CC BY
9
Vвсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ИНФЕКЦИИ И ИНФЕКЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В ГЕМАТОЛОГИИ И СЛУЖБЕ КРОВИ»
явления маркеров ГТИ в сумме: до и после карантинизации. В 2017 г. доля общей инфи-цированности ГТИ среди доноров СЗП увеличилась вдвое (5,2 %). При анализе структуры ГТИ в «браке» СЗП было установлено, что в 2017 году на сифилис приходилось 18,6 % случаев брака с основного выпуска и 33,1 % с карантина (2016 г.— 12,8 % и 11,6 %; 2015 г.— 9,7 % и 8,3 % соответственно).
ВГВ в 2017 г. диагностировался в 66% случаев от общего объема брака СЗП доноров с основного выпуска (в 2016 г.— в 68,6 %, в 2015 г.— в 50,1 %), в то время как после карантинизации показатели составили 30,6 %, 44 %, 30,3 % соответственно. В 2017 г. ВГС был выявлен у 27,3 % доноров с ГТИ на момент донации крови,— в 2015 году — в 17,5 % образцов забракованной
Санкт-Петербург 29-30 ноября 2018 г.
СЗП. После карантинизации доля ВГС в «браке» составила 17,8 % в 2017 году и 25 % в 2015 году.
В структуре ГТИ до карантинизации СЗП в 2017 г. обнаружение ВИЧ составило 4 % от брака крови с основного выпуска, в 2016 г.— 4,7 %, в 2015 г.— 6,8 % (после карантинизации СЗП: 18,5 %; 12 %; 36,4 % соответственно).
Выводы: 1. В течение периода 2015-2017 гг. в г. Казани отмечен двукратный рост частоты выявления маркеров ГТИ у доноров крови.
2. В структуре ГТИ в течение исследованного периода продолжает доминировать вирусный гепатит В, возросла также доля сифилиса (как до, так и после карантинизации).
3. Карантинизация СЗП позволяет минимизировать риск заражения гемоконтактными инфекциями при переливаниях крови.
Фиалкина С. В., Белый Ю. Ф.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени Почетного академика Н. Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
РОЛЬ В ПАТОГЕНЕЗЕ И ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ТОКСИНОВ
CLOSTRIDIUM DIFFICILE
Введение. Clostridium difficile — грамполо-жительный микроорганизм и частый возбудитель колитов, связанных с применением антибиотиков широкого спектра действия у людей. Развивающийся дисбаланс представителей нормальной флоры толстой кишки способствует размножению патогена и сопровождается продукцией им белковых токсинов — одноцепочечных мультидоменных токсинов TcdA и TcdB и бинарного токсина CDT. После проникновения TcdA, TcdB и CDT в эукарио-тические клетки путем рецептор-опосредованного эндоцитоза, ферментативные домены TcdA и TcdB модифицируют регуляторные низкомолекулярные ГТФазы семейств Rho/ Ras путем моноглюкозилирования, тогда как А-субъединица токсина CDT АДФ-рибозилирует молекулы мономерного актина. Модификация белков-мишеней приводит к их инактивации и развитию широкого спектра клеточных нарушений с признаками воспалительного поражения слизистой оболочки толстой кишки. Использование токсинов C. difficile в инструментарии научного поиска позволяет получать фундаментальные данные о механизмах физиологических и патологических процессов в эукариотических клетках. С другой стороны,
в силу особо важной роли токсинов в патогенезе диффициле-инфекции, данные факторы патогенности рассматриваются в мировой медицинской литературе в качестве основных компонентов разрабатываемых лечебно-профилактических препаратов. В нашей лаборатории проводятся исследования по созданию подобных лечебно-профилактических препаратов на основе нетоксичных производных ТЫЛ и ТсёВ, специфических однодоменных антител к ним животного происхождения, а также противовоспалительных цитокинов. При этом фрагменты токсинов А и В необходимы для стимуляции антитоксического иммунитета с выработкой организмом собственных нейтрализующих антител к данным белкам (активный иммунитет), однодоменные антитела, экзогенно поступающие в просвет кишечника, способны ингибировать токсическое действие клостридий на клетки эпителия (пассивный иммунитет), а противовоспалительные ци-токины необходимы для снижения общей воспалительной реакции тканей кишечника, являющейся важнейшим звеном патогенеза заболевания.
Цель. Разработка комплексного подхода для профилактики и иммунотерапии диффи-
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XIV, № 4, 2018
циле-колитов с использованием панели генно-модифицированных пробиотических микроорганизмов.
Материалы и методы. С применением моле-кулярно-генетических методов созданы генетические конструкции, кодирующие токсоиды TcdA и TcdB, однодоменные антитела к ним, а также модельные белки (зеленый флуоресцирующий белок GFP и люцифераза), содержащие сигнальные пептиды для специфической локализации продуктов (внутриклеточная, мембранная, внеклеточная) и под контролем конститутивных и индуцибельных промоторов. Штаммы безвредных для человека микроорганизмов Saccharomyces cerevisiae, Lactococcus lactis, Lactobacillus ramnosus, L. plantarum, Bacillus subtilis и B. megaterium (GRAS, "generally regarded as safe") были трансформированы нуклеотид-ными последовательностями, кодирующими перечисленные белки. Продукция белков исследовалась в опытах in vitro с использованием
флуоресцентной микроскопии, Вестерн-блот-тинга и измерения уровня хемилюминесценции.
Результаты. Проведенные эксперименты показали существенный уровень выработки фрагментов токсинов и антител к ним полученными штаммами-продуцентами in vitro. В зависимости от типа сигнального пептида, исследуемые белки накапливались в цитоплазме, локализовались на поверхности клетки или секретировались во внеклеточную среду.
Выводы. Использование непатогенных штаммов микроорганизмов в качестве векторов, способных доставлять в просвет толстой кишки иммунотерапевтические препараты и протективные антигены, является реальным и перспективным подходом для разработки новых препаратов на основе токсоидов C. difficile для лечения диффициле-колитов. Подобный подход может быть использован для терапии и иных заболеваний, связанных с развитием воспалительных процессов кишечника.
Хамитова И. В., Лаврентьева И. Н., Аверьянова М. Ю., Зубаровская Л. С., Чухловин А. Б., Афанасьев Б. В.
Федеральное бюджетное учреждение науки «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, г. Санкт-Петербург
НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. Горбачевой, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ВИРУСНАЯ НАГРУЗКА И ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ ПАРВОВИРУСА B19 ПРИ АЛЛОГЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Введение. Парвовирус В19 (ПВ В19) является хорошо известным ДНК-вирусом, который поражает клетки гемопоэза, в особенности эритроидного ряда. Латентная инфекция ПВ В19 может активироваться у лиц с ослабленным иммунитетом. До сих пор не выяснено, влияет ли активация ПВ В19 на скорость обновления лейкоцитов и тромбоцитов. Эти эффекты можно исследовать при трансплантации гемопоэтических клеток (ТГСК), когда выполняется интенсивная кондиционирующая терапия с последующей миелосупрессией и восстановлением кроветворения.
Цель. Оценка уровней ПВ В19 до ТГСК и в ранние сроки после нее, наряду с показателями антительного ответа и динамикой посттрансплантационного восстановления отдельных ростков гемопоэза у пациентов.
Материалы и методы. В исследование были включены 54 пациента в возрасте от 1 до 19 лет, в основном — онкогематологического профиля, которым выполнялась аллогенная ТГСК. 51 больной из 54 наблюдались до 60 сут. после ТГСК. У 94% пациентов использовали немие-лоаблативный режим кондиционирования. Для профилактики реакции «трансплантат против хозяина» применяли антилимфоцитарный иммуноглобулин и/или циклофосфамид. Выявление ДНК ПВ В19, а также герпес- и полиомавирусов проводили до начала терапии, а также в дни +30 и +60 после ТГСК. Количественное определение ПВ В19 осуществляли посредством ПЦР в реальном времени тест-системой «Амплисенс». Антитела классов ^ и ^М к ПВ В19 определяли в количественном формате методом ИФА.
Результаты. До проведения ТГСК у 32 % пациентов были обнаружены невысокие уров-
