Разработка рационального состава растительного сбора «Эуфразин», обладающего антиоксидантной активностью

Мирович Вера Михайловна; Самбаров Андрей Леонидович; Шапкин Юрий Григорьевич; Цыренжапов Арсен Владимирович

Information About the Authors:

Yarygina MarinaVictorovna - MD, Associate Professor of Preventive Medicine, School of Biomedical of Federal State Autonomic Educational Institution of Professional Higher Education “Far-Eastern Federal University” (FEFU), Sukhanov str., 8, Vladivostok, Russian Federation, 690091, tel. / Fax (432) 2406634; Kiku Paul Fedorovich - MD, PhD, Professor, Head of Department of Preventive Medicine of School of Biomedical (FEFU); Gorborukova Tatiana Vladimirovna - PhD., Associate Professor of Computer Systems School of Natural Sciences (FEFU); Yudin Sergei Sergeevich - MD, Chief of State Autonomic Institution of Healthcare «Regional Clinical Center of specialized types of medical care» of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, Uborevych str., 30/37,

Vladivostok, 690091, tel. / Fax (423) 243-62-63.

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ

РАЗРАБОТКА РАЦИОНАЛЬНОГО СОСТАВА РАСТИТЕЛЬНОГО СБОРА «ЭУФРАЗИН», ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Вера Михайловна Мирович1, Андрей Леонидович Самбаров1,

Юрий Григорьевич Шапкин1, Арсен Владимирович Цыренжапов2 ('Иркутский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармакогнозии и ботаники, зав. - д.ф.н. В.М. Мирович, кафедра фармакологии, зав. - к.ф.н., доц. А.И. Левента; 2Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии СО РАМН, директор - член-корр. РАМН, д.м.н., проф. Е.Г. Григорьев)

Резюме. Разработан состав растительного сбора «Эуфразин», обладающий антиоксидантной активностью. Экспериментально установлено оптимальное соотношение компонентов сбора по результатам изучения перекис-ного окисления липидов, а также данных содержания основных биологически активных веществ. Растительный сбор снижает содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида в плазме крови в опытах in vitro на 38 и 60% соответственно.

Ключевые слова: растительный сбор, антиоксидантная активность, флавоноиды.

THE DEVELOPMENT OF RATIONAL COMPOSITION OF HERBAL MIXTURE “EUPHRASIN" WITH ANTIOXIDANT ACTIVITY

V.M. Mirovich1, A.L. Sambarov1, Y.G. Shapkin1, A.V Tsyrenzhapov2 ('Irkutsk State Medical University, 2Scientific Center of Reconstructive and Restorative Surgery RAMS, Russia)

Summary. The formula of herbal mixture “EUPHRASIN” with antioxidant status has been developed. After studying lipid peroxidation and data contents of basic biologically active substance, the optimal ratio of herbal mixture components were experimentally determined. Herbal mixture reduces the diene conjugates and malondialdehyde in plasma in experiments in vitro by 38 and 60% respectively.

Key words: herbal mixture, antioxidant status, flavonoids.

В последние годы значительно возросла потребность медицинской практики в использовании лекарственных растений и препаратов на их основе. Актуальны вопросы создания лекарственных средств на основе индивидуального растительного сырья и сборов [7].

Окислительный стресс и истощение антиоксидантных резервов является причиной многих серьезных заболеваний и процесса старения в частности. В большинстве случаев развитие патологических изменений в структурах глаза обусловлено окислительным стрессом - нарушение баланса в системе образования свободных радикалов и антиоксидантной защиты [9].

Антиоксидантной активностью обладают многие биологически активные вещества растений: биофлавоноиды, фе-нолокислоты, витамины, полиненасыщенные жирные кислоты, аминокислоты [10].

В состав сбора «Эуфразин» нами предложено введение 5 растений: очанка гребенчатая, лабазник вязолистный, мелисса лекарственная, шиповник коричный, черника обыкновенная.

Очанка гребенчатая содержит комплекс фенольных соединений: лютеолин-7-р-Э-глюкозид, диосметин-6-С-

глюкозид, кверцетин-3,7-диглюкозид, рутин, кислоты хлорогеновая и кофейная. Результаты экспериментальных исследований, показали перспективность разработки на ее основе

средств с антиоксидантной, противовоспалительной и антимикробной активностью [5].

Цветки лабазника вязолистного, обладают антиоксидантной, противовоспалительной, ноотропной и ранозаживляющей активностью. В цветках содержатся флавоноиды (спи-реозид), фенолокислоты, фенологликозиды (монотропитин, спиреин, изосалицин), аскорбиновая кислота, дубильные вещества [7].

Трава мелиссы лекарственной, обладает антиоксидант-ным, спазмолитическим, нейротропным действием. Она содержит эфирное масло, флавоноиды - лютеолин, цинарозид; фенольные кислоты - розмариновую, хлорогеновую, кофейную [1].

Известно, что антиоксидантным действием обладает витамин С, каротиноиды. Природным источником этих соединений могут быть плоды шиповника.

Плоды черники обыкновенной, обладают антиоксидант-ной, противовоспалительной, антимикробной активностью. Плоды черники содержат органические кислоты, дубильные вещества, арбутин, флавоноиды, антоцианы (производные мальвидина и дельфинидина). Антоциановые соединения черники ускоряют регенерацию родопсина, улучшают кровоснабжение глаза [7].

Целью исследования являлось установление рационального соотношения компонентов в растительном сборе

Таблица 1

Ингибирование образования ДК и МДА в сыворотке крови под влиянием извлечений из растительных сборов №1-№6

Препарат ДК МДА

Содержание в мкмоль/мл Ингибирование, в % Содержание в мкмоль/мл Ингибирование, в %

К ПК К ПК

Сбор №1 6,88±0,47 6,9 - 3,08±0,30 77,8 53,8

Сбор №2 2,55±0,23 65,6 25,4 2,50±0,28 81,7 62,5

Сбор №3 5,43±0,21 26,5 - 2,62±0,25 80,8 60,7

Сбор №4 4,58±0,15 38,0 - 4,10±0,19 70,0 38,4

Сбор №5 6,45±0,60 12,7 - 2,79±0,32 79,6 58,1

Сбор №6 2,12±0,13 71,7 38,0 2,66±0,16 80,6 60,1

Контроль (вода очищенная) 7,39±0,47 13,68±10,8

Позитивный контроль (ЭДТА) 3,42±0,35 6,66±0,75

Примечание: K - контроль (вода очищенная); ПK - позитивный контроль (ЭДТА).

«Эуфразин», обладающего антиокси-дантной активностью.

Материалы и методы

Материалом исследования являлись образцы сырья лекарственных растений, которые включены в состав сбора «Эуфразин»: трава очанки гребенчатой - Herba Euphrasiae (проект ФС), цветки лабазника вязолистного - Flores Filipendulae ulmariae (ВФС 42-1777-87), плоды черники - Fructus Myrtilli (ГФ XI), трава мелиссы - Herba Melissae officinalis (ФС 42-3645-98), плоды шиповника Fructus Rosae (ГФ XI). Используемое сырье соответствовало требованиям нормативной документации.

Для определения оптимального соотношения компонентов в сборе было приготовлено 6 растительных композиций с различным соотношением компонентов - сбор №1 - №6.

Для определения антиоксидантной активности из сборов готовили извлечения на 50% спирте этиловом (1:10) при нагревании на водяной бане в течение 30 мин., полученные извлечения фильтровали, спирт отгоняли и доводили водой очищенной до первоначального объема.

Антиоксидантную активность изучали в опытах in vitro и in vivo (на сыворотке донорской крови и лабораторных животных - крысах линии Wistar массой 180-200 г). Животные содержались на стандартном рационе питания при свободном доступе к воде и пище в условиях вивария. Исследования с животными проводились в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей».

В опытах in vitro к 1 мл тестируемого извлечения прибавляли 2 мл сыворотки донорской крови, 0,1 мл 0,5 М раствора сульфата меди (II), в качестве индуктора перекисного окисления липидов. Для сравнения использовали контроль без исследуемого извлечения и позитивный контроль, в котором ингибитором ПОЛ служил 0,05 М раствор этилендиаминте-траукскусной кислоты (ЭДТА). Полученные смеси после инкубирования в течение 24 ч при 37оС исследовали на содержание диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА) [10]. Содержание ДК оценивали методом Z. Placer (1968) в модификации В.Б. Гаврилова и М.И. Мишкорудной [2]. Определение МДА в сыворотке крови в исследовании антиоксидантной активности in vitro проводили по методике М.С. Гончаренко и А.М. Латиновой, а в опыте in vivo по методике - РА. Темирбулатова и Е.И. Селезнева [3,8].

Сборы №1-№6 оценивали на содержание основных биологически активных веществ. Количественное содержание суммы флавоноидов проводили спектрофотометрическим методом, основанном на реакции комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом. Содержание в сборах суммы окисляемых веществ определяли перманганатометрическим методом по ГФ XI [4].

Измерение оптической плотности исследуемых растворов проводили на спектрофотометре СФ-46. Результаты эксперимента статистически обработаны методами для малой выборки с определением средней величины (М) и ошибки (m). Степень статистической значимости результатов исследований (p) оценивали с помощью параметрического критерия t-Стьюдента для малой выборки. Различия между данными контроля и опыта считали значимыми при вероятности 95% (p<0,05).

Результаты и обсуждение

При тестировании извлечений, полученных из сборов №1-№6 в опытах in vitro на сыворотке донорской крови на содержание ДК и МДА, установлено, что все варианты сборов ингибируют образование ДК в сравнении с контролем (вода очищенная) от 6,9 до 71,7% (табл. 1). Извлечения вариантов сбора №2 и №6 снижают содержание ДК более чем на 50%. В позитивном контроле (ЭДТА) содержание ДК составляло 3,42±0,35 мкмоль/мл. Извлечения сборов №2 и №6 значи-

тельно ингибируют образование ДК и превосходят позитивный контроль на 25,4 и 38,0% соответственно.

Все извлечения тестируемых сборов №1-№6 подавляют образование МДА в сыворотке крови (табл. 1). По отношению к контролю (вода очищенная) ингибирование составляло от 70,0 до 80,8%. По отношению к позитивному контролю (ЭДТА) более чем на 50% наблюдается снижение содержание МДА в извлечениях всех сборов кроме сбора №4.

Положительным результатом мы считали подавление ПОЛ более чем на 50%, сохраняющееся при определении содержания как ДК, так и МДА. Такими являются прописи сборов №2 и №6.

Таблица 2

Количественное содержание окисляемых веществ (суммы полифенолов) и флавоноидов в извлечениях, полученных из сборов №1-№6

Вариант сбора Содержание в извлечении, в %

Окисляемые вещества Сумма флавоноидов

№1 0,45±0,01 0,36±0,01

№2 0,50±0,02 0,57±0,02

№3 0,37±0,01 0,35±0,02

№4 0,63±0,02 0,55±0,01

№5 0,50±0,02 0,62±0,03

№6 0,68±0,02 0,64±0,02

Количественное определение основных биологически активных веществ показало, что содержание окисляемых веществ (сумма полифенолов) в извлечениях составляет от

0,37±0,01% до 0,68±0,02%, суммы флавоноидов от 0,35±0,01% до 0,64±0,02%. Наибольшее количество окисляемых веществ и суммы флавоноидов содержится в извлечениях из сбора №6 (табл. 2).

Таким образом, экспериментально установлено, что вариант сбора №6 обладает высокой антиоксидантной активностью и содержит наибольшее количество окисляемых веществ и флавоноидов, который предлагается нами для дальнейшего исследования.

При использовании сборов лекарственных растений в зависимости от морфологической группы сырья и химического состава готовят настои или отвары. Из сбора №6 готовили настои по методике ГФ XI и оценивали антиоксидантную активность на белых крысах линии '^81аг, на модели экспериментального тетрациклинового гепатита [6]. Настои сбора №6 (1:10) вводили животным внутрижелудочно в объёме 2

Таблица 3

Влияние настоя сбора №6 на ингибирование ДК и МДА в сыворотке крови крыс при экспериментальном тетрациклиновом гепатите

Показатели Интактные крысы Контроль Сбор №6

МДА, мкмоль/мл мин. 0,93±0,05 1,48±0,06 1,29±0,10

ДК, условные ед. 3,05±0,27 7,41±0,62 5,05±0,28

мл. Контрольная группа крыс получала дистиллированную воду в эквиобъёмном количестве.

Содержание МДА и ДК определяли на 7 сутки эксперимента. Настой сбора №6 уменьшал показатели ДК на 32% и МДА на 13% (табл. 3).

Таким образом, на основании проведенных фармакологических и фитохимических исследований разработан состав и оптимальные соотношения компонентов растительного сбора «Эуфразин», обладающего антиоксидантной активностью.

ЛИТЕРАТУРА

1. Алексеева А.В. Трава мелиссы лекарственной - перспективный источник импортнозаменяющих нейротропных препаратов // Медицинский альманах. - 2011. - №1. - С.233-237.

2. Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови // Лабораторное дело. -1983. - №3. - С.33-36.

3. Гончаренко М.С., Латинова А.М. Метод оценки пере-кисного окисления липидов // Лабораторное дело. - 1985. -№1. - С.60-61.

4. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырьё. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 400 с.

5. Мирович В.М., Самбаров А.Л., Шакалова С.М. Исследование фенольных соединений очанки гребенчатой,

произрастающей в Прибайкалье // Вопросы естествознания. - 2013. - №1. - С.34-36.

6. Скакун Н.П., Высоцкий Н.Ю. Влияние антибиотиков тетрациклинового ряда на желчеобразовательную функцию печени // Антибиотики. - 1982. - №3. - С.16-20.

7. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология. - М.: МИА, 2000. - 970 с.

8. Темирбулатов Р.А., Селезнев Е.И. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение // Лабораторное дело. - 1981. - №4. - С.209-211.

9. Терешина Е.В. Старение, окислительный стресс и антиоксиданты // Геронтология и гериатрия. - 2006. - №5. - С.38-48.

10. Шаварда А.Л., Чемесова И.И., Беленовская Л.М. и др. Антиоксидантная активность видов флоры Алтая // Растительные ресурсы. - 1998. - Т. 34. Вып. 2. - С.1-8.

REFERENCES

1. Alekseyeva A.V. The herb of sweet offlcinalis - prospective sourse of substitude of imported neurotropic medicine // Meditsynskiy almanakh. - 2011. - №1. - P.233-237. (in Russian).

2. Gavrilov V.B., Mishkorudnaya M.I. Spectrophotometric assay of the blood plasma lipid hydroperoxides // Laboratornoye delo. - 1983. - №3. - P.33-36. (in Russian).

3. Goncharenko M.S., Latinova A.M. Method for assessing lipid peroxidation // Laboratornoye delo. - 1985. - №1. - P.60-61. (in Russian).

4. State Pharmacopoeia of the USSR: Part 2. General methods analysis. Medicinal plant material. - Vol. 11. - M.: Meditsina, 1987. - 400 p. (in Russian).

5. Mirovich V.M., Sambarov A.L., Shakalova S.M. The investigation of phenolic compounds of Euphrasia pectinata TEN., growing in the Baikal region // Voprosy estestvoznaniya. - 2013. -

№1. - P.34-36. (in Russian).

6. Skakun N.P., Vysotsky N.Yu. Effect of tetracyclines on biligenic function of the liver // Antybiotiky. - 1982. - №3. - P.16-20. (in Russian).

7. Sokolov S.I. Phytoterapiya and phytopharmakologiya. - M.: MIA, 2000. - 970 p. (in Russian).

8. Temirbulatov R.A., Seleznev E.I. Method for increasing intensity of free radical oxidation of blood lipid containing components and diagnostic value // Laboratornoye delo. - 1981. -№4. - P.209-211. (in Russian).

9. Tereshina E.V. Aging, oxidative stress and antioxidants // Gerontologya and Geriatria. - 2006. - №5. - P.38-48. (in Russian).

10. Shavarda A.L., Chemesova I.I., Belenovskaya L^. and others. Antioxidant activity of Altai’s flora species // Rastitelnye resursy. - 1998. - Vol. 34. Part 2. - P. 1-8. (in Russian).

Информация об авторах:

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Мирович Вера Михайловна - д.ф.н., заведующая кафедрой. 664003, г. Иркутск, ул. Карла Маркса, 10, тел. 8(3952) 24-34-47, e-mail: [email protected]; Самбаров Андроей Леонидович - аспирант, e-mail: [email protected]; Шапкин Юрий Григорьевич - к.б.н., ассистент кафедры. 664003, г. Иркутск, ул. Красного восстания, 1, e-mail: [email protected]; Цыренжапов Арсен Владимирович — к.м.н., научный сотрудник. 664003, г. Иркутск, ул. Борцов Революции, д.1,

тел. (3952) 290354, e-mail: [email protected].

Information About the Authors:

Mirovich Vera Michailovna - doctor of Pharmaceutical Sciences, 664003, Irkutsk, 10 Karla Marksa str., tel. 8(3952) 24-34-47, e-mail: [email protected]; Sambarov Andrey Leonidovich - postgraduate, e-mail: [email protected];

Shapkin Yuriy Grigorievich - candidate of Biological Sciences, assistant of the Department. 664003, Irkutsk,

Krasnogo Vosstaniya str., 1, e-mail: [email protected]; Tsyrenzhapov Arsen Vladimirovich— candidate of medical sciences, junior researcher, Scientific Center of Reconstructive and Restorative Surgery RAMS, Irkutsk, Bortsov Revolutsiyi str.,

tel. (3952) 290354, e-mail: [email protected].

АКТОПРОТЕКТОРНАЯ АКТИВНОСТЬ АДАПТОГЕНОВ ПРИРОДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Илларион Митрофанович Бальхаев1, Лариса Николаевна Шантанова2, Аюна Сергеевна Тулесонова1 ('Бурятский государственный университет, ректор - д.п.н., проф. С.В. Калмыков; 2Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор - д.б.н. Л.Л. Убугунов)

Резюме. В серии опытов на 48 крысах линии Wistar исследовали актопротекторную активность адаптогенных препаратов природного происхождения. Наиболее эффективными среди них оказались водный раствор лиофили-зированного апилака, а также Полифитотон, полученный в виде 40% спиртового полиэкстракта и сухой экстракт Адаптон-6.

Ключевые слова: адаптогены, физическая выносливость, свободнорадикальное окисление.

ACTOPROTECTIVE ACTIVITY OF THE ADAPTOGEN OF NATURAL ORIGIN

I.M. Balkhayev1, L.N. Shantanova2, A.S. Tulesonova3

The development of rational composition of herbal mixture “Euphrasin” with antioxidant activity

Текст научной работы на тему «Разработка рационального состава растительного сбора «Эуфразин», обладающего антиоксидантной активностью»