CC BY
10
6. Mitrofanova E.V. The main causes of food allergies in domestic animals in urban areas. Eurasian Union of Scientists. 2016; 26(5-4): 99-100.
7. Ushakova T.M., Derezina T.N. Correlation of malnutrition and hepatoprival syndrome in allergic enteropathy in dogs. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2020; 83(3): 236-240.
8. Ushakova T.M. Correction of the immunological status and malnutrition in dogs with allergic enteropathy with severe hepatoprival syndrome. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2022; 95(3): 274-279.
9. Ushakova T.M., Derezina T.N. Correlative links between malnutrition and redox homeostasis disorders in allergic enteropathy in dogs with severe gastrointestinal syndrome. International Bulletin of Veterinary Medicine. 2022; 2: 148-155.
10. Ushakova T.M. Correction of the level of metabolic processes and disorders of redox homeostasis in dogs with allergic enteropathy with severe hepatoprival syndrome and malnutrition. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2022; 94(2): 229-235.
11. Ushakova T.M., Babkina T.N. The level of nutritional disorders in dogs with allergic enteropathy with symptoms of malnutrition and morphofunctional disorders of the hepatobiliary system // Prospects for the development of scientific and innovative activities of youth in veterinary medicine: mater. intl. scientific-practical conf. Persianovsky, 2022, pp. 155-159.
12. Neskoromnykh E.N. Pharmacocorrection of nutritional status in dogs with allergic enteropathy with severe gastrointestinal syndrome. all-Russian scientific-practical conf. Persianovsky, 2019, pp. 103-108.
Татьяна Михайловна Ушакова, кандидат ветеринарных наук, [email protected]
Tatiana M. Ushakova, Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor, [email protected]
Статья поступила в редакцию 15.11.2022; одобрена после рецензирования 05.12.2022; принята к публикации 10.01.2023.
The article was submitted 15.11.2022; approved after reviewing 05.12.2022; accepted for publication 10.01.2023. -♦-
Научная статья
УДК 619:612.64:636.3
doi: 10.37670/2073-0853-2023-99-1-228-235
Результаты криоконсервации эмбрионов овец на разных стадиях развития двумя технологиями
Магомет Муссаевич Айбазов1, Марат Султанович Сеитов2
1 Северо-Кавказский федеральный научный аграрный центр, Михайловск, Ставропольский край, Россия
2 Оренбургский государственный аграрный университет, Оренбург, Россия
Аннотация. В статье приведены результаты эксперимента по определению наиболее криорезистентной стадии развития эмбрионов и оптимального метода их замораживания у мясных пород овец. Изучены в сравнительном аспекте криорезистентность двух стадий эмбриона (ранние, 2 - 8-бластомерные и поздние, на стадии морула/бластоциста) и два протокола криоконсервации (традиционное медленное замораживание и сверхбыстрая витрификация). Выявлены различия в криорезистентности эмбрионов на разных стадиях эмбрионального развития в пользу стадии морула/бластоциста. Не установлено влияние метода криоконсервации на сохранность морфологической структуры эмбрионов. Делается вывод, что сбор и криоконсервация эмбрионов на стадии морулы/бластоцисты (6-й день после осеменения) является более эффективной, чем получение и замораживание 2 - 8-клеточных зигот.
Ключевые слова: овцы шароле, доноры, суперовуляция, эмбрионы, криоконсервация, витрификация.
Для цитирования: Айбазов М.М., Сеитов М.С. Результаты криоконсервации эмбрионов овец на разных стадиях развития двумя технологиями // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2023. № 1 (99). С. 228 - 234. https://doi.org/10.37670/2073-0853-2023-99-1-228-234.
Original article
Results of cryopreservation of sheep embryos at different stages of development by two technologies
Magomet M. Aibazov1, Marat S. Seitov2
1 North Caucasus Federal Agricultural Research Center, Mikhailovsk, Stavropol Territory, Russia
2 Orenburg State Agrarian University, Orenburg, Russia
Abstract. The article presents the results of an experiment to determine the most cryoresistant stage of embryo development and the optimal method for their freezing in meat breeds of sheep. Cryoresistance of two stages of the embryo (early, 2 - 8 blastomeric and late, at the morula/blastocyst stage) and two cryopreservation protocols
(traditional slow freezing and ultrafast vitrification) were studied in a comparative aspect. Differences in the cryoresistance of embryos at different stages of embryonic development were revealed in favor of the morula/ blastocyst stage. The influence of the cryopreservation method on the preservation of the morphological structure of embryos has not been established. It is concluded that the collection and cryopreservation of embryos at the morula/blastocyst stage (day 6 after insemination) is more efficient than the production and freezing of 2 - 8 cell zygotes.
Keywords: Charolais sheep, donors, superovulation, embryos, cryopreservation, vitrification.
For citation: Aibazov M.M., Seitov M.S. Results of cryopreservation of sheep embryos at different stages of development by two technologies. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2023; 99(1): 228-234. (In Russ.). https://doi.org/10.37670/2073-0853-2023-99-1-228-234.
Биотехнологии репродукции, более известные во всём мире как вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ), могут быть эффективно использованы для улучшения генетических и продуктивных показателей мелких жвачных [1]. Из множества разработанных в последние десятилетия ВРТ наибольшее распространение получило искусственное осеменение (ИО), которое было реализовано на национальном уровне в животноводстве десятков стран мира, в том числе в России [2]. В то же время такая технология, как МОЭТ (множественная овуляция и эмбриотрансфер), у мелких жвачных в России применяется ограниченно в научных целях, хотя и является достаточно хорошо разработанной и широко применяемой в некоторых странах с развитым овцеводством, включая Австралию, Южную Африку, Мексику и Аргентину [3, 4].
Современные экономические условия определяют общемировую тенденцию перехода важнейшей отрасли животноводства - овцеводства - от экстенсивного производства шёрстного сырья к интенсивному производству баранины. При всех национальных издержках экономика России является составной и важной частью глобальной экономики, соответственно, учитывая современные мировые тенденции, в России также будет приоритетно развиваться мясное овцеводство. Вследствие отсутствия отечественного генофонда специализированных мясных пород, в полной мере отвечающих современным требованиям, неизбежен завоз и использование лучших мясных пород зарубежной селекции, во-первых, в селекционных целях для создания отечественных мясных пород овец, во-вторых, для создания в разных регионах страны массивов мясных овец методом промышленного скрещивания с овцематками отечественных пород.
Использование ценного завозимого поголовья должно быть комплексным. Баранов-производителей необходимо максимально использовать для искусственного осеменения овец отечественных пород с параллельным накоплением от них спермы в замороженном виде. Маток зарубежной селекции необходимо использовать для получения чистопородного молодняка, а лучшую часть маток использовать в технологии МОЭТ для максимального тиражирования ценных генотипов. При этом животными-реципиентами
могут быть овцы отечественных пород [3]. В рамках этой комплексной задачи были проведены собственные исследования по вызыванию множественной овуляции (суперовуляции, полиовуляции) у овец породы шароле, получению эмбрионов на разных стадиях развития, их криоконсервации, при этом применяли различные методы замораживания.
Известно, что для того, чтобы технология заинтересовала сельхозтоваропроизводителя, была принята и пошла в производство, она должна быть эффективной и недорогой. Краткий анализ литературных источников показывает, что при исследовании результативности эмбриотрансфера разными авторами получены достаточно противоречивые данные. Так, некоторые исследователи показывают, что результаты не различались при переносе как свежеполученных, так и подвергшихся витрификации бластоцист [5, 6], Другие выяснили, что точно так же на эти показатели не влияли качество и стадия развития эмбриона [7].
С другой стороны, как сообщают исследователи [8, 9], частота наступления беременности при трансплантации эмбрионов при прочих равных условиях зависит от стадии развития эмбриона и бывает выше при переносе бластоцисты по сравнению с переносом зигот на стадии дробления. Результаты другого исследования показали, что трансплантация эмбрионов, которые были витрифицированы на стадии морулы, приводила к большей частоте наступления беременности, чем перенос эмбрионов на стадии морулы, которые были криоконсервированы с использованием методов медленного замораживания [10]. И наоборот, криоконсервация эмбрионов, полученных с помощью процедур экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) с использованием метода медленного замораживания, приводила к более высокому уровню развития эмбрионов (скорости дробления и бластоцисты), чем при переносе эмбрионов, криоконсервированных с использованием процедур витрификации [11].
Следует подчеркнуть, что отечественных исследований по применению МОЭТ в практике овцеводческих хозяйств практически нет. Тем более мы не нашли в отечественной научной литературе данных по результатам криоконсервации и витрификации овечьих эмбрионов на разных стадиях развития. Таким образом, по-видимому,
наши опыты являются одними из первых исследований по стимуляции множественной овуляции и результативности криоконсервации эмбрионов в мясном овцеводстве.
Целью настоящего исследования было определить оптимальную стадию сбора эмбрионов и технику замораживания эмбрионов для получения лучших результатов.
Материал и методы. Исследование проводили в сентябре 2022 г. (половой сезон) на опытно-экспериментальной станции Всероссийского НИИ овцеводства и козоводства. Все животные содержались в крытом загоне, где имелась выгульная площадка, а также возможность выпаса на пастбище. Вода, соль и минеральная подкормка были доступны вволю. Соблюдался общий график вакцинации, дегельминтизации и обрезки копыт. Все процедуры в этом исследовании соответствовали принятым во ВНИИОК этическим стандартам.
Дизайн исследования. В собственных исследованиях для получения эмбрионов в качестве овец-доноров было использовано 12 взрослых овец породы шароле. Овцы были клинически здоровы, проверены при помощи ультрасоногра-фии (УЗИ) на отсутствие беременности и патологии внутренних половых органов. Программа индукции суперовуляции была проведена по следующей методике: всем овцам-донорам вводили интравагинальное устройство (Eazi-Breed™ CIDR-G; Interag, Новая Зеландия) на 10-е сут. Двойная инъекция фолликулостимулирующего гормона (Folltropin-V, Bioniche Animal Health, Канада) вводилась в дозе 150 мг на 7-е сут. после аппликации интравагинальных пессариев и в дозе 30 мг - спустя 48 час. после первой инъекции одновременно с удалением влагалищных пессариев. На 9-е сут. от начала обработки проводили две инъекции простагландина F2a (PGF2a; Cloprostenol®, German) по 150 мкг утром и вечером с интервалом 12 час. На 10-е сут. после начала обработки овцам-донорам инъецировали 200 МЕ хорионического гонадотропина человека (ХГЧ, Chorulon®, Animal Health, Inc., США). Пришедших в охоту в течение 22 - 24 час. овец трёхкратно интрацервикально осеменяли свеже-полученной спермой высокого качества [3].
За 24 часа до операции лапаротомии всех овец-доноров переводили на абсолютно голодную диету, а за 12 часов исключали потребление воды. Забор эмбрионов проводили при помощи лапаротомии. В качестве седативного препарата для общего наркоза использовали внутривенное введение 0,3 - 0,4 мл Телазола (Telasol, Zoetis, USA). Разрез по средней вентральной линии делали краниальнее вымени. Осматривали яичник и определяли количество жёлтых тел (ЖТ) с хорошей морфологией. Эмбрионы собирали либо на 2-е, либо на 6-е сут. после осеменения в
зависимости от желаемой эмбриональной стадии. Для промывания яйцевода использовали физиологический раствор Дюльбекко (DPBS, Gibgo, США), содержащий 5 % фетальной бычьей сыворотки (FBS, JR Scientific, Inc., Вудленд, США). Промывочный раствор, содержащий эмбрионы, собирали в одноразовые стерильные пластиковые чашки Петри.
Криоконсервация эмбрионов. Для замораживания отбирали только морфологически нормальные эмбрионы. Эмбрионы на стадиях 2 - 8 клеток или на стадиях морулы/бластоцисты были случайным образом распределены для различных методов криоконсервации путём либо медленного замораживания, либо витрификации. Таким образом, было сформировано четыре группы перенесённых эмбрионов: I - 2 - 8-клеточные эмбрионы для медленного замораживания, II -2 - 8-клеточные эмбрионы для витрификации, III - эмбрионы на стадии морулы/бластоцисты для медленного замораживания и IV - эмбрионы на стадии морулы/бластоцисты для метода витрификации. Криоконсервацию проводили в течение 3 - 5 час. после извлечения эмбрионов.
Метод медленного замораживания был проведён по методике, описанной M.H. Bhat et al. (2014) [12], с некоторыми модификациями, включающими помещение соломинок с эмбрионами в программируемую морозильную камеру (IMV, France) при первоначальной температуре 25 °C. Далее эмбрионы охлаждали со скоростью 2 °С/мин и выдерживали при минус 6 °C в течение 5 мин. Потом эмбрионы охлаждали со скоростью 0,3 °С/мин до минус 33 °C. После завершения этой стадии процесса замораживания соломинки помещали в сосуд с жидким азотом при температуре минус 196 °C для длительного хранения.
Перед витрификацией эмбрионы при 25 °C последовательно помещали в три раствора, содержащие возрастающие концентрации этилен-гликоля (10 %, 20 % и 40 %) в базовой среде и затем помещали в четвёртую среду, содержащую 0,125 М трегалозы с 10 % FBS, используя ранее описанный протокол [13]. После переноса эмбрионов во французские мини-соломинки образцы сразу же погружали непосредственно в жидкий азот.
Оттаивание соломинок с криоконсервиро-ванными эмбрионами проводили по методике, предложенной A.G. Martinez et al. (2006) [14], которая предполагала оттаивание соломинок медленной заморозки в течение 20 сек. в водяной бане при 37 °C, тогда как оттаивание соломинок с верифицированными эмбрионами проводили при комнатной температуре с дальнейшим четырёхкратным промыванием дефростирован-ных эмбрионов в промывочных растворах для удаления этиленгликоля.
Оценку замороженных/оттаянных эмбрионов проводили под микроскопом (Olympus, Япония) и в зависимости от морфологии делили на четыре категории: 1) морфологически нормальные эмбрионы; 2) дегенеративные эмбрионы: эти эмбрионы были с несколькими дегенеративными изменениями в области внутренней клеточной массы с тёмными и некротическими клетками;
3) лизированные клетки: разрыв эмбриона после процедуры замораживания и оттаивания и
4) повреждённая блестящая оболочка: потеря зоны пеллюцида.
Только эмбрионы, классифицированные как высококачественные (код 1: отличное/хорошее или 2: удовлетворительное, классификация IETS), были отобраны как пригодные для дальнейших манипуляций, в то время как эмбрионы (код 3: плохое и код 4: мертвые/дегенерирующие) были выбракованы.
Результаты и обсуждение. Суперовулятор-ную реакцию яичников на применённую нами схему гормональной обработки можно считать удовлетворительной. Все овцы-доноры (n = 12) ответили множественной овуляцией, на что указывало наличие сформировавшихся жёлтых тел в яичниках животных. При этом не обнаружено достоверных различий в уровне овуляций в зависимости от правого или левого яичника.
В яичниках первой группы доноров, оперированных на 2-е сут. после осеменения, обнаружено 47 жёлтых тел (в среднем на одного донора 7,9 ± 1,12 ЖТ). Количество извлечённых зигот составляло 36 ед. (вымываемость составляла 76,6 %). Неоплодотворённых яйцеклеток не обнаружено. В том числе на стадии 2 бласто-меров извлечено 6 клеток (16,6 %), на стадии 4 бластомеров - 22 зиготы (61,2 %), на стадии 8 бластомеров - 8 клеток (22,2 %). На одного донора было получено 6,0 ± 1,21 нормальных зигот, что является приемлемым результатом.
В яичниках второй группы доноров, оперированных на 6-е сут. после осеменения, обнаружено 43 жёлтых тела (в среднем на одного донора 7,17 ± 1,32 ЖТ). В этой группе доноров всего вымыто 34 эмбриона (вымываемость 79,1 %), в том числе на стадии морулы - 12 эмбрионов (35,3 %), а на стадии бластоцисты - 22 эмбриона (64,7 %). Как и в первой группе доноров, неоплодотворённых яйцеклеток не обнаружено.
Среднее количество извлечённых зигот на одного донора в этой группе составляло 5,67 ± 1,10, что также соответствовало параметрам хорошего результата.
Статистический анализ показал, что не было достоверных различий между группами по времени извлечения и количеству жёлтых тел или извлечённых эмбрионов на двух стадиях эмбрионального развития (P > 0,05).
Для криоконсервации было отобрано 20 зигот на стадии 2 - 8 бластомеров и 22 эмбриона на стадии морулы и бластоцисты. В соответствии с дизайном эксперимента внутри каждой стадии развития эмбриона криоконсервация осуществлялась либо методом медленного замораживания, либо с использованием процедуры витрифика-ции. После криоконсервации эмбрионы оттаивали и определяли их качество (табл. 1).
Выявлено, что большинство эмбрионов на стадии 2 - 8 бластомеров, криоконсервированных методом медленного замораживания (n = 10), после размораживания имели нормальную морфологию (код 1 - 2 - 8 клеток, или 80,0 %; дегенерированные - 1 клетка, или 10,0 %; лизированные - 1 клетка, или 10,0 %).
После размораживания эмбрионов на стадии развития 2 - 8 бластомеров, криоконсервиро-ванных с использованием процедур витрифи-кации (n = 10), также были морфологически нормальными большая часть зигот (код 1 - 2 всего 7 клеток, или 70,0 %; повреждённая zona pellucida - 3 эмбриона, или 30,0 %).
В группе из 11 эмбрионов, замороженных методом медленной заморозки на стадии морулы/ бластоцисты, после оттаивания с нормальной морфологией (код 1 - 2) было 9 эмбрионов, или 81,8 %; с повреждённой зоной пеллюцида - 2 эмбриона, или 18,2 %. Верифицированные на стадии морулы/бластоцисты эмбрионы (n = 11) после оттаивания имели следующие показатели качества: с нормальной морфологией (код 1 - 2) всего 10 клеток, или 90,9 %, повреждённые - 1 клетка, или 9,1 %).
Овцеводство и козоводство являются наиболее динамично развивающейся отраслью животноводства многих стран мира [15]. Существует значительный спрос на овец и коз на рынках, ежегодно увеличивающийся в среднем, по некоторым оценкам, на 6 - 7 %. При многих
1. Качество замороженных/оттаянных эмбрионов
Стадия развития эмбриона Метод замораживания После оттаивания
нормальные дегенерировавшие лизированные повреждения зоны пеллюцида
n % n % n % n %
2 - 8-бластомерные зиготы Медленное 8/10 80,0 1/10 10,0 1/10 10,0 - -
Витрификация 7/10 70,0 - - - - 3/10 30,0
Эмбрионы на стадии морулы и бластоцисты Медленное 9/11 81,8 - - - - 2/11 18,2
Витрификация 10/11 90,9 - - - - 1/11 9,1
положительных параметрах разведения мелких жвачных, при естественных методах репродукции имеются биологические ограничения интенсификации воспроизводства, такие, как наличие полового сезона, низкая плодовитость, получение 1 ягнёнка в год и т.д. Использование вспомогательных репродуктивных технологий, особенно искусственного осеменения, позволило существенно увеличить темпы селекции, создать множество высокопродуктивных типов и пород мелких жвачных. Что касается интенсификации использования самок, этот вопрос остаётся нерешённым до сих пор, и только ограниченное число стран широко использует технологию МОЭТ при разведении мелкого рогатого скота. Основным преимуществом МОЭТ является возможность производить до 10 - 15 потомков в год от генетически превосходных животных [2]. Эту технологию можно использовать для ускорения генетического прогресса, улучшения репродуктивной способности животных, максимизации продуктивности животных, снижения затрат сельхозтоваропроизводителей, связанных с ввозом племенных животных из-за рубежа, транспортных расходов и предотвращения заболеваний. Однако у технологии МОЭТ также есть много ограничивающих сторон. Это её высокая стоимость, складывающаяся из затрат на приобретение дорогостоящих гормональных препаратов, как правило, импортного производства; необходимость сложного и дорогостоящего оборудования; наличие высококвалифицированных и хорошо обученных техников, которые внимательно относятся к деталям при проведении процедур, включая этапы технологии МОЭТ: выбор доноров и реципиентов; синхронизацию эструса; индукцию суперовуляции; осеменение; получение и оценку эмбрионов; трансфер эмбрионов реципиентам [2, 16, 17].
В России технология МОЭТ не получила широкого распространения, однако, на наш взгляд, это не является основанием для отказа от научных разработок в данном направлении с целью усовершенствования её отдельных элементов, повышения её результативности и снижения затрат на её проведение. Результаты настоящего исследования показывают, что эффективность суперовуляции, определяемая количеством жёлтых тел, процентом вымытых эмбрионов на соответствующей стадии развития, были схожими с результатами других исследователей [16] и даже немного их превосходили. Это может быть объяснено использованной породой овец шароле, очень эффективной схемой гормональной обработки и, возможно, большим практическим опытом авторов в проведении подобных процедур. Количество жёлтых тел у доноров в результате индукции суперовуляции варьировало от 5 до 13 ед.
Тот факт, что все извлечённые гаметы были оплодотворёнными, говорит как минимум о двух важных моментах. Во-первых, схема гормональной обработки оказалась оптимальной, биологически совместимой с естественной физиологией репродукции у мясных овец, что послужило основанием для выхода полноценных яйцеклеток. Во-вторых, трёхкратное осеменение овец в охоте спермой хорошего качества обеспечило высокий уровень оплодотворяемости яйцеклеток.
Количество эмбрионов, извлечённых при сборе на обеих стадиях эмбрионального развития (76 - 79 %), по сравнению с количеством наблюдаемых жёлтых тел можно объяснить несколькими факторами. Возможно, бахромки яйцевода не были способны полностью покрыть заметно увеличенные яичники, возникшие в результате индукции суперовуляции, и, следовательно, яйцеклетки могли попадать в брюшную полость. При извлечении эмбрионов на стадиях морулы/ бластоцисты основные потери, по-видимому, были связаны с необходимостью вымывания из рога матки. Несмотря на это, мы рекомендуем получать эмбрионы от овец-доноров на 6-е сут. после осеменения, поскольку это является более простой процедурой, причём при таком подходе можно избежать необходимости манипулировать бахромкой яйцевода и яйцеводом во время сбора. Это может исключить риск их повреждения и наиболее часто возникающих осложнений в виде слипчивого воспаления бахромки и яйцеводов, приводящих к невозможности дальнейшего использования доноров. В предыдущем нашем исследовании, когда производилась индукция полиовуляции у самок пород шароле и иль-де-франс, вымывание проводили на 6-е сут. после осеменения, и были получены сходные результаты [3].
Хорошо известно, что многие процессы метода криоконсервации наносят ущерб качеству эмбрионов. В наших опытах криоконсервация вне зависимости от стадии развития эмбриона и от технологии замораживания в определённой степени повреждала зиготы. В каждой из четырёх групп были повреждённые эмбрионы, в том числе подвергшиеся дегенерации, с лизи-рованной клеточной морфологией, и эмбрионы с повреждённой зоной пеллюцида. Повреждение последней считается следствием механического напряжения, вызванного неравномерными изменениями объёма замораживающей среды, что приводит к снижению жизнеспособности бластомеров [18].
Выявленное в наших опытах сохранение нормальной морфологии у дефростированных эмбрионов от 70 до 90 % является хорошим результатом и соответствует средним показателям, полученным другими исследователями.
В то же время обращает на себя внимание факт, что наибольшие повреждения (30 % от общего числа) обнаруживались после размораживания эмбрионов на стадии развития 2 - 8 бластомеров, криоконсервированных с использованием витри-фикации. Практически одинаковое количество повреждённых и непригодных для пересадки эмбрионов регистрировали при медленном замораживания как 2 - 8 бластомерных зигот (около 20 %), так и при использовании традиционной криоконсервации эмбрионов на стадии морулы и бластоцисты (около 18 %).
Наилучшие показатели криорезистентности и сохранности показали витрифицированные на стадии морулы/бластоцисты эмбрионы: после оттаивания нормальную морфологию имели 90,9 % эмбрионов. По-видимому, объяснение кроется в том, что при витрификации для дегидратации эмбрионов используются большие концентрации криозащитного агента в сочетании с быстрыми скоростями охлаждения. Это приводит к предотвращению образования кристаллов льда в периоды замораживания и оттаивания [19 - 21]. Возможно, именно на данной стадии развития эмбрионы у овец наиболее устойчивы к внешним воздействиям, но это предположение следует научно обосновать.
Вывод. Результаты настоящего исследования с использованием как традиционно принятого медленного замораживания, так и сверхбыстрой витрификации для криоконсервации эмбрионов показывают, что качество эмбрионов было хорошим при использовании обеих технологий. Результаты нашего исследования согласуются с результатами, полученными зарубежными исследователями [22, 23]: качество замороженных/ размороженных эмбрионов было выше при использовании процедур витрификации, чем при использовании метода медленной заморозки. Кроме того, преимуществами использования метода витрификации для криоконсервации эмбрионов являются простота, меньшие затраты на квалифицированный персонал, быстрота проведения процедуры и тот факт, что этот метод не требует дорогостоящего оборудования, как в случае использования метода медленного замораживания.
Список источников
1. Advances in reproductive biotechnologies / K.K. Choudhary, K.M. Kavya, A. Jerome, R.K. Sharma. Veterinary World. 2016; 9: 388-395.
2. Мамонтова Т.В., Селионова М.И., Айбазов А.-М. Половая активность и производство спермы у баранов пород шароле и иль-де-франс в разные сезоны // Сельскохозяйственная биология. 2021. № 56 (4). С. 752 -762. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2021.4.752rus
3. Результаты и перспективы использования вспомогательных репродуктивных технологий в воспроизводстве мелких жвачных животных / А.-М.М. Айбазов,
Т.В. Мамонтова, И.Г. Сердюков, М.А. Губаханов // Овцы, козы и шерстяное дело. 2022. № 2. С. 8 - 14. https://doi. org/10.26897/2074-0840-2022-2-8-14.
4. Бимагамбетов А.Ж., Сеитов М.С., Биктеев Ш.М. Некоторые показатели линейных параметров половых органов овец эдильбаевской породы в период беременности // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биотехнологии: матер. национал. науч.-практич. конф. с междунар. участ. Оренбург, 2022. С. 61 - 63.
5. Paramio M.T., Izquierdo D. Current status of In Vitro Embryo production in sheep and goats. Reproduction in Domestic Animals. 2014; 49: 37-48.
6. Shelton J.N. Factors affecting viability of fresh and frozen-thawed sheep demi-embryos. Theriogenology. 1992; 37: 713-721.
7. Successful direct transfer of vitrified sheep embryos / G. Baril, A.L. Traldi, Y. Cognie et al. Theriogenology. 2001; 56: 299-305.
8. Evaluating recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle / A.R. Spella, W.E. Bealb, L.R. Coraha, G.C. Lambc. Theriogenology. 2001; 56: 287-297.
9. Blastocyst stage transfer vs cleavage stage embryo transfer / A.M. Mangalraj, K. Muthukumar, T.K. Aleyamma et al. Journal of Human Reproductive Sciences. 2009; 21: 23-26.
10. A comparative study between cleavage stage embryo transfer at day 3 and blastocyst stage transfer at day 5 in in-vitro fertilization/intra-cytoplasmic sperm injection on clinical pregnancy rates / P. Kaur, M.L. Swarankar, M. Maheshwari, V. Acharya. Journal of Human Reproductive Sciences. 2014; 7: 194-197.
11. Viability of OPS vitrified sheep embryos after direct transfer / R.E. Green, B.F.S. Santos, C.C. Sicherle et al. Reproduction in Domestic Animals. 2009; 44: 406-410.
12. Comparison of slow freezing and vitrification on ovine immature oocytes / M.H. Bhat, V. Sharma, F.A. Khan et al. CryoLetters. 2014; 35: 77-82.
13. Martinez A.G., Matkovic M., Cryopreservation of ovine embryos: slow freezing and vitrification. Theriogenol-ogy. 1998; 49: 1039-1049.
14. Cryopreservation of in vitro-produced ovine embryos A.G. Martinez, A. Valcarcel, C.C. Furnus et al. Small Ruminant Research. 2006; 63: 288-296.
15. FAOSTAT, 2021. URL: http://www.fao.org/faostat/ en/#data/QL.
16. Production of black goat using laparoscopic artificial insemination and embryo transfer / N. Anakkul, J. Suwimonteerabutr, T. Tharasanit et al. Thai Journal of Veterinary Medicine. 2013; 43: 259-263.
17. A simplified superovulation protocol using split-single administration of Folltropin®-V in hyaluronan: application to purebred sheep / S. Panyaboriban, J. Suwimonteerabutr, T. Swangchan-Uthai et al. VeterinarniMedicina. 2018; 63: 321-328.
18. Development of business models for indigenous genetic improvement in small ruminant farms through reproductive biotechnology / S. Khunmanee, T. Swangchan-Uthai, J. Suwimonteerabutr et al. Thai Journal of Veterinary Medicine. 2019; 49: 217-225.
19. Abbeel E.V., Steirteghem, A.V. Zona pellucida damage to human embryos after cryopreservation and the consequences for their blastomere survival and in vitro viability. Human Reproduction. 2000; 15: 373-378.
20. Son W.Y., Tan S.L. Comparison between slow freezing and vitrification for human embryo. Expert Review of Medical Devices. 2009; 6: 1-7.
21. Айбазов М.М., Мамонтова Т.В. Криорезистент-ность эмбрионов коз в зависимости от стадии развития // Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. 2013. Т. 3. № 6. С. 14 - 17.
22. Youngs C.R. Cryopreservation of preimplantation embryos of cattle, sheep, and goats. Journal of Visualized Experiments. 2011; 54: 1-4.
23. Open pulled straw vitrification and slow freezing of sheep IVF embryos using different cryoprotectants / M.H. Bhat, V. Sharma, F.A. Khan et al. Reproduction, Fertility and Development. 2015; 27: 1175-1180.
References
1. Advances in reproductive biotechnologies / K.K. Choudhary, K.M. Kavya, A. Jerome, R.K. Sharma. Veterinary World. 2016; 9: 388-395.
2. Mamontova T.V., Selionova M.I., Aibazov A.-M. Sexual activity and sperm production in Charolais and Ile-de-France sheep in different seasons. Agricultural Biology. 2021; 56(4): 752-762. https://doi.org/10.15389/ agrobiology.2021.4.752rus
3. Results and prospects for the use of assisted reproductive technologies in the reproduction of small ruminants / A.-M.M. Aibazov, T.V. Mamontova, I.G. Serdyukov, M.A. Gubakhanov. Sheep, goats, woolen business. 2022; 2: 8-14. https://doi.org/10.26897/2074-0840-2022-2-8-14.
4. Bimagambetov A.Zh., Seitov M.S., Bikteev Sh.M. Some indicators of the linear parameters of the genital organs of sheep of the Edilbaev breed during pregnancy // Actual problems of veterinary medicine and biotechnology: mater. national scientific-practical. conf. with international participation Orenburg, 2022. Р. 61-63.
5. Paramio M.T., Izquierdo D. Current status of In Vitro Embryo production in sheep and goats. Reproduction in Domestic Animals. 2014; 49: 37-48.
6. Shelton J.N. Factors affecting viability of fresh and frozen-thawed sheep demi-embryos. Theriogenology. 1992; 37: 713-721.
7. Successful direct transfer of vitrified sheep embryos / G. Baril, A.L. Traldi, Y. Cognie et al. Theriogenology. 2001; 56: 299-305.
8. Evaluating recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle / A.R. Spella, W.E. Bealb, L.R. Coraha, G.C. Lambc. Theriogenology. 2001; 56: 287-297.
9. Blastocyst stage transfer vs cleavage stage embryo transfer / A.M. Mangalraj, K. Muthukumar, T.K. Aleyamma et al. Journal ofHumanReproductive Sciences. 2009; 21: 23-26.
10. A comparative study between cleavage stage embryo transfer at day 3 and blastocyst stage transfer at day
5 in in-vitro fertilization/intra-cytoplasmic sperm injection on clinical pregnancy rates / P. Kaur, M.L. Swarankar, M. Maheshwari, V. Acharya. Journal of Human Reproductive Sciences. 2014; 7, 194 - 197.
11. Viability of OPS vitrified sheep embryos after direct transfer / R.E. Green, B.F.S. Santos, C.C. Sicherle et al. Reproduction in Domestic Animals. 2009; 44: 406-410.
12. Comparison of slow freezing and vitrification on ovine immature oocytes / M.H. Bhat, V. Sharma, F.A. Khan et al. CryoLetters. 2014; 35: 77-82.
13. Martinez A.G., Matkovic M., Cryopreservation of ovine embryos: slow freezing and vitrification. Theriogenology. 1998; 49: 1039-1049.
14. Cryopreservation of in vitro-produced ovine embryos A.G. Martinez, A. Valcarcel, C.C. Furnus et al. Small Ruminant Research. 2006; 63: 288-296.
15. FAOSTAT, 2021. URL: http://www.fao.org/faostat/ en/#data/QL.
16. Production of black goat using laparoscopic artificial insemination and embryo transfer / N. Anakkul, J. Suwimonteerabutr, T. Tharasanit et al. Thai Journal of Veterinary Medicine. 2013; 43: 259-263.
17. A simplified superovulation protocol using split-single administration of Folltropin®-V in hyaluronan: application to purebred sheep / S. Panyaboriban, J. Suwimonteerabutr, T. Swangchan-Uthai et al. VeterinarniMedicina. 2018; 63: 321-328.
18. Development of business models for indigenous genetic improvement in small ruminant farms through reproductive biotechnology / S. Khunmanee, T. Swangchan-Uthai, J. Suwimonteerabutr et al. Thai Journal of Veterinary Medicine. 2019; 49: 217-225.
19. Abbeel E.V., Steirteghem, A.V. Zona pellucida damage to human embryos after cryopreservation and the consequences for their blastomere survival and in vitro viability. Human Reproduction. 2000; 15: 373-378.
20. Son W.Y., Tan S.L. Comparison between slow freezing and vitrification for human embryo. Expert Review of Medical Devices. 2009; 6: 1-7.
21. Aibazov M.M., Mamontova T.V. Cryoresistance of embryos goats depending on the stage of development. Collection of scientific works of the Stavropol Research Institute of Animal Husbandry and Forage Production. 2013; 6(3): 14-17.
22. Youngs C.R. Cryopreservation of preimplantation embryos of cattle, sheep, and goats. Journal of Visualized Experiments. 2011; 54: 1-4.
23. Open pulled straw vitrification and slow freezing of sheep IVF embryos using different cryoprotectants / M.H. Bhat, V. Sharma, F.A. Khan et al. Reproduction, Fertility and Development. 2015; 27: 1175-1180.
Магомет Муссаевич Айбазов, доктор сельскохозяйственных наук, профессор, главный научный сотрудник, [email protected]
Марат Султанович Сеитов, доктор биологических наук, профессор, [email protected]
Magomet M. Aibazov, Doctor of Agriculture, Professor, Chief Researcher, [email protected] Marat S. Seitov, Doctor of Biology, Professor, [email protected]
Вклад авторов: все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Contribution of the authors: the authors contributed equally to this article. The authors declare no conflicts of interests. Статья поступила в редакцию 27.11.2022; одобрена после рецензирования 20.12.2022; принята к публикации 10.01.2023.
The article was submitted 27.11.2022; approved after reviewing 20.12.2022; accepted for publication 10.01.2023. -♦-
