CC BY
10
Сельскохозяйственный журнал. 2023. №2 (16). С. 66-76 Agricultural journal. 2023; 16 (2). P. 66-76
Зоотехния и ветеринария
Научная статья
УДК 636.32/38.082.453.5
DOI 10.48612/FARC/2687-1254/007.2.16.2023
РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИЖИВЛЯЕМОСТИ ЭМБРИОНОВ ОВЕЦ, ПОЛУЧЕННЫХ НА РАЗНОЙ СТАДИИ РАЗВИТИЯ И КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ РАЗНЫМИ ТЕХНОЛОГИЯМИ
Али-Магомет Муссаевич Айбазов
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Северо-Кавказский федеральный научный аграрный центр», Россия, Ставропольский край, Михайловск, е-mail: info@fnac.center
Аннотация. В статье приводятся данные о результативности трансфера эмбрионов овец в зависимости от стадии развития эмбрионов и метода их замораживания. Эмбрионы у овец-доноров породы шароле получали после индукции полиовуляции. Синхронизацию стадии полового цикла вызывали введением полиуретановой интраваги-нальной губки, пропитанной 45 мг флюорогестон ацетата на 7 дней (день аппликации -день 0). Фолликулостимулирующий гормон (Folltropin-V) вводили в дозе 10 мл дробно в течение 4 дней с интервалом 12 часов. Эструс выявляли по поведенческим реакциям овцы на самца и животных в охоте осеменяли свежеполученной спермой хорошего качества. Извлечение эмбрионов проводили хирургическим путем (лапаротомия) на 2-й и на 6-й дни после осеменения. Эмбрионы замораживали двумя протоколами - стандартное медленное замораживание и сверхбыстрая витрификация. Не обнаружено статистически достоверной разницы между группами доноров как по числу желтых тел в яичниках, так и по количеству вымытых эмбрионов (P > 0,05). Установлены различия в криорезистентности эмбрионов на разных стадиях эмбрионального развития в пользу стадии морула/бластоциста. Не выявлено влияния метода криоконсервации на сохранность морфологической структуры эмбрионов. Не установлено значимых различий приживляемости криоэмбрионов, замороженных разными технологиями, после их трансплантации реципиентам. Показано, что приживляемость свежеполученных эмбрионов, полученных на 2-й и на 6-й дни после осеменения, оказалась достоверно выше, чем трансфер криоэмбрионов на тех же стадиях развития. Количество ягнят, масса плода при рождении и масса ягненка в возрасте 1, 2 и 4 месяца значимо не различались между группами. Делается вывод, что сбор и криоконсервация эмбрионов на стадии морулы/бластоцисты (6-й день после осеменения) является более эффективной технологией.
Ключевые слова: овцы шароле, доноры, суперовуляция, эмбрионы, криокон-сервация, витрификация, реципиенты, трансфер, приживляемость
Для цитирования: Айбазов А.-М.М. Результаты приживляемости эмбрионов овец, полученных на разной стадии развития и криоконсервированных разными технологиями // Сельскохозяйственный журнал. 2023. № 2 (16). С. 66-76. DOI 10.48612/FARC/2687-1254/007.2.16.2023
Zootechny and veterinary science
Original article
RESULTS OF SHEEP EMBRYOS ACCEPTANCE OBTAINED AT DIFFERENT STAGES OF DEVELOPMENT AND CRYOPRESERVED BY DIFFERENT TECHNIQUES
Ali-Magomet M. Aibazov
Federal State Budgetary Scientific Institution "North Caucasus Federal Agricultural Research Centre", Russia, Stavropol Territory, Mikhailovsk, E-mail: info@fnac.center
Abstract. This article presents data on the performance of sheep embryo transfer depending on the stage of embryo development and the method of freezing. Embryos from donor sheep of the Charollais breed were obtained after induction of polyovulation. Synchronization of the estrous cycle stage was induced by injecting a polyurethane intravaginal sponge impregnated with 45 mg of flugestone acetate for 7 days (day of application - day 0). Follicle-stimulating hormone (Folltropin-V) was administered at a dose of 10 ml in fractions during 4 days with 12-hour intervals. Oestrus was detected by the behavioural reactions of the ewes towards the male and the animals in heat were inseminated with freshly obtained good quality semen. The embryos were extracted surgically (laparotomy) on days 2 and 6 after insemination. Embryos were frozen by two protocols, standard slow freezing and ultra-fast vitrification. No statistically significant difference was found between the donor groups for both the number of yellow bodies in the ovaries and the number of washed embryos (P >0,05). Differences in the cryoresistance of embryos at different stages of embryonic development were established in favor of the morula/blastocyst stage. No effect of cryoconservation method on the preservation of morphological structure of embryos was found. No significant differences were found in the acceptance rate of embryos, which were frozen by different techniques after their transplantation to recipients. It was shown that the acceptance rate of freshly obtained embryos, which were obtained on days 2 and 6 after insemination was significantly higher than of frozen embryos transferred at the same stage of development. The number of lambs, birth weight and lamb weight at 1, 2 and 4 months of age did not differ significantly between the groups. It was concluded that collection and cryoconservation of embryos at the morula/blastocyst stage (day 6 after insemination) was a more effective technique.
Keywords: Charollais ewes, donors, superovulation, embryos, cryopreservation, vitrification, recipients, transfer, acceptance
For citation: Aibazov A.-M. M. Results of sheep embryos acceptance obtained at different stages of development and cryopreserved by different techniques // Agricultural journal. 2023; 16(2). Р. 66-76. DOI 10.48612/FARC/2687-1254/007.2.16.2023
Введение. Для интенсификации воспроизводства и улучшения генетических и продуктивных показателей сельскохозяйственных животных используются вспомога-
тельные репродуктивные технологии (ВРТ), из которых наибольшее распространение получило искусственное осеменение (ИО), позволяющее максимально использовать высокоценных производителей и реализованное в животноводстве многих стран мира, в том числе в России [1]. Другие ВРТ, включая технологию индукции множественной овуляции и эмбриотрансфера (МОЭТ), направленную на эффективное использование высокоценных самок, получили распространение в скотоводстве, а у мелких жвачных применяются в некоторых странах с развитым овцеводством [2]. В России технология МОЭТ хотя и является достаточно хорошо разработанной, используется ограниченно в научных целях, в практическом овцеводстве не находит распространения, вследствие низкой результативности [3]. Исследователи единодушны во мнении, что результативность МОЭТ зависит от многих факторов, например от стадии развития эмбриона, что подтверждается полученными разными авторами достаточно противоречивыми данными. Сообщают, что при прочих равных условиях эмбрионы на стадии вылупившейся бластоцисты имели тенденцию к большей жизнеспособности in vivo по сравнению с эмбрионами на стадии поздней морулы [4]. Другие исследователи сообщают, что успех трансплантации зависел возраста эмбриона и возрастал от двухклеточной зиготы к многобластомерной зиготе [5]. Ряд исследователей отрицает наличие коррелятивной связи успешности переноса от возраста эмбриона [6]. В вопросе влияния криоконсер-вации на качество оттаянных эмбрионов также нет единого мнения [7, 8].
Материал и методы исследования. Собственные эксперименты проведены в половой сезон в опытно-экспериментальном подразделении Всероссийского НИИ овцеводства и козоводства. Экспериментальные овцы содержались в одинаковых условиях кормления, содержания и ветеринарного ухода. Для проведения гормональной обработки и получения эмбрионов использовали 12 взрослых овец породы шароле со средней живой массой 65,5 кг. Синхронизацию стадии полового цикла вызывали введением полиуретановой интравагинальной губки, пропитанной 45 мг флюорогестон ацетата (Muqimuye Sci-Tech Co., Ltd., Китай) на 7 дней (день аппликации - день 0). Одновременно с введением пессария подкожно инъецировали 125 мкг простагландина F2a (PGF2a; Эстрофан, Чехия). На 7-й день губку удаляли и вводили новую. На 12-й день от начала обработки утром и вечером с разницей 12 часов инъекцировали фолликулости-мулирующий гормон (Folltropin-V, Bioniche Animal Health, Канада) соответственно в дозе 2,5 и 2,0 мл. На 13-й день ФСГ вводился в такой же последовательности в дозе 1, 5 и 1,5 мл. На 14-й день пессарий удалялся, доза ФСГ составляла 1,0 + 1,0 мл. На 15-й день - однократное введение ФСГ в дозе 0,5 мл утром. Спустя 36 часов после удаления вагинальных губок все овцы получали 200 МЕ хорионгонадотропина. Эструс выявляли по поведенческим реакциям овцы на самца и животных в охоте осеменяли свежеполу-ченной спермой хорошего качества.
Этапы и технику хирургического получения эмбрионов осуществляли в соответствии с ранее описанной методикой [3]. Криоконсервации как медленным замораживанием, так и витрификацией подвергались эмбрионы, соответствующие статусу «нормальные». Замораживание традиционным способом проводили в программируемой морозильной камере (IMV, France) [9], а для витрификации использовали методику (Martinez A.G., Valcarcel A., Furnus C.C. et all.) [10]. Дефростацию замороженных эмбрионов осуществляли по технологии (Moawad A.D.) [11]. Для дальнейших манипуляций допускались эмбрионы, оцененные по классификации LETS как высококачественные (код 1: отличное/хорошее или код 2: удовлетворительное) [12].
Перенос эмбрионов. В качестве реципиентов использовались овцы эдильбаев-ской породы. Всего 72 реципиента разделили на 6 групп. Опытные группы (группы 14, всего содержалось 48 голов - по 12 голов в группе) состояли из овец в зависимости от используемых процедур криоконсервации эмбрионов и разных стадий эмбрионального развития. Контрольные группы (группы 5-6, всего насчитывалось 24 головы -по 12 голов в группе) - овцы, которым пересаживали свежеполученные эмбрионы: группа 5 - перенос 2-8-клеточных стадий; группа 6 - перенос эмбрионов на стадии мо-рула/бластоциста.
У овец-реципиентов эстральный цикл был синхронизирован со стадией половой охоты донора с разницей не более 12 часов. Эмбрионы переносили лапароскопическим путем (2 эмбриона на одного реципиента вне зависимости от количества ЖТ) в яйцевод (перенос 2-8-клеточных стадий на 2-й день после эструса) и в рог матки (перенос стадий морулы/бластоцисты на 6-й день после эструса). Эмбрионы переносили в один яйцевод или рог матки, ипсилатеральный по отношению к ЖТ. В случаях с двойной овуляцией в разных яичниках эмбрионы пересаживались в оба яйцевода или рога.
Диагностика беременности. Диагностика беременности после эмбриотрансфе-ра проводилась на 35-е сутки с помощью трансректальной ультрасонографии на аппарате EDAN DUS 60 VET (Россия) с использованием линейного зонда с частотой 5,0 МГц. Уровень беременности в каждой группе выражался в процентах и основывался на количестве беременных овец/количестве реципиентов. Все беременные овцы находились под наблюдением до окота, когда фиксировались количество потомства, пол и масса тела ягнят при рождении. Показатель приживляемости эмбрионов рассчитывали как частное от деления количества полученных живых ягнят на число пересаженных эмбрионов, умноженное на 100 и выраженное в процентах.
Результаты исследования и их обсуждение. Основным научным результатом эксперимента явилась множественная овуляция всех обработанных животных. В первой группе доноров суммарное количество желтых тел составило 47, что соответствует 7,9±1,12 ЖТ на одного донора. В промывной жидкости удалось обнаружить только 36 клеток, что составляет 76,6 %. При этом из полученных 36 эмбрионов двухклеточных идентифицировали 6 зигот (16,6 %), четырехлеточных - 22 зиготы (61,2 %), восьмикле-точных - 8 зигот (22,2 %), что свидетельствует о том, что от одного донора первой группы получено 6,0±1,21 зигот, пригодных для дальнейших манипуляций.
У доноров второй группы (n = 6), прооперированных через 6 дней после осеменения, в яичниках выявлено 43 желтых тела (7,17±1,32 ЖТ на одного донора). В результате промывания рогов матки обнаружено 34 эмбриона (вымываемость - 79,1 %), при этом 12 эмбрионов (35,3 %) классифицированы как морулы, а 22 эмбриона (64,7 %) -как ранние бластоцисты. Соответственно, число полученных эмбрионов от одного донора в этой группе составило 5,67±1,10. Не обнаружено статистически достоверной разницы между группами доноров как по числу желтых тел в яичниках, так и по количеству вымытых эмбрионов (P > 0,05).
Одна из задач эксперимента - выяснение влияния метода криоконсервации на выживаемость эмбрионов. Для этого отобрали 42 эмбриона, в том числе на стадии 2-8 клеток - 20 гамет и на более поздней стадии (вымывание на 6-й день) - 22 эмбриона. Отобранные эмбрионы подвергались криоконсервации в соответствии с описанной методикой, после чего их дефростировали и определяли качество (таблица 1).
Таблица 1
Качество замороженных-оттаянных эмбрионов_
Стадия развития эмбриона Метод замораживания Качество эмбрионов после оттаивания
нормальные дегенерировавшие лизированные повреждения зоны пеллю-цида
п % п % п % п %
2-8 бласто-мерные зиготы медленное 8/10 80,0 1/10 10,0 1/10 10,0 - -
витрифи-кация 7/10 70,0 - - - - 3/10 30,0
Эмбрионы на стадии мо-рулы и бла-стоцисты медленное 9/11 81,8 - - - - 2/11 18,2
витрифи-кация 10/11 90,9 - - - - 1/11 9,1
После замораживания традиционной технологией и последующей дефростации большинство - 80,0 % - ранних зигот (2-8-клеточные) сохранили жизнеспособность, остальные 20 % были отнесены к дегенерированным или лизированным.
При консервировании витрификацией эмбрионов на той же стадии развития восстановили свою морфологию и оказались жизнеспособными 70,0 % зигот, в то время как нежизнеспособными и, соответственно, непригодными для дальнейших манипуляций оказались 30,0 %.
Наилучшие результаты получены при криоконсервации эмбрионов на стадии морулы/бластоцисты. При этом технология замораживания незначительно влияла на сохранность и жизнеспособность оттаянных зигот: 81,8 % клеток имели нормальную морфологию при медленном замораживании, а после процедур витрификации-оттаивания - 90,9 %. Средняя частота овуляции у овец-реципиентов составила 1,55±0,79, достоверных различий между правым и левым яичником не обнаружено. УЗИ-диагностика не выявила достоверной разницы в частоте наступления беременности в группах овец 1-4 (в среднем 47,93 % при лимите - 41,7-50,0 %, таблица 2). Таким образом, стадия развития перенесенных эмбрионов, а также метод замораживания эмбрионов не влияли на частоту наступления беременности после трансфера криоэмбри-онов.
В группах 5 и 6 уровень беременности составил в среднем 70,85 % при лимите 66,7-75,0 %, из чего следует, что эффективность переноса свежеполученных эмбрионов достоверно выше (Р < 0,01), чем криоконсервированных эмбрионов. Как и в группах 14, стадия развития перенесенных свежеполученных эмбрионов не влияла на результативность пересадки.
Данные о массе плода при рождении и массе ягнят в возрасте 1, 2 и 4 месяцев представлены в таблице 2. Не наблюдалось различий в живой массе в эти сроки при трансплантации криоконсервированных эмбрионов ни в зависимости от стадии развития, на которой эмбрионы были собраны от доноров, ни в зависимости от метода замораживания (Р > 0,05). Не обнаружено различий в количестве баранчиков и ярочек в приплоде в зависимости от стадии развития эмбриона и метода замораживания. Живая
масса ягнят, полученных в группах 5 и 6, во все исследованные периоды достоверно не различалась ни от стадии развития эмбриона, ни от ягнят, полученных в группах 1-4.
Таблица 2
Результаты переноса эмбрионов на разной стадии развития_
Показатели Результаты трансплантации эмбрионов
криоконсервированные эмбрионы свежеполученные эмбрионы
стадия 2-8 клеток стадия морулы/бластоцисты стадия 2-8 клеток стадия морулы/ бластоцисты
традиционное замораживание быстрое замораживание традиционное замораживание быстрое замораживание
группа 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа 5 группа 6
Число овец-реципиентов 12 12 12 12 12 12
Число пересаженных эмбрионов 24 24 24 24 24 24
Беременность при УЗИ-диагностике в 35 дней гол. 5 6 6 6 8 9
% 41,7 50.0 50.0 50.0 66.7 75.0
Получено ягнят, гол. 7 7 8 7 10 12
Приживляемость эмбрионов, % 29,17 29,17 33,33 29,17 41,67 50,00
Живая масса ягнят, кг при рождении 3,08±0,4 2,72±0,35 3,15±0,49 2,91±0,51 3,12±0,67 2,93±0,55
в 1 мес. 9,12±0,96 8,88±1,04 9,42±1,12 8,36±0,90 9,56±1,15 8,74±1,41
в 2 мес. 17,67±1,44 18,56±1,56 18,98±1,72 17,79±1,88 19,12±1,38 18,56±1,77
в 4 мес. 33,43±2,12 32,56±2,31 34,40±2,89 33,76±2,41 35,23±2,57 34,87±2,39
Методы репродукции мелких жвачных являются традиционными и мало изменились за последние 50 лет. Основными ограничениями интенсификации воспроизводства мелких жвачных считаются особенности биологии размножения - малоплодность и наличие полового сезона. Разработка и внедрение так называемых вспомогательных репродуктивных технологий у мелких жвачных, в отличие от крупного рогатого скота, не получили широкого практического распространения. Технология индукции множественной овуляции и эмбриотрансплантации (МОЭТ) - уникальная технология, способная преодолеть биологический барьер малоплодности у овец и в десятки раз увеличить число потомков от высокоценных животных и тем самым ускорить генетический прогресс [1]. В то же время развитию и внедрению МОЭТ препятствуют с биологической точки зрения непредсказуемость яичникового ответа на гормональную обработку по индукции полиовуляции, низкое качество и разнородность получаемых эмбрионов. Немаловажное значение имеет и экономическая составляющая - до настоящего време-
ни стоимость МОЭТ остается очень высокой из-за внушительной стоимости оборудования и расходных материалов. Нельзя не упомянуть и такой важный момент, как необходимость в квалифицированных кадрах.
В нашей стране технология МОЭТ используется очень ограниченно, в основном в молочном скотоводстве, а в овцеводстве данная технология практически не применяется, поэтому в собственных исследованиях мы попытались выяснить, с одной стороны, эффективность схемы гормонального вызывания множественной овуляции у овец породы шароле, с другой - определить наиболее криорезистентную стадию развития эмбриона и результативность трансфера криоэмбрионов. Полученные результаты исследования продемонстрировали, что схема гормональной обработки оказалась эффективной (число овуляций у одного донора колебалось от 5 до 13), уровень вымываемо-сти эмбрионов составлял 7Ó...79 %, что соответствует данным ведущих зарубежных исследователей [13, 14, 15].
Технология криоконсервации существенно снижает жизнеспособность эмбрионов. Результаты наших опытов, во-первых, подтвердили это, во-вторых, показали возможность сохранения жизнеспособности у 70.90 % замороженных-оттаянных эмбрионов. При этом можно утверждать, что 2-8-клеточные ранние эмбрионы вне зависимости от технологии криоконсервации обладали наименьшей криорезистентностью (30 % зигот не были пригодны для пересадки), в то время как эмбрионы на стадии мору-лы/бластоцисты обладали достоверно лучшей криорезистентностью - более 90 % зигот после оттаивания восстановили нормальную морфологию.
В своих ранних публикациях [16] мы уже указывали на то, что стадия мору-лы/бластоцисты у овец, по всей вероятности, является наиболее криоустойчивой. На примере эмбрионов коров [ 17] козьих эмбрионов [ 18] показали, что выживаемость вит-рифицированных эмбрионов может быть связана с несколькими факторами, такими как использование различных криопротекторов, время воздействия или концентрация растворов для витрификации или различные стадии развития эмбрионов.
Эффективность трансплантации криоэмбрионов, определяемая уровнем беременности у овец-реципиентов, оказалась самой низкой при переносе 2-8-клеточных эмбрионов после медленного замораживания и составила 41,7 %. При переносе 2-8-клеточных витрифицированных эмбрионов и морул/бластоцист, замороженных по двум технологиям, составила 50,0 %, что сходно с показателями, о которых сообщалось в исследовании (Green R.E., Santos B.F.S., Sicherle C.C. et all.) [8], но существенно ниже (65 %), чем в исследовании (S. Panyaboriban, J. Suwimonteerabutr, T. Swangchan-Utha iet all.) [19]. По-видимому, это связано с тем, что средняя частота наступления беременности в результате переноса эмбрионов обычно коррелирует с качеством замороженных-размороженных эмбрионов, хотя в некоторых исследованиях частота наступления беременности зависит от синхронности репродуктивного цикла «донор-реципиент» [20] или полноценности ЖТ у животных-реципиентов [21]. Показатель приживляемости криоэмбрионов практически не различался по группам 1-4 (лимит - от 29,8 % до 33,3 %), что соотносится с результатами [22], в которых от 80 реципиентов, которым пересадили 160 эмбрионов, получено 49 ягнят (30,6 %). Приживляемость после трансфера свежеполученных эмбрионов оказалась значимо выше (41,7 %) в группе 5, а в группе 6 - максимально высокой (50,0 %). Количество ягнят, масса плода при рождении и масса ягненка в возрасте 1, 2 и 4 месяца значимо не различались между группами 1-6. Этот результат диссонирует с данными [20], в которых масса тела ягнят в 2-месячном воз-
расте была выше у молодняка, полученного с использованием процедур витрификации, по сравнению с процедурами медленного замораживания.
Заключение. Таким образом, установлены различия в криорезистентности эмбрионов на разных стадиях эмбрионального развития в пользу стадии мору-ла/бластоциста. Не выявлено влияния метода криоконсервации на сохранность морфологической структуры эмбрионов. Не установлено значимых различий приживляемо-сти криоэмбрионов, замороженных разными технологиями, после их трансплантации реципиентам. Показано, что приживляемость свежеполученных эмбрионов, полученных на 2-й и 6-й дни после осеменения, оказалась достоверно выше, чем трансфер криоэмбрионов на тех же стадиях развития. Количество ягнят, масса плода при рождении и масса ягненка в возрасте 1, 2 и 4 месяца значимо не различались между группами. Делается вывод, что сбор и криоконсервация эмбрионов на стадии мору-лы/бластоцисты (6-й день после осеменения) является более эффективной технологией.
Список источников
1. Мамонтова Т.В., Селионова М.И., Айбазов А.-М. Половая активность и производство спермы у баранов пород шароле и иль-де-франс в разные сезоны // Сельскохозяйственная биология, 2021. Т.56. 4. С.752-762. D01:10.15389/agrobiology. 2021.4.752rus
2. Paramio M.T., Izquierdo D. Current status of In Vitro Embryo production in sheep and goats // Reprod Don. Anim, 2014. 49. Р. 37-48.
3. Айбазов А.-М.М., Мамонтова Т.В., Сердюков И.Г., Губаханов М.А. Результаты и перспективы использования вспомогательных репродуктивных технологий в воспроизводстве мелких жвачных животных // Овцы, козы и шерстяное дело, 2022. №2. С. 8-14. D0I:10.26897/2074-0840-2022-2-8-14
4. King CAF, Osborn D, Gruppen CG. Multiple ovulation and embryo transfer in sheep: Effects of embryo developmental stage and quality on viability in vivo under farm conditions // Australian Veterinary Journal, 2022. 100 (9) D0I:10.1111/avj.13174.
5. Kaur P., Swarankar M.L., Maheshwar M., Acharya V. A comparative study between cleavage stage embryo transfer at day 3 and blastocyst stage transfer at day 5 in in-vitro fertiliza-tion/intra-cytoplasmic sperm injection on clinical pregnancy rates // J. Hum. Reprod, 2014. Sci. 7, 194-197.
6. Spella A.R., Bealb W.E., Coraha L.R., Lambc G.C. Evaluating recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle // Theriogenology, 2001. 56, 287-297.
7. Successful direct transfer of vitrified sheep embryos / G. Baril, A.L. Traldi, Y. Cognié et all. // Theriogenology, 2001. 56, 299-305.
8. Viability of OPS vitrified sheep embryos after direct transfer / R.E. Green, B.F.S. Santos, C.C. Sicherle et all. // Reprod. Domest.Anim, 2009. 44, 406-410.
9. Martinez A.G., Matkovic M. Cryopreservation of ovine embryos: slow freezing and vitrification // Theriogenology, 1998. 49, 1039-1049.
10. Cryopreservation of in vitro-produced ovine embryos / A.G. Martinez, A. Valcarcel, C.C. Furnus et all. // Small Rumin, 2006. Res.63, 288-296.
11. Moawad A.D. Cryopreservation of Ovine Oocytes, Division of Animal Sciences School of Business // University of Nothingam, 2010. pp. 222. http://reprints.nottingham.ac.Uk/27948/1/537660.pdf.
12. Recent advances in bovine in vitro embryo production: reproductive biotechnology history and methods / L. Ferré, M. Kjelland, L. Stmbech et all. // Animal, 2020. 14(5): 991-1004 (doi: 10.1017/S1751731119002775).
13. Effects of different doses of estradiol benzoate used in a cervical relaxation protocol on the success of non- surgical embryo recovery and luteal function in superovulated ewes / J.H. Dias, J.D. Gon9alves, A.M. Arrais et all. // Domest. Anim. Endocrinol, 2022. 82, 106751 https://doi.org/10.1016/j.domaniend.2022.106751.
14. Preovulatory follicular dynamics, ovulatory response and embryo yield in Lacaune ewes subjected to synchronous estrus induction protocols and non-surgical embryo recovery / L.M. Figueira, N.G. Alves, J.M.G. Souza-Fabjan et all. // Theriogenology, 2020. 145, Р.238-246. https://doi.org/ 10.1016/j.theriogenology. 2019.11.004.
15. £izmeci SÜ., Güler M., Kaymaz M. Comparision of different cryoprotectants on slow freezing ofin vivo derived Saanen goats embryos // Ankara Üniv Vet Fak Dergisi, 2018. 65:171e8.https://doi .org/10.1501/Vetfak_0000002843.
16. Айбазов М.М., Мамонтова Т.В. Криорезистентность эмбрионов коз в зависимости от стадии развития // Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства, 2013. Т.3. №6. С. 14-17.
17. In-straw warming protocol improves survival of vitrified embryos and allows direct transfer in cattle / CS Oliveira Silva Feuchard, VL Freitas, C Silva Rosa et all. // Cryobiology, 2020. 97: 222e5.https://doi.org/10.1016/j.cryobiol.2020.02.007
18. Van N.K., Huong V.T.T., Au H.T., Lan P.D. Influence of cryopreservation and developmental stages of embryos on Saanen goat embryos during cold storage in Vietnam // J Anim Husbandry Sci Tech, 2021.
http://hoichannuoi.vn/uploads/files/Tap%20chi%20KHKT/TAPCHICHANNU0I% 20THANG%208_2021%20268-%C4%91%C3%A3%20n%C3%A9n.pdf#page1/435
19. A simplified superovulation protocol using split-single administration of Folltropin®-V in hyaluronan: application to purebred sheep / S. Panyaboriban, J. Suwimonteerabutr, T. Swangchan-Utha iet all. // Vet Med-Czech, 2018. №63. Р. 321-328.
20. On-farm lambing outcomes after transfer of vitrified and slow frozen embryos / S Khun-manee, T. Tharasanit, J Suwimonteerabutr et all. // Anim Reprod Sci, 2020. 216: 106e467.https://doi.org/10.1016/j.anireprosci. 2020. 1064.
21. Embryo survival and birth rate after minimum volume vitrification or slow freezing of in vivo and in vitro produced ovine embryos / P.C. Dos Santos-Neto, F. Cuadro, N. Barrera et all. // Cryobiology, 2017. 78:8e14. https://doi.org/10.1016/j.cryobiol. 2017. 08.002.
22. Cryopreservation of oocytes and embryos: current status and opportunities / A. Dhali, A.P. Kolte, A. Mishra et all. // In: Dhastagir SS, editor. Infertility, assisted reproductive technologies and hormone assays. London: E-Publishing Inc, 2019. P. 49-64.
References
1. Mamontova T.V., Selionova M.I., Aibazov A.-M. Sexual activity and sperm production of charolais and Ile-De-France rams in different seasons of the year // Agricultural Biology, 2021. V.56, 4, P.752-762. D01:10.15389/agrobiology. 2021.4.752rus
2. Paramio M.T., Izquierdo D. Current status of In Vitro Embryo production in sheep and goats // Reprod Don. Anim, 2014. 49, 37-48.
3. Aibazov A.-M.M., Mamontova T.V., Serdyukov I.G., Gubakhanov M.A. Results and prospects for the use of assisted reproductive technologies in the reproduction of small ruminants // Sheep, goats, wool business, 2022. No. 2. P. 8-14. D0I:10.26897/2074-0840-2022-2-8-14
4. King CAF, Osborn D, Gruppen CG. Multiple ovulation and embryo transfer in sheep: Effects of embryo developmental stage and quality on viability in vivo under farm conditions // Australian Veterinary Journal, 2022. 100 (9) D0I:10.1111/avj.13174
5. Kaur P., Swarankar M.L., Maheshwar M., Acharya V. A comparative study between cleavage stage embryo transfer at day 3 and blastocyst stage transfer at day 5 in in-vitro fertiliza-tion/intra-cytoplasmic sperm injection on clinical pregnancy rates // J. Hum. Reprod, 2014. Sci. 7, 194-197.
6. Spella A.R., Bealb W.E., Coraha L.R., Lambc G.C. Evaluating recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle // Theriogenology, 2001. 56, 287-297.
7. Successful direct transfer of vitrified sheep embryos / G. Baril, A.L. Traldi, Y. Cognié et all. // Theriogenology, 2001. 56, 299-305.
8. Viability of OPS vitrified sheep embryos after direct transfer / R.E. Green, B.F.S. Santos, C.C. Sicherle et all. // Reprod. Domest.Anim, 2009. 44, 406-410.
9. Martinez A.G., Matkovic M. Cryopreservation of ovine embryos: slow freezing and vitrification // Theriogenology, 1998. 49, 1039-1049.
10. Cryopreservation of in vitro-produced ovine embryos / A.G. Martinez, A. Valcarcel, C.C. Furnus et all. // Small Rumin, 2006. Res. 63, 288-296.
11. Moawad A.D. Cryopreservation of Ovine Oocytes, Division of Animal Sciences School of Business // University of Nothingam, 2010. pp. 222. http://reprints.nottingham.ac.uk/27948/1/537660.pdf.
12. Recent advances in bovine in vitro embryo production: reproductive biotechnology history and methods / L. Ferré, M. Kjelland, L. Stmbech et all. // Animal, 2020. 14(5): 991-1004 (doi: 10.1017/S1751731119002775)
13. Effects of different doses of estradiol benzoate used in a cervical relaxation protocol on the success of non-surgical embryo recovery and luteal function in superovulated ewes / J.H. Dias, J.D. Gon9alves, A.M. Arrais et all. // Domest. Anim. Endocrinol, 2022. 82, 106751 https://doi.org/10.1016/j.domaniend.2022.106751.
14. Preovulatory follicular dynamics, ovulatory response and embryo yield in Lacaune ewes subjected to synchronous estrus induction protocols and non-surgical embryo recovery / L.M. Figueira, N.G. Alves, J.M.G. Souza-Fabjan et all. // Theriogenology, 2020. 145, 238-246. https://doi.org/ 10.1016/j.theriogenology.2019.11.004.
15. £izmeci SÜ, Güler M, Kaymaz M. Comparision of different cryoprotectants on slow freezing of in vivo derived Saanen goats embryos // Ankara Üniv Vet Fak Dergisi, 2018. 65:171e8.https://doi .org/10.1501/Vetfak_0000002843.
16. Aibazov M.M., Mamontova T.V. Cryoresistance of goat embryos depending on the stage of development // Collection of scientific papers of the Stavropol Research Institute of Animal Husbandry and Feed Production, 2013. V.3. No. 6. P. 14-17.
17. In-straw warming protocol improves survival of vitrified embryos and allows direct transfer in cattle / CS Oliveira Silva Feuchard, VL Freitas, C Silva Rosa et all. // Cryobiology, 2020. 97: 222e5.https://doi.org/10.1016/j.cryobiol.2020.02.007.
18. Van N.K., Huong V.T.T., Au H.T., Lan P.D. Influence of cryopreservation and developmental stages of embryos on Saanen goat embryos during cold storage in Vietnam // J Anim Husbandry Sci Tech, 2021. http:// hoichannuoi. vn/uploads/ files/Tap%20chi%20KHKT/TAPCHICHANNU0I% 20THANG%208_2021%20268-%C4%91%C3%A3%20n%C3%A9n.pdf#page/35
19. A simplified superovulation protocol using split-single administration of Folltropin®-V in hyaluronan: application to purebred sheep / S. Panyaboriban, J. Suwimonteerabutr, T. Swangchan-Utha iet all. // Vet Med-Czech, 2018. 63. 321-328.
20. On-farm lambing outcomes after transfer of vitrified and slow frozen embryos / S Khun-manee, T. Tharasanit, J Suwimonteerabutr et all. // Anim Reprod Sci, 2020. 216: 106e467.https://doi.org/10.1016/j.anireprosci. 2020. 1064.
21. Embryo survival and birth rate after minimum volume vitrification or slow freezing of in vivo and in vitro produced ovine embryos / P.C. Dos Santos-Neto, F. Cuadro, N. Barrera et all. // Cryobiology, 2017. 78:8e14. https://doi.org/10.1016/j.cryobiol.2017. 08.002.
22. Cryopreservation of oocytes and embryos: current status and opportunities / A. Dhali, A.P. Kolte, A. Mishra et all. // In: Dhastagir SS, editor. Infertility, assisted reproductive technologies and hormone assays. London: E-Publishing Inc, 2019. P. 49e64.
Информация об авторах А.-М. М. Айбазов - доктор сельскохозяйственных наук, профессор, главный научный сотрудник лаборатории воспроизводства и репродуктивных технологий, тел.: +7(86553) 2-32-97, E-mail: velikii-1@yandex.ru
Information about the authors A.-M. M. Aibazov - Doctor of Agricultural Sciences, Professor, Chief Researcher, Laboratory of reproduction and reproductive technologies, tel.: +7(86553) 2-32-97, E-mail: velikii-1@yandex.ru
Статья поступила в редакцию 30.05.2023; одобрена после рецензирования 14.06.2023; принята к публикации 17.06.2023.
The article was submitted 30.05.2023; approved after reviewing 14.06.2023; accepted for publication 17.06.2023.
©Айбазов А.-М. М., 2023
