CC BY
8Вестник АПК
Ветеринария -; № 1(29), 2018 " "
УДК 619:615.281.9
И. С. Коба, Е. Н. Новикова, Г. А. Бурменская, С. П. Скляров, Н. В. Дятлов Koba I. S., Novikova E. N., Burmenskaya G. A., Sklyarov S. P., Dyatlov N. V.
РЕЗУЛЬТАТЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИСПЫТАНИЙ НОВОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ОБРАБОТКИ СОСКОВ ВЫМЕНИ КОРОВ НА ОСНОВЕ ШТАММОВ-ПРОБИОНТОВ «БИОМАСТИМ»
RESULTS OF MICROBIOLOGICAL TESTS OF NEW MEANS FOR PROCESSING OF NIPPLES OF AN UDDER OF COWS ON THE BASIS OF STRAINS PRO-BIONTS «BIOMASTIM»
Описывается ход разработки нового пробиотического средства для обработки сосков вымени коров, в частности описываются результаты проведенных на данный момент микробиологических исследований на предмет антагонистической активности входящей в состав препарата микрофлоры по отношению к полевым штаммам, вызывающим маститы крупного рогатого скота в Краснодарском крае.
This paper describes new probiotic drug for cattle udder treatment developing, in particular, given the recent microbiologic research results of included in drug composition microflora antagonistic activity to field strains causing cattle mastitis in Krasnodar territory.
Ключевые слова: крупный рогатый скот, маститы, про-биотическое средство, средство для обработки вымени коров.
Key words: cattle, mastitis, probiotic drug, cattle udder treatment drugs.
Коба Игорь Сергеевич -
доктор ветеринарных наук, профессор,
заведующий кафедры терапии и фармакологии
ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный
университет»
г. Краснодар
Тел.: 8(861)221-58-18
E-mail: vetdoctor@mail.ru
Новикова Елена Николаевна -
кандидат ветеринарных наук, преподаватель
кафедры микробиологии и вирусологии
ФГБОУ ВО «Кубанский государственный
аграрный университет»
г. Краснодар
Тел.: 8(861)221-58-18
E-mail: elena_150185@mail.ru
Бурменская Галина Алексеевна -
кандидат ветеринарных наук, доцент
кафедры терапии и фармакологии
ФГБОУ ВО «Кубанский государственный
аграрный университет»
г. Краснодар
Тел.: 8(861)221-58-18
E-mail: vetdoctor@mail.ru
Скляров Сергей Павлович -
кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры
паразитологии, ветеринарно-санитарной экспертизы,
анатомии и патанатомии
им. профессора С. Н. Никольского
ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный
аграрный университет»
г. Ставрополь
Тел.: 8-905-491-09-13
E-mail: ssklyar@mail.ru
Дятлов Никита Викторович -
аспирант кафедры терапии и фармакологии
ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный
университет»
г. Краснодар
Тел.: 8(861)221-58-18
E-mail: vetdoctor@mail.ru
Koba Igor' Sergeyevich -
Doctor of Veterinary Sciences, Professor,
Head of the Department of Therapy and Pharmacology
FSBEI HE «Kuban State Agrarian University»
Krasnodar
Tel.: 8(861)221-58-18 E-mail: vetdoctor@mail.ru
Novikova Elena Nikolaevna -
Ph.D of Veterinary Sciences, Senior Lecturer of Department of Microbiology and Virology FSBEI HE «Kuban State Agrarian University» Krasnodar
Tel.: 8(861)221-58-18 E-mail: elena_150185@mail.ru
Burmenskaya Galina Alekseevna -
Ph.D of Veterinary Sciences, Associate Professor of Department of Therapy and Pharmacology FSBEI HE «Kuban State Agrarian University» Krasnodar
Tel.: 8(861)221-58-18 E-mail: vetdoctor@mail.ru
Sklyarov Sergey Pavlovich -
Ph.D in veterinary, Veterinary Sciences, Associate Professor of Department of parasitology, veterinary and sanitary examination, anatomy and pathological anatomy named after Professor S. N. Nicholas FSBEI HE «Stavropol State Agrarian University» Stavropol
Tel.: 8-905-491-09-13 E-mail: ssklyar@mail.ru
Dyatlov Nikita Viktorovich -
postgraduate student of Department of Therapy and Pharmacology
FSBEI HE «Kuban State Agrarian University» Krasnodar
Tel.: 8(861)221-58-18 E-mail: vetdoctor@mail.ru
40
,,„ „„„„, Jj Ставрополья
научно-практическии журнал
Мастит - воспаление молочной железы, развивающееся вследствие воздействия механических, термических и биологических факторов [1, 2].
Среди ветеринарных проблем маститу принадлежит особое место, что обусловлено, с одной стороны, массовым охватом поголовья, а с другой - экономическими потерями из-за снижения удоев, ухудшения качества молока, сокращения срока продуктивной жизни коров. Как показывают расчеты, суммарные потери эквивалентны стоимости 10-15 % производимой продукции [3].
Необходимо отметить, что ведущую роль в патологическом процессе при возникновении маститов играет условно-патогенная и патогенная микрофлора, причем участие условно-патогенной микрофлоры с каждым годом возрастает и в настоящее время составляет около 85 % случаев патологии, связанной с воспалением молочной железы [4]. Важное значение имеют не только клинические, но и субклинические формы мастита, так как переболевание животных субклиническим маститом не только отрицательно сказывается на их продуктивности, но и ухудшает санитарные показатели молока, что делает его непригодным для пищевого использования [5].
Также большую проблему представляют структурные поражения сосков молочной железы, которые представлены утолщением эпидермиса, круговой мозолью, гиперкератоз с радиальными трещинами и зиянием соскового канала [6].
На сегодняшний день имеется огромное количество средств, профилактирующих как заболевания вымени, так и сосков вымени. Одним из первых средств, которое использовалось на производстве, был «Dipal» от знаменитой фирмы «Delaval» - производитель: Швеция. Действующее вещество йод, а вспомогательный смягчающий компонент сорбитол. Kenocidin (Кено-цидин) - производство: Бельгия. Действующее вещество хлоргексидин (антисептик) и луговая мята, смягчающее вещество аллантоин.
Мастиклин Финиш - производство: Россия. Действующее вещество хлоргексидин и аллан-тоин, не содержит йода. Обладает репеллент-ным действием (отпугивает насекомых). Легко смывается при подготовке вымени к доению (не образует полимерную пленку).
Viri TE Dip - производство: Дания. На основе молочной кислоты. Ярко-оранжевого цвета. Содержит репеллент. Nova DipBarrier - производство: Дания. Действующее вещество: йод, молочная кислота, аллантоин, сорбитол. Цвет: коричневый.
Также имеется ряд средств для орошения сосков после доения на основе биопрепаратов. Основой данных средств является ассоциация штаммов аэробных строго сапрофитных микроорганизмов: Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus и Bacillus megaterium. Данные комплексные концентриро-
ванные микробиологические продукты, с одной стороны, активно воздействуют на патогенную микрофлору и частицы грязи, а с другой стороны, формируют полезную для здоровья и безопасную микрофлору. Применяют средство PIP СТС, при помощи пульверизатора непосредственно после снятия доильного аппарата, распыляя препарат снизу вверх от верхушки соска в течение 2-3 секунд [7].
В Краснодарском НИВИ совместно с ООО «Биотехагро» было разработано новое средство для обработки сосков вымени коров после доения на основе жизнеспособных штаммов-пробионтов Bacillus subtilis В-5225 (не менее 1х108 КОЕ в 1 см3 препарата) и Enteroccocus fae-cium СТФ 1/56 (не менее 1х108 КОЕ в 1 см3 препарата) - «Биомастим».
Цель нашего исследования - определение антибактериальной активности препарата «Биомастим».
Для выяснения антагонистической активности компонентов препарата по отношению к полевым штаммам условно-патогенной микрофлоры, выявляемой при маститах крупного рогатого скота в Краснодарском крае, была проведена серия опытов.
В первой серии испытаний в чашки Петри наливали расплавленный и охлажденный до 45 0С лактобакагар, затем добавляли небольшое количество бульонной культуры штамма-пробионта. Перемешивали содержимое чашки и оставляли до остывания агара. Сразу после остывания агара стерильным скальпелем удаляли из чашки половину агаровой пластинки с выросшим на ней пробионтом. В свободную часть чашки заливали 10 мл СПА. После застывания среды на нее сплошным газоном засевали тест-микроб.
Во второй серии опыта изучали совместную антагонистическую активность штаммов Bacillus subtilis и Enteroccocus faecium препарата «Биомастим» при их предварительном посеве на питательную среду. Для этого использовали «чашечный» метод М. Литвинова (1947) в модификации Н. С. Егорова (1965): в чашки Петри наливали расплавленный и охлажденный до 45 0С лактобакагар, затем добавляли небольшое количество бульонной культуры штамма-пробионта. Перемешивали содержимое чашки и оставляли до остывания агара. Затем помещали в термостат при температуре 37 0С на 48 часов.
Через двое суток стерильным скальпелем удаляли из чашки Петри половину агаровой пластинки с выросшим на ней пробионтом. В свободную часть чашки заливали 10 мл СПА. После застывания среды на нее сплошным газоном засевали тест-микроб. Через 24 часа учитывали зону задержки роста между пробионтом и тест-микробом.
В третьей серии опыта исследовали антагонистическую активность компонентов препарата «Биомастим» к тест-микробам при посеве последних перпендикулярным штрихом. Тест-
в
естник ЛПК
Ставрополья
:№ 1(29), 2018
Ветеринария
культуры при посеве штрихом подписывали согласно номеру:
1. St. epidermidis.
2. Kl. pneumoniae spp. Ozaenae.
3. C. freundii.
4. E. agglomerans.
5. St. xylosus.
6. E. coli.
7. St. aureus.
Проведенные исследования показали, что при одновременном посеве штаммов-пробионтов и тест-культур (St. epidermidis, Kl. pneumonia spp. Ozaenae, C. freundii, E. agglomerans, St. xylosus, E. coli, St. aureus) зоны задержки роста между ними отсутствуют (рис. 1).
Во второй серии опыта при предварительном посеве на питательную среду по методу М. Литвинова (1947) в модификации Н. С. Егорова (1965) зона задержки роста между штаммами Bacillus subtilis и Enteroccocus faecium препарата «Биомастим» и тест-микробами в среднем составила 8,6 мм. При этом наибольшая зона задержки роста наблюдалась между культурами-пробионтами и Kl. pneumoniae spp. Ozaenae, а также между культурами-пробионтами и St. xylosus - 11 мм. Зона задержки роста между культурами-пробионтами и C. freundii составила 8 мм, культурами-пробионтами и E. agglomerans -7 мм (рис. 2).
41
Минимальная зона задержки роста тест-культур при перпендикулярном посеве штрихом составила 8 мм. При этом в одной из последовательностей роста C. freundii не регистрировали, во второй не регистрировали роста St. xylosus. Зона задержки роста между штаммами-пробионтами препарата «Биомастим» и Kl. pneumonia spp. Ozaenae составила 11 мм, между штаммами-пробионтами препарата «Биомастим» и St. epidermidis - 12 мм, зона задержки роста между пробионтами и E. coli, так же как и между пробионтами и St. aureus, составила 8 мм (рис. 3).
В четвертой серии испытаний исследовали антагонистическую активность каждого из пробио-тических компонентов препарата по отдельности.
При определении антагонистической активности Bacillus subtilis В-5225 зона задержки роста составила в среднем 7 мм. При этом наибольшая антагонистическая активность наблюдалась в отношении тест-культуры Kl. pneumonia spp. Ozaenae, C. freundii и St. xylosus и составила 1о мм.
Наименьшая антагонистическая активность наблюдалась в отношении штаммов E. coli и St. aureus и составила 5 мм.
При определении антагонистической активности штамма Enteroccocus faecium СТФ 1/56 зона задержки роста составила в среднем 8 мм.
¿ß
S3 L
Рисунок 1 - Рост штаммов-пробионтов препарата «Биомастим» при одновременном посеве с тест-культурами
Рисунок 2 - Антагонистическая активность штаммов-пробионтов препарата «Биомастим» при их предварительном посеве на среду сплошным газоном
Рисунок 3 - Антагонистическая активность штаммов-пробионтов препарата «Биомастим» при посеве тест-микробов перпендикулярным штрихом
Литература
1. Архипов А. А. Комплекс препаратов для лечения и профилактики маститов // Ветеринария Кубани. 2012. № 1. С. 19-20.
2. Новый подход к лечению коров с хроническим маститом / А. А. Дробышевская, Л. Г. Войтенко, Т. И. Лапина, С. С. Гни-дин // Ветеринарная патология. 2014. № 3-4 (49-50). С. 58-62.
3. Морфофункциональная характеристика молочной железы у коров при субклиническом мастите / В. Н. Василенко, С. М. Су-лейманов, О. Б. Павленко [и др.] // Ветеринарная патология. 2014. № 2(48). С. 14-20.
4. Профилактика мастита у коров посредством обработки сосков вымени / И. С. Коба, А. Н. Турченко, В. Е. Тарасов, А. С. Перемыщев // Ветеринария Кубани. 2011. № 2. С. 67-68.
5. Коренник И. В. Современные аспекты гигиены в молочном животноводстве // Ветеринария Кубани. 2012. № 2. С. 21-22.
6. Баркова А. С. Эффективность использования пробиотических средств для профилактики заболеваний молочной железы у коров // Ветеринария. 2014. № 4. С. 4044.
7. Барашкин М. И. Эффективность комплексного применения средств на основе про-биотических бактерий в профилактике маститов и повышении качества молока // Ветеринария Кубани. 2012. № 6. С. 2425.
Вестник АПК
Ставрополья
При этом наибольшая антагонистическая активность наблюдалась в отношении тест-культуры St. xylosus и St. aureus и составила 10 мм. Наименьшая антагонистическая активность наблюдалась в отношении штамма C. freundii и составила 6 мм.
Таким образом, лабораторные исследования доказывают, что препарат «Биомастим», в состав которого входят штаммы Bacillus subtilis В-5225 (не менее 1х108 КОЕ в 1 см3 препарата) и Enteroccocus faecium СТФ 1/56 (не менее 1х108 КОЕ в 1 см3 препарата), обладает антибактериальной и антагонистической активностью по отношению к микрофлоре, выделенной у коров, больных маститом.
References
1. Arkhipov A. A. Complex preparations for the treatment and prevention of mastitis // Veterinary Kuban. 2012. № 1. P. 19-20.
2. New approach to the treatment of cows with chronic mastitis / A. A. Drobyshevskaya, L. G. Voitenko, T. I. Lapina, S. S. Gnidin // Veterinary Pathology. 2014. № 3-4 (49-50). P. 58-62.
3. Morphological and functional characteristics of mammary gland in cows with subclinical mastitis / V. N. Vasilenko, S. M. Suleymanov, O. B. Pavlenko [et al.] // Veterinary Pathology. 2014. № 2 (48). P. 14-20.
4. Prevention of mastitis in cows by treatment of udder teats / S. I. Koba, A. N. Turchenko, V. E. Tarasov, A. S. Priemyshev // Veterinary Kuban. 2011. № 2. P. 67-68.
5. Korennik I. V. Modern aspects of hygiene in dairy animal breeding // Veterinary Kuban. 2012. № 2. P. 21-22.
6. Barkova A. S. Efficacy of use of probiot-ic agents for the prevention of mammary gland diseases in cows // Veterinary medicine. 2014. № 4. P. 40-44.
7. Barashkin M. I. Efficiency of complex application of means on the basis of probiot-ic bacteria in prevention of mastitis and improvement of quality of milk // Veterinary Kuban. 2012. № 6. P. 24-25.
