter. Rec. - 1988. - V. 122. - № 2.
- P. 29-31.
9.Bretagne, S. Late toxoplasmosis evidenced by PCR in marrow transplant recipient [Текст] / S. Bretagne, J.M. Costa, M. Kuentz, D. Simon, M. Vidaud, I. Fortel, J.P. Vernant, C. Cordonnier / Bone Marrow Transplant.
- 1995. - 15, № 5. - Р. 809-811.
10.Conti, C. Diagnose von Toxoplasma gondii - infectionen bei AIDS-patienten mit der Gewebekulturtechnik [Текст]/ C. Conti, R. Romani, S. Magno, S. Delia / Clin. Lab. - 1996. - 42, № 3. - Р. 204-205.
11. Deckert-Schluter, M. Different subsets of immune cells mediate the intracerebral immune response to Toxoplasma gondii in athymic nude and euthymic immunocompetent Lewis rats [Текст] /M. Deckert-Schluter, A. Hein, R. Dorries, D. Schluter//Abstr. 40th Annu. Meet. Dtsch Ges. Neuropathol. Und Neuroanat., Tubingen, Oct. 11-14, 1995. - Clin. Neuropathol. - 1995. - 14, № 5. - Р. 254.
12. Hagiwara, T. Detection of Toxoplasma infection in pork by Sabin-Feldman s dye test with meat extract [Текст]/ T. Hagiwara, Y. Katsube // Japan. J. Veter. Sc. - 1981. - V. 43. - № 5. - P. 763-765.
13. Hellerbrand, C. Untersuchunden uber die Bedeutung der Serologie fur die Diagnose und Profilaxe der Toxoplasmoseen zephalitis bei HIV-infizierten Patienten: diss. ... dok. med. science: 03.00.19 [Текст] /Fak. Med. Techn. Univ., Munchen, 1994. - 101 s.
14.Lund, M.N. Antigenic differences between endozoites and cystozoites of Toxoplasma gondii [Текст] / M.N. Lund, L. Jacobs // J. Parasitol. - 1983. - V. 69. - № 5. - P. 806-808.
15.Marenzi, C. Toxoplasmosi in ovini e caprini allevati in provincia di Varese: indagini siero-immunologiche e isolamento di toxoplasma gondii da organi e tessuti [Текст]/ C. Marenzi, F. Avezza, M. Finazzi, D. Rothauer, F. Turri //Arch. vet. ital. - 1985. - V. 36. - № 3. - P. 53-60.
16. Marty, P. Prenatal diagnosis of severe fetal toxoplasmosis a resuet of toxoplasmic reactivation in an HIV-1 seropositive woman [Текст] / P. Marty, A. Bondain, A. Ranal, P. Thulliez, D. Wasfi, J.C. Lambert, Y. Le Fichoux, J.Y. Gillet/Prenat. Diagn. - 1994. - 14, № 5. - Р. 414-415.
17. Miller, R.F. Disseminated Toxoplasma gondii infection presenting with a fulminant pneumonia [Текст] /R.F. Miller, S.B. Lucas, M.T. Bateman//Genitourin. Med. - 1996. - 72, № 2. - Р. 139-143.
18.Tenter, A.M. An ELISA for toxoplasmosis using recombinant nucleoside triphosphate hydrolase [Текст] /A.M. Tenter, A.M. Johnson //Bull. Soc. fr. Parasitol. - 1990. - V. 8. - № 2. - P. 936.
Literatura
