CC BY
110
ЛИТЕРАТУРА
го действия инсулина// Проблемы эндокринологии. — 1956. — №6. — С. 75-78.
7. Скакун Н.П., Высоцкий Н.Ю. Применение метода с тио-барбитуровой кислотой для определения продуктов липопе-роксидации в желчи// Новое в лабораторной диагностике хронических болезней внутренних органов: тез. докл. 3-го съезда респ. науч. общ-ва врачей лаборантов. — Ужгород,1983. — С. 386-387.
8. Скуя Н.А. Хронические заболевания желчных путей (патогенез и лабораторная диагностика). — Л.: «Медицина». — 1972. — 229 с.
9. Соколов С.Я. Фитотерапия и фито фармакология: Руководство для врачей. М.: Медицина, 2000. — 976 с.
10. Шантанова Л.Н., Николаев С.М. К патогенезу желчнокаменной болезни// Моделирование и фармакотерапия заболеваний органов пищеварения. — Улан-Удэ: БНЦ СО РАН СССР, 1990. — С. 109-119.
11. Дандаржав Д., Байгалмаа Р. Монгол ардын эмнэлгийн эмийн жор. — Ондорхаан. — 1992. — 250 с.
Адрес для переписки: тел.: 8(3012)433713 E-MAIL: [email protected] Николаев Сергей Матвеевич — д.м.н., профессор, заведующий Отделом биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН;
Самбуева Зинаида Гомбожаповна — к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН;
Занданов Александр Октябревич — к.м.н., зав. кафедрой пропедевтики Медицинского факультета БГУ; Мархаева Лариса Эдуардовна — старший преподаватель кафедры пропедевтики Медицинского факультета БГУ; Чехирова Галина Владимировна — к.фарм.н., старший научный сотрудник лаборатории медико-биологических исследований ИОЭБ СО РАН.
© ПОТРЯСАЙ К.А., КОПНИН А.А., ДАРГАЕВА Т.Д., МАРКАРЯН А.А., СОКОЛЬСКАЯ Т.А. — 2009
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АРБУТИНА В СЫРЬЕ РОДОДЕНДРОНА ЗОЛОТИСТОГО (RHODODENDRON AUREUM GEORGI) МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОЙ ХРОМАТОРАФИИ
К.А. Потрясай1, А.А. Копнин2, Т.Д. Даргаева2, А.А Маркарян1, Т.А. Сокольская2 ^Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова, ректор — д.м.н., проф., акад. РАН и РАМН М.А. Пальцев, кафедра фармхимии с курсом социальной фармации, зав. — д.ф.н., проф. А.А. Маркарян; ^Всероссийский НИИ лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН, директор — В.А. Быков)
Резюме. Целью нашей работы являлось обнаружение арбутина в извлечениях из свежего и высушенного сырья рододендрона золотистого, а также разработка методики количественного определения методом ВЭЖХ. В результате исследований нами предложены хроматографические условия разделения арбутина и условия пробоподготов-ки сухого и свежего сырья рододендрона золотистого. Согласно проведенным исследованиям содержание арбутина должно быть не менее 1,0 %. Воспроизводимость методики количественного определения арбутина была установлена на примере одного образца сырья в 5 независимых повторностях. Относительная ошибка методики определения содержания арбутина с 95%вероятностью составляет ±0,904%для свежего сырья и ±1,03%для высушенного сырья. Для проверки отсутствия систематической ошибки методики были проведены эксперименты с добавками арбутина к навеске высушенного сырья перед началом экстракции.
Ключевые слова: рододендрон золотистый, арбутин, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).
QUANTATIVE DEFINITION OF ARBUTIN IN THE RAW MATERIALS OF RHODODENDRON AUREUM GEORGI BY THE METHOD OF HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
K.A. Potrjasaj, A.A. Kopnin, T.D. Dargaeva, A.A. Markarjan, T.A. Sokolskaya (All-Russian Scientific-Research Institute of Medicinal and Aromatic Plants,
Moscow Medical Academy named after I.M. Sechenov)
Summary. The purpose of our work was detection of arbutin in extraction from the fresh and dried up raw material of a rhododendron golden (Rhododendron aureum Georgi), and also development of the methods of quantitative definition by method of high-performance liquid chromatography (HPLC). As a result of the researches there have been picked up chromatography conditions of division of arbutin and conditions of preparation of test dry and fresh raw material of a rhododendron golden. According to the researches the content of arbutin should be not less than 1,0 %. Reproducibility of the methods of quantitative definition of arbutin was established on an example of one sample of raw material in 5 independent repetitionc. The relative mistake of the methods of definition of the content of arbutin with 95 %probability a mounts to ± 0,904 %for fresh raw material and ± 1,03 %for the dried up raw material. For check of absence of a regular mistake of the methods , the experiments with additives of arbutin to the dried up raw material before the beginning extraction have been conducted.
Kew words: rhododendron aureum Georgi, arbutin, high-performance liquid chromatography (HPLC).
Рододендрон золотистый (Rhododendron aureum кустарником, образующим заросли по каменистым
Georgi) — представитель рода Rhododendron L. семейства склонам и скалам, преимущественно в высокогорном
вересковые (Ericaceae), являющийся, главным образом поясе Восточной Сибири и Дальнего Востока, включая
1. Галкин В.А. Профилактика холелитиаза в практике терапевта поликлиники// Терапевтический архив. — 2007. — №1. — С. 23-28.
2. Лазебник Л.В., Ильченко А.А. Желчнокаменная болезнь. Пути решения проблемы// Терапевтический архив. — 2005. — № 2. — С. 5-10.3.
3. Лузина В.Е. Влияние некоторых гормонов на развитие желчнокаменной болезни// Забайкал. Мед. Вест. — 2002. — № 3. — С. 31-34.
4. Мирошниченко В.П., Громашевская Л.Л., Касаткина М.Г и др. Определение содержания желчных кислот и холестерина в желчи //Лаб. дело. — 1978. — №3. — С.149-153.
5. Патент РФ № 215591237 А61Р1/16. Опубл. 20. 11. 2000. Бюлл. 32. «Способ получения средства, обладающего желчегонной и противовоспалительной активностью». (Чехирова В.В., Самбуева З.Г., Ербаева Л.В., Асеева Т.А., Николаев С.М. и др.)
6. Скакун Н.П. Нейрогуморальный механизм желчегонно-
Сахалин, Северные Курильские острова и Камчатку, встречается также на Алтае, Северной Монголии и Японии [5,14,15].
Основными действующими веществами, содержащимися в сырье рододендрона, являются фенольные соединения, среди которых наибольшее значение имеют фенологликозиды и флавоноиды, такие как арбутин, флороглюцин, гидрохинон, рододендрол, кверцетин, авикулярин и некоторые другие [3,5,17].
В качестве лекарственного растительного сырья применяются свежие и высушенные побеги рододендрона. [2,15] Средства, получаемые на основе рододендрона, обладают выраженным сердечным действием и при применении у больных с сердечно-сосудистой недостаточностью снижают венозное давление, увеличивают скорость кровотока, повышают диурез, уменьшают отеки и нормализуют работу сердца.
Настойка на 40%этиловом спирте при приеме внутрь, используется при ревматизме и простуде и как вяжущее средство при желудочных заболеваниях. Настой из листьев в тибетской медицине используется для лечения сердечно-сосудистых и гинекологических заболеваний.
Водные отвары и экстракты обладают хорошим противовоспалительным действием и применяются в стоматологии при заболевании десен, стоматитах, неприятном запахе изо рта [12,18,9,10].
Рододендрон достаточно широко применяется в гомеопатической медицине. Отвар рододендрона золотистого в гомеопатии применяют при отравлениях ртутью, заболеваниях слизистых оболочек, при головной боли, а также в виде гомеопатических гранул в разведениях D3, С3, С6 и выше, капель D3, С3 и выше при остром и хроническом ревматизме, невралгии, лицевой боли, плеврите, воспалении яичка, лимфатических отеках, расстройствах пищеварения, заболеваниях глаз, ушей, климаксе [1,4,6,7].
Несмотря на то, что на данный момент на территории РФ на данный момент применяется 5 лекарственных гомеопатических препаратов, а также 3 препарата для ветеринарии, настойка гомеопатическая матричная (НГМ) до сих пор не зарегистрирована.
В связи с этим, целью нашей работы являлось исследование фенольных соединений в извлечениях из свежего и высушенного сырья рододендрона золотистого, а также разработка методики количественного определения арбутина в сырье методом ВЭЖХ, для дальнейшей возможности стандартизации НГМ Rhododendron aureum.
Материалы и методы
Для обнаружения и количественного определения арбутина в сухом и свежем сырье были использованы побеги рододендрона золотистого, собранные в Бурятии (Тунтинский район) в 2008 году в фазу цветения.
Подбор оптимальных условий пробоподготовки.
Для разработки методики количественного определения арбутина в исследуемых образцах необходимо было подобрать оптимальные условия анализа. Для выбора оптимальных условий экстракции арбутина из сырья было исследовано влияние ряда факторов: степени измельчения сырья, характера экстрагента, температуры, продолжительность экстракции, соотношение сырья и экстрагента [8]. Важным фактором, влияющим на интенсификацию диффузии и повышение выхода действующих веществ, является степень измельчения сырья. При большой степени измельчения увеличивается площадь соприкосновения с экстрагентом, что приводит к увеличению экстракции. Однако при получении сверхтонких порошков разрушается большое число клеток растительного материала, что приводит к вымыванию из клеток макромолекул белков, полисахаридов, камедей, пектинов, сильно затрудняющих анализ и приводящих к быстрому выходу из строя хроматографической колонки. Данные по изучению влияния сте-
пени измельчения сырья рододендрона золотистого на содержание арбутина представлены в таблице 1.
Таблица 1
Зависимость содержания арбутина от степени измельчения
Степень измельчения, мм Содержание арбутина в абсолютно сухом сырье, %
Сухое сырье Свежее сырье
0,5 1,10 1,10
1 1,13 1,15
2 1,17 1,19
3 1,0 1,10
5 0,90 0,85
7 0,85 0,90
Полученные данные показывают, что оптимальная экстракция целевых БАВ из сырья достигается при размере частиц сырья 2 мм.
Для обеспечения температурного режима экстракции оправдано применение кипящей водяной бани с обратным холодильником (табл. 2).
Наиболее широко применяемыми экстрагентами являются вода, спирт этиловый, спиртоводные смеси, спирт метиловый, буферные растворы. Результаты количественного определения арбутина в зависимости от используемого экстрагента представлены в табл. 3.
Таблица 3
Влияние экстрагента на содержание арбутина
Экстрагент Содержание арбутина в пересчете на абсолютно сухое сырье, %
Сухое сырье Свежее сырье
Вода очищенная - 1,11
30%спирт этиловый 0,90 0,85
40%спирт этиловый 1,00 1,10
50%спирт этиловый 1,11 1,10
60%спирт этиловый 1,12 1,15
70%спирт этиловый 1,17 1,19
80%спирт этиловый 1,17 1,19
96%спирт этиловый 1,16 1,17
100%спирт метиловый 0,70 0,80
100%н-бутиловый спирт 0,75 0,80
100%спирт изопропиловый 0,70 0,90
50%спирт изопропиловый 0,85 0,90
Для установления оптимального соотношения сырья и экстрагента были проведены эксперименты при соотношении 1:5, 1:10, 1:25, 1:50, 1:100, полученные данные представлены в табл. 4.
Таблица 4
Зависимость содержания арбутина от соотношения сырья и
экстрагента
Соотношение сырья и экстрагента Содержание арбутина в пересчете на абсолютно сухое сырье, %
Сухое сырье Свежее сырье
1:5 1,14 1,15
1:10 1,17 1,19
1:25 1,17 1,19
1:50 1,17 1,19
Как показывают результаты эксперимента, оптимальным соотношением сырье-экстрагент является 1:10. Дальнейшее увеличение этого соотношения нецелесообразно, так как это не влияет на выход БАВ, но увеличивает расход экстрагента.
Полученные данные свидетельствуют о том, что максимальный уровень арбутина в извлечении наблюдается при экстрагировании сырья рододендрона золотистого 70%спиртом этиловым на кипящей водяной бане с об-
Таблица 2
Зависимость содержания арбутина от температуры и времени экстракции
Время экстракции Содержание арбутина в пересчете на абсолютно сухое сырье, %
Настаивание при 20 °С Нагревание на кипящей водяной бане с обратным холодильником
Сухое сырье Свежее сырье Сухое сырье Свежее сырье
15 мин - - 0,55 0,60
30 мин - - 1,00 1,00
60 мин - - 1,17 1,19
90 мин 0,80 0,75 1,17 1,19
120 мин 0,85 0,80 1,17 1,19
ратным холодильником в течение 1 ч при соотношении сырья и экстрагента 1:10.
Подбор хроматографических условий.
Для подбора условий хроматографирования использовали арбутина рабочий стандартный образец (РСО) и извлечение из побегов рододендрона золотистого, полученное путем настаивания в течение 1 ч на кипящей водяной бане со спиртом этиловым 70%в соотношении сырье — экстрагент 1:10.
По данным литературы, для анализа арбутина наиболее приемлемым являются: обращенная фаза С18 в качестве сорбента и смеси: метанол — вода — кислота фосфорная концентрированная в качестве подвижной фазы. Детектирование проводят при 280 нм.
Наилучшая эффективность разделения и форма пиков на обращенных фазах характерна для анализируемых веществ в молекулярной (диссоциированной) форме [16], а арбутин за счет фенольной группы проявляет кислотные свойства, поэтому для подавления ионизации неорганический элюент должен иметь кислый рН среды. Растительные экстракты обычно содержат вещества, как основного, так и кислотного характера. Подкисление приводит к увеличению удерживаемых объемов соединений кислого характера и уменьшению объемов соединений основного. Применение элюентов с рН менее 2,0 нежелательно для стабильности неподвижной фазы, т.к. при данных рН имеет место гидролиз силанольных групп сорбента [19]. Для создания кислого рН нами была выбрана кислота фосфорная концентрированная [11,13,20,21].
Для определения необходимой длины волны (Хшах) были изучены УФ-спектры спиртового извлечения из сырья рододендрона золотистого и арбутина РСО (табл. 5, рис.1).
Таблица 5
Подбор оптимальной длины волны для анализа
Образец Л для СО max m Л для опытного образца
Свежее сырье Высушенное сырье
Арбутин 221 нм 285,5 нм 272 нм 285,5 нм 271 нм 286 нм
Учитывая описанные нами условия, была выбрана металлическая колонка размером 4,6х250 мм КгошазИ С 18, размер частиц 5 микрон. Экспериментально установлено, что лучшими показателями разделения и ста-
бильностьюотличалась система метанол-вода-кислота фосфорная концентрированная, в соотношении 400:600:5, в условиях изократи-ческого элюирования. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность
анализа 70 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора ‘^1Х8ТО№’ UV/VIS модель 151 при длине волны 280 нм.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных испытаний нами разработана следующая методика количественного определения арбутина в сырье рододендрона.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм по (ГОСТ 214-83).Свежее сырьё измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм.
Около 8,000 г (точная навеска) растительного сырья помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 70 мл спирта этилового 70%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 ч с момента закипания спиртоводной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,250,45 мкм в мерную колбу вместимостью 100 мл (первые 5 мл фильтрата отбрасывают) и доводят спиртом этиловым 70 %до метки (исследуемый раствор).
Параллельно готовят 0,05 %растворы рабочих стандартных образцов (РСО) фенольных соединений в 70%спирте этиловом. Около 0,01250 г (точная навеска) РСО фенольных соединений помещают в мерные колбы вместимостью 25 мл, прибавляют по 20 мл спирта этилового 70%, встряхивают до растворения, затем объем раствора в колбах доводят до метки. По 20 мкл исследуемых растворов и раствора сравнения вводят в хроматограф с помощью микрошприца Hamilton вместимостью 25 мкл и хроматографируют по вышеприведенной методике (рис. 2, табл. 6).
Полученные данные свидетельствуют о том, что в изучаемых спиртовых извлечениях из сырья рододендрона золотистого методом внутренней нормализации идентифицировано 11 соединений, среди которых превалирующим является галловая кислота (около 44 %). Хроматограммы сухого и свежего сырья идентичны.
Расчёт количественного содержания арбутина производили методом абсолютной калибровки с помощью
Таблица 6
Результаты исследования фенольных соединений в сухом и свежем сырье рододендрона золотистого методом ВЭЖХ
№ Время, мин Высота, mV Площадь, ^М*сек. Концентрация, % Название
1 2.598 21,94 503,95 2,13 Неидентиф.
2 3,001 32,62 349,72 1,48 Неидентиф.
3 3,37 167,36 2694,84 11,41 Арбутин
4 3,956 492,18 10406,77 44,08 Галловая кислота
5 4,684 14,69 372,02 1,58 Впикатехин
6 6,905 16,21 1004,90 4,26 Феруловая кислота
7 7,655 23,62 1554,39 6,58 Рутин
8 9,142 5,17 141,59 0,60 Неидентиф.
9 11,29 2,66 118,92 0,50 Неидентиф.
10 11,93 4,49 123,16 0,52 Апигенин
11 13,41 16,19 1189,65 5,04 Гиперозид
12 17,24 6,27 1159,66 4,91 Неидентиф.
13 22,8 17,54 1758,89 7,45 Кемпферол
14 32,93 3,44 637,50 2,70 Неидентиф.
15 35,79 4,65 785,31 3,33 Неидентиф.
16 40,65 1,74 296,06 1,25 Катехин
17 48,221 0,51 96,56 0,41 Лютеолин
18 54,31 1,14 286,70 1,21 Неидентиф.
19 64,06 0,80 127,36 0,54 Кверцетин
Таблица 7
Метрологические характеристики методики количественного определения арбутина в спиртовых извлечениях из сырья рододендрона золотистого
n f X S2 S x P,% t (P, f) ДХ є , %
Свежее сырье рододендрона золотистого
5 4 1,266 0,0000847 0,00412 95 2,78 0,0114 ± 0,904
Высушенное сырье рододендрона золотистого
5 4 1,185 0,0000968 0,00440 95 2,78 0,0122 ± 1,03
компьютерной программы Мультихром Windows по формуле:
Рис. 2. Хроматограмма спиртовых извлечений из рододендрона золотистого методом ВЭЖХ.
С(%) =
5цс,-Сст,-100100100 Scm -25 a-(\00-W)
;где
S — площадь пика арбутина в исследуемом растворе ис
S — площадь пика раствора арбутина СО;
С(%) — содержание арбутина, %;
С — масса навески арбутина СО; а — масса сырья, взятого на анализ, г;
W — потеря в массе при высушивании в %; Содержание арбутина в исследуемых образцах должно быть не менее 1,0 %.
Результаты опытов с добавками арбутина к навеске высушенного сырья
Взято в сырье, г Добавлено арбутина (г) Должно быть (г) Найдено (г) Ошибка
Абсолютная (г) Относительная (%)
0,01185 0,002963 0,01481 0,01483 + 0,00002 + 0,135
0,01185 0,005925 0,01778 0,01776 - 0,00002 - 0,112
0,01185 0,008888 0,02074 0,02078 + 0,00004 + 0,193
0,01185 0,011850 0,02370 0,02367 - 0,00003 - 0,127
Воспроизводимость методики количественного определения арбутина была установлена на примере одного образца сырья в 5 независимых повторностях. Метрологические характеристики методики количе-
ственного определения арбутина в спиртовых извлечениях из свежего и высушенного сырья рододендрона представлены в табл. 7.
Относительная ошибка методики определения содержания арбутина с 95%вероятностью составляет ± 0,904%для
свежего сырья и ± 1,03%для высушенного сырья.
Для проверки отсутствия систематической ошибки методики были проведены эксперименты с добавками арбутина к навеске высушенного сырья перед началом экстракции (табл. 8).
Относительная ошибка результатов опытов с добавками не превышает относительную ошибку единичного определения и имеет отклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений, что свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки в предлагаемой методике анализа.
Следует отметить, что при количественном опреде-Таблица 8 лении арбутина в сухом и свежем сырье рододендрона золотистого по ГФ XI методом йодометрического титрования его содержание составляет около 3%, что выше, чем предлагаемая нами методика ВЭЖХ. Такие результаты можно объяснить примесью соединений фенольной природы, что соответственно увеличивает выход при титровании.
Нами разработана методика количественного определения арбутина с помощью метода ВЭЖХ, которая в перспективе может быть использована при стандартизации лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных Рододендрона.
ЛИТЕРАТУРА
1. Александрова М.А. рододендроны природной флоры СССР. — М.: Наука, 1975.
2. Атлас лекарственных растений СССР. — М., 1962. — С.478-479.
3. Баньковский И.А., Запесочная М.Ф. Исследования фла-воноидов в листьях рододендрона золотистого // Химия природных соединений. — 1968. — 34. — С.48-50.
4. Верещагин В.И., Соболевская К.А., Якубова А.И. полезные растения западной Сибири. — М.: Л., 1959. — 348 с.
5. Губанов И.А., Крылова И.Л., Тихонова В.Л. Дикорастущие полезные растения СССР. — М., 1976. — 360 с.
6. Ефремова Н.А. Лекарственные растения Камчатки и Командорских островов. Изд. 2-е. — Петропавловск-Камчатский, 1967. — 123 с.
7. Землинский С.Е. Лекарственные растения СССР. — М.,
1958. — 609 с.
8. Куркин В.А., Жарова О.Г. Фитохимические исследоав-ния новых препаратов на основе семян каштана конского// Материалы VI Международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». — СПб., 2005. — С.248-250.
9. Куршакова Г.В. и др. рододендрон золотистый, или каш-кара, и возможности его использования в качестве дубильного растения // Растительное сырье. — 1961. — Вып.1Х. — С.291-302.
10. Медведева Р.Г. Сибирское лекарственное растение — рододендрон золотистый (кашкара) // Аптечное дело. — Иркутск, 1952. — №3. — С.29-32.
11. Руководство по методам анализа качества и безопас-
ности пищевых продуктов / Под ред. И.М. Скурхина, В.А. Тутельяна. — М., Медицина, 1998. — 188 с.
12. Смирнов Н.Н. Лекарственные и технические растения Сибири. — Омск, 1959. — 236 с.
13. Стыскин Е.Л., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. — М.: Химия, 1986. — 312 с.
14. Флора Средней Сибири / Под ред. М.Г. Попова. — М.-Л.,
1959. — Т.2. — С. 565-567.
15. Флора СССР / Под ред. В.Л. Комарова. — М., 1952. — Т.18. — С.38.
16. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. — Рига:Зинатне. — 1988. — 380 с.
17. Шнякина Г.П., Седельникова В.А., Цыганкова Н.Б. О содержании арбутина в листьях некоторых растений советского Дальнего Востока // Растит. Ьесурсы. — 1981. — Т.17. — Вып. IV. — С.568-571.
18. Шретер А.И. Лекарственная флора Советского Дальнего Востока. — М.: Медицина, 1975. — С. 216-217.
19. Harborn J.B. Phytochemical methods. A guide to modern ticniques of plan t analisis: London. — Hcapment and hall., 3 edition, 1988. — 233 p.
20. Wagner, et al. Ropkastaniensamen — HPLC-Analyse // deutsche Apotheker Zeitung. — 1985. — №30. — P1515-1518.
21. Zhang Zh., Li Sh., Zhang Sh., Gorenstein D. Triterpenoid saponins from the fruit of Aesculus pavia // Phytochemistry. — 2006. — №67. — Р784-794.
Адрес для переписки: 127221, г. Москва, ул. Полярная, д.26, к.2, кв.274,
Потрясай Ксения Алексеевна — аспирант кафедры фармации с курсом социальной фармации ФППОП ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава, е-таіі: [email protected]; [email protected], тел.: 8-926-598-84-70;
Маркарян Артем Александрович — д.ф.н., профессор, зав. кафедрой фармации с курсом социальной фармации ФППОП ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава, е-mail: [email protected];
Копнин Алексей Александрович — ведущий научный сотрудник отдела стандартизации и сертификации ВИЛАР, к.ф.н., 140103, Московская область, г. Раменское, ул. Свободы, д.11, кв. 52. E-mail: [email protected], тел.: 8-916-365-27-26 (моб.); Даргаева Тамара Дарижаповна — д.ф.н., профессор, главный научный сотрудник отдела стандартизации и сертификации ВИЛАР, 117556, Москва, Чонгарский б-р. д.1, корп. 4, кв.422, е-mail: [email protected] Сокольская Татьяна Александровна — д.ф.н., профессор, первый заместитель директора ВИЛАР,
115487, Москва, ул. Нагатинская, д. 28, корп. 2, кв.21, е-mail: [email protected].
© ЛУБСАНДОРЖИЕВА П.Б., ДАШИНАМЖИЛОВ Ж.Б. — 2009
СОДЕРЖАНИЕ ФЛАВОНОИДОВ В МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ СБОРАХ
П.Б. Лубсандоржиева, Ж.Б. Дашинамжилов (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор — д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов)
Резюме. Определено содержание флавоноидов в различных фракциях и отварах пяти сборов и отдельных растениях. Установлено, что в сборах содержится 0,56-2,76% флавоноидов, а в отвары (1:10) сборов извлекается от 2,5 до 23-33% флавоноидов от их общего содержания в исходном сборе.
Ключевые слова: многокомпонентный сбор, флавоноиды
THE CONTENT OF FLAVONOIDS IN MULTY — COMPONENTAL HERB TEAS
P.B. Lubsandorzhieva, Zh. B.Dazhinamzhilov (Institute of General and Experimental Biology SD RAS, Ulan-Uda)
Summary. The quantitative content of flavonoids was determined in different fractions and infusions in 5 multy — componental herb teas. The content of flavonoids is 0,56-2,76% in teas, and from 2,5 to 23-33% of flavonoids are released from teas in water extraction (1:10).
Key words: multy-componental herb tea, flavonoids.
Лекарственные средства растительного происхождения, содержащие в качестве действующих веществ флавоноидные соединения широко используются в медицинской практике для лечения заболеваний органов пищеварения. Известно, что при поступлении флавоноидов в желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) реализуются процессы их частичного гидролиза и метаболизма под воздействием пищеварительных ферментов и кишечной микрофлоры. Благоприятное воздействие флавоноидов на состояние органов пищеварения зависит от их абсорбции и метаболизма, которые, в свою очередь, определяются их структурой, степенью гликозилирования / ацилирования, размером молекул, растворимостью, локализации в тканях и клетках, связыванием флавоноидов внутри пищевой матрицы. [15]. Для достижения защитного эффекта флавоноидных соединений в ЖКТ необходимо присутствие как агликонов (неполярных веществ), так и гликозидов (гидрофильных веществ) [10].
Цель данной работы — определить содержание флавоноидов в 5-и многокомпонентных сборах, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний органов пищеварения.
Материалы и методы
В состав сбора № 1 для лечения алкогольного гепатита и абстинентного синдрома входят листья Vaccinium vitis-idaea L. и Mentha piperita L., трава Gnaphalium uliginosum L.s.l., плоды Rosa и Crataegus, корневища Inula helenium L., корни Eleutherococcus senticosus Rupr. Et Maxim. В состав сбора №2 для лечения патологического влечения к алкоголю входят корни Acorus calamus L., трава Achillea millefolium L.,
Artemisia absinthicum L., Thymus vulgaris L., цветы Tanacetum vulgaris L., листья Urtica dioica L. В состав сбора № 3 для лечения алкогольного гепатита с сопутствующим колитом входят черные листья и корни Bergenia crassifolia (L.) Fritsch., листья M. piperita L., цветки Calendula officinalis L., побеги Pentaphylloides fruticosa (L.)
Schwarz, M., корни Scutellaria baicalensis Georgi. В состав сбора № 4 для лечения и профилактики гиперлипидемии входят
черные листья B. crassifolia, цветки Matricaria recutita L., трава Polygonum aviculare L., плоды Rosa L. и Crataegus L., корни A. calamus L. и Taraxacum officinale Wigg. В состав сбора №5 для лечения и профилактики хронического колита входят черные листья B. crassifolia, листья M. piperita, цветки M. recutita, трава A. millefolum L.
Для определения флавоноидов разной полярности из сборов получены отдельные фракции последовательной экстракцией хлороформом. 96% , 40% этанолом, водой очищенной. 3,0 г (точная навеска) сбора обработали трехкратно 10 мл гексана для удаления липофиль-ных веществ (каротиноидов, фосфолипидов, жирных кислот и др.). Шрот последовательно обработали хлороформом, 96 % спиртом этиловым (при комнатной температуре), 40 % этиловым спиртом (при температуре 90 о С), водой очищенной (при 100 оС). Экстрагент удалили, сухой остаток фракции растворили в 25 мл 60% этилового спирта.
Для обнаружения флавоноидов извлечения хроматографировали на бумаге (БХ), пластинках «Silufol» (ТСХ) в системах растворителей: 15% уксусная кислота (I), бутанол — уксусная кислота — вода (4:1:5) (II), эти-лацетат — муравьиная кислота — уксусная кислота — вода (100:11:11:26) (III).
В спиртовых растворах отдельных фракции, отварах (1:10) сборов и отдельных растений определяли содер-
Таблица 1
Содержание флавоноидов в многокомпонентных сборах
Фракция сбора (экстрагент) Сбор 1 Сбор 2 Сбор 3 Сбор 4 Сбор 5
Фракция I (Хлороформ) УФ спектр (+АІСІ 3), нм Флавоноиды, в % 390 0,05 400 0,06 400 410 0,04 400 0,16
Фракция II (96 % этиловый спирт) уФ спектр (+АІСІ 3), нм Флавоноиды, в % 390 0,74 395 0,11 4 10 1,20 410 0,32 400 0,63
Фракция III (40 % этиловый спирт) УФ спектр (+АІСІ 3), нм Флавоноиды, в % 390 0,16 390 0,28 405 0,62 410 0,06 395 0,13
Фракция IV (Вода очищ.) УФ спектр (+АІСІ 3), нм Флавоноиды, в % 390 0,06 410 0,02 390 0,02 410 0,03 390 0,02
УФ спектр суммарного 96 % извлечения, очищенного на полиамиде (+АІСІ 3), нм Флавоноиды в сборе, % 390 1,08 395 1,25 410 2,76 410 0,56 400 1,22
Флавоноиды в отваре (1:10) сбора, % 1,15 1,67 2,92 0,38 0,09
