CC BY
27
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© Коллектив авторов, 2013 УДК: 615.244:616-005.4
РОЛЬ АТФ-ЗАВИСИМЫХ К+ КАНАЛОВ В РЕАЛИЗАЦИИ ЭФФЕКТОВ ВЛИЯНИЯ ЭРИТРОПОЭТИНА НА СКОРОСТЬ ОБЪЕМНОГО КРОВОТОКА ПРИ ИШЕМИИ/РЕПЕРФУЗИИ ОРГАНОВ БРЮШНОЙ ПОЛОСТИ
М.В. Покровский 1, С.А. Алехин 2, Л.В. Иванова 2, Д.П. Назаренко 2, Д.И. Колмыков 2
Медицинский институт НИУ «БелГУ», г. Белгород (1) Курский государственный медицинский университет, г. Курск (2)
В статье показано влияние эритропоэтина на скорость объемного кровотока в различных органах брюшной полости на ранних стадиях ишемии/реперфузии. В ходе работы установлено, что глибенкламид, как блокатор митохондриальных АТФзависимых К+ каналов, отменяет защитные эффекты эритропоэтина, увеличивая транзиторную гиперемию. При этом поджелудочная железа имеет реакцию, отличную от других органов брюшной полости, как на ишемию/ реперфузию, так и на введение фармакологических агентов.
Ключевые слова: ишемия, реперфузия, кровоток, эритропоэтин.
Центральное место в повреждении органов брюшной полости при многих заболеваниях занимает ишемия, приобретая особое значение в связи с распространением высокотехнологичной хирургии - трансплантации органов, вмешательств с применением аппаратов искусственного кровообращения. Однако в случае с поджелудочной железой, ишемия приводит к развитию самостоятельной нозологической формы [7-9].
Среди фармакологических агентов, уменьшающих ишемическое повреждение одними из наиболее эффективных являются препараты, реализующие свои эффекты по механизмам ишемического пре-кондиционирования, конечной точкой приложения действия которого являются мито-хондриальные АТФ-зависимые К+ каналы, в связи с чем изучение роли данных АТФаз в реализации того или иного защитного эффекта является ключевым правилом, относящим агент к пре-кондиционирующим или исключающим его из таковых.
Нами ранее было показано положительное влияние эритропоэтина на раз-
витие микроциркуляторных расстройств при ишемии печени, однако реакция поджелудочной железы, отличная от таковой в других органах, предполагает различие в действии эритропоэтина на ткань поджелудочной железы в условиях ее ишемии и реперфузии. В связи с чем целью нашего исследования явилось изучение роли АТФ-зависимых калиевых каналов в реализации эффектов влияния эритропоэтина на скорость объемного кровотока в органах брюшной полости при ишемии/реперфузии.
Материалы и методы Исследование выполнено на 180 белых крысах (самцы и самки) массой 280-300 г. Все вмешательства выполнены под общим обезболиванием (золетил 100 в дозе 60 мг/кг и хлоралгидрат в дозе 125 мг/кг внутрибрюшинно). Транзиторная ишемия поджелудочной железы, печени и тонкого кишечника воспроизводилась путем перекрытия просвета соответствующих питающих артерий на 30 минут с последующим возобновлением кровотока [3-4]. Человеческий рекомбинантный
эритропоэтин («Эпокрин» производства ГосНИИ особо чистых биопрепаратов ФМБА ФГУП (Россия)) вводили в дозе 50 МЕ/кг за 30 минут до моделирования ишемии соответствующего органа [5-6]. Блокатор АТФ-зависимых К+каналов глибенкламид производства Sigma вводили в дозе 5 мг/кг внутрибрюшинно за 30 минут до эпизода ишемии или введения эритропоэтина в противоположную от введения агента область брюшной полости. Скорость объемной перфузии измеряли при помощи программно-аппаратного комплекса Biopac systems MP150 с датчиком TSD144 и выражали в перфузионных единицах (ПЕ) [2].
Цифровые данные обрабатывали методами вариационной статистики, количественные величины характеризовали средней арифметической (М) и ошибкой средней (m), статистическую значимость количественных величин оценивали по критерию Стьюдента (t). Все расчеты выполнены с помощью пакета статистических программ Microsoft Excel 2007.
Результаты и их обсуждение
Установлено, что характер реакции микроциркуляторного русла печени на перенесенный эпизод 30-минутной ишемии характеризуется наличием транзитор-ной гиперемии с пиком на 15-й минуте, превосходящей показатели интактной группы в 2,3 раза. При этом введение человеческого ре-комбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг за 30 минут до ишемии приводит к уменьшению выраженности транзиторной гиперемии в 1,37 раза (рис. 1), а применение глибенкламида в дозе 5 мг/кг за 30 минут до введения фармакологического агента приводит к отмене его положительного действия на скорость объемного кровотока в печени (рис. 2).
Характер микроциркуляторных изменений в стенке тонкого кишечника при ишемии и реперфузии аналогичен таковому в печени. Так пик транзиторной гиперемии приходится на 15-ю минуту восстановления кровотока и превосходит показатели интактной группы в 3,7 раза. Как и в печени, введение человеческого
рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг приводит к уменьшению величины транзиторной гиперемии в 1,28 раза (рис. 1). Введение блокатора АТФ-зависимых К+каналов глибенкламида в дозе 5 мг/кг в качестве фармакологического анализатора за 30 минут до введения эритропоэтина приводит к отмене защитного эффекта эритропоэтина, что однозначно свидетельствует о реализации защитного действия человеческого рекомбинантного эритропоэтина через митохондриальные АТФазы (рис. 2).
В ходе исследования нами была установлена реакция скорости объемного кровотока в поджелудочной железе в ответ на 30-минутную ишемию, отличная от таковой в печени и тонком кишечнике.
Основным отличием является отсутствие транзиторной гиперемии, при этом кривая восстановления скорости кровотока по своему характеру ближе к линейной, а восстановление протекает только до уровня 79,7% от показателей интактной группы с последующим снижением (рис. 1).
Таким образом, эпизод 30-минутной ишемии приводит к выраженным изменениям в гемодинамике микроциркуля-торного русла печени и тонкого кишечника, стимулируя массивный выброс вазоак-тивных веществ, что впоследствии определяет характер повреждения органа в ходе так называемых реперфузионных расстройств. Однако наиболее чувствительным органом в отношении 30-минутной ишемии оказывается поджелудочная железа, что проявляется отсутствием эпизода транзиторной гиперемии с резким снижением скорости кровотока к концу эпизода реперфузии и свидетельствует о реализации ответа ткани по NFkappa-b опосредованному пути [1].
Введение человеческого рекомби-нантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг приводит к "восстановлению" реакции ткани на ишемию/реперфузии, что проявляется улучшением кровоснабжения ткани в сравнении с группой ише-мии/реперфузии, при этом если экстраполировать данные, полученные в ходе
исследования перфузии печени и тонкого кишечника на поджелудочную железу, то "предполагаемый" уровень транзиторной гиперемии в группе ишемии/реперфузии должен находиться в пределах 1000-1200 ПЕ, а динамика изменения показателей скорости объемного кровотока в поджелудочной железе на фоне введения эритропоэтина будет сопоставима с динамикой данных показателей при исследовании кровотока в печени и тонком кишечнике. При этом реальная динамика скорости кровотока с увеличением перфу-
зии, по сравнению с группой ише-мии/реперфузии, свидетельствует о наличии механизмов реализации защитных эффектов эритропоэтина, отличных от таковых печени и тонкого кишечника, несмотря на то что основной точкой приложения действия являются, как в печени и тонком кишечнике, митохондриальные К+зависимые АТФазы, что подтверждается отменой эффектов эритропоэтина введением глибенкламида за 30 минут до введения фармакологического агента (рис. 2).
Рис. 1. Влияние эритропоэтина в дозе 50 МЕ на скорость объемной перфузии в печени, тонком кишечнике, поджелудочной железе после перенесенного эпизода 30-минутной ишемии в сравнении с группами ишемии/реперфузии (М±м, п=10). И/Р - группа ишемии реперфузии; -p<0,05 в сравнении с показателями интактной группы; - p<0,05 в сравнении с показателями группы ишемии/реперфузии; подписи данных справа от показателей для групп с применением эритропоэтина, слева жирным курсивом для групп ишемии реперфузии, сверху вниз - для печени, тонкого кишечника, поджелудочной железы
Рис. 2. Влияние эритропоэтина в дозе 50 МЕ на скорость объемной перфузии в печени, тонком кишечнике, поджелудочной железе после перенесенного эпизода 30-и минутной ишемии в сравнении с группами на фоне введения глибенкламида в дозе 5 мг/кг (М±м, п=10). (глибенкламид) - группа с введением глибенкламида в дозе 5 мг/кг; - р<0,05 в сравнении с показателями интактной группы; - р<0,05 в сравнении с показателями группы ишемии/реперфузии; подписи данных справа от показателей для групп с применением эритропоэтина, слева жирным курсивом для групп ишемии/реперфузии, сверху вниз - для печени, тонкого кишечника, поджелудочной железы
Заключение
В ходе исследования было установлено, что 30-минутная ишемия печени и тонкого кишечника приводит к выраженной транзиторной гиперемии, а введение человеческого рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг предупреждает ее развитие, при этом, при-менение бло-катора митохондриальных К+ АТФаз гли-бенкламида в дозе 5 мг/кг отменяет защитные эффекты эритропоэтина. Также
была установлена реакция скорости объемного кровотока в микроциркуляторном русле поджелудочной железы в ответ на эпизод 30-минутной ишемии, отличная от реакции в печени и тонком кишечнике, что проявлялось отсутствием периода транзиторной ишемии. Полученные данные свидетельствуют о выраженном защитном действии человеческого реком-бинантного эритропоэтина при ишемии и реперфузии в печени, тонком кишечнике
и поджелудочной железе, причем различная реакция скорости объемного кровотока в ответ на введение эритропоэтина в поджелудочной железе подразумевает различные пути реализации его защитных эффектов, несмотря на идентичные точки приложения действия в виде митохондри-альных К+зависимых АТФаз.
Литература
1. Геномные и экстрагеномные механизмы в реализации ишемических и реперфузионных повреждений в хирургии органов брюшной полости / С.А. Алехин [и др.] // Научные ведомости БелГУ. - 2012. - Т. 22(141), № 20/3. - С. 5-12.
2. Исследование микроциркуляции методом лазердопплеровской флоуметрии в поджелудочной железе при остром экспериментальном панкреатите / Р.А. Емельянов [и др.] // Кубанский научный медицинский вестник. - 2007. - № 1-2. - С. 50-51.
3. Прекондиционирование при ишеми-ческих и реперфузионных поражениях печени / Н.И. Жернакова [и др.] // Научные ведомости БелГУ. - 2012. -Т. 4(123), №17/1. - С. 157-162.
4. Влияние дистантного и прямого прекондиционирования на динамику показателей стабильных метаболитов оксида азота при ишемии тонкого кишечника / Н.И. Жернакова [и др.] // Научные ведомости БелГУ. - 2012. -Т. 4(123), № 17/1. - С. 163-167.
5. Дистантное и фармакологическое прекондиционирование - новые возможности стимуляции неоваскуло-генеза / И.М. Колесник [и др.] // Кубанский научный медицинский вестник. - 2010. - Т. 6, № 120. - С. 56-58.
6. Фармакологическое прекондиционирование эритропоэтином при ишемии конечности / И.М. Колесник [и др.] // Биомедицина. - 2011. - Т. 4, №. -С. 90-92.
7. Anderson M.C. Significance of vascular injury as a factor in the pathogenesis of pancreatitis / M.C. Anderson, J.J. Bergan // Ann Surg. - 1961. - Vol. 154. - P. 58-67.
8. Acute pancreatitis after cardiopulmonary bypass / G.S. Haas [et al.] // Am J Surg. -1985. - Vol. 149, № 4. - P. 508-515.
9. Ischemia reperfusion of the pancreas: a new in vivo model for acute pancreatitis in rats / T.F. Hoffmann [et al.] // Res Exp Med (Berl). - 1995. - Vol. 195, № 3. -P. 125-144.
ROLE OF ATP-DEPENDENT K+ CHANNELS IN ERYTHROPOIETIN EFFECTS ON ABDOMINAL ORGANS VOLUMETRIC BLOOD FLOW VELOCITY AT ISCHEMIA/REPERFUSION
M.V. Pokrovsky, S.A. Alehin, L.V. Ivanova, D.P. Nazarenko, D.I. Kolmikov
In this article erythropoietin influence on volumetric blood flow velocity in different abdominal organs at early ischemia/reperfusion stages were shown. We determine that glibenclamid as mitochondrial ATPdependent K+ channels blocker abolish erythropoietin protective effects, increasing transient hyperemia, at the same time pancreas has reaction different from other abdominal organs to ischemia/reperfusion and pharmacological agents intake.
Keywords: ischemia, reperfusion, blood flow, erythropoietin.
Покровский М.В. - д-р мед. наук, проф., зав. кафедрой фармакологии и фармацевтических дисциплин факультета постдипломного медицинского образования медицинского института ГБОУ ВПО НИУ «БелГУ» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Белгород.
E-mail: mpokrovsky@yandex.ru.
Алехин С.А. - канд. мед. наук, докторант кафедры хирургических болезней №2 ГБОУ ВПО КГМУ Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Курск.
Иванова Л.В. - аспирант кафедры хирургических болезней №2 ГБОУ ВПО КГМУ Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Курск.
Назаренко Д.П. - д-р мед. наук, проф. кафедры хирургических болезней №2 ГБОУ ВПО КГМУ Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Курск.
Колмыков Д.И. - аспирант кафедры хирургических болезней №2 ГБОУ ВПО КГМУ Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Курск.
