CC BY
074 А Ветеринария
www.agroyug.ru
УДК 619:57.083.1:579.844:616.9:617.711:636.2 Карайченцев1 В.Н., д.в.н., профессор,
Зуев2 Н.П., д. в. н., профессор кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы, эпизоотологии и паразитологии Тучков1 Н.С., студент 4 курса
1 ФГБОУ ВО «Белгородский государственный аграрный университет с имени В.Я. Горина»
2 ФГБОУ ВО «Воронежский государственный аграрный университет имени императора Петра I»
РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ, КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ ИНФЕКЦИОННОГО КЕРАТОКОНЪЮНКТИВИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Moraxella bovis - это грамотрицательная кокко-бацилла, неподвижная, свободноживущая бактерия размером от 0,6 до 1,0 мкм в диаметре [3, 4, 5], лишенная жгутиков с различным количеством пили. M. bovis может использовать колониальную морфологию как способ адаптации к изменениям окружающей среды. Колонии могут чередоваться между распространяюще-корродирующей (SC) и некорродирующей (N) морфологиями. Более вирулентным и распространенным типом колонии является форма SC, которая растет в плоском цилиндрическом диске толщиной в несколько бактерий. Исследования показывают, что прокалывание агара во время посадки позволяет бактериям адаптироваться и расти на границе между чашкой Петри и агаром [б]. В зависимости от родительских клеток M. bovis форма, толщина и дисперсность колонии различаются относительно скорости роста [2].
Материалы и методы исследований. Патологический материал от больных кератоконъюнктиви-том коров, телок и телят брали путем погружения стерильных ватных тампонов в серозно-гнойный экссудат под третьим веком пораженного глаза и сразу помещали в пробирку с бульоном и в термосе со льдом доставляли в лабораторию и не позднее 10-15 часов из проб делали высев на питательные среды.
Таблица 1.
Дифференциация выделенных культур Moraxella bovis.
Дифференциальные тесты Наименование микроорганизмов
Moraxella bovis
К-1 К-2 К-3 В-1 В-2 В-3 Н-1 Н-2 Н-з
Утилизация ацетата .........
Восстановление нитратов .........
Разжижение желатина + + + + + + + + +
Гемолиз на кровяном агаре + - + + + + + + -
Пептонизация лакмусового молока + + + + + + + + +
Свёртывание лакмусового молока + + + + + + + + +
Ферментация углеводов .........
Каталазная активность + + + + + + + + +
Образование индола .........
Подвижность .........
За рубежом основой питательных сред для изоляции и культивирования Moraxella bovis является триптиказо-соевый агар. В процессе испытаний сред из триптиказо-соевого перевара отмечали нестандартность гидролиза, что приводило к изготовлению недоброкачественных питательных сред.
ЭФФЕКТИВНОЕ ЖИВОТНОВОДСТВО
Ф 75
В качестве основы среды нами испытаны: мя-со-пептонный агар, сухой питательный агар из гидролизата кильки, перевар Хоттингера. Изучили влияние на рост Moraxella bovis на плотной среде дефибринированной крови барана, кролика, крупного рогатого скота, сыворотки крови крупного рогатого скота дифосфопиридинуклеотида и экстракта пекарских дрожжей [1].
Результаты исследований. Исследования установили, что использование в качестве основы для твердых и жидких питательных сред перевара Хоттингера наиболее полно отвечает ростовым потребностям Moraxella bovis Экстракт пекарских дрожжей, сыворотка крови крупного рогатого скота, дефибринированная кровь барана, кролика, крупного рогатого скота значительно улучшали рост Moraxella bovis.
Для приготовления бульона Хоттингера основной перевар разводили дистиллированной водой до содержания в готовой среде 220-230 мг% аминного азота. К бульону добавляли 0,5% пептона, 0,3% химически чистого двузамещенного фосфата калия и 0,5% натрия хлористого, устанавливали район 7,4-7,6 и стерилизовали. После автоклавирования рН среды составлял 7,2-7,4.
Для приготовления твердой среды при изоляции и культивировании Moraxella bovis, к бульону Хоттингера добавляли 2% агар-агара и стерилизовали. Перед использованием, в расплавленный агар добавляли 5% свежей дефибринированной крови барана и 10% дрожжевого экстракта.
При исследовании выделенных культур, морфологически и культурально схожих с моракселлами, получили следующие результаты. Все выделенные в разных хозяйствах из экссудата поражённых глаз культуры в мазках были представлены грамотрица-тельными, некислотоустойчивыми, полиморфными, аэробами, неподвижными, короткими и толстыми с закругленными концами бактериями, с характерным парным сочленением; некоторые штаммы приближены к кокковидной форме, они не имеют спор и капсул и встречаются преимущественно одиночно в парах или коротких цепочках, длиной 1,5-2,5 мкм, шириной 1,0-1,5 мкм. Они не давали роста на МПБ и МПА, но в бульоне Хоттингера с сывороткой крови крупного рогатого скота и дрожжевым экстрактом вызывали помутнение и осадок бактерий, характерных для R-формы. На кровяном агаре с дрожжевым экстрактом культуры формировали типичные R-колонии с зоной бета-гемолиза. Все выделенные культуры Moraxella bovis не утилизировали ацетат натрия, не восстанавливали нитраты до нитритов, не ферментировали углеводы, не образовывали индол и не обладали подвижностью. Все культуры разжижали желатин в течение 48-72 часов, продуцировали каталазу, не образовывали индол. Они вызывали характерные для Moraxella bovis изменения в лакмусовом молоке. В условиях аэробиоза они вызывали защелачивание молока, а в условиях анаэробиоза - пептонизацию и закисление. В результате такой избирательности поведения бактерий верхний слой лакмусового молока высотой до 0,5-1 см окрашивался в темно-синий цвет, средний слой - в светлосиний, а нижний слой - в белый с крупинками пептонизированного молока (таблица 1).
Заключение. Из всех проанализированных питательных сред, для культивирования подходит среда Хоттингера, как более всего отвечающая
■ 1ЛВЧ"
• Ргкмттлцйр MHD-M НЩЧНП1 -L'hMLlLLlI
' HfMiiwi« i нтн
■ iif]jnJHWi[tfiH[iiMühi|iiiuHH
• |nMHHH>tiHfe ■ ■ '•uwt' Mi ¡мцрли:
а HwnnHwW'"^ FtüfrUMt-rt
o- QlHt^pqiM ■■МЫ (llgMTPf 6 ..|—гио rat*.
• (r>pWIOtiA>[jJ.oh*-p*. MpiPJtME 'iWtft } (Т1Ы
я npriltlaLFpOlrt+tvlfntVMt+H*!
ш farrwiHt ГЧНЧР
□ Htfl94*4t I1PCP ±4 Jl"m ¡.РКПМ. Г-!
ш Ьшн НИГ1М11В1» IMhD
■ HjiOi^yhpi^HW r".'>jfjiЙРjpiP
ПСН IM.1LH ] № ICH J Li|
• Hi(=vü -.tp. 4Ц11,Д№» НкрН^чШДОкЧЫ*
• Inn дл ■ ■ ■ ■■ ■ ............. i'irF'-i jijtf|
• h^rmiO*
• LJikiMlH гЦНФ:-* pd lwl
fr ■,<!!.■ 111И1-1ЧП1Л ДГР IljMI
t F^-h rnn-P.-.'iil; PF
• tuhu^i и KWiniÄiRi 1 пил*
ростовым потребностям Moraxella bovis. По совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств выделенные нами из экссудата пораженных глаз крупного рогатого скота разного возраста бактерии соответствуют признакам рода Moraxella и вида Moraxella bovis [7].
[^р ЛИТЕРАТУРА
1. Карайченцев, В.Н. Лабораторная диагностика инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота [Текст] / В. Н. Карайченцев // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2005. - № 6. -С. 51-52.
2. Жмуров, Н.Г. Методы идентификации микобактерий / Н.Г. Жмуров, Н.Н. Жмуров, Н П. Зуев // Ветеринарно-санитарные аспекты качества и безопасности сельскохозяйственной продукции: материалы Ш-й международной конференции по ветеринарно-санитарной экспертизе, Воронеж, 15 ноября 2018 года. Том 2. - Воронеж: Воронежский государственный аграрный университет им. Императора Петра I, 2019.
- С. 209-211. - EDN XOCEJV.
3. Bergefur, Ann-Louise, and Karl-Erik Johansson. Moraxella B ovis. 2011. Photograph. http://www.vetbact.org/vetbact/index. php?artid=67#
4."Genes and Mapped Phenotypes." National Center for Biotechnology Information. U.S. National Library of Medicine. Web. 19 Mar. 2012. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene
5. R, Craig. New Forest Eye. 2011. Photograph. http:// informedfarmers.com/new forest eye in beef cattle/
6. Highlander, Sarah K., and George M. Weinstock. "HGSC at Baylor College of Medicine." HGSC at Baylor College of Medicine. 27 June 2006. Web. 19 Mar. 2012. http://www.hgsc. bcm.tmc.edu/projects/microbial/microbial detail.xsp?project_ id=123 .
7. Bart, T. Isolierung von Moraxellabovis bei Rindern mit Infekti ser Boviner Keratokonjunktivitis [Text] / T. Barth, K. Taurek, W Wittig // Monatsheftef rVeterin rmedizin (Mh. Vet.-Med.). - 1986. - Bd. 41, № 10. - S. 329-330.
