CC BY
7
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XIV, № 4, 2018
циле-колитов с использованием панели генно-модифицированных пробиотических микроорганизмов.
Материалы и методы. С применением моле-кулярно-генетических методов созданы генетические конструкции, кодирующие токсоиды TcdA и TcdB, однодоменные антитела к ним, а также модельные белки (зеленый флуоресцирующий белок GFP и люцифераза), содержащие сигнальные пептиды для специфической локализации продуктов (внутриклеточная, мембранная, внеклеточная) и под контролем конститутивных и индуцибельных промоторов. Штаммы безвредных для человека микроорганизмов Saccharomyces cerevisiae, Lactococcus lactis, Lactobacillus ramnosus, L. plantarum, Bacillus subtilis и B. megaterium (GRAS, "generally regarded as safe") были трансформированы нуклеотид-ными последовательностями, кодирующими перечисленные белки. Продукция белков исследовалась в опытах in vitro с использованием
флуоресцентной микроскопии, Вестерн-блот-тинга и измерения уровня хемилюминесценции.
Результаты. Проведенные эксперименты показали существенный уровень выработки фрагментов токсинов и антител к ним полученными штаммами-продуцентами in vitro. В зависимости от типа сигнального пептида, исследуемые белки накапливались в цитоплазме, локализовались на поверхности клетки или секретировались во внеклеточную среду.
Выводы. Использование непатогенных штаммов микроорганизмов в качестве векторов, способных доставлять в просвет толстой кишки иммунотерапевтические препараты и протективные антигены, является реальным и перспективным подходом для разработки новых препаратов на основе токсоидов C. difficile для лечения диффициле-колитов. Подобный подход может быть использован для терапии и иных заболеваний, связанных с развитием воспалительных процессов кишечника.
Хамитова И. В., Лаврентьева И. Н., Аверьянова М. Ю., Зубаровская Л. С., Чухловин А. Б., Афанасьев Б. В.
Федеральное бюджетное учреждение науки «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, г. Санкт-Петербург
НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. Горбачевой, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ВИРУСНАЯ НАГРУЗКА И ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ ПАРВОВИРУСА B19 ПРИ АЛЛОГЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Введение. Парвовирус В19 (ПВ В19) является хорошо известным ДНК-вирусом, который поражает клетки гемопоэза, в особенности эритроидного ряда. Латентная инфекция ПВ В19 может активироваться у лиц с ослабленным иммунитетом. До сих пор не выяснено, влияет ли активация ПВ В19 на скорость обновления лейкоцитов и тромбоцитов. Эти эффекты можно исследовать при трансплантации гемопоэтических клеток (ТГСК), когда выполняется интенсивная кондиционирующая терапия с последующей миелосупрессией и восстановлением кроветворения.
Цель. Оценка уровней ПВ В19 до ТГСК и в ранние сроки после нее, наряду с показателями антительного ответа и динамикой посттрансплантационного восстановления отдельных ростков гемопоэза у пациентов.
Материалы и методы. В исследование были включены 54 пациента в возрасте от 1 до 19 лет, в основном — онкогематологического профиля, которым выполнялась аллогенная ТГСК. 51 больной из 54 наблюдались до 60 сут. после ТГСК. У 94% пациентов использовали немие-лоаблативный режим кондиционирования. Для профилактики реакции «трансплантат против хозяина» применяли антилимфоцитарный иммуноглобулин и/или циклофосфамид. Выявление ДНК ПВ В19, а также герпес- и полиомавирусов проводили до начала терапии, а также в дни +30 и +60 после ТГСК. Количественное определение ПВ В19 осуществляли посредством ПЦР в реальном времени тест-системой «Амплисенс». Антитела классов ^ и ^М к ПВ В19 определяли в количественном формате методом ИФА.
Результаты. До проведения ТГСК у 32 % пациентов были обнаружены невысокие уров-
Vвсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ИНФЕКЦИИ И ИНФЕКЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В ГЕМАТОЛОГИИ И СЛУЖБЕ КРОВИ»
ни ДНК ПВ В19 в плазме крови, при значимых уровнях антител IgG к данному вирусу у 68% больных, что свидетельствует о высокой частоте адаптивного гуморального ответа, очевидно, при предыдущих контактах с ПВ В19. Интересно, что средние уровни парвовируса В19 по группе, как и содержание антител к нему, не изменялись на протяжении 30 и 60 сут. Однако при корреляционном анализе по всей группе выявлена достоверная связь между вирусной нагрузкой и уровнями специфических IgG-антител (г = 0.351; р < 0.0001). Кроме того, обнаружение ДНК ПВ В19 в плазме на день +30 после алло-ТГСК во всех случаях (14/14) ассоциировалось с синдромом фебрильной нейтропении у этих пациентов, что допускает непосредственное участие парвовирусной ин-
Санкт-Петербург 29-30 ноября 2018 г.
фекции в генезе подобных осложнений ТГСК. Достоверные корреляции показаны также между наличием ДНК парвовируса до ТГСК и задержкой восстановления числа эритроцитов и тромбоцитов в периферической крови (соответственно, г= - 0,281; р = 0.02, и г= - 0,303, р = 0.01). Кроме того, отмечена корреляция между повышенными титрами антител IgG к РУ В19 на день +60 после ТГСК и относительно низким содержанием нейтрофилов и тромбоцитов в периферический крови в этот срок.
Выводы. Полученные результаты дают основание предположить патогенетические связи между активацией ПВ В19 (по данным ПЦР и антительному ответу) и замедленным обновлением системы гемопоэза после алло-генной ТГСК.
