CC BY
39
STANDARDIZATION DEHYDRATION POWDER OF GARLIC AND DEVELOPMENT OF THE MEDICINAL FORM ON ITS BASIS
I.P. Remezova, A.N. Stachinsky, E.J. Jampol'skaja
Faculty of pharmaceutical chemistry Faculty of technology of medicines Pyаtigorsk State Academy of Farmacy prosp. Kalinin, 11, Pyatigorsk, Stavropol territory, 375500
The summary: For today accessible preparations of garlic are issued many, all of them concern to one of four categories: dehydration powder of garlic, oil of garlic, maceration oil of garlic and an extract of old garlic. In the present work experimental data by definition of the contents of basic biologically active components in dehydration a powder of garlic are submitted: the sums components, which containg sulfur, an ascorbic acid, flavonoids, chlorophyll a. Change of the contents of basic biologically active components in conditions of oxidizing stress is investigated at various values рН. On the basis of the carried out researches the medicinal form dehydration a powder of garlic is offered.
Keywords: garlic, dehydration powder of garlic, the sum components, which containg sulfur, flavonoids, ascorbic acid, chlorophyll a, capsules
РАЗРАБОТКА МЕТОДИК КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА МНОГОКОМПОНЕНТНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СБОРА «ТАН-22»
О.И. Рогозина, А.А. Маркарян
Московская Медицинская академия им. И.М. Сеченова ул. Большая Пироговская, 2, стр. 3, Москва, Россия, 119992
Одной из актуальных проблем современной медицины являются заболевания мочевыдели-тельной системы. Для профилактики и комплексной терапии данной патологии разработан сбор из 6 видов лекарственного растительного сырья. Предложены методики определения подлинности сбора с помощью качественных реакций и ТСХ. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов методом спектрофотометрии.
Заболевания мочевыделительной системы занимают одно из ведущих мест в общей структуре болезней. В настоящее время до 90% мужчин старше 60 лет страдают заболеваниями почек, мочевого пузыря и предстательной железы, а также около 70% женщин в возрасте старше 50 лет страдают почечно-каменной бо-
лезнью, пиелонефритом, циститом. Широкая распространенность указанных патологий, а также их медико-социальная значимость обусловливают разработку новых средств профилактики и лечения [2, 3].
Опыт народной и официнальной медицины показал, что эффективными при терапевтическом и профилактическом использовании являются многокомпонентные растительные препараты и биологически активные добавки к пище (БАД). Благодаря наличию комплекса биологически активных веществ (БАВ), средства растительного происхождения оказывают многостороннее фармакологическое воздействие на патологический процесс с минимальными побочными эффектами.
В связи с этим нами подобран оптимальный состав, соотношение компонентов и предложена растительная композиция «Тан-22», предназначенная для коррекции заболеваний мочеполовой системы в качестве БАД.
Целью настоящего исследования является разработка методик качественного и количественного анализа БАВ «Тан-22».
Материалы и методы исследования. Объектом изучения служил сбор, состоящий из 6 видов лекарственного растительного сырья: цветков календулы (Flores Calendulae officinalis L); цветков ромашки аптечной (Flores Chamomillae recutitae L); листьев ортосифона тычиночного (Folia Orthosiphonis staminei Benth.), листьев толокнянки (Folia Arctostaphylos uva ursi L.), травы хвоща полевого (Her-ba Eqiseti arvensis L.), корней солодки (Radices Glycyrrhizae).
Установление подлинности сбора проводили с помощью качественных реакций и метода хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ).
Качественные реакции предложены на дубильные вещества, флавоноиды, восстанавливающие сахара, сапонины и арбутин [1].
Методика проведения анализа: 2 г сбора помещаю в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды и нагревают на кипящей водяной бане 30 мин. Извлечение охлаждают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр.
К 2 мл водного извлечения прибавляют несколько капель раствора железо-аммониевых квасцов, наблюдается черно-зеленое окрашивание (дубильные вещества).
К 1 мл водного извлечения прибавляют 1 мл 95% спирта, 0,1 г порошка магния и 1 мл концентрированной хлористоводородной кислоты; постепенно появляется красное окрашивание (флавоноиды).
К 1 мл фильтрата прибавляют 2 мл реактива Фелинга и нагревают до кипения. Выпадает кирпично-красный осадок (восстанавливающие сахара).
К 5 мл фильтрата прибавляют 5 мл 0,25% раствора аммиака и встряхивают в течение 1 минуты. Образуется стойкая пена, не исчезающая в течение 1 минуты (сапонины).
К 1 мл фильтрата прибавляют небольшой кристаллик сульфата закисного железа; появляется красно-фиолетовое, затем темно-фиолетовое окрашивание и, наконец, темно-фиолетовый осадок (арбутин).
Основной группой БАВ исследуемого сбора являются флавоноиды, поэтому для характеристики подлинности сбора предусмотрено ТСХ со стандартными образцами.
Методика проведения анализа: 1,0 г сбора помещают в колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл спирта этилового 50% и нагревают на кипящей водяной бане 30 минут с обратным холодильником. Извлечение охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр. 5 мкл фильтрата и по 5 мкл 1% спиртовых растворов фла-воноидов: рутина, кемпферола и лютеолин-7-гликозида наносят на пластинку Kieselgel 40 F254 (Е. Мегк, Darmstadt) на расстоянии 1,5 см от края и хроматогра-фируют в системе растворителей: этилацетат : уксусная кислота : вода (25 : 5 : 5) 1 ч восходящим способом (предварительное насыщение камеры 1 час). Длина пробега растворителей 15 см. Затем пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе и просматривают в УФ-свете при длине волны 360 нм, затем обрабатывают 2% спиртовым раствором алюминия хлорида и просматривают в УФ-свете.
Для количественной оценки БАД в сборе «Тан-22» предложена методика спектрофотометрического определения суммы флавоноидов. В ходе исследования подобраны условия экстракции и установлено, что оптимальным является использование в качестве экстрагента 70% спирта, двукратной экстракции на кипящей водяной бане сырья со степенью измельчения 2 мм в соотношении сырье-экстр-агент 1 : 5.
При изучении УФ-спектров поглощения комплекса флавоноидов сбора с раствором алюминия хлорида и комплексов флавоноидов установлено, что при длине волны 411 нм наблюдается максимум поглощения комплекса сбора и рутина. В связи с этим в качестве аналитической длины волны предложено использовать 411 нм и проводить количественное определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин.
Методика проведения анализа: около 10 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 200 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Экстракцию повторяют дважды. После охлаждения смесь фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр и объем раствора доводят 70% спиртом до метки (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 2 мл 2% раствора алюминия хлорида в 96% спирте и объем раствора доводят 96% спиртом до метки, перемешивают и через 40 минут измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 411 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор: в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл раствора А, 0,1 мл разведенной уксусной кислоты и объем раствора доводят 96% спиртом до метки.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца (СО) рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.
Содержание суммы флавоноидов в процентах (Х) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
х _ Б • т0-100-100-100 _ Б0 • т-100(100-W),
где Б — оптическая плотность испытуемого раствора; Б0 — оптическая плотность СО рутина; т — масса навески сбора в граммах; т0 — масса навески СО рутина в граммах; W — потеря в массе при высушивании сбора в процентах.
Примечание. Приготовление раствора СО рутина: 0,001 г (точная навеска) рутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, объем раствора доводят спиртом этиловым 96% до метки, перемешивают. 1 мл раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и объем раствора доводят спиртом этиловым 96% до метки.
Результаты и обсуждение. Таким образом, для установления подлинности сбора предложено проведение качественных реакций на дубильные вещества, фла-воноиды, восстанавливающие сахара, сапонины и арбутин. Кроме того, предусмотрено проведение ТСХ-анализа со стандартными образцами флавоноидов: при просматривании в УФ-свете на хроматограмме спиртового извлечения из сбора должно быть видно 8 зон адсорбции, из них зона с Ш" « 0,30 желтовато-коричневого цвета соответствует рутину, зона с Ш" « 0,48 коричневого цвета — лю-теолин-7-гликозиду и зона с Ш1 « 0,98 желтоватого цвета — кемпферолу. После обработки пластинки 5% спиртовым раствором алюминия хлорида и нагревания ее в течение 2—3 минут в сушильном шкафу при температуре 100—105 °С пятна, соответствующие рутину, лютеолин-7-гликозиду и кемпферолу, приобретают желтую окраску в видимом свете и ярко-желтую флуоресценцию в УФ-свете.
Метрологические характеристики разработанной методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин свидетельствуют об удовлетворительной ее воспроизводимости. Относительная ошибка не превышает ±5,78.
Таблица 1
Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин
г X в2 в Р, % Р) АХ Е, %
4 0,85 0,0016 0,04 95 2,78 0,049 ±5,78
Отсутствия систематической ошибки методики подтверждено в «опытах с добавками» рутина непосредственно к навеске сбора перед экстракцией. Полученные результаты приведены в табл. 2. Относительная ошибка результатов опытов с добавками не превышает относительную ошибку единичного определения и имеет отклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений, что свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки в предлагаемой методике анализа.
Таблица 2
Результаты опытов с добавками рутина в навеске сбора
Найдено суммы флавоноидов в сырье, г Добавлено рутина, г Должно быть, г Найдено, г Относительная ошибка, %
0,85 0,1 0,95 0,94 + 1,06
0,85 0,2 1,05 1,04 - 0,96
0,85 0,3 1,14 1,14 + 1,89
Выводы
1. Предложены методики определения подлинности сбора «Тан-22» с помощью качественных реакций и метода ТСХ.
2. Разработана методика количественного определения суммы флавонои-дов в пересчете на рутин методом спектрофотометрии.
3. Полученные результаты включены в проект нормативной документации на сбор «Тан-22».
ЛИТЕРАТУРА
[1] Запрометов М.Н. Основы биохимии природных соединений. — М., 1974.
[2] Корсун В.Ф., Суворов П.П. Фитотерапия мочеполовых болезней. — СПб.: Диля, 1999. — С. 5—7.
[3] Мондодоев А.Г. Нефропротекторное действие комплексного средства растительного происхождения: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. — Улан-Удэ, 1999. — 27 с.
DEVELOPMENT OF METHODS OF HIGH-QUALITY AND QUANTITATIVE ANALYSIS OF MULTICOMPONENT VEGETABLE COMPOSITION OF «TAN-22»
O.I. Rogozina, A.A. Markaryan
Moscow Medical academy the name of I.M. Sechenov L. Pirogovskaya str., 2,. str. 3, Moscow, Russia, 119992
One of issues of the day of modern medicine are diseases of the urogenitalic system. For a prophylaxis and complex therapy of this pathology composition from 6 kinds of medicinal vegetable raw material is developed. The methods of determination of authenticity of species are offered by high-quality reactions and TLC. The method of quantitative determination of sum of flavonoides by the method of spectropho-tometry is developed.
