CC BY
20
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
РАЗРАБОТКА МЕТОДИК АНАЛИЗА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ МЕТИЛОВОГО ЭФИРА 4-АМИНО-3-ФЕНИЛБУТАНОВОЙ КИСЛОТЫ Карманович А.А. Email: Karmanovich6114@scientifictext.ru
Карманович Александра Андреевна - студент, фармацевтический факультет, Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения
России, г. Пятигорск
Аннотация: в статье описаны исследования по определению реакций подлинности и спектральных характеристик фармацевтической субстанции метилового эфира 4-амино-3-фенилбутановой кислоты. Цель исследования явилось изучение спектральных характеристик в УФ-области и определение качественных реакций. Материалы и методы. Исследования проводились с использованием информационно-поисковой базы данных (PubMed), а также результатов собственных исследований. Результаты. В результате исследований были определены спектральные характеристики и цветные реакции. Заключение. Результаты исследования позволят в дальнейшем их использовать для разработки УФ-спектрофотометрической методики определения исследуемого соединения. Ключевые слова: аминокислоты, УФ-спектрофотометрия, нингидриновая проба.
DEVELOPMENT OF METHODS FOR ANALYSIS AND STANDARDIZATION OF PHARMACEUTICAL SUBSTANCE OF METHYL ETHER 4-AMINO-3-PHENYLBUTANIC ACID Karmanovich A.A.
Karmanovich Alexandra Andreevna - Student, FACULTY OF PHARMACY, PYATIGORSK MEDICAL AND PHARMACEUTICAL INSTITUTE - BRANCH FEDERAL STATE BUDGETARY EDUCATIONAL INSTITUTION OF HIGHER PROFESSIONAL
EDUCATION
VOLGOGRAD STATE MEDICAL UNIVERSITY OF THE MINISTRY OF HEALTH OF RUSSIA,
PYATIGORSK
Abstract: the article describes studies to determine the reactions of authenticity and spectral characteristics of the pharmaceutical substance of methyl ester of 4-amino-3-phenylbutanoic acid. The aim of the study was to study the spectral characteristics in the UV region and determine the qualitative reactions. Materials and methods. The research was carried out using the information retrieval database (PubMed), as well as the results of our own research. Results. As a result of the research, spectral characteristics and color reactions were determined. Conclusion. The results of the study will make it possible to use them in the future for the development of a UV spectrophotometry method for the determination of the compound under study. Keywords: amino acids, UV spectrophotometry, ninhydrin test.
УДК 615.31:547.466.3.074
Аминокислотам принадлежит большая роль в современной фармакологии. Являясь не только структурными элементами белков и других эндогенных соединений, они имеют большое функциональное значение. Многие аминокислоты нашли самостоятельное применение в качестве лекарственных средств, расширяется круг новых лекарственных препаратов, синтезируемых с использованием остатков аминокислот [1].
Особое внимание ученых привлекают лекарственные препараты, полученные путем химической модификации гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) - важного тормозного медиатора ЦНС. Таким лекарственным препаратом является мефебут, представляющий собой метиловый эфир р-фенил-у-аминомасляной кислоты гидрохлорид. За счет наличия фенильного радикала в в- положении, мефебут примерно в 10 раз лучше проникает в ЦНС через гематоэнцефалический барьер, оказывая транквилизирующее, ноотропное и церебропротекторное действие [2, 3]. В свете новых достижений в области физиологии (изучение роли ГАМК-ергической системы в кардиоваскулярной регуляции), в настоящее время является актуальным изучение эффектов этого лекарственного вещества на сердечно-сосудистую систему. Установлено, что мефебут оказывает положительное терапевтическое действие при патологиях миокарда, которое проявляется в улучшении метаболизма, ускорении регенеративных процессов [4;5]. В фармакологических исследованиях оказалось перспективным также применение мефебута в виде солей с другими кислотами, например лимонной, янтарной, оротовой, которые также обладают биологической активностью [6]. Предварительные доклинические испытания, проведенные на базе Волгоградской Государственной Медицинской Академии, показали, что это вещество обладает выраженной церебропротекторной и антиангинальной активностью [7].
Важной вехой на пути от биологически активного вещества до лекарственного препарата, является разработка методов анализа и стандартизации субстанции, необходимых для создания проекта ФСП. И одной из целей нашей работы является разработка условий контроля качества мефебута.
На основе анализа молекулы мефебута, предложено использовать для доказательства подлинности комплекс общих реакций сложной эфирной группы.
А) Нингидриновая проба рекомендована для подтверждения в мефебуте наличия первичной алифатической аминогруппы. Реакция проводилась по следующей методике: 0,02г вещества растворяют при нагревании в 1 мл воды, прибавляют 5-6 капель раствора нингидрина и нагревают на кипящей водяной бане, появляется фиолетовое окрашивание. Чувствительность реакции выражена в предельном разбавлении 1:40000.
Б) Гидроксамовая реакция предложена для идентификации сложноэфирной группы в молекуле мефебута. Реакция основана на щелочном гидролизе сложного эфира в присутствии гидроксиламина гидрохлорида образуются гидроксамовые кислоты, которые с солями железа (III) дают гидроксаматы железа красного или красно-фиолетового цвета.Гидроксаматы меди (II) - осадки зеленого цвета. Реакция протекает при нагревании. Чувствительность реакции 1:13000 [8].
Реакция проводилась по следующей методике: 0,02 г вещества растворяют в 3 мл спирта этилового 95%, прибавляют 1 мл щелочного раствора гидроксиламина, встряхивают, нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 минут. Затем добавляют 2 мл кислоты хлористоводородной разведенной, 0,5 мл 10% раствора железа (III) хлорида в 0,1 моль/л растворе кислоты хлористоводородной. Появляется красно-фиолетовое окрашивание.
В результате проведенных исследований установлено, что в мефебуте подтверждается наличие первичной алифатической аминогруппы и сложноэфирной группы, с помощью гидроксамовой реакции можно отличить лекарственный препарат от фенибута. Наиболее чувствительна нингидринова реакция, 1:40000.
Поглощение мефебута в УФ-области обусловлено п^-п переходами бензольного хромофора. В спектре наблюдается интенсивная полоса поглощения в области менее 200 нм и бензольная полоса малой интенсивности при 257-258нм.
Нами были изучены спектры поглощения мефебута в воде. Спектры поглощения измеряли на спектрофотометре СФ-56 в кварцевых кюветах с толщиной рабочего слоя 10мм.В качестве раствора сравнения использовали растворитель. Исследуемые растворы готовили по следующей методике: в мерные колбы вместимостью 100мл помещали точные массы мефебута, равные 0,1000г и растворяли в 20-30мл воды, затем объёмы растворов доводили до метки теме растворителем. Градуированной пипеткой 1 мл раствора А переносили в мерные колбы вместимостью 50мл и доводили объемы до метки водой. Растворы перемешивали и измеряли их спектр поглощения в диапазоне длин волн от 100-300 нм. На рисунке №8 представлен спектр поглощения мефебута в воде. Кривая светопоглощения мефебута характеризуется максимумом светопоглощения в области длины волны 257±2 нм (растворитель вода).
'0.6
0,5
0.3
о,г
о
220
Рис. 1. УФ-спектр водного раствора исследуемого соединения
Для установления границ подчиняемости закону Бугера-Ламберта-Бера для раствора мефебута в воде приготовили серии растворов различных концентраций и измеряли их оптические плотности при длине волны Х=257нм. Условия приготовления испытуемых растворов приведены в таблице №1.
Таблица 1. Условия приготовления растворов мефебута в воде для построения калибровочного графика
Объем раствора А, мл Объем раствора А, мл Концентрация полученного раствора, %
1,0 100 0,0010
1,5 100 0,0015
2,0 100 0,0020
2,5 100 0,0025
3,0 100 0,0030
4,0 100 0,0040
По полученным данным рассчитали удельные показатели светопоглощения мефебута при 257нм.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ. В результате исследований были определенны спектральные характеристики исследуемого соединения и реакции подлинности.
Список литературы /References
1. Сергеев П.С. ГАМК-рецепторы и сердечно-сосудистая система / Сергеев П.В., Валеева П.А., Шимановский Н.Л. // Эксперим. и клин. фармакол., 1998. Т. 61. № 3. С. 81-85.
2. Смирнов А.В. Кардиальные эффекты фенибута при формировании экспериментальной хронической почечной недостаточности / Смирнов А.В., Барабанова Т.А., Пенчул Н.А. // Эксперим. и клин. фармакол, 2003. Т. 66. № 4. С. 21-24.
3. Хвиливицкий Т.Я. // Всесоюзный симпозиум «Фенибут и замещенные гамма-аминомасляные кислоты и альфа-пирамидоны (Клиника, фармакология, химия, производство)»: Тезисы докладов. Черкассы, 1981. С. 60-71.
4. Боровский Б.В. Валидационная оценка спектрофотометрической методики количественного определения фенибута в таблетках по реакции с нингидрином / Научное обозрение, 2013. № 4. С. 222-225.
5. Боровский Б.В., Шабардина Д.Д.Разработка методики количественного определения «ФЕНИГАММЫ» методом УФ-спектрофотометрии / Фармация и фармакология, 2015. № 1(8). С. 34-37.
6. Коваль Н.О. Изучение некоторых физических свойств нового биологически активного соединения ПМФИ-195 / В сборнике: Наука в современном информационном обществе. Материалы XX международной научно-практической конференции, 2019. С. 93-95.
7. Боровский Б.В. Изучение показателей чистоты нового биологически активного соединения ПМФИ-195 / Боровский Б.В., Коваль Н.О., Компанцев В.А., Кодониди И.П. // Вестник науки и образования, 2019. № 1-2 (55). С. 82-85.
8. Коваль Н.О. Идентификация и установление подлинности нового биологически активного соединения ПМФИ-195 с использованием хромогенных реакций / Вестник науки и образования, 2019. № 12 (66). С. 105-107.
