CC BY
214
вовоспалительным действием [6]. МП-система действует совместно с перекисью водорода и галоидами. Из галоидов самым эффективным кофактором при осуществлении антимикробной функции считается йодид [7]. Но уровень йода в сыворотке крови мал для эффективного функционирования МП-системы.
Таблица 2
Показатели уровня гемоглобина и эритроцитов периферической крови мышей при различных сроках лечения (М±т)
Гб(г/л) Эр. (Ю12/л) Гб (г/л) Эр. (Ю12/л) Гб (г/л) Эр. (Ю12/л)
З месяцев лечения 8 месяцев лечения 11 месяцев лечения
КХ+KJ 128±9,З 4,3±C,17 136±3,C1 4,6±C,C96 14б,2±4,З 4,64±0,05
КХ 122±7,1 4,4±C,18 141±1З,З 4,7±C,C9 142,З±7,9 4,77±0,00
Контроль (без лечения) 137,8±8,б 4,37±Q,18 13C±7,C9 З,9Ш,З 14C,7±8,3 4,75±0,038
Цель — применение КХ в виде пищевой добавки, комбинируя его с йодистым калием для повышения эффективности терапии экспериментальной лепры.
Материалы и методы исследования. Эксперимент выполнен на 18C мышах линии СВА, сопоставимых по массе и условиям содержания. Мышей заражали интраплантарно взвесью возбудителя лепры (Mycobacterium leprae) (в дозе 1C4 микробных тел на мышь), выделенных от больных лепрой лепроматозным типом и пассированных двукратно на опытных животных.
Все животные были разделены на три группы. Животным первой опытной группы после заражения одновременно давали per os подобранные ранее эффективно действующие антибактериальные дозы: свежего высушенного и молотого КХ (3CC мг/кг комбикорма) и KJ в дозе C,2 мг/кг в виде водного раствора ежедневно. Активность пероксидазы в используемом КХ (определенная методом перманганатометрического титрования) составила 1CC Е/г. Содержание аскорбиновой кислоты - 18C мг в 1CC г продукта. Вторая группа животных после заражения получала КХ в виде кормолекарственной смеси в той же дозе. Контролем служили мыши, зараженные одновременно с опытными и не получающие лечения (3-я группа). Испытания препаратов вели непрерывным методом по рекомендациям ВОЗ [8]. Через З, 8 и 11 мес. от начала лечения по З-б мышей из каждой группы декапи-тировали для получения крови, воспалительного инфильтрата и печени. Все манипуляции с животными проводили по правилам GLP. Подсчитывали количество M.leprae в лапах мышей [1C]. Активность МП НГ крови, уровень гемоглобина, число эритроцитов, лейкоцитов и лейкоцитарную формулу определяли унифицированными методами. О функции печени судили по активности аланин- и аспартатаминотрансфераз в сыворотке крови и гомогенате печени животных [1]. Статистическая обработка - по программе «Statgraphics» и t-критерию Стъюдента.
Результаты. Комбинированная терапия КХ+KJ уже через З мес. приводила к подавлению роста M.leprae в подушечках лап мышей по отношению к контролю (в 21,2 раза). У части мышей микобактерии в лапе вообще не обнаруживались. Через 8 и 11 мес. комбинация препаратов оказывала антимикробное действие, статистически превышающее эффект монотерапии КХ (табл.1).
При цитохимическом исследовании НГ крови мышей, длительно леченных комбинацией препаратов, выявлено статистически достоверный рост активности внутриклеточной МП по сравнению с контролем (табл. 1). Так же как и в [З], в крови животных под действием биодобавок не было снижения уровня гемоглобина и числа эритроцитов, что, видимо, связано с содержанием в корне хрена аскорбиновой кислоты (табл.2). Количество лейкоцитов и показатели лейкоцитарной формулы после курсов проведенной комбинированной терапии КХ+KJ статистически достоверных изменений также не имели. Уровень трансаминаз (АСТ и АЛТ) в сыворотке крови и гомогенате печени особей, получавших лечение КХ и КХ+KJ, оставался стабильным, что говорило об отсутствии токсического влияния на печень. Добавление йода усиливает антимикробные свойства МП-системы, так как его комплексирование с КХ, содержащим пероксидазу, увеличивает активность МП НГ крови. Предполагается, что с переходом йода в положительную одновалентную форму он проявляет наибольшую антибактериальную активность, а МП в присутствии даже малых количеств перекиси водорода способствует переходу йода в это высокоактивное состояние.
Доказана зависимость между способностью к фиксации йодида фагоцитами, поглощающими бактериальные клетки, и уровнем в них МП. Макрофаги мышей при низкой активности МП не фиксируют йодид [7]. Введение мышам per os пероксидазы способствует росту активности МП макрофагов [3]. Наблюдения [2] свидетельствуют, что йод оказывает терапевтическое действие при лепре, но иногда имеются побочные действия. Тогда KJ назначали в виде монотерапии и дозы были в 60100 раз выше примененных нами. В нашем исследовании KJ применяли совместно с пероксидазой, с которой он связывается и работает, оказывая антибактериальное действие. Поэтому в этих условиях KJ может и не давать побочного действия, особенно в малых дозах.
Способ лечения экспериментальной лепры путем ком-плексирования йода с корнем хрена, содержащим перокси-дазу, усиливает действие бактерицидных факторов, активирует МП-систему, что важно в терапии лепры
Литература
1. Лабораторные исследования в клинике. / Под ред.
В.В.Меньшикова.- М., 1987.
2. Малов Г .А. и др. // Труды АГМИ.- Т 10.- Астрахань, 1952.- С. 217-218.
3. Маслов А.К., Лужнова С.А. // Бюл. эксперим. биол.- 2000 - Т. 130, № 7.- С. 83-87.
4. Маслов А.К. и др. // Бюл. эксперим. биол.- 2001.- Т. 132 , № 11.- С. 551-553.
5. Маслов А.К. и др. // Бюл. эксперим. биол.- 2002.- Т. 134, № 8.- С. 181-183
6. Маслов А.К. и др. // Естеств. науки.- Астрахань: Изд-во. АГУ.- 2004.- № 7.- С.64-68.
7. Klebanoff S.J. // J. Exper. Med. 1967.- Т. 126.- С. 1063.
8. Laboratory techniques for leprosy.- Geneva, 1987.
9. Shepard C.C. // J. Exp. Med.- 1960.- Т. 112.- С. 445^54.
10. Shepard C., McRae D. // Int. J. Lepr.- 1968.- Т. 36.- С. 78.
УДК 616-002.0: 615.35
РОЛЬ ПЕРОКСИДАЗЫ В ПАТОГЕНЕЗЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РЕАЛИЗАЦИЯ ЕЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НА ПРИМЕРЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЛЕПРЫ
А.К.МАСЛОВ*
Осуществление биологических процессов невозможно без ферментов - специфических высокомоллекулярных белков, способных, участвуя в самых разнообразных реакциях, направлять, ускорять, изменять или замедлять все происходящие в организме процессы. Отсутствие или недостаток одного или ряда ферментов ведет к нарушению функций растительных и животных клеток или тканей, поскольку переваривание, всасывание и усвоение питательных веществ, синтез и распад белков, нуклеиновых кислот, жиров и углеводов и некоторых других соединений в них обусловлены совокупностью ферментативных реакций.
Ныне возрастает роль энзимологических исследований в диагностике и прогнозировании эффекта лечения заболеваний, т.к. по уровню активности ферментов возможно судить о характере патологии и диагностировать ряд заболеваний.
При определении уровня активности креатинкиназы можно проводить диагностику коронарной патологии, уровня щелочной фосфатазы - диагностировать поражения костей, кислой фосфа-тазы - рак предстательной железы, трансаминаз - болезни печени, гликолитических ферментов - нарушение метаболизма. Исследование активности лактатдегидрогеназы используется в прогнозировании эффекта лечения при гистиоцитарной лимфоме и раке яичек [20]. За последние годы много исследований посвящено изучению миелопероксидазы (МП) фагоцитирующих клеток. Известно, что МП - система нейтрофильных лейкоцитов и моноцитов-макрофагов является основной бактерицидной системой клеток, осуществляющей начальный киллинг патогенных микроорганизмов без которого невозможно их дальнейшее переваривание. По современным представлениям, кислые гидролазы
* 414057 Астрахань, проезд Н. Островского, НИИ по изучению лепры
способны разрушить в фаголизосомах фагоцитов только те бактерии, которые были умерщвлены МП-системой, неферментными катионными белками, лизоцимом и лактоферрином. Если гидролитическим ферментам лизосом фагоцитарных клеток ранее отводили основную роль в уничтожении патогенных микроорганизмов, то в настоящее время участие их в нейтрализации активности фагоцитированных бактерий остается недоказанным. По современным понятиям, им отводится преимущественно роль, заключающаяся в переработке поврежденного или ненужного клетке материала. Антимикробная функция МП определяется как декарбоксилирование и дезаминирование аминокислот бактерий [21]. Приобретенный или наследственный дефицит активности МП может способствовать развитию заболеваний различного характера, особенно хронических инфекционных и гранулематозных заболеваний, либо инфекционных осложнений при хронических заболеваниях неинфекционного генеза.
Общие сведения о ферменте. Пероксидаза - фермент класса оксидоредуктаз (КФ 1.11.1.7), катализирующий окисление субстратов и обладающий высокой специфичностью по отношению к окислению перекиси водорода. Пероксидазы широко распространены в животном и растительном мире. Клетки растений содержат особый вид органелл, имеющих пероксидазу и выполняющих антимикробную функцию. В больших количествах пероксидаза содержатся в корнях хрена и турнепса, в млечном соке фигового дерева. Присутствие фермента можно обнаружить в дереворазрушающих грибах и соке черной редьки.
В лейкоцитах и, в частности, в значительном количестве в нейтрофильных гранулоцитах крови пероксидаза впервые была выявлена Agner K. в 1941 году. Из-за зеленой окраски гноя, обусловленной распавшимися лейкоцитами, он назвал ее вердо-пероксидазой. Впоследствии пероксидаза была обнаружена в моноцитах макрофагах, купферовских клетках печени и получила название «миелопероксидаза» и эритроцитах, а также в эозино-филах, мегакариоцитах и тромбоцитах. Кроме того, пероксидаза была найдена в слюнных и молочных железах, слизистых оболочках кишок. Некоторые авторы обнаруживали пероксидазную активность в лизосомах, которые обычно характеризовались как центры активности кислых гидролаз [23].
Пероксидаза представляет собой гемопротеид с молекулярной массой от 40000 до 100000 усл. ед. Характеризуется полифункциональностью, катализируя наряду с образованием хлора-минов и гипохлорид- и гипойодит анионов с последующим активным галодированием белков фагоцитированных микроорганизмов, продукцируя синглетный кислород и некоторые альдегиды. Обычно используется препарат пероксидазы из корня хрена (ПХ). Молекулярная масса ПХ составляет 40000 усл. ед., диаметр глобул около 5 нм. В медицине лиофилизированная ПХ применяется при иммунологическом анализе для диагностики острых, хронических бактериальных, вирусных (в т.ч. СПИД), инфекционных, аллергических, эндокринологических, аутоиммунных заболеваний и злокачественных новообразований [24].
Антимикробная функция миелопероксидазы. При выраженной недостаточности МП лейкоцитов и моноцитов, последние не способны убивать грибы рода кандида, стафилококки и различные патогенные грамотрицательные микроорганизмы. Выявлено нарушение секреции МП нейтрофилов периферической крови, в тесте люминол-зависимой хемилюминесценции, у 2-х больных 5 и 18 лет с рецидивирующей инфекцией, вызванной Staphylococcus aureus [33]. Сниженная активность МП сегментоядерных нейтрофилов периферической крови отмечалась у больных хроническим миелолейкозом и сублейкемическим миелозом. В этой группе отмечен высокий процент больных с инфекционными осложнениями [4]. Определение активности МП нейтрофи-лов в настоящее время включается в число обязательных стандартных методик для диагностики острого лейкоза [10]. Низкие показатели или отсутствие активности МП в нейтрофилах крови обнаружены у больных хроническим кандидозом кожи и слизистых оболочек, что свидетельствует о значительном понижении кандидацидной активности фагоцитов [37]. Дефицит МП ней-трофилов крови отмечен при упорной мегалобластной анемии. При этом микроорганизмы рода Candida albicans и Aspergillus fumigatus активно фагоцитировались нейтрофилами, но последние не были способны убивать их, что привело к летальному исходу больного [38]. Низкая активность МП фагоцитов периферической крови была определена у больных инфильтративно-
нагноительными дерматофитиями волосистой части головы [28] и больных хроническим тонзиллитом [5].
При хронической пневмонии в период обострения заболевания происходит значительное, статистически достоверное снижение активности МП в нейтрофилах крови. Улучшение клинического состояния больного сопровождалось повышением показателей активности МП клеток [3]. Обнаружена зависимость активности МП нейтрофилов периферической крови от клинического статуса больных туберкулезом: низкая активность фермента коррелировала с неблагоприятным статусом больных и распространенным процессом в легких. Рост показателей активности МП нейтрофилов периферической крови больных было сопоставимо с улучшением их клинического состояния [16]. Выявлен спад активности МП нейтрофильных гранулоцитов крови больного при развитии некротических изменений в миокарде. Низкая активность МП отмечена в острый и подострый периоды инфаркта миокарда. Активность плавно росла в период рубцевания [7].
Снижение активности МП нейтрофильных гранулоцитов крови также отмечено у больных болезнью Ходжкина и онкобольных с метастазирующими опухолями [41]. Показано, что причиной низкой активности фермента в нейтрофильных гранулоцитах может быть ингибирующий эффект опухоли. Авторами обнаружено, что экстракты злокачественных новообразований в условиях in vitro ингибировали активность железопорфириновых ферментов, в том числе и пероксидазы, экстрагированной из корня хрена [35]. Полученные данные позволяют с большой степенью достоверности считать, что такой показатель бактерицидной системы фагоцитов как активность МП является надежным критерием оценки их фагоцитарной способности и его можно использовать при исследовании роли фагоцитов в патогенезе различных хронических заболеваний.
Активность миелопероксидазы при лепре. При экспериментальной лепрозной инфекции у броненосцев, в макрофагах лепрозных гранулем с высокой активностью МП, возбудитель лепры (Mycobacterium leprae) отсутствовали и, напротив, макрофаги с низкой активностью МП содержали в цитоплазме большое количество M.leprae [39]. То же было отмечено при электронноцитохимическом изучении гранулем кожи больных лепрой ле-проматозного типа [17]. На основании сопоставления скорости и стабильности регресса лепрозного процесса на фоне терапии и возможности рецидива со степенью активности МП фагоцитов, была выявлена связь между уровнем активности фермента в макрофагах больных (зарегистрированным при поступлении) со скоростью достижения и стойкостью регресса заболевания на фоне терапии. Высокий уровень активности МП макрофагов гранулем корреллировал с элиминацией возбудителя из организма и наибольшей эффективностью терапии. Низкая активность МП макрофагов связывалась с медленным регрессом заболевания и риском возникновения рецидива лепрозного процесса [18].
Учитывая роль пероксидазы в процессах фагоцитоза микроорганизмов, в эксперименте на животных (мыши) при искусственном снижении активности МП в клетках системы мононукле-арных фагоцитов (СМФ), путем насыщения их подобранной концентрацией перекиси водорода (известно, что основной функцией МП фагоцитов является связывание перекиси водорода и при этом фермент инактивизируется), удалось установить связь между степенью фагоцитарных реакций и активностью МП, выяснить при этих условиях возможность моделирования процесса персистенции патогенных микобактерий в клетках СМФ.
Вводимая внутрибрюшинно стимулированным животным (мыши) за 1-2 часа до заражения подобранная концентрация перекиси водорода в 0,6% давала достоверное снижение активности МП перитонеальных макрофагов мышей на срок до 6 суток (время наблюдения). В этих условиях имелась длительная (по сравнению с контролем) персистенция внутриклеточно расположенных M.leprae и M.tuberculosis. Одним из пусковых моментов для персистенции M.leprae и M.tuberculosis в фагоцитах хозяина может быть недостаточность функции макрофагов из-за низкого уровня активности МП фагоцитов [11].
Основываясь на этих исследованиях, была предпринята попытка совершенствования модели лепры Шепарда [42] (интра-плантарное заражение мышей) путем избирательного воздействия на МП - систему фагоцитов. При введении за 1-2 часа до заражения, мышам в подушечку лапы 0,6%-ного свежеприготовленного раствора перекиси водорода в количестве 0,03-0,05 мл на лапу отмечалось лучшее размножение M.leprae в подушечках лап
мышей по сравнению с обычным способом заражения и генерализация процесса (размножение M.leprae в легких и селезенке мышей), что не наблюдалось при стандартном способе заражения. Методом электронной цитохимии обнаружено снижение активности МП в фагоцитарных клетках, что подтверждает большую роль МП - системы фагоцитов в киллинге микобактерий лепры и патогенезе заболевания [б].
Будущее клинической энзимологии, как подчеркивалось на международном симпозиуме по энзимологии в 199б г., связывается, в т.ч. с использованием ферментов и их ингибиторов как средств лечения болезней [2C]. В качестве лекарственных средств используется свыше 50 ферментных препаратов. Это - протеоли-тические ферменты, которые применяются для терапии при новообразованиях, при воспалительных процессах, тромбозах [2], а также ферментный препарат цитохром С, применяющийся для улучшения тканевого дыхания при состояниях, сопровождающихся нарушением окислительных процессов в организме.
Предпосылки использования пероксидазы в терапии лепры. Основой лечения лепры до настоящего времени остаются сульфоновые препараты, впервые примененные в 1943 году. Это доступные для лечения per os препараты, которые хорошо адсорбируются и быстро достигают пиковых концентраций в организме при парентеральном введении. При исследовании на животных было показано, что эти препараты действуют, в основном, бактериостатически. Обычно сульфоновые препараты хорошо переносятся больными и в терапевтических дозах малотоксичны. Однако в ряде случаев при длительном приеме препарата возможны побочные действия в виде эозинофилии [3C], анемии, образования в крови метгемоглобина [31], а также токсического воздействия на паренхиму и строму печени больных лепрой [9] и канцерогенное действие в эксперименте на мышах [32].
Длительное применение сульфонов приводит к возникновению сульфонорезистентных штаммов возбудителя лепры и, следовательно, к неэффективности терапии и развитию рецидивов заболевания [27, 31]. Разработки конца тысяча девятьсот семидесятых годов комбинированной терапии лепры тремя препаратами (рифампицин, клофазимин и дапсон) позволили сократить сроки лечения, количество обострений и рецидивов заболевания [4C]. Однако известны случаи резистентности к этим препаратам и возникновения рецидивов у больных лепрой, леченных по схемам ВОЗ. Предполагается, что рецидивы вызваны персистирующими формами микобактерий лепры [Зб, 43].
Число доказанных случаев резистентности к препаратам, применяющимся для лечения лепры становится все большим. Вероятность лекарственной резистентности при лепре все более требует разработки контролируемого, связанного с патогенезом заболевания, лечения больных, особенно мультибактериальными формами лепры. В эксперименте испытано эффективное проти-волепрозное действие фторохинолонов (пефлоксацин, офлокса-цин), миноциклина и кларитромицина [34]. Но высокая стоимость этих препаратов ограничивает их применение в практике.
Учитывая роль пероксидазы в патогенезе лепры была предпринята попытка лечения лиофилизированной пероксизой из корня хрена (ПХ) экспериментально зараженных лепрой животных. При введении животным ПХ per os вместе с кормом наблюдается эффективная задержка роста возбудителя лепры, особенно выраженная при применении дозы 150-200 мг/кг комбикорма [12]. В нейтрофильных гранулоцитах периферической крови и макрофагах воспалительного инфильтрата мышей, получавших ПХ и ДДС, выявлен статистически достоверный рост активности внутриклеточной МП, причем в макрофагах активность локализовалась в фаголизосомах. В нейтрофилах и макрофагах интакт-ных мышей в эти сроки выявлен спад активности эндогенной МП. Учитывая расположение МП в фаголизосомах макрофагов, предположим правомерность мнения о локализации пероксидаз-ной активности в лизосомах фагоцитарных клеток [13].
В периферической крови мышей, получавших ПХ, во все сроки эксперимента в сравнении с контролем, наблюдалось статистически достоверное уменьшение количества лейкоцитов, что свидетельствует о снижении воспалительного процесса, вызванного инфектом. В поздние сроки лечения (8-11 мес.) доля нейтрофилов в лейкоцитарных формулах росла, а процентное содержание лимфоцитов снижалось. Статистически достоверно росла доля моноцитов, что говорило о способности ПХ и ДДС стимулировать фагоцитарную активность крови. Пока не выяснен механизм антимикробного действия ДДС. Действие основного
противолепрозного препарата направлено на рост уровня активности МП фагоцитов, так же как и параллельно с ним вводимой ПХ, способствуя стимуляции клеточного иммунитета [13].
При комплексировании ПХ с противолепрозными средствами - диаминодифенилсульфоном (ДДС+ПХ) и рифампицином (РФП+ПХ), также наблюдалось значительное подавление роста M.leprae по сравнению с контролем и монотерапией. Лечение ПХ в комплексе с противолепрозными препаратами оказывало то же действие на состояние крови и активность внутриклеточной МП, что и при терапии ПХ. Монотерапия рифампицином в течение 9 мес. вела к снижению активности МП нейтрофилов крови, что не исключает спада их функциональных возможностей. При длительном применении комбинаций препаратов наблюдалось снижение уровня гемоглобина и числа эритроцитов. Уровень тран-саминаз в сыворотке крови и гомогенате печени особей, получавших комплексную терапию, был стабилен на протяжении всего опыта [14]. Антибиотики, являясь иммунодепресантами, подавляют бактерицидную функцию нейтрофилов крови [1], а рифампицин и ПХ вызывали рост активности внутриклеточной МП фагоцитов, активируя их антимикробные свойства.
Применение корня хрена в терапии экспериментальной лепры. Пероксидазы широко распространены в животном и растительном мире. Они содержатся в корнях хрена, из которого ее извлекают. Однако цена чистого препарата очень высока. Поэтому нами была предпринята попытка использования корня хрена для лечения экспериментальной лепры.
Хрен - многолетняя трава семейства крестоцветных. Молодые корни используют как приправу к пище. Корни хрена (КХ) содержат тиогликозид, который при гидролизе выделяет эфирное горчичное масло, а также сахара, крахмал, смолистые и азотистые вещества, жиры, аскорбиновую кислоту (содержание которой составляет 110-200 мг в 100 г продукта), минеральные соли (калий, кальций, фосфор). Свежий КХ содержит лизоцим. Содержание воды - 77%, углеводов - 16,3%, белков - 2,5% .
Из КХ пероксидаза может быть извлечена экстракцией воды. Вероятно, в связи с этим водные настои корня хрена используют как бактерицидное средство в виде полосканий, примочек, компрессов при воспалительных процессах [25]. Сведений по применению очищенной ПХ и препаратов ПХ в виде КХ для лечения хронических инфекционных заболеваний нами в литературе не обнаружено. В [19] сведений по применению КХ для лечения инфекционных заболеваний нет, хотя есть полные данные по применению экстрактов или настоек цветов, трав и корней других растений в медицинской практике. Хрен применяется в народной медицине при заболеваниях печени, водянке, затрудненном мочеиспускании, камнях в мочевом пузыре, подагре, ревматизме, при отсутствии менструаций, малокровии, цинге, артрозах, импотенции, при пояснично-крестцовом радикулите, миозите, плеврите, артритах и др. заболеваниях неинфекционного характера [8]. Учитывая высокое содержание пероксидазы в корне хрена, мы решили выяснить его антибактериальную активность для терапии хронических инфекционных заболеваний.
В эксперименте использовался оригинальный метод получения препарата: корни сушили при комнатной температуре, измельчали, мололи в обычной электрической кофемолке и хранили при t +4oC. Активность пероксидазы в КХ, определенная способом перманганотометрического титрования, составила 100 Е/г. Содержание аскорбиновой кислоты - 150 мг/ 100 г КХ.
При введении мышам КХ вместе с кормом в различных дозах наблюдалось эффективное подавление роста M. leprae в лапах мышей по сравнению с зараженными и нелеченными животными. Наибольший антимикробный эффект выявлен при применении КХ в дозе 300 мг/кг кормосмеси. Лечение КХ, так же как и при терапии ПХ и сочетанием ПХ и ДДС, сопровождалось активацией МП нейтрофилов периферической крови, противовоспалительным действием, стимуляцией клеточного иммунитета и отсутствием токсического воздействия на печень мышей. В отличие от применения для лечения экспериментальной лепры ПХ и ДДС, при лечении КХ не было снижения числа эритроцитов и уровня гемоглобина в крови подопытных животных в процессе длительной терапии [15]. Видимо, это связано с содержанием в КХ большого количества аскорбиновой кислоты [26], которая обладает выраженными восстановительными свойствами, участвует в регуляции окислительно-восстановительных процессов, углеводного обмена, свертываемости крови, регенерации тканей, образовании стероидных гормонов. Применяется
при геморрагических диатезах, кровотечениях, терапии инфекционных заболеваний и интоксикаций. Обладая вышеперечисленными свойствами, она стабилизирует и укрепляет мембраны клеток, которые при инфекционных заболеваниях и заболеваниях воспалительного характера разрушаются. Аскорбиновая кислота оказывает экономизирующее действие в отношении витаминов Ві, В2, А и Е (природный антиоксидант), фолиевой и пантотено-новой кислот уменьшая их расходование (снижая потребность в них). Стабильный уровень компонентов красной крови (эритроциты, гемоглобин) в данном случае объясняется антиоксидант-ными и редуцирующими свойствами аскорбиновой кислоты.
КХ, оказывающий эффективное антимикробное действие за счет содержания ПХ, которая активизирует МП фагоцитов, обладает антиоксидантными и антианемическими свойствами, может использоваться в качестве пищевой добавки для профилактики и лечения хронических инфекционных заболеваний.
Перспективы исследований, посвященных ферментоте-рапии пероксидазой. Из приведенных материалов исследований подтверждено, что МП клеток является важнейшим антибактериальным фактором при образовании фаголизосомы фагоцитов. Важнейшей особенностью фагоцитов, в значительной мере обусловливающей их бактерицидные свойства, является способность к выделению активного кислорода. Снижение выделения активного кислорода фагоцитами наблюдается при хронических гранулематозных заболеваниях, сопровождающихся дефицитом МП. Детальное исследование процесса выделения активного кислорода в настоящее время может быть достигнуто благодаря применению хемилюминисцентного метода регистрации. По данным экспериментальных исследований различных авторов, хемилю-минисцентный ответ макрофагов при фагоцитозе имеет двухфазный характер. 1-я фаза развития хемилюминисценции при фагоцитозе характеризует скорость выделения активного кислорода в начальный период фагоцитоза и завершается с окончанием процесса инвагинации частиц, тогда как 2-я фаза хемилюминисцен-ции сопряжена с последующими этапами обработки фагоцитированного материала. В присутствии даже минимальной концентрации пероксидазы (Зх1С-4М) увеличивается хемилюминисцен-ция фагоцитов, проявляющаяся преимущественно во 2-й фазе - в фазе дезинтеграции фагоцитированного материала [29].
Макрофаги лишены ряда катионных белков, содержащихся в нейтрофильных гранулоцитах. При использовании методов электронной цитохимии, активность пероксидазы установлена в моноцитах и их предшественниках. При дифференцировке моноцитов в макрофаги пероксидаза их клеток исчезает. Лактоферри-на в макрофагах нет. Этот катионный белок признан специфическим маркером лизосомальных гранул нейтрофильных грануло-цитов у всех видов млекопитающих и человека.
В эксперименте установлено неизвестное ранее явление деструкции и гибели хламидий в макрофагах, поглотивших продукты распада нейтрофильных гранулоцитов. Макрофаги, содержащие продукты распада нейтрофильных гранулоцитов, также способны изменить течение пневмоний, вызванных у лабораторных мышей возбудителем энзоотического аборта овец и превратить летальную инфекцию в несмертельное заболевание. Макрофаги, поглотившие лейкоцитарные продукты богатые пероксида-зой, приобретают качественно новые свойства и повышенную функциональную активность. После захвата макрофагами МП резко возрастает их способность обезвреживать лейшмании, токсоплазмы, листерии и трипаносомы .
В оценке защитных клеточных реакций, гранулоцитарная и макрофагальная клеточные системы находятся в постоянном взаимодействии: пройдя короткий период активности, грануло-циты разрушаются в тканях и фагоцитируются макрофагами, изменяя их свойства. Стимулирующий эффект связан с тем, что макрофаги приобретают отсутствующую у них пероксидазу, наделенную антимикробной способностью [22]. Учитывая терапевтический эффект пероксидазы при экспериментальной лепрозной инфекции, можно предположить, что рост функциональной активности макрофагов связан с приобретением ими вводимой пероксидазы, в результате чего с ростом активности внутриклеточной МП во время фагоцитоза появляется способность к функционированию у них антимикробной системы Клебанова (пероксидаза+перекись водорода+йод). Это явление отражает функционирование в макрофагах приобретенной пероксидазы и тем самым антимикробной системы Клебанова.
Литература
1. Абдрашитова Н. и др.// Бюл. экспер. биол.- 1998.- № 3.-С. 297-299.
2. Вольф М., Рансбергер К. Лечение ферментами / Пер. с англ.- М.: Мир, 1972..
3. ГалалуВ.В. // Лаб. дело.- 1981.- № З.- С. 2б4-2бб.
4. Гусева С.А. и др. // Арх. патол.- 1988.- Вып.1.- С.З2-ЗЗ.
З. Драгомирецкий В.Д., Бажора Ю.И. // Лаб. дело.- 198б.-
№ 11.- С.б49-бЗ1.
6. Калянина О.В., Маслов А.К. // Вестн. новых мед. технол.-1999.- № 3-4.- С. 9C-93.
7. Козинец Г.И. и др. // Лаб. дело.- 1984 - № 2.- С. 96-ICC.
8. Лавренов В.К. и др. Энциклопедия практической фитотерапии.- Донецк.: Сталкер.- 2CC1..
9. Лазовский А.Р. Влияние сульфоновых препаратов на печень при лепре (клинико-экспериментальное исследование): Автореф. дис...канд. мед. наук.- Волгоград, 1993.- 2б с.
1C. Львов С.Г. Энзимология новообразований / Под ред. А.М.Голубева. Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 1981.- С. 88-9б.
11. Маслов А.К. // ВНМТ.- 1999.- № 1.- С. 7б-79.
12. Маслов А.К., Калянина О.В. // Бюл. эксперим. биол.-2CCC.- Т.129, № З.- С.З71-З7З.
13. Маслов А.К., Лужнова С.А. // Бюл. эксперим. биол.-2CCC.- Т. 13C, № 7.- С. 83-87.
14. Маслов А.К. и др. // Бюл. экспер. биол.- 2CC1.- Т. 132, № 11.- С. ЗЗ1-ЗЗЗ.
1З. Маслов А.К. и др. // Бюл. эксперим. биол.- 2CC2.- № 8.-
С. 181-183.
16. Маслов А.К. и др. // Вопр. клин. медицины / Тр. Астрах. ГМА., 2CC1.- Т. 21.- С. 2б4-2б7.
17. Маслов А.К., Ющенко А.А. // Арх. патологии.- 1988.-Вып.11.- С.З1-З4.
18. А.С.№1бЗб717 СССР. Способ прогнозирования рецидива лепрозного процесса /Маслов А.К., Ющенко А.А.// Открытия. Изобретения.- 1991.- № 11.- С. 122.
19. Машковский М.Д. Лекарственные средства.- М., 2CC2.
2C. Меньшиков В.В. //Клин. лаб. диагн.- 199б.- № б.- С. З1.
21. Пигаревский В.Е. // Арх.патол.- 1977.- Вып.2.- С.84-94.
22. Пигаревский В.Е. // Арх. патол.- 1992.- Вып.8.- С. 4C.
23. Роговин В.В. и др. Пероксидазосомы.- М.: Наука, 1977.
24. Ронин В.С., Старобинец Г.М. Рук-во к практ. занятиям по методам клин. лабораторных исслед-й.- М.: Медицина, 1989.
2З. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям.- М.: Медицина, 1988.
26. Угарова Н.Н., Лебедева О.В. // Биохимия.- 1978.- Т.43, № 1C.-. С. 1731-1742.
27. Урляпова Н.Г. Чувствительность микобактерий лепры и туберкулеза к производным дихлормалеиновой кислоты: Авто-реф. дис... канд. мед. наук.- М., 198З.- 19 с.
28. Хамзина О.Ш. // Тез.докл. б Всеросс.съезда дерматол. и венерол.- М.,1989.- С.ЗЗб-ЗЗ7.
29. ЯрковаЛ.Н. и др. // Иммунол.- 198б.- №3.- С.31-34.
3C. Arunthathy S., Raju S.// Acta Leprol.- 1988.-Vol. 11.- P. 3.
31. Beeching N.V., Ellis CJ. // J. of Antimicrobial chemotherapy.- 1982.- Vol. 1C.- P. 81-83.
32. BergelM. // Lepra in India.- 197б.- Vol. 48.- P. 87.
33. Edwards S.W., Hart C.A. // Acta paediat. hung.- 19881989.- Vol. 29, № 1-2.- P. 1C1-1C4.
34.Grosses J.-H. // Int. J. Lepr -. 1994.- Vol. б2.- P. 2б8-277. ЗЗ. Hargreaves A., Deutsch H.F.// Cancer Res.-19З2.-Vol. 12.-
P. 72C-723.
36. JametP. // Int. J. Lepr.- 199З.- Vol. бЗ.- P. 19З-2С1.
37. Lehrer R.I.,Cline M.L. // J. Clin. Invest.- 19б9.- Vol.48.-P. 1478-1488.
38. Lehrer R.I. et al // Ann. Internal. Med.- 1972.- Vol. 7б.-Р. 447-4З1.
39. McKeever P.E. et al // Am. J. Trop. Med. Hyg.- 1978.-Vol.27.- P. 1C19-1C29.
4C. Noordeen S.K. // Bull. WHO - 1991.- № 3.- P. 2бЗ-2б9.
41. Quaglino D. // Boll. Soc. Med. Chir. Mod.-^4.- Vol. 44.-
P^-9.
42. Shepard C.C. // J. Exp. Med.- 196c.- Vol. 112.- P. 44З.
43. Thomas A. et al // Int. J. Lepr.- 199З.- Vol. бЗ.- P. 391.
