CC BY
24
((Г СибАК
Современная медицина: актуальные вопросы
www.sibac.info_____________________________________№ 12 (44), 2015г.
РОЛЬ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПРЕДИКТОРОВ В ПРОГНОЗИРОВАНИИ НЕВЫНАШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ ПРИ МНОГОПЛОДИИ
Никитина Ирина Николаевна
канд. мед. наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии, Сумской государственный университет, Украина, г. Сумы E-mail: nikitina-med@mail. ru
Бойко Владимир Иванович
д-р мед. наук, профессор, зав. кафедры акушерства и гинекологии Сумской государственный университет, Украина, г. Сумы
Смииян Светлана Анатольевна
канд. мед. наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии, Сумской государственный университет, Украина, г. Сумы
Иконописцева Наталья Анатольевна
канд. мед. наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии, Сумской государственный университет, Украина, г. Сумы
Сухарев Анатолий Борисович
канд. мед. наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии, Сумской государственный университет, Украина, г. Сумы
Бабар Татьяна Владимировна
канд. мед. наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии, Сумской государственный университет, Украина, г. Сумы
Калашник Наталья Владимировна
канд. мед. наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии, Сумской государственный университет, Украина, г. Сумы
25
www.sibac.info
Современная медицина: актуальные вопросы _________________________№ 12 (44). 2015 г
ROLE OF GENETIC PREDICTORS IN FORECASTING DURING MULTIPLE PREGNANCY MISCARRIAGE
Irina Nikitina
candidate of Medical Sciences, assistant professor of department of Obstetrics and Gynecology Sumy State University,
Ukraine, Sumy
Vladimir Boyke
doctor of Medical Sciences, professor of department of Obstetrics and Gynecology Sumy State University,
Ukraine, Sumy
Svetlana Smyian
candidate of Medical Sciences, assistant professor of department of Obstetrics and Gynecology Sumy State University,
Ukraine, Sumy
Natalya Ikonopisceva
candidate of Medical Sciences, assistant professor of department of Obstetrics and Gynecology Sumy State University,
Ukraine, Sumy
Anatoliy Sukharev
candidate of Medical Sciences, assistant professor of department of Obstetrics and Gynecology Sumy State University,
Ukraine, Sumy
Tatyana Babar
candidate of Medical Sciences, assistant professor of department of Obstetrics and Gynecology Sumy State University,
Ukraine, Sumy
Natalya Kalachnik
candidate of Medical Sciences, assistant professor of department of Obstetrics and Gynecology Sumy State University,
Ukraine, Sumy
26
Современная медицина: актуальные вопросы www.sibac.info________________________________
СибАК
№ 12 (44), 2015 г.
АННОТАЦИЯ
Изучены особенности распределения полиморфизма генов IL-8 (-781 C/T), MTHFR C677T, Fll G20210A, FV(Leiden) G1691A и PAI-1675 5G/4G и их роль у женщин с невынашиванием многоплодной беременности. Проведена оценка прогностической роли выявленных генетических предикторов в развитии невынашивания беременности. При анализе частоты аллелей и генотипов показан риск репродуктивных потерь между обследованными женщинами и контрольной группой, обнаружены наиболее значимые генетические маркеры и определено взаимодействие по полиморфизмам изученных генов.
ABSTRACT
The distribution of gene polymorphisms of IL-8 (-781 C/T), MTHFR C677T, Fll G20210A, FV(Leiden) G1691A and PAI-1675 5G/4G and their role in women with a multiple pregnancy miscarriage. The prognostic role of identified genetic predictors in the development of miscarriage is evaluated. The risk of reproductive losses risk comparing the control group by different genotypes us considered, the most significant genetic markers are discovered and different genes polymorphism interaction is discussed.
Ключевые слова: многоплодная беременность; невынашивание беременности; полиморфизм; мутация генов.
Keywords: multiple pregnancy; miscarriage; polymorphism; genes mutation.
В настоящее время вопросы невынашивания беременности (НБ) приобрели статус одного из приоритетных направлений в акушерстве в связи с распространенной высокой частотой неблагоприятных исходов для матери и плода. Особенно остро эта проблема касается многоплодной беременности [1, с. 15-21]. Это обусловлено ростом ее числа за счет широкого внедрения в практику здравоохранения эффективных методик лечения бесплодия. Частота преждевременных родов при многоплодии составляет 54,3 % по сравнению с 9,7 % при одноплодной беременности. Невынашивание беременности можно рассматривать как мультифакторное заболевание, возникающее в результате взаимодействия функционально слабых аллелей многих генов на фоне неблагоприятных внешних и внутренних факторов влияния на организм женщины. Поиск генетических маркеров мультифакторной патологии, основанный на изучении полиморфизма отдельных генов, является очень важным, а определение аллелей генов, которые определенным образом влияют на течение беременности, имеет огромное значение для выявления групп риска
27
ifC СибАК
Современная медицина: актуальные вопросы www.sibac.info__________________________________________№12 (44), 2015г.
и предупреждения возникновения невынашивания беремен-
ности [3, с. 69-77].
Доля наследственных тромбофилий в структуре причин НБ составляет 30-55 %. Основными считаются полиморфизм генов ферментов фолатного цикла (5, 10-метилентетрагидрофолат редуктаза MTHFR С677Т); свертывающей системы крови (мутация генов протромбина Fll G20210A, фактора V FV(Leiden) G1691A) системы фибринолиза (полиморфизм гена ингибитора активатора плазминогена 1 PAI-1675 5G/4G) [4, с. 937-942].
MTHFR - фермент группы флавопротеинов, играет важную роль в синтезе метионина из гомоцистеина. Носительство аллеля 677Т приводит к термолабильности фермента и замене в молекуле фермента аминокислоты аланина на валин (Ala222Val) в каталитическом домене, в результате отмечается снижение ферментативной активности у гомозигот по полиморфному аллелю на 60 %, а у гетерозигот на 30 %, что влечет за собой повышение уровня гомоцистеина. Патогенез осложнений при гомоцистеинемии заключаются в повреждении эндотелия сосудов с повышением процессов коагуляции, микротромбообразование, приводящее к нарушению инвазии трофобласта, плацентации и фетоплацентарного кровотока. Кроме того гомоцистеин переходит через плаценту и может вызвать тератогенное и фетотоксическое действие [6, с. 105-137].
Основным механизмом, предотвращающим тромбообразование, является фибринолиз, его центральное звено - ингибитор активатора плазминогена 1 (PAI-1), уровень которого в плазме зависит от полиморфизма гуанозина (5G/4G) делеция/вставка в области промотера гена PAI-1. Угнетение фибринолиза, вызванное полиморфизмом этих генов в основном в гомозиготном состоянии нарушает процесс имплантации бластоцисты и формирование системы «мать-плацента-плод», что может стать как причиной бесплодия и ранних потерь беременности, так и привести к аномалиям плацентации и спровоцировать развитие патогенетических механизмов акушерских осложнений: невынашивание беременности, антенатальная гибель плода [4, с. 937-942].
К ряду осложнений беременности, а именно: невынашиванию, фетоплацентарной дисфункции, гестозу, задержке развития плода ведет наличие мутации FV(Leiden). В результате мутации G1691A происходит замена остатка аргинина на глицин в участке 506, что приводит к нечувствительности фактора V к активированному белку С, повышается уровень этого фактора в плазме, что ведет к усиленному образованию тромбина и патологии свертывания крови, которая
28
((Г СибАК
Современная медицина: актуальные вопросы
www.sibac.info__________________________________________№ 12 (44), 2015г.
является причиной осложнений гестации. Мутация гена протромбина Fll G20210A характеризуется заменой гуанина на аденин в позиции 20210, при этом полиморфизме уровень протромбина в плазме может быть повышен на 30 %, что провоцирует появление избыточного количества сгустков, повышая риск венозных тромбозов и приводит к потерям плода преимущественно в I триместре. Мутация имеет аутосомно-доминантный тип наследования, что свидетельствует о том, что тромбофилия может возникнуть и у гетерозиготного носителя. Г етерозиготное носительство ассоциируется с нарушением
плацентации и риском НБ в ранние сроки.
Существуют данные о влиянии полиморфизма генов цитокинов на создание имунного ответа и течение беременности. IL-8, который продуцируют клетки плаценты, потенцирует иммунную компетентность плацентарных клеток против бактерий, атакующих фетоплацентарный комплекс [5, с. 406-414]. IL-8 активно участвует в развитии трофобласта на ранних сроках беременности. Одним из ответственных факторов за процесс успешной инвазии трофобласта является именно IL-8. Этот цитокин влияет на индукцию ангиогенеза в месте прикрепления зародыша. Повышение секреции IL-8 в системе «мать-плацента-плод» свидетельствует о его важной роли в поддержании иммунологической толерантности во время беременности [2, с. 45-49].
Целью нашего исследования было снижение частоты невынашивания беременности путем изучения и прогнозирования влияния генетических предикторов у женщин с многоплодием.
Материалы и методы. Работа выполнена на базе Сумского обласного перинатального центра, лаборатории молекулярногенетических исследований Сумского государственного университета. Обследовано 160 пациенток с двойней, у 84 (52,5 %) из которых беременность протекала на фоне угрозы самопроизвольного выкидыша или преждевременных родов, они составили основную группу обследованных женщин. Контрольная группа состояла из 47 беременных с физиологическим течением гестации. Все пациентки проходили молекулярно-генетическое тестирование мутации генов IL-8 (-781 C/T), MTHFR С677Т, Fll G20210A, FV(Leiden) G1691A и PAI-1 675 5G/4G.
Для определения связи полиморфизма с невынашиванием беременности было проведено выделение ДНК из периферической крови беременных, для этого венозную кровь набирали в моноветы объемом 2,7 мл с антикоагулянтом (“Sarstedt”, Германия). ДНК выделяли из лейкоцитов цельной крови с использованием наборов DIAtomDNAPrep 100 (“Isogene”, Россия). Определение аллельного
29
ifC СибАК
Современная медицина: актуальные вопросы www.sibac.info___________________________________________№12 (44), 2015г.
полиморфизма проводилось с использованием аллель-специфической полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим гидролизом ампликонов соответствующей рестриктирующей эндонуклеазой. Г еномную ДНК из образцов крови выделяли по стандартной методике с использованием протеиназы К, фенол-хлороформной экстракции и осаждения этанолом. Идентификацию аллельных вариантов проводили по наличию узнавания для соответствующей реструктирующей эндонуклеазы с помощью электрофореза. При наличии мутации обнаруживали образование двух низкомолекулярных полос, появляющихся под действием фермента. Полное расщепление продукта ПЦР свидетельствовало о наличии в анализируемой ДНК гомозиготной формы мутации, а частичное - гетерозиготной. Анализ распределения изучаемых генотипов проводился с помощью теста х2 Распределение генотипов по исследуемым полиморфными локусам проверено на соответствие равновесии Харди-Вайнберга с помощью теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между разными группами использовали критерий Пирсона. Различия считались статистически значимыми при р<0,05. Для анализа ассоциации аллелей и генотипов исследуемых генов с риском развития акушерских осложнений рассчитано отношение шансов (OR) с 95 % доверительными интервалами.
Результаты и обсуждение. Результаты проведенного молекулярно-генетического тестирования показали, что мутация MTHFR С677T обнаружена у 32 женщин (38,1 %), полиморфизм гена PAI-1 675 5G/4G у 16 (19,0 %), Fll G20210A у 1 (1,2 %), FV(Leiden) G1691A у 7 (8,3 %) и различные комбинации мутаций у 28 (33,3 %). Для выявления возможных ассоциаций полиморфизмов генов с НБ нами был проведен сравнительный анализ частот аллелей и генотипов между пациентками с невынашиванием беременности и контрольной группой. Согласно полученным результатам полиморфизм MTHFR C677T у женщин основной группы встречался в гетерозиготном варианте у (51,2 %), в контрольной группе (13,5 %), гомозиготная мутация гена MTHFR C677T составила (15,4 %), что в три раза превысило показатели контрольной группы (5,4 %). Анализ мутации гена PAI-1 675 5G/4G в основной группе показал снижение нормального генотипа 5G/4G (54,8 %) по сравнению с контрольной группой (75,7 %, р<0,05), при этом доля гетеро- и гомозиготных носителей генотипов была выше по сравнению с контрольной группой (25,0 % и 20,2 %, против 18,9 % и 5,4 %). Отмечена высокая частота гомо- и гетерозиготного носительства мутации FV(Leiden) G1691A (12,8 %, 2,6 %) по сравнению с контрольной группой (2,7 %, 0 %).
30
((Г СибАК
Современная медицина: актуальные вопросы
www.sibac.info____________________________________________№ 12 (44), 2015г.
При проведении исследования распределения полиморфизма гена IL-8 в локусе - 781С/Т получены результаты в виде фрагментов аллельных генов. Для полиморфизма гена 781С/Т IL-8 гомозигота по доминантному типу была обозначена как - СС, гетерозигота - СТ, гомозигота по рецессивному типу - TT. У женщин с невынашиванием беременности получены следующие результаты: CC - (19,1 %) случаев, СТ - (57,1 %) случаев, ТТ - (23,8 %) случаев. В контрольной группе соответствующие показатели составили (42,5 %) (40,4 %) и (17,1 %).
Генетическим маркером успешного течения беременности является наличие аллеля С в локусе - 781 С/Т гена, кодирующего IL-8. Носители Т-аллеля имеют в 1,85 раза выше риск развития осложнений беременности. Гомозигота по аллели ТТ (-781 С/Т) имеет достоверно меньшие шансы на успешное течение беременности, чем суммарно все носители доминантного гена, а именно в 1,5 раза. Все носители рецессивного аллельного гена достоверно имеют втрое выше риск развития патологии беременности по сравнению с гомозиготой по доминантному аллели. Носители генотипа С/T и T/T имеют относительные риски в 2 и 1,5 раза выше по сравнению с носителями гомозиготного по доминантной аллели гена по развитию невынашивания беременности.
Выводы. В результате проведенного исследования удалось определить наиболее важные предикторы, ассоциирующиеся с риском невынашивания беременности при многоплодии MTHFR С677Т, FV(Leiden) G1691A и IL-8 (-781 C/T). Комбинации как гомо-, так и гетерозиготных генотипов этих генов ассоциируются с риском развития репродуктивных потерь.
Своевременное выявление генетических предикторов позволит оптимизировать преконцепционную подготовку для снижения риска репродуктивных потерь и акушерских осложнений. Наличие генетических маркеров послужит показанием к усиленному контролю гемостаза, иммунологического статуса, уровня гомоцистеина во время беременности и при необходимости проведение лечебных мероприятий.
Список литературы:
1. Дубоссарская З.М. Основные вопросы иммунологии репродукции /
З.М. Дубоссарская, Ю.А. Дубоссарская // Здоровье Украины. - 2010. -№ 4 (31). - С. 15-21.
2. Охтырская Т.А. Роль RAI-1 в повторных неудачах ВРТ / Т.А. Охтырская, К.А. Яворовская, Н.М. Файзуллина, Л.С. Ежова, Т.А. Демура, А.В. Шуршалина // Проблемы репродукции. - № 4. - С. 45-49.
31
www.sibac.info
Современная медицина: актуальные вопросы _________________________№ 12 (44). 2015 г
3. Associations between cytokine gene polymorphisms and recurrent pregnancy loss / S. Daher, N. Shulzhenko, A. Morgun [et al.] // J. of Reproductive Immunology. - 2003. - Vol. 58, - № 1. - P. 69-77.
4. Bura-Riviere A. Trombophilia and pregnancy. Rev. Prat. - Vol. 62, - № 7. -P. 937-942.
5. Medica I. Association between genetic polymorphisms in cytokine genes and recurrent miscarriage - a meta-analysis / I. Medica // Reproductive BioMedicine. - 2009. - Vol. 19, - № 3. - Р. 406-414.
6. Murphy M.M., Fernandes-Ballart J.D. Homocystein in pregnancy. Adv. Clin. Chem. - Vol. 53. - P. 105-137.
ВЛИЯНИЕ ВИДА АНЕСТЕЗИИ НА СОСТОЯНИЕ КОГНИТИВНЫХ ФУНКЦИЙ ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ КЕСАРЕВО СЕЧЕНИЕ
Соколова Наталья Юрьевна
студент VI курса лечебного факультета Курского государственного медицинского университета,
РФ, г. Курск E-mail: sokoloval 102@mail. ru
Иванова Оксана Юрьевна
д-р мед. наук, профессор кафедры акушерства и гинекологии Курского государственного медицинского университета,
РФ, г. Курск
INFLUENCE OF ANESTHESIA TECHNIQUES ON COGNITIVE FUNCTION AFTER CESAREAN SECTION
Natalia Sokolova
6th year student of the medical faculty of Kursk State Medical University,
Russia, Kursk
Oksana Ivanova
Sc. D., professor of Obstetrics and Gynecology department of Kursk State Medical University, Russia, Kursk
32
