CC BY
82
4
2007
ВЕСТНИК ВолГМУ
О-позитовном, так и при О-негативном); стенокардией напряжения ФК 1-2 и ФК 3-4; сердечной недостаточностью ФК 1-2 и ФК 3-4; пароксиз-мальной и хронической мерцательной аритмией. Эти данные говорят о возможности дифференциальной диагностики различных клинических форм, оценки тяжести заболевания и прогнозировании течения ИБС с учетом интегрального показателя Р.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Комплексная оценка микрореологических свойств крови, состояния ПОЛ, АОС и ТКО у больных с различными формами ИБС демонстрирует взаимосвязь выявленных нарушений и указывает на участие сопряженных изменений этих систем в формировании клинического течения заболевания. Проведенные нами исследования показали, что у больных ИБС изменения агрегационных свойств тромбоцитов, вязкости крови и уровня ПОЛ имеют в целом однонаправленный характер при различных клинических вариантах течения. Это обусловлено тем, что в реализации процесса агрегации тромбоцитов участвуют как тромбоциты с измененными свойствами, так и плазменные факторы, в том числе ацилгидроперекиси. Одновременное снижение способности СОД к ингиби-рованию свободно-радикальных реакций у больных ИБС позволяет предположить, что дисбаланс в проантиоксидантной системе может быть одной из причин структурно-функциональных изменений в тромбоцитах. При обострениях ИБС
в значительной степени повышается агрегацион-ная способность тромбоцитов, снижается степень их дезагрегации, повышается вязкость крови, усиливается потенциал пероксидации при снижении активности СОД и нарастании синдрома капилляро-трофической недостаточности. Соче-танные нарушения гемореологии, микроциркуляции и липопероксидации характерны для прогрессирующего течения ИБС, что подтверждается результатами математического моделирования и свидетельствуют о диагностической и прогностической значимости комплексной оценки соот-вествующих сдвигов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ольбинская Л. И., Кочкарева Ю. Б., Колосова К. Ю. // Сердечная недостаточность. - 2004. - Т. 5, № 3 (25). - С. 127-130.
2. Панченко Е. П. // Сердце. - 2002. - Т. 1, № 1 (1). -С. 24-29.
3. Петрищев Н. Н., Власов Т. Д. Эндотелий, адгезия и агрегация тромбоцитов: Дисфункция эндотелия / Под ред. Н. Н. Петрищева. - СПб., 2003. - С. 22-24.
4. Сидоренко Б. А, Затейщиков Д. А., Баринов В. Г. и др. // Кремл. медицина. - 2001. - № 4. - С. 16-18.
5. Ситникова М. Ю, Иванов С. Г., Шляхто Е. В. // Сердечная недостаточность. - 2006. - Т. 7, № 4. -С. 188-191.
6. Guzk P., Burduk P., Bronisz M, et al. // Eur. Heart J. -2000. - № 21 (Suppl). - Р. 112.
7. Yasunori Shintani, Hiroshi Ito, Katsuomi Iwakura, et al. // Amer. J. Cardiol. - 2004. - Vol. 93. - Р. 974-978.
УДК 611.41:577.95
РАЗВИТИЕ СЕЛЕЗЕНКИ В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ
М. Ю. Капитонова, А. И. Краюшкин, А. И. Рябикина, А. А. Нестерова
Кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии, кафедра анатомии человека ВолГМУ
В статье анализируется возрастная динамика стромально- паренхиматозных взаимоотношений Т- и В-кле-точных компартментов белой пульпы селезенки в растущем организме по данным иммуногистохимического исследования.
Ключевые слова: селезенка, белая пульпа, иммуногистохимия.
DEVELOPMENT OF SPLEЕN DURING EARLY POSTNATAL
ONTOGENESIS
М. Yu. Kapitonova, A. I. Ryabikina, A. A. Nesterova
Abstract. Age-related dynamics of the stromal and parenchymal interactions in the T- and B-cellular compartments of the splenic white pulp was elucidated using methods of immunohistochemistry.
Key words: spleen, white pulp, immunohistochemistry.
Селезенка является крупнейшим периферическим органом иммуногенеза, который во многом определяет иммунный статус: состояние
врожденного и приобретенного иммунитета, гуморального и клеточного его звена, качество и количество лимфоидных клеток в организме чело-
века и животных [1-4, 6]. В настоящее время, несмотря на растущее число исследований по иммуноморфологии лимфоидных органов, наименее изученными остаются вопросы взаимодействия и установления связей между гемопо-этическими и стромальными клеточными элементами в белой пульпе селезенки, во многом определяющие эффективность иммунного ответа в организме в раннем детстве.
Целью настоящего исследования является изучение особенностей развития Т- и В-клеточ-ных компартментов белой пульпы селезенки в раннем постнатальном онтогенезе с помощью имму-ногистохимических методов исследования.
Исследование выполнено на белых крысах породы Spargue-Dawley грудного возраста (10 дней от роду) и возраста перехода на самостоятельное питание (20 дней от роду) - по 10 особей в каждой возрастной группе.
Серийные продольные парафиновые срезы фиксированной формалином селезенки окрашивались гематоксилин-эозином и иммуногистохи-мически моноклональными антителами против СD3 (клон 1F4), CD4 (клон W3/25), CD8a (клон MRC OX8); СD20 (клон RLN-9D3) CD45RC (клон MRC OX22) фирмы "Serotec" (UK), CD90 (клон HIS51) фирмы "BD Pharmingen" (USA), выявляющими различные фракции лимфоидных клеток; а также CD68 (клон ED1), ОХ62 (клон MRC OX62) и белка S100 (DAKO, Denmark) для выявления стромальных клеток с помощью стрептавидин-биотин-пероксидазного метода. Полученные результаты анализировались на качественном и полуколичественном уровнях с помощью рангового метода.
Проведенное исследование показало, что в раннем постнатальном онтогенезе иммуноар-хитектоника селезенки очень динамично подвергается возрастной перестройке, что свидетельствует о выраженных иммуномодуляционных сдвигах в организме на уровне периферического звена органов иммуногенеза в данный возрастной период. Так селезенка животных возраста, соответствующего грудному периоду, выглядит морфологически незрелой: с очагами миелопоэза в красной пульпе, с относительно небольшим объемом белой пульпы, представленной, главным образом, периартериальными лимфоидными влагалищами (ПАЛВ), преимущественно мелкими и средними, и формирующимися лимфоид-ными узелками, окруженными ободками маргинальной зоны с недостаточно четкими границами. Иммуногистохимическое окрашивание на белок S100, выявляющее фолликулярные дендритные клетки (ФДК) [3], показало наличие большого количества формирующихся лимфоидных фолликулов, содержащих рыхлую мелкопетлистую им-мунореактивную сеть. При окрашивании серийных срезов селезенки на CD20, выявляющем
2007
зрелые В-лимфоциты, видно гомогенное заполнение этой сети иммунореактивными клетками, а при окрашивании на ОХ-62, маркер дендритных клеток, выявлялась строма ПАЛВ, заполняемая Т-лимфоцитами с фенотипом СРЭ+ (маркер зрелых Т-клеток), СР4+ (маркер Т-хелперов и некоторой части макрофагов и дендритных клеток), СР8+ (маркер Т-супрессоров/цитотоксических лимфоцитов, ЫК-клеток и части дендритных клеток), СР90+ (маркер недавних тимусных иммигрантов). При этом обращало на себя внимание, что в то время как ОХ-62 иммунореактивные клетки располагались преимущественно в наружной зоне ПАЛВ, так же как и Сй90-позитивные недавние тимусные иммигранты, СР8+клетки локализовались в большей степени во внутренней зоне ПАЛВ, что согласуется с данными других исследователей о том, что большая часть дендритных клеток в селезенке крыс являются клетками нелимфоидного происхождения [5]. Окрашивание на CD45RC, выявляющее В-лимфо-циты, Т-супрессоры и часть Т-хелперов, показало наличие нешироких маргинальных зон вокруг ПАЛВ и формирующихся лимфоидных узелков; последние окрашивались наиболее интенсивно. В ПАЛВ иммунореактивные клетки были единичными. Содержание CD68-иммунореактивных клеток в белой пульпе было невелико, в то время как красная пульпа содержала их в большом количестве. В целом доля CD8+ иммунореактивных клеток в селезенке у данной возрастной группы была выше, чем доля CD20+клеток, аналогично число ОХ-62-иммунореактивных клеток выше, чем белок Б100+клеток, что соответствует уровню развития Т- и В-клеточных субкомпартментов в данный возрастной период. Вместе с тем окрашивание на CD20 и Б100 позволило выявить более раннее становление В-клеточного субком-партмента у крыс в раннем постнатальном онтогенезе, чем это было известно ранее из исследований, выполненных без применения иммуноги-стохимических методов окраски [6].
У животных в возрастной группе, соответствующей периоду перехода на самостоятельное питание, объем белой пульпы значительно возрастал: увеличивался диаметр ПАЛВ за счет появления крупных лимфоидных влагалищ, в разрастающихся лимфоидных фолликулах появлялись центры размножения. Окрашивание на белок Б100 выявило резкое увеличение объема лимфоидных узелков, стромальный каркас которых эти клетки образуют (рис. 1). Соответственно большая плотность расположения CD20+клеток и CD45RC+клеток отмечалась в этих лимфоидных фолликулах. CD45RC-клетки образовывали более широкие ободки маргинальных зон вокруг ПАЛВ и лимфоидных узелков по сравнению с младшей возрастной группой (рис. 2). При окрашивании на ОХ-62 даже на качественном уровне было замет-
4 (24) I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I ВЕСТНИК ВолГМУ I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I
4 2007
но увеличение доли иммунореактивных клеток в ПАЛВ (рис. 3), где они тянулись прерывистыми рядами вдоль артерий белой пульпы. Здесь же несколько возрастало число cDз+клеток, пред-
ставляющих собой популяцию зрелых Т-лимфо-цитов, CD90-иммунореактивных клеток и существенно больше - Т-супрессоров, выявляемых окраской на CD8 (рис. 4).
Рис. 1. Селезенка в возрасте 20 дней. В белой пульпе наблюдаются немногочисленные лимфоидные узелки (1), некоторые из них в стадии формирования (головки стрелок); маргинальная зона вокруг них достаточно широкая (стрелка); 2 - ПАЛВ; 3 - капсула. Окр. на белок 8100, докраска гематоксилином. Исх. ув. х40
Рис. 2. Селезенка крысы в период перехода на самостоятельное питание. Первичный лимфоидный узелок (1) и маргинальная зона (2) с высокой плотностью иммунореактивных клеток; в ПАЛВ (3) они единичны, расположены мелкими скоплениями, 4 - маргинальный синус, 5 - артерия белой пульпы. Окр. на CD45RC, докраска гематоксилином. Исх. ув. х200
3
1
1
2
3
Рис. 4. Селезенка крысы в возрасте 20 дней: 1 - ПАЛВ, 2 - артерия белой пульпы, 3 - маргинальная зона, 4 -немногочисленные иммунореактивные клетки. Окр. на СD8, докраска гематоксилином. Исх. ув. х400
Рис. 3. Селезенка крысы в возрасте 20 дней. В ПАЛВ (1) иммунореактивные клетки локализуются преимущественно в наружной зоне, часть их - с заходом в маргинальную зону (стрелка); 2 - артерия белой пульпы, 3 - маргинальный синус. Окр. на ОХ62, докраска гематоксилином. Исх. ув. х200
Таким образом, проведенное иммуногисто-химическое изучение распределения различных популяций лимфоидных и стромальных клеток белой и красной пульпы селезенки уже на качественном уровне выявило очень динамичное развитие Т- и В-клеточных компартментов в изучаемые возрастные периоды раннего постна-тального онтогенеза и отчетливую возрастную динамику их клеточных популяций: различных субпопуляций Т-лимфоцитов (зрелых Т-клеток, недавних тимусных иммигрантов, супрессоров) с параллельным нарастанием количества дендритных клеток в ПАЛВ, CD20+ иммунореактивных В-клеток и белок 8100-позитивных фолликулярных дендритных клеток. Неожиданным было обнаружение значительного количества лимфоидных фолликулов с центрами размножения в более раннем возрасте, чем это принято было считать [6], уже в 20-дневном возрасте, как пока-
зало окрашивание на CD45RC, CD20 и белок 8100, а также значительного количества зрелых макрофагов в красной пульпе в возрасте, соответствующем периоду грудного вскармливания.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Обнаруженная динамика популяций лимфоидных и стромальных клеток Т- и В-клеточных компартментов белой пульпы селезенки в раннем постнатальном онтогенезе позволяет предположить высокую степень "готовности" к перестройкам иммуноархитектоники органа при различных иммуномодулирующих воздействиях в описываемый возрастной период.
ЛИТЕРАТУРА
1. Капитонова М. Ю., Краюшкин А. И., Мурае-ва Н. А. и др. // Вестник ВолГМУ. - 2006. - № 3. - С. 28-32.
2. Сапин М. Р., Никитюк Д. Б. Иммунная система,
ВЕСТНИК ВолГМУ
стресс и иммунодефицит. - М.: Джангар, 2000. - 184 с.
3. Alos L., Navarrete P., Morente V., et al. // Mod. Pathol. - 2005. - Vol. 18, № 1. - P. 127-136.
4. Balogh P., Horvath G, Szakal A. K. // J. Histo-chem. Cytochem. - 2004. - Vol. 52, № 10. - P. 1287-1298.
4
2007
5. Martin P., del Hoyo G. M., Anjuere F., et al. // Blood. - 2000. - Vol. 96, № 7. - P. 2511-2519.
6. Mebius R. E. // Nature Rev. Immunol. - 2003. -Vol. 4. - P. 292-303.
