CC BY
96
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
кова Ю.К. Комплексный подход к противодействию ВИЧ-инфекции в Иркутской области в условиях сложной эпидемической ситуации. Основные тенденции, перспективы развития службы //Байкальская неделя противодействия ВИЧ-инфекции 2013: Взгляд в будущее: информ. реклам. бюл. Иркутск, 2013. С. 41-42.).
10. Lisovtsov AA. Hygienic aspects of premature mortality Irkutsk region. Cand. med. sci. abstracts dis. Irkutsk, 2012. 23 p. Russian (Лисовцов А.А. Гигиенические аспекты преждевременной смертности населения Иркутской области: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Иркутск, 2012. - 23 с.).
а
Статья поступила в редакцию 12.10.2015 г.
Марковская А.А.
Кемеровская государственная медицинская академия,
г. Кемерово
РОЛЬ ГРИБОВ РОДА CANDIDA В РАЗВИТИИ ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ
Предметом исследования явилось изучение микробиоценозов у 72 ВИЧ-инфицированных и 45 здоровых детей. Цель исследования - изучение биологических свойств грибов рода Candida, выделенных из кишечного содержимого ВИЧ-инфицированных детей. Методы исследования. Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Были изучены факторы вирулентности и чувствительность к антимикотикам грибов рода Candida.
Основные результаты. Установлена распространенность бактериально-грибковых ассоциаций и их этиологическая структура в сравниваемых группах. В симбиотических ассоциациях грибы рода Candida высоко экспрессировали факторы вирулентности, обладали более низкой чувствительностью к антимикотикам.
Область их применения. Медицинская микробиология.
Выводы. Полученные данные раскрывают патогенетическую основу развития эндогенных инфекций у ВИЧ-инфицированных детей.
Ключевые слова: микробиоценоз; кандидоз; ассоциации; биологические свойства; антимикотики.
Markovskaya A.A.
Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo
THE ROLE OF CANDIDA IN THE DEVELOPMENT OF HIV-INFECTED CHILDREN'S OPPORTUNISTIC INFECTIONS Objective. Microbiocenosis of 72 HIV-infected children and 45 healthy children were studied.
Aim. The purpose of the research is to study Candida's biological properties received from HIV-infected children's intestinal contents.
Methods. The allocation and identification of microorganisms were performed by conventional methods.Candida's virulent factors and sensitivity to antimycotics were studied.
Results. The prevalence of bacteria-fungi associations and their etiological structure in comparative groups were determined. In symbiotic associations Candida highly expressed, virulent factors had a lower sensitivity to antimycotics.
Field. Medical Microbiology.
Conclusions. The received data reveal pathogenetic bases of the development of the HIV-infected children's endogenous infections.
Key words: microbiocenosis; candidiasis; associations; biological properties; antimycotics.
Несмотря на наличие определенных достижений в противодействии эпидемии в РФ, эпидемиологическая ситуация по ВИЧ-инфекции в стране остается достаточно сложной, число ВИЧ-инфицированных граждан на 31.12.2013 г. составило 850000 граждан, в том числе 95823 детей в возрасте 18 лет. Последние 5 лет ежегодно на 10 %
Корреспонденцию адресовать:
МАРКОВСКАЯ Алина Анатольевна, 650029, Кемерово, ул. Ворошилова 22а, ГБОУ ВПО КемГМА Минздрава России. Тел.: 8 (3842) 73-28-71.
E-mail: micro@kemsma.ru
увеличивается количество выявленных новых случаев ВИЧ-инфекции. Средний показатель вновь зарегистрированных случаев ВИЧ-инфекции по России составил 43,4 на 100000 населения. Превышение среднероссийского показателя роста заболеваемости зарегистрировано в различных областях, среди которых Кемеровская область является лидером (124,4 новых случаев на 100000 населения) [1, 2].
Хотя ВИЧ является этиологическим фактором СПИДа, основная смертность и заболеваемость у пациентов с СПИД связана с оппортунистическими инфекциями (ОИ): около 80 % таких пациентов умирает от ОИ, а не от ВИЧ. Среди наиболее часто встречаемых инфекций у пациентов с ВИЧ-инфекцией ли-
ОК{едицина
в Кузбассе
Medicine
in Kuzbass
T. 14 № 4 2015
23
РОЛЬ ГРИБОВ РОДА CANDIDA В РАЗВИТИИ ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ
дирующее положение занимает слизисто-кожный кан-дидоз [3, 4].
Поэтому особую значимость в решении данной проблемы приобретает изучение механизмов развития эндогенных инфекций у ВИЧ-инфицированных детей, что позволит разработать новые подходы в предупреждении развития осложнений или отсрочить их наступление.
Цель исследования — изучение биологических свойств грибов рода Candida, выделенных из кишечного содержимого ВИЧ-инфицированных детей.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Изучен микробиоценоз кишечника 117 детей в возрасте до 3-х лет. Из них в опытную группу вошли 72 ВИЧ-инфицированных ребенка (52 % мальчика и 48 % девочек), средний возраст которых составил 2,3 ± 0,2 года. Диагноз ВИЧ-инфекция был выставлен на основании данных эпидемиологического анамнеза (перинатальный контакт) и подтвержден результатами ИФА, ПЦР, иммуноблотинга. Группа сравнения включала 45 ВИЧ-негативных относительно здоровых детей (53 % мальчика и 47 % девочек) в возрасте 2,0 ± 0,2 лет.
Исследование кишечного микробиоценоза проводили с помощью количественного бактериологического метода. Для идентификации грибов рода Candida использовались микроскопический, культуральный путем посева на питательную среду № 2 ГРМ (Сабу-ро) и HICrome Candida Differential Agar (HiMediа) и биохимический методы. Идентификацию C. albicans проводили по ростковым трубкам, которые формируются в течение двух часов в лошадиной сыворотке. Другие виды грибов выявляли с помощью тестсистемы Auxocolor по ферментативным свойствам [5]. Липолитическую и ДНКазную активность условнопатогенных бактерий и грибов исследовали методом посева на Trybuthirit Base Agar (HiMedia) и DNA Base Agar (HiMediа). Изучение гемолитической активности микроорганизмов проводили на МПА с добавлением 5 % эритроцитов человека. Чувствительность к антимикотикам (АМ) определяли диско-диффузионным методом с использованием среды Мюллер-Хинтон агар и коммерческих стандартных дисков: из группы азолов — кетоконазол (20 мкг), клотри-мазол (10 мкг), флюконазол (40 мкг), итраконазол (10 мкг), из группы полиенов-макролидов: амфоте-рицин В (40 мкг), нистатин (80 ЕД).
На начальном этапе статистической обработки полученной информации применяли программы Microsoft Office Excel 2003 (лицензионное соглашение 74017-640-0000106-57177). С использованием названной программы осуществляли формирование базы данных, включающей информацию о видовом составе и количественном уровне грибов, а также о рас-
пространенности и уровне экспрессии факторов вирулентности среди них. Данные по количественному уровню микромицетов представлены в виде M ± m, где М — среднее значение, m — стандартная ошибка среднего.
Структура бактериально-грибковых ассоциаций, частота колонизации слизистой грибами, распространенность у них факторов вирулентности и резистентности к антимикотикам представлены в виде относительных величин. Для статистического анализа использовали пакет прикладных программ Statis-tica (версия 6.1 лицензионное соглашение ВХХИ 006ВО92218 FAN 11). Статистическая обработка информации строилась с учетом характера распределения данных, который определяли с помощью построения гистограмм. В связи с тем, что характер распределения данных не соответствовал нормальному, для статистической обработки применяли непараметрические критерии оценки статистической значимости. Сравнение контрольных и опытных частот проводили с помощью критерия X2. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимался равным 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В результате проведенных исследований обнаружено, что частота и уровень колонизации слизистой кишечника грибами рода Candida у ВИЧ-инфицированных детей выше, чем у детей группы сравнения (97,2 % и 26,6 %; 4,1 ± 0,3 lg и 2,2 ± 0,3 lg КОЕ/г, соответственно, х2 = 10,1; df = 1; p = 0,0025). Подавляющее большинство выделенных из кишечника штаммов дрожжевых грибов, как у ВИЧ-позитивных, так и ВИЧ-негативных, принадлежало к виду Candida albicans — 61,1 % и 88,9 %, на долю non-albicans-виды приходилось 38,9 % и 11,1 %, соответственно. Различия в видовой структуре грибов в опытной и контрольной группах были статистически значимы (х2 = 6,7; df = 1; p = 0,003).
При изучении ассоциативных микросимбионтов у детей основной группы была установлена высокая распространенность бактериально-грибковых ассоциаций (66,1 ± 9,6 на 100 ВИЧ-инфицированных детей). Среди детей группы сравнения ассоциации грибов и бактерий встречались реже (28 ± 11,2 на 100 относительно здоровых детей). У ВИЧ-инфицированных детей доминировали трехкомпонентные ассоциации микробов, состоящие из Candida spp. + Staphylococcus spp. + Enterobacteriaceae, их доля составила 54,4 %. В 17,6 % случаев были выделены четырехкомпонентные ассоциации Candida spp. + Staphylococcus spp. + Enterococcus spp. + Enterobacteriaceae. Пяти и шестикомпонентные бактериально-грибковые сожительства (14,7 % и 13,3 %, соответственно) включали, помимо членов четырехкомпонентных ассоциаций, представителей рода Actinomyces spp.
Сведения об авторах:
МАРКОВСКАЯ Алина Анатольевна, аспирант, кафедра микробиологии, иммунологии и вирусологии, ГБОУ ВПО КемГМА Минздрава
России, г. Кемерово, Россия. E-mail: micro@kemsma.ru
24
T. 14 № 4 2015 MediciinnLass
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
В группе сравнения доминировали двухкомпонентные ассоциативные сожительства бактерий (73,4 %), состоящие из представителей семейства Enterobac-teriaceae и рода Staphylococcus. Сожительства бактерий и грибов у здоровых детей встречались в виде трехкомпонентных (Candida spp. + Staphylococcus spp. + Enterobacteriaceae, 22,2 %) и четырехкомпонентных (Candida spp. + Staphylococcus spp. + Enterococcus spp. + Enterobacteriaceae, 4,4 %) ассоциаций.
Статистический анализ позволяет говорить о наличии значимых различий между долевым содержанием ассоциативных сожительств микробов в кишечнике у ВИЧ-негативных и ВИЧ-позитивных детей (х2 = 72,9; df = 4; p = 0,00001). Среди грибов рода Candida, выделенных из ассоциаций у детей основной группы, 39,3 % обладали гемолитической и
71,4 % — липазной активностью. У ВИЧ-негативных детей данные микромицеты проявляли гемолитическую активность в 7,8 % случаев, а липазу продуцировали только 21,3 % штаммов. Различия в частоте экспрессии факторов вирулентности у грибов рода Candida в сравниваемых группах были статистически значимы (х2 = 5,7; df = 1; p = 0,021).
Изучение количественного уровня условно-патогенной микрофлоры позволило установить, что содержание стафилококков в кишечнике детей с ВИЧ-инфекцией в среднем составило 3,2 ± 0,2 lg КОЕ/г, грибов рода Candida 4,1 ± 0,3 lg КОЕ/г, условнопатогенных энтеробактерий — 6,9 ± 0,2 lg КОЕ/г, актиномицетов 7,2 ± 0,6 lg КОЕ/г. У детей группы сравнения количественный уровень грибов Candida spp. в ассоциациях не отличался от такового при ВИЧ-инфекции (3,9 ± 0,4 lg КОЕ/г), тогда как в монокультурах титр данных микромицетов достигал только 2,2 ± 0,3 lg КОЕ/г. Интенсивность колонизации кишечника детей группы сравнения стафилококками и условно-патогенными энтеробактериями была ниже, чем в основной группе, и составила 3 ± 0,5 lg КОЕ/г и 5,2 ± 0,3 lg КОЕ/г, соответственно.
В результате изучения чувствительности дрожжевых грибов к антимикотикам было установлено, что Candida albicans в ассоциации с кишечной палочкой (Lac-, Hly+) и золотистым стафилококком, по сравнению с non-albicans-видами, проявляли более высокую чувствительность к нистатину (100 % и 78,5 % штаммов, соответственно) и амфотерици-ну В (100 % и 83,3 % штаммов). Все виды микро-мицетов в данных ассоциациях проявляли высокую чувствительность к клотримазолу (90-100 %). Чувствительность к флюконазолу была выше у Candida albicans в ассоциации с золотистым стафилококком (50 %), тогда как non-albicans-виды в аналогичной ассоциации в 100 % случаев проявляли резистентность к данному антимикотику. Низкая чувствительность к флюконазолу зарегистрирована у 25 % штаммов nonalbicans-видов и у 18 % штаммов Candida аШ^ш в
ассоциациях E. coli Lac-, Hly+. В ассоциациях с клеб-сиеллой чувствительность Candida albicans к анти-микотикам была выше, чем у non-albicans-видов. Так, к нистатину и клотримазолу она составила 100 %, а у non-albicans-видов — 100 % и 87,5 %, соответственно, к амфотерицину В — 88,9 % против 50 % у nonalbicans-видов, к флюконазолу — 66,7 % (у non-al-bicans-видов — 25 %).
С целью определения степени устойчивости ведущего возбудителя кандида-ассоциированных инфекций у Candida albicans были определены резис-тенс-типы и удельный вес штаммов с резистентностью от 1 до 6 антимикотиков (табл.).
Полученные результаты показали, что наибольший процент в обеих группах приходится на штаммы, проявляющих резистентность к 4 антимикотикам. При этом основным резистенс-типом Candida albicans оказался R4S2, характеризующийся устойчивостью ко всем 4 азолам и сохраняющий чувствительность к полиенам-макролидам. Однако частота встречаемости данных резистенс-типов у ВИЧ-инфицированных детей составила 22 %, тогда как в группе сравнения только 6,3 % (х2 = 7,1; df = 1; p = 0,009). Кроме того, Candida albicans, выделенные из кишечного содержимого ВИЧ-инфицированных детей, проявляли максимальную устойчивость к 6 антимикотикам, в группе сравнения — только к 5 антимикотикам.
ВЫВОДЫ:
1. Формирование ассоциативных сожительств микроорганизмов способствует не только поддержанию определенного популяционного уровня условно-патогенных микроорганизмов, но и более высокой экспрессии факторов вирулентности и устойчивостью к антимикробным препаратам у отдельных представителей. Так, среди грибов рода Candida, выделенных из ассоциаций у детей основной группы, 39,3 % штаммов обладали гемолитической, 71,4 % липазной активностью и 7,4 %
Таблица
Удельный вес штаммов Candida albicans резистентных к антимикотикам (в %)
Table
The specific gravity of Candida albicans strains resistance to antimicotics (in %)
Резистентность C. albicans ВИЧ- позитивные дети ВИЧ- негативные дети Уровень значимости различий относительных показателей
К 6 антимикотикам 7,4 0
К 5 антимикотикам 3,7 6,2 p = 0,141
К 4 антимикотикам 37 37,5 p = 0,135
К 3 антимикотикам 18,4 12,5 p = 0,001
К 2 антимикотикам 7,4 12,5 p = 0,001
К 1 антимикотику 15 6,3 p = 0,81
Information about authors:
MARKOVSKAYA Alina Anatolyevna, postgraduate student, chair of microbiology, immunology and virology, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. E-mail: micro@kemsma.ru
ОК{вдицина
в Кузбассе
Medicine
in Kuzbass
T. 14 № 4 2015
25
РОЛЬ ГРИБОВ РОДА CANDIDA В РАЗВИТИИ ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ
штаммов устойчивостью ко всем изученным ан-тимикотикам. У ВИЧ-негативных детей данные микромицеты проявляли гемолитическую активность в 7,8 % случаев, липазу продуцировали только 21,3 % штаммов, а максимальная устойчивость составила к 5 антимикотикам.
2. Для снижения риска развития эндогенных бактериально-грибковых инфекций у ВИЧ-инфицированных детей необходимо проводить своевременную коррекцию микробиоценоза кишечника,
направленную на устранение ассоциативных микробных сообществ и, в первую очередь, с грибами рода Candida.
3. Для эффективной коррекции дисбиотических нарушений кишечной микрофлоры, осложненных кандидозной инфекцией, необходимо проводить видовую идентификацию всех выделенных грибов рода Сandida с определением их чувствительности к наиболее распространенным антимикотическим препаратам.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES:________________________________________________________________________
1. Ladnaya NN, Sokolova EV, Tushina OI et al. HIV-infection of the women and the children in the Russian Federation in 2013 year. In: Children and HIV: problems and perspectives: the materials of reports of a science-practical conference with international participation, Saint Petersburg. Moskow, 2014. p. 3-6. Russian (Ладная Н.Н., Соколова Е.В., Тушина О.И. [и др.] ВИЧ-инфекция у женщин и детей в Российской Федерации в 2013 г. //Дети и ВИЧ: проблемы и перспективы: материалы докл. научно-практической конференции с международным участием, г. Санкт-Петербург, 25-26 сентября 2014 г. Москва, 2014. С. 3-6).
2. Levanovich VV, Timchenko VN, Arhipova UA et al. HIV-infection at the turn of the century: guidelness for doctors of all specialties. Levanovich VV, Timchenko VN, editors. St. Petersburg: N-L Publ., 2012. 496 p. Russian (Леванович В.В., Тимченко В.Н., Архипова Ю.А. [и др.]. ВИЧ-инфекция на рубеже веков: руководство для врачей всех специальностей /под ред. В.В. Леванович, В.Н. Тимченко. СПб.: Издательство Н-Л., 2012.
496 с.)
3. Jorge O. Alarcon, Laura Freimanis-Hance et al. Opportunistic and other infections in HIV-infected children in Latin America compared to similar cohort in the United States. AIDS Research and human retroviruses. Mary Ann Liebert, Inc. 2012; 28(3): 1226-1233.
4. Alberto Novaes Ramos Jr, Luiza Harunari Matida, Carlos Henrique Alencar, Norman Hearst et al. AIDS patient care and STDs. Mary Ann Liebert, Inc. 2011; 25(4): 176-223.
5. Elinov NP, Vasileva NV, Stepanova AA, Chilina GA. Candida. Candidosis. Laboratory diagnostics. Elinov NP editor. St. Petersburg: Costa Publ., 2010. 224 p. Russian (Елинов Н.П., Васильева Н.В., Степанова А.А., Чилина Г.А. Candida. Кандидозы. Лабораторная диагностика /под ред. з.д.н. РФ проф. Н.П. Елинова. СПб.: Коста, 2010. 224 с.).
а
Статья поступила в редакцию 22.09.2015 г.
Гончаров А.Е.
Северо-западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова,
Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург
ШТАММЫ С ПОВЫШЕННОЙ ЧАСТОТОЙ МУТАЦИЙ
ПОПУЛЯЦИЯХ S. AUREUS РАЗЛИЧНЫХ SPA-СИКВЕНСТЙПОВ:
ПОТЕНЦИАЛЬНОЕ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Предмет исследования. 47 штаммов Staphylococcus aureus, выделенных при носительстве и клинических формах инфекции.
Цель исследования - установить возможную взаимосвязь между распространенностью штаммов Stahylococcus aureus различных клональных линий и степенью их мутабильности.
Методы исследования. В ходе исследования оценивалась частота спонтанных мутаций к рифампицину у представителей различных spa-сиквенстипов.
Основные результаты. В исследовании установлена более высокая частота обнаружения штаммов с гипермутабель-ным фенотипом среди Staphylococcus aureus, представляющих широко распространенные эпидемические spa-типы t008, t030, t037 по сравнению со штаммами неэпидемических spa-типов. Обсуждается потенциальное эпидемиологическое значение штаммов-мутаторов.
Область применения. Полученные результаты раскрывают один из возможных механизмов формирования эпидемических штаммов стафилококков.
Заключение. Широкое распространение штаммов с повышенной частотой мутаций среди эпидемических spa-типов MRSA отражает высокую степень их геномной пластичности, что должно учитываться при организации эпидемиологического надзора за ними.
Ключевые слова: Staphylococcus aureus; гипермутабельные штаммы; spa-сиквенстипирование; MRSA.
26
T. 14 № 4 2015
Medicine
in Kuzbass
в Кузбассе
