CC BY
34
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ РОЛЬ CD95/FAS-PEUtEHTOPA... 3
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
УДК 576.367:577.352.2:547.495.4 М.А. Барышникова1, Н.В. Грищенко1, О.С. Бурова1, Д.В. Новиков2, Д. А. Афанасьева1, С.А. Полозкова1, А.П. Полозкова , H.A. Оборотова1, В.В. Новиков2, А.Ю. Барышников1, М.И. Давыдов1 РОЛЬ CD95/FAS-PE4EnTOPA
В ИНДУКЦИИ АПОИТОЗА ПРОТИВООПУХОЛЕВЫМИ ПРЕПАРАТАМИ
1ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им. H.H. Блохина» ФАНО, Москва
2НИИ молекуляпной биологии и регионарной экологии Нижегородского Государственного Университета им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород
Контактная информация
Барышникова Мария Анатольевна, к.фарм.н., ведущий научный сотрудник лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО
адрес: 115478, Москва, Каширское ш., 24; тел. +7(499)324-10-65 e-mail: ma ba@mail.ru
Статья поступила 20.08.2014, принята к печати 08.09.2014.
Резюме
Одним из механизмов действия противоопухолевых препаратов является инициация апоптоза посредством активации CD95/Fas сигнального пути. Ранее было показано, что в отсутствие CD95/Fas рецептора противоопухолевые препараты из группы нитрозоалкилмочевины не вызывают гибели клеток меланомы in vitro, однако липосомальные формы оказывают цитотоксическое действие.
Целью настоящей работы стало изучение роли CD95/FAS-pe4enropa в механизме клеточной гибели, индуцируемой липосомальной и традиционной лекарственными формами аранозы - препарата из группы нитро-зоалкилмочвины.
Клеточные линии меланомы человека mel Mtp, mel Mtp clone X, mel Z и mel Kor были охарактеризованы по экспрессии рецептора CD95/Fas методом проточной цитофлуорометрии с использованием МКА против CD95 и по наличию мРНК CD95-pe4enropa. Клетки линии mel Kor экспрессировали антиген CD95, тогда как на всех остальных клеточных линиях экспрессия данного антигена отсутствовала.
В МТТ-тесте сравнили действие аранозы в лекарственной форме «лиофилизат для приготовления раствора для инъекций» (араноза-лио) и в липосомальной лекарственной форме (липосомальная араноза) на эти клеточные линии. Клетки линии mel Kor были чувствительны к цитотоксическому действию аранозы-лио, а клетки линий mel Mtp, mel Mtp clone X и mel Z - устойчивы (p<0,05). Липосомальная араноза оказывала дозо-зависимое цитотоксическое действие на все исследованные клеточные линии.
С помощью двойного окрашивания аннексином V и пропидием йодидом было показано, что в клетках mel Kor араноза-лио, так же, как и липосомальная араноза, в концентрации 450 мг/мл индуцировала ранний и поздний апоптоз, а при концентрации 900 мг/мл - поздний апоптоз и некроз. На клетках mel Z, mel Mtp, mel Mtp clone X араноза-лио не индуцировала апоптоз. Липосомальная араноза дозо-зависимым образом индуцировала ранний и поздний апоптоз в клетках линий mel Z, mel Mtp, mel Mtp clone X.
Ключевые слова: апоптоз, FAS/CD95, липосомы, производные нитрозоалкилмочевины.
M.A. Barvshnikova1, N.V. Grischenko1, O.S. Burova1, D.V. Novikov2, D.A. Afanasieva1, S.A. Polozkova1, A.P. Polozkova1, N.A. Oborotova1, V.V. Novikov2, A . Yu. Baryshnikov , M.I. Davydov THE ROLE
OF CD95/FAS-RECEPTOR IN APOPTOSIS INDUCTION BY ANTITUMOR DRUGS
FSBSI «N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center» FASO, Moscow N.I. Lobachevsky State University, Nizhny Novgorod
Abstract
The initiation of apoptosis by activation of CD95/Fas signaling pathways is considered to be one of the mechanisms of anticancer drugs action. Recently, it was shown that the nitrozourea derivatives do not cause the death of melanoma cells in the absence of CD95/Fas receptor expression, however liposomal forms of these drugs were cytotoxic.
The aim of this work was to study the role CD95/FAS-receptor expression in cell death induced by liposomal and native form of nitrozourea derivative - Aranoza.
Using flow cytometry, we have divided the melanoma cell lines mel Mtp, mel Mtp clone X, mel Z and mel Kor derived from the surgical species of patients with disseminated melanoma into two groups by their ability to express CD95/Fas receptor or not. We have also followed the level of CD95 mRNA. Here we show that Mel Kor cell line expressed CD95 antigen and CD95 mRNA while the others were negative for this receptor expression. The cytotoxicity of native aranoza and it's liposomal form was tested by MTT assay. Here we show that Mel Kor cells were sensitive to the cytotoxic effect of native aranoza, whereas mel Mtp, mel Mtp clone X and mel Z cell lines were resistant (p<0.05). However, the dose-dependent effect of liposomal aranosa was observed in all studied melanoma cell lines.
№ 3/tom 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Annexin V and propidium iodide double staining demonstrated that that both aranoza formulations induced early and late apoptosis at the concentration of 450 mg/ml and late apoptosis and necrosis at the concentration of 900 mg/ml in mel Kor cells. It is worth to note that native aranoza didn't induce apoptosis in mel Z, mel Mtp, mel Mtp clone X cells while liposomal aranoza induced dose-dependent early and late apoptosis in these cells lines.
Key words: apoptosis; FAS/CD95; liposomes; derivative nitrosourea.
Введение
CD95/Fas рецепторно-лигандная система играет важную роль в иммунологическом гомеостазе и противоопухолевом иммунном ответе [4]. Одним из механизмов действия противоопухолевых препаратов является индукция CD95/Fas-nnraHfla и инициация апоптоза. В некоторых случаях в отсутствие CD95/Fas-pe4enTopa противоопухолевые препараты не индуцируют апоптоз и не вызывают гибели опухолевых клеток [16; 24; 25]. Ранее нами было показано, что липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов из группы нитрозоалклилмочевины, в отличие от традиционных лекарственных форм, индуцируют цитотокси-ческое действие на клетки меланомы в отсутствие CD95/Fas рецептора [6; 7]. Однако механизм цито-токсического действия липосомальных препаратов не изучен.
Целью настоящей работы было изучение роли CD95/FAS-pe4enTopa в механизме клеточной гибели, индуцируемой липосомальной и традиционной лекарственными формами аранозы - препарата из группы нитрозоалкилмочвины.
Материалы и методы
Клеточные линии
Исследования проводили на 4 клеточных линиях диссеминированной меланомы человека: mel Kor, mel Z, mel Mtp и mel Mtp clone X, полученных из банка клеточных культур ФГБУ «РОНИ им. H.H. Блохина» РАМН. Клеточные линии культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10 % ТЭС, 10 мМ HEPES (Sigma, США), 2мМ L-глугамин (Sigma, США), 40нг/мл гентамицин (ICN, США), пируват натрия (ПанЭко), 0,1 %-ный раствор аминокислот и 0,1 % üacTBOü витаминов (ПанЭко, Россия) пои 37° C в атмосфере 5 % С02. Клетки поддерживали в логарифмической Фазе роста постоянным пересевом культуры через 3-4 дня.
Определение экспрессии СБ95-антигена
Реакцию иммунофлуореспенции проводили с МКА CD95, меченными фикоэритрином (Dako, Дания). Экспрессию CD95 антигена оценивали на проточном цитометре FACSCantolI (Becton Dickinson).
Определение мРНК CD95
200 мкл суспензии клеток смешивали с равным объемом лизирующего раствора (4 М гуани-дин тиоционата, 250 мМ ацетата натрия, 0,5 % Triton X-100), добавляли 400 мкл смеси фенола с хлороформом (1:1), преципитировали изопропано-лом и промывали 75 %-ным этиловым спиртом. Осадок разводили в 20 мкл воды, свободной от нуклеаз. Полученный препарат использовали в реакции обратной транскрипции с использованием MMLV ревертазы (AmpliSens, Россия) согласно рекомендациям производителя. В качестве затравки использовали поли-Т праймер.
Детекцию мРНК мембранной формы Fas антигена (мРНК mFas) и мРНК растворимой формы Fas антигена (мРНК sFas) и оценку относительных
уровней проводили методом ПЦР в реальном времени. Для нормализации использовали уровень мРНК UBC. Реакционная смесь содержала ПЦР буфер, 5 единиц активности TaqF-полимеразы (ООО «Ин-терЛабСервис», Москва), 0.4 мМ каждого из дНТФ, по 10 пМ праймеров, по 5 пМ зондов, специфичных к исследуемым мРНК. Первичная структура праймеров и зондов представлена в табл. 1. ПЦР проводили в анализаторе нуклеиновых кислот DTlite (ДНК технология, Москва) при следующих температурных условиях: 94 °С - 15 мин и 50 циклов при 94 °С - 30 с, 55 °С - 40 с, 72 °С - 45 с. Расчет уровней исследуемых мРНК проводили, как описано Cikos S. и соавт. [22]. Уровни мРНК компенсировались с учетом эффективности реакции и нормализовались относительно уровня мРНК UBC.
Противоопухолевые препараты
Исследованы две лекарственных Формы аранозы, препарата из группы нитрозоалкилмочевины:
1. Араноза, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций (араноза-лио), производства филиал «НаукапроФи» ФГБУ «РОНЦ им. H.H. Блохина» РАМН;
2. Липосомальная лекарственная Форма аранозы (липосомальная араноза), предоставлена лабораторией разработки лекарственных Форм НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. H.H. Блохина» РАМН.
МТТ-тест
Клетки сажали в 96-луночные плоскодонные планшеты по 7*103 клеток на лунку. Через 24 ч в лунки с клетками добавляли по 20 мкл исследуемых препаратов в концентрациях 56 мкг/мл, 112 мкг/мл, 225 мкг/мл, 450 мкг/мл и 900 мкг/мл. Клетки инкубировали с препаратами в течение 24; 48 и 72 ч при 37 °С и 5% С02. После инкубации в каждую лунку вносили по 20 мкл раствора МТТ (1 мг/мл, Sigma, Chemical Co, США) и оставляли еше на 4 ч при 37 °C и 5% С02. По окончании инкубации планшеты центрифугировали, отбирали супернатант и вносили в лунки по 150 мкл ДМСО (ПанЭко, Россия) для растворения кристаллов Формазана, после чего планшеты встряхивали на шейкере. Оптическую плотность раствора Формазана определяли на Фотометрическом анализаторе имму-ноФерментных реакций «АИФР - 01 Униплан» (ЗАО, «Пикон») при X 530 нм. Величина поглощения прямо пропорциональна числу живых клеток. Интенсивность цитотоксичности оценивали в % по формуле:
Ц = (1 - —) х 100%, где Ok
Ок - оптическая плотность в контрольных лунках, Оо - оптическая плотность в опытных лунках.
Определение апоптотических клеток
методом двойного окрашивания
аннексином V-FITC и пропидием йодидом
Клетки сажали в 6-луночные планшеты в количестве 200 000 на лунку. Через сутки в лунки с клетками добавляли аранозу-лио и липосомальную аранозу в концентрациях 450 мкг/мл и 900 мкг/мл.
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ РОЛЬ CD95/FAS-PEU,EHTOPA... 5
Таблица 1
Первичная структура праймеров и зондов, используемых в ПЦР в реальном времени_
Праймер Первичная структура (5' - 3')
Fas-F ACCAAATGTGAACATGGAAT
Fas-R TTCCTTTCTCTTCACCCAA
sFas-R TTCCTTTCTCTTCACTTCC
Fas-Z ROX-AGATCTAACTTGGGGTGGCTTTGTCTTCTT-BHQ2
sFas-Z FAM-AGAGGAAGTGAAGAGAAAGGAAGTACAGA-BHQ1
UBC-F CACAGCTAGTTCCGTCGCA
UBC-R GAAGATCTGCATTGTCAAGT
UBC-Z R6G-ATTTGGGTCGCAGTTCTTGTTTGTGGAT-BHQ1
Таблица 2
Значения относительных уровней мРНК CD95 mFas и sFas
Уровень мРНК Линии клеток
mel Mtp mel Mtp clone X mel Kor mel Z
mFas /UBC 0 0 0,138463 0,19385
sFas/UBC 0 0 0,154881 0,285165
mFas/sFas 0 0 0,893997 0,67978
Таблица 3
Определение соотношения Аннексина У-ИТС и Р1 на клеточных линиях меланомы после 24 ч инкубации с ЛФ аранозы_
Клеточные ЛФ Живые Ранние апоптотичес-кие клетки (AnV+/Pl-),% Поздние апоптотичес-кие клетки (AnV+/PI+),% Некротичес-
линии меланом аранозы, мкг/мл клетки (AnVTPF), % кие клетки (AnV-/PI+), %
контроль 90,1 2,8 6,8 0,3
лио, 450 63,5 14,8 20,4 1,3
лио, 900 25,4 4,2 49,3 21,2
mel Kor липосомы, 450 58,2 9,8 27,5 4,4
липосомы, 15,4 2,3 48,9 33,5
900
контроль 92,8 1,2 5,8 0,1
лио, 450 92,0 1,4 5,6 0,1
лио, 900 92,9 2,6 4,4 0,2
mel Z липосомы, 450 66,8 11,1 20,6 1,5
липосомы, 18,7 26,0 52,6 2,6
900
контроль 90,5 4,1 5,3 0,1
лио, 450 89,7 5,8 4,4 0,0
лио, 900 83,7 9,5 6,7 0,1
mel Mtp липосомы, 450 83,5 10,2 6,3 0,1
липосомы, 76,8 11,8 11,2 0,1
900
контроль 88,0 4,6 4,5 2,8
лио, 450 84,8 8,2 4,4 2,5
mel Mtp clone X лио, 900 80,8 10,3 7,5 1,4
липосомы, 450 40,9 28,7 28,6 1,8
липосомы, 11,3 82,8 5,7 0,1
900
В контрольных лунках клетки оставались без препаратов. Через 24 ч инкубации клетки снимали, отмывали и помешали в пробирки по 500 000 клеток на пробирку в 100 мкл аннексин-связываюшего буфера. В пробирки добавляли по 5 мкл аннексина V-FITC и 5 мкл PI. Образцы инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут. Далее к пробам добавляли 400 мкл аннексин-связываюшего буфера и проводили анализ на проточном цитометре FACSCantoII (Becton Dickinson).
Результаты
Для изучения механизма действия аранозы-лио и липосомальной аранозы использовали клеточные линии меланомы кожи человека mel Mtp, mel Mtp clone X, mel Kor и mel Z, полученные в РОНЦ им. H.H. Блохина.
Эти клетки были охарактеризованы по экспрессии рецептора CD95/Fas методом проточной цитофлуорометрии с использованием МКА против
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
CD95 и по наличию мРНК CD95. Было обнаружено, что клетки линии mel Kor экспрессировали антиген CD95, тогда как на всех остальных клеточных линиях экспрессия данного антигена отсутствовала (рис. 1; см. цветной блок).
Известно, что отсутствие экспрессии белка не всегда отражает активность гена. В связи с этим нами было проведено изучение наличия мРНК гена CD95/Fas в выше указанных линиях. Оценку уровней мРНК проводили методом ПЦР в реальном времени. Определяли два вида mPHK - мембранос-вязанную (mFas) и растворимую (sFas) формы. Результаты представлены в табл. 2.
Оба вида мРНК отсутствовали в клетках mel Mtp и mel Mtp clone X, а клетках mel Z и mel Kor - присутствовали. Таким образом, клетки линии mel Z имеют мРНК антигена CD95/Fas, но не экспрессируют белок.
В МТТ-тесте сравнили действие аранозы-лио и липосомальной аранозы на эти клеточные линии. Клетки линии mel Kor были чувствительны к цито-токсическому действию аранозы-лио, а клетки линий mel Mtp, mel Mtp clone X и mel Z устойчивы (p<0,05), суммарные результаты представлены на рис. 2.
Липосомальная араноза оказывала дозо-зависимое цитотоксическое действие на все исследованные клеточные линии. На рис. 3 представлены суммарные результаты сравнения цитотоксического действия аранозы-лио и липосомальной аранозы на чувствительные клетки линии mel Kor и устойчивые клетки линии mel Mtp. Араноза-лио оказывала цитотоксическое действие только на клетки mel Kor, а липосомальная - на оба вида клеток. Аналогичные результаты получили также на клеточных линиях mel Mtp clone X и mel Z при инкубации клеток с препаратами в течение 24; 48 и 72 ч.
Следующим этапом работы было определение индукции клеточной гибели с помощью окраски клеток аннексином V-FITC и PI (табл. 3, рис. 4-7).
В клетках mel Kor араноза-лио, так же, как и липосомальная араноза, в концентрации 450 мг/мл через 24 ч индуцировала ранний и поздний апоптоз, а при концентрации 900 мг/мл - поздний апоптоз и некроз (рис. 4).
На клетках mel Z, mel Mtp, mel Mtp clone X араноза-лио апоптоз не индуцировала (табл. 3, рис. 5-7). Липосомальная араноза дозо-зависимым образом индуцировала ранний и поздний апоптоз в клетках линий mel Z, mel Mtp, mel Mtp clone X. Однако в последних при концентрации 900 мкг/мл липосомальная араноза индуцировала только ранний апоптоз у 82 % клеток. В отличие от чувствительных клеток mel Kor, липосомальная араноза не вызывала некроз на данных клеточных линиях.
Литература
Обсуждение
Ранее было показано, что липосомальные препараты преодолевают множественную лекарственную устойчивость [21]. Вероятно, это связано с отсутствием контакта липосомальной формы противоопухолевого препарата с цитоплазматической мембраной клетки, т.к. липосомы попадают в клетку путем эндоцитоза [5].
Внутри клетки липосомы попадают в лизо-сомы и после их разрушения препарат поступает в цитоплазму и ядро, где реализуется его токсическое действие. В нашем исследовании было показано, что липосомальная араноза индуцирует апоптоз в и СБ95- и СБ95+ клетках.
Липосомальные формы противоопухолевых препаратов стали применять в онкологической клинике в связи с тем, что они имеют ряд преимуществ перед традиционными лекарственными формами: в липосомы можно включать как гидрофильные, так и гидрофобные вещества; липосомы значительно снижают токсичность противоопухолевых препаратов [1-3; 9-15; 17; 18; 20; 23]. Липосомальные препараты избирательно накапливаются в опухолевой ткани в связи с особенностями неоан-гиогенеза неоплазмы [19; 26; 27].
Образование кровеносных сосудов не успевает за ростом опухоли, и в эндотелии вновь образованных сосудов имеются поры, через которые липосомы размером около 150 нм попадают в опухолевую ткань [8]. Однако, преимущество липосо-мальных препаратов не только в снижении токсичности химиотерапии, но и в преодолении лекарственной устойчивости, связанной с отсутствием рецептора внешнего апоптоза, что подтвердило наше исследование.
Заключение
Таким образом, наше исследование, проведенное на СБ95 и СБ95- клетках, показало, что механизм действия двух лекарственных форм аранозы различается. Традиционно применяемая в клинике араноза-лио вызывает в чувствительных СБ95 клетках апоптоз и некроз, а в резистентных СБ95- клетках не индуцирует клеточную гибель.
Липосомальная араноза индуцирует клеточную гибель на всех клеточных линиях, независимо от наличия или отсутствия на них СБ95-рецептора. Эффект устойчивости к аранозе-лио обусловлен отсутствием на цитоплазматической мембране рецептора СБ95/Ра8, ответственного за внешний сигнальный путь апоптоза.
1. Барышников А.Ю. Наноструктурированные липосомальные системы как средство доставки противоопухолевых препаратов // Вестник РАМН. - 2012. - № 3. - С. 23-30.
2. Барышников А.Ю., Барышникова М.А. Иммунолипосомы и мишени их действия // Российский химический журнал. Журнал Российского химического общества им. Д.И. Менделеева. - 2012. - Т. LVI, №3-4. - С. 60-7.
3. Барышников А.Ю., Оборотова H.A. Иммунолипосомы - новое средство доставки лекарственных препаратов // Современная онкология. - 2001. - Т. 3, № 2. - С. 4.
4. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Программированная клеточная смерть (апоптоз) // Российский онкологический журнал. - 1996. - № 1. - С. 58.
5. Барышникова М.А., Зангиева М.Т., Барышников А.Ю. Взаимодействие липидных нанокапсул с клеткой // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 11-5.
6. Грищенко Н.В., Алъбассит Б., Барышникова М.А. и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм противоопухолевых препаратов из класса нитрозомочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 49-54.
7. Грищенко Н.В., Барышникова М.А., Полозкова А.П. и др. Липосомальные противоопухолевые препа-
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
раты не используют CD95-3aBHCHMbrn сигнальный путь апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13. № 1. - С. 37-42.
8. Гуревич Д.Г., Меерович И.Г.. Меерович Г.А. и др. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. - Т. 6. № 2. - С. 45-9.
9. Дмитриева М.В., Оборотова Н.А., Санарова Е.В., Бунятян Н.Д. Наноструктурированные системы доставки противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11. № 4. - С. 21-7.
10. Дмитриева М.В., Оборотова Н.А., Орлова О.Л. и др. Липосомальная лекарственная форма борхло-рина // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13. № 1. - С. 37-42.
11. Мееревич И.Г., Кубасова И.Ю., Мееревич Г.А. и др. О возможности использования бактериохлор-филлид-серина в качестве фотосенсибилизатора для флюоресцентного определения новообразований // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2. № 4. - С. 9-13.
12. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Клименко О.В. и др. Разработка липосомальной формы противоопухолевой вакцины // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10. № 4. - С. 62-6.
13. Оборотова Н.А. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35. № 5. - С. 30.
14. Оборотова Н.А., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии. - 2009. - Т. 121. № 5. - С. 464.
15. Оборотова Н.А., Смирнова 3.С., Полозкова А.П., Барышников А.Ю. Фармацевтические аспекты разработки липосомальных лекарственных форм для внутривенного введения гидрофобных цитостати-ков // Вестник РАМН. - 2002. - № 1. - С. 42-5.
16. Славина Е.Г., Бигвава Х.А., Заботина Т.Н. и др. Модификация фактором некроза опухоли (ФНО-альфа) цитотоксического и апоптотического действия противоопухолевых лекарств в клетках мела-номы человека // Российский биотерапевтический журнал. - 2009. - Т. 8. № 4. - С. 37-44.
17. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Макарова О. А. и др. Доклиническое изучение липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2. № 4. - С. 40-5.
18. Смирнова З.С., Меерович И.Г., Лукъянец Е.А. и др. Фенилтиозамещенные фталоцианины - новые фотосенсибилизаторы ближнего инфракрасного диапазона // Российский биотерапевтический журнал. -2004. - Т. 3. № 1. - С. 54-60.
19. Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей человека // Успехи современной биологии. - 2000. - Т. 120. № 6. - С. 599.
20. Толчева Е.В., Оборотова Н.А. Липосомы как транспортное средство для доставки биологически активных молекул // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5. № 1. - С. 54-61.
21. Шоуа И.Б., Полозкова А.П., Оборотова Н.А. Действие липосомального доксорубицина на клетки линии. экспрессирующие активный pgp170 // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3. № 1. - С. 20-3.
22. Cikos S., Bukovska A., Koppel J. Relative quantification of mRNA: comparison of methods currently used for real-time PCR data analysis // BMC Molecular Biology. - 2007. - 8. - P. 113.
23. Meerovich I.G., Smirnova Z.S., Oborotova N.A. et al. Hydroxyaluminium tetra-3-phenylthiophthalocyanine is a new effective photosensitizer for photodynamic therapy and fluorescent diagnosis // Bulleten Experimental Biology and Medicine. - 2005. - 139(4). - P. 427-30.
24. Sokolovskaya A.A., Zabotina T.N., Blokhin D.Yu. et al. Comparative analysis of apoptosis induced by various anticancer drugs in Jurkat cells // Experimental Oncology. - 2001. - 23(1). - P. 46-50.
25. Sokolovskaya A.A., Zabotina T.N., Blokhin D.Yu. et al. CD95-dificient cells of Jurkat/A4 subline are resistant to drug-induced apoptosis // Experimental Oncology. - 2001. - 23. - P. 175-81.
26. Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V Baryshnikov A.Yu. The involement of apoptosis in melanoma vasculoggenic mimicry // Melanoma Research. - 2007. - 11(1). - P. 1-8.
27. Vartanian A.A., Stepanova E.V., Grigorjeva I.N. et al. VEGFR1 and PKCa signaling control melanoma vasculogenic mimicry in a VGFR2 kinasa-idependent manner // Melanoma Research. - 2011. - 21(2). - P. 91-8.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ДМСО
ПЦР
ЛФ
PI
- Диметилсульфоксид
- полимеразная цепная реакция
- лекарственная форма
- пропидий йодид
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
