CC BY
27************************************* Ю.Г. Чернецкая1, Ю.Г. Белковская1,
Т.В. Трухачева1, А.И. Жебентяев2,
П.Т. Петров3
РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИРАМИ-СТИНА В ГИДРОГЕЛЕВЫХ ПОЛИМЕРНЫХ МАТРИЦАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
!РУП «Белмедпрепараты», г. Минск 2Витебский государственный медицинский университет
3
ГУ Научно-производственный центр «Институт фармакологии и биохимии Национальной академии наук Беларуси», г. Минск
Разработана методика идентификации и количественного определения мирамистина (миристамидопропилди-метилбензиламмония хлорида) в новой лекар-ственной форме на основе гидрогелевых полимерных матриц с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии со спектрофотометрическим детектором. Установлены оптимальные условия хроматографического анализа: колонка размером 250х4,6 мм, заполненная октилсилиль-ным силикагелем (Lichrospher 100 ЯР-8), в качестве подвижной фазы использова-
ли 0,5 М раствор аммония ацетата в смеси метанол - вода (93:7), скорость элюирования — 1,0 мл/мин. Детектирование проводили при длине волны 261 нм. Объем вводимой пробы — 100 мкл. Оптимизированы условия пробоподготовки образцов для анализа. В результате проведенной валидации подтверждены избирательность, линейность, повторяемость, воспроизводимость и правильность разработанной методики.
Ключевые слова: высокоэффек-
тивная жидкостная хроматография, гидрогелевые полимерные матрицы, ми-рамистин.
ВВЕДЕНИЕ
Мирамистин находит применение в производстве антисептических средств, обладающих широким спектром противо-микробного действия. Освоены и выпускаются различные виды лекарственных форм на основе мирамистина: мази, растворы, клеи [1].
Для лечения инфицированных ран и ожогов разработан новый вид аппликационных лекарственных средств с антисептиком мирамистином (миристамидопро-пилдиметилбензиламмония хлоридом) [2]. Новая лекарственная форма для наружного применения «Гидрогелевые пластины» включена в Государственную фармакопею Республики Беларусь (ГФ РБ) [3]. Трехмерная полимерная структура гидрогелевых пластин формируется в результате воздействия ионизирующего излучения на растворенные в воде полимеры медицинского назначения. Нами установлено, что благодаря введению в состав мирамистина, антисептика широкого спектра действия из группы четвертичных аммониевых соединений, гидрогелевые матрицы обладают выраженным противомикробным действием по отношению к наиболее часто встречающимся условно-патогенным микроорганизмам, основным возбудителям раневой инфекции: грамположительным (стафилококкам, стрептококкам, бациллам) и грамотрицательным (энтеробактериям и псевдомонадам), проявляют высокую противогрибковую активность в отношении
Candida albicans [4]. Гидрогелевые пластины предназначены для лечения свежих травматических ран, травматических дефектов мягких тканей в первую и вторую фазы раневого процесса, травматических дефектов мягких тканей с обнажением костей и сухожилий, фликтен, гранулирующих ран после аутодермопластики, донорских дефектов после взятия кожных лоскутов. Новые методики лечения травматических дефектов мягких тканей с использованием гидрогелевых форм позволяют сократить сроки лечения поверхностных дефектов мягких тканей конечностей в 3,2, а глубоких - в 1,7 раза по сравнению с контрольной группой, значительно улучшить качество жизни пациентов [5]. Комплексное лечение рожистого воспаления, включающее местное применение гидрогелевых пластин, позволило сократить средний койко-день при рожистом воспалении с 14,3 до 13,0, при этом уменьшить общую летальность с 0,76 % до 0,21 % [6].
Количественное определение мира-мистина проводят титрованием 0,1 М раствором кислоты хлорной в кислоте уксусной (НД РБ 0050С-2009 «Миритин»), в 0,01 % растворе - меркуриметрическим титрованием (ФС РБ 0386-05 «Септоми-рин, раствор для наружного применения»). Известны способы определения количественного содержания мирамистина в лекарственных формах методами потенциометрического титрования и прямой потенцио-мет-рии с использованием трехточечного градуировочного графика [7]. При определении мирамистина в мази и суппозиториях «Пантестин», содержащих D-пантенол и мирамистин в количествах 5 % и 0,5 %, соответственно, был использован метод гетерофазного титрования [8]. Однако данные методики характеризуются высокой трудоемкостью, неспецифичностью и низкой чувствительностью.
Поэтому является актуальной задача разработки высокочувствительной, селективной методики идентификации и количественного определения мирамистина в новой лекарственной форме - гидрогелевых пластинах. Для разработки такой методики нужно оптимизировать процесс
б8
пробоподготовки, снизить временные и трудовые затраты, что актуально при последующем использовании разработанной методики в контрольно-аналитических лабораториях.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Реактивы. Для проведения анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) применяли следующие реактивы: вода деионизированная, полученная с помощью системы Millipore Milli-Q (Millipore, Milford, MA, USA), метанол (Merck, кат. № 1.06018.2500), аммония дигидрофосфат (Merck, кат. №
1.01126.0502), ацетонитрил (Криохром®, РФ), аммония ацетат (Baker Analyzed HPLC® Reagent, кат. № 0390), изопропанол (Sigma-Aldrich, кат. № 31,416-1), спирт этиловый (СТБ 1334-2003).
Подготовка образцов гидрогелевых пластин. Для исследования использовали образцы лекарственного средства «Гидрогелевые пластины мирамистина 0,05 %» размером 6х9 см производства РУП «Бел-медпрепараты».
При производстве гидрогелевых матриц использовали следующие компоненты: повидон (Ph. Eur.) производства AppliChem (Германия); агар (Ph. Eur.) производства Merck (Германия); полиэтиле-ноксид низкомолекулярный 400 (ТУ 2483167-05757587-2000) производства ОАО «Сибур-Нефтехим» (РФ). В качестве активного антимикробного компонента была использована субстанция миритина (мира-мистина) (рег. удостоверение № 582/03/09) с содержанием основного вещества - не менее 99,0 %, примесей - не более 1,0 %. Радиационную обработку гидрогелей проводили на ускорителе электронов УЭЛВ-10-10 ГНУ «ОИЭиЯИ-Сосны» НАН РБ. Параметры облучения описаны ранее [3].
В качестве образцов сравнения использовали опытные образцы гидрогелевых полимерных матриц, не содержащие мирамистин.
Приготовление стандартных растворов. Раствор рабочего стандартного образца (РСО) мирамистина готовили, растворяя 0,025 г (точная навеска) субстанции мирамистина в 20 мл воды в мерной колбе
вместимостью 25,0 мл, доводили объем водой до метки и перемешивали. Затем 5,0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50,0 мл и доводили объем 96 % спиртом этиловым до метки и перемешивали.
Экстракция. Для приготовления испытуемых растворов около 5,00 г измельченных гидрогелевых пластин помещали в колбу вместимостью 50,0 мл, добавляли соответствующий растворитель до 25,00 г и проводили экстракцию с использованием встряхивания на шейкере IKA® 130 basic (Германия) приготовленных проб в течение определенного промежутка времени. Полученные извлечения из матриц фильтровали через бумажный фильтр «синяя лента», а затем через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм (Millipore, Bedford, MA, USA).
Спектрофотометрический анализ. Спектральные свойства раствора мириста-мидо-пропилдиметилбензиламмония хлорида (0,5 мг/мл в 96 % спирте этиловом) были изучены с использованием спектрофотометра Lambda 25 UV/VIS Spectrometer (Perkin Elmer, Гер-мания) в диапазоне длин волн от 220 до 300 нм.
Хроматографический анализ. Разработка методики анализа гидрогелевых пластин мирамистина проводилась с использованием жидкостного хроматографа «Agilent 1200 Series» со спектрофотометрическим детектором модели Agilent G1314B. Диапазон длин волн - от 190 до 700 нм. Диапазон шкалы детектора - от 0,0001 до 2,0 о.ед. Цена деления - 0,0001 о.ед. В системе используется четырехканальный насос модели Agilent GD!^. Скорость подвижной фазы устанавливается от 0,001 до 10 мл/мин при давлении 0410 атмосфер. Точность установки потока
- ± 0,5 % при 1 мл/мин (изопропиловый спирт). Воспроизводимость установки потока (RSD) - ± 0,3 % при 1 мл/мин (смесь вода/метанол). Система оснащена авто-самплером модели Agilent G1367B. Диапазон объема ввода образца - от 0,1 до 100 мкл с погрешностью 0,2 %.
Расчет количественного содержания ми-рамистина в гидрогелевых пластинах проводили по формуле:
S1 х m 0 х 5 х m 2 х (100 - W0)
--------------------------------------А 0
S0 х m 1 х 25 х 50 х p х 100
где S1 - среднее значение площади пика мирамистина, вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;
S0 - среднее значение площади пика мирамистина, вычисленное из хроматограмм раствора РСО мирамистина;
m0 - масса навески РСО мирамисти-на, в граммах;
m1 - масса навески гидрогелевой пластины, в граммах;
m2 - масса навески гидрогелевой пластины со спиртом этиловым, в граммах; р - плотность спирта этилового. Полученные данные обрабатывались с помощью программы Chem Station Agilent для хроматографии.
Валидация. Валидация разработанной методики количественного определения мирамистина в гидрогелевых полимерных матрицах проведена по следующим аналитическим характеристикам: избирательность, линейность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и правильность [9,10]. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы Microsoft Excel.
Избирательность. Для доказательства избирательности методики проводили сравнительный анализ извлечений из гидрогелевых пластин, не содержащих действующего вещества (раствор «плацебо»), из гидрогелевых пластин с мирамистином и раствора РСО мирамистина. Экстракцию компонентов «плацебо» и мирамистина из гидрогелевых матриц проводили 96 % спиртом этиловым в течение 3-х часов, как описано в разделе «Экстракция». Критерием приемлемости служило отсутствие на хроматограммах раствора «плацебо» пиков со временем удерживания, совпадающим со временем удерживания пика мирамистина на хроматограммах раствора РСО.
Линейность. Определение линейности разработанной методики проводилось на 5 уровнях концентрации: 70 %, 90 %, 100 %, 110 % и 130 % от количества мира-
мистина, принятого за 100 % (0,1 мг/мл в пробе). Готовили исходный раствор субстанции мирамистина с концентрацией 1 мг/мл в 96 % спирте этиловом и выполняли соответствующие разведения.
Для оценки линейности методики была представлена графически зависимость площади пика мирамистина как функции содержания анализируемого вещества. Выполнена статистическая обработка результатов анализа и вычислена регрессивная линия методом наименьших квадратов. Критерием приемлемости линейности является коэффициент корреляции, величина которого должна быть не ниже 0,99, и пересечение с осью У - не более 2,0 % отклика номинальной концентрации.
Повторяемость. Повторяемость оценивалась по результатам 6 параллельных анализов одной серии лекарственного средства «Гидрогелевые пластины мирамистина 0,05 %», проведенных исследователем в один день. Критерий приемлемости выражается величиной относительного стандартного отклонения, которая не должна превышать 5 %.
Внутрилабораторная воспроизводимость. Внутрилабораторная воспроизводимость оценивалась по результатам 6 параллельных анализов одной серии лекарственного средства, выполненных двумя исследователями в разные дни, при использовании различных хроматографических колонок и химической посуды. Величина относительного стандартного отклонения не должна превышать 5 %.
Правильность. Выполнен анализ модельных смесей на трех уровнях концентраций, эквивалентных 70 %, 100 % и 130 % от номинального содержания мира-мистина (0,1 мг/мл в пробе). Модельные растворы готовили, добавляя к раствору «плацебо» определенное количество рабочего стандартного образца мирамистина и проводили дальнейшую пробоподготовку и анализ согласно методике. Рассчитывали величину процента восстановления как отношение полученного при анализе количества к известному добавленному количеству мирамистина. Критерием приемлемости является процент восстановления, при ис-
пользовании растворов заданных концентраций, скорректированный на 100 %, который должен составлять 95 - 105 %.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Спектрофотометрическое определение мирамистина. Мирамистин представляет собой соль четвертичного аммониевого соединения - миристамидопро-пилдиметилбензиламмония хлорид моногидрат. Как видно из химической структу-
ры (рисунок 1), мирамистин является полярным соединением.
Благодаря наличию бензольного кольца миристамидопропилдиметилбензи-ламмония хлорид поглощает в ультрафиолетовой области спектра. УФ-спектр раствора мирамистина (0,5 мг/мл) в 96 % спирте этиловом (рисунок 2) имеет максимумы при длинах волн (257±2) нм, (262±2) нм и (270±2) нм.
C
-CH2-N—( CH2 )3 NH C (CH2)12 CH3
O
H3 N CH3
Cl . H2O
Рисунок 1 - Структурная формула миристамидопропилдиметилбензиламмония хлорида моногидрата (мирамистина)
Рисунок 2 - УФ-спектр мирамистина (0,З мг/мл в 9б % спирте этиловом)
С учетом определения максимумов поглощения мирамистина в качестве аналитической длины волны для детектирования при проведении анализа методом жидкостной хроматографии выбрали 261 нм.
Методика определения мирами-стина с применением ВЭЖХ. При разработке методики проводился выбор оптимальных условий хроматогра-фирования: тип и геометрия используемого сорбента, природа и соотношение растворителей в подвижной фазе.
При выборе хроматографических систем использовали колонки с различными сорбентами с размером частиц 5 мкм (Discovery® Amide C16 размером 250х4,6 мм, заполненная пальмитамидопропилси-лильным силикагелем; катионообменная BioBasic SCX размером 250х4,6 мм, заполненная силикагелем с привитыми группами бензил-3-сульфоновой кислоты, Hyper-sil Gold CN размером 250х4,6 мм, заполненная силикагелем нитрильным, обраще-но-фазовые колонки С18).
Оптимальные условия разделения пиков вспомогательных компонентов гидрогелевых матриц и мирамистина были получены при использовании колонки, заполненной октилсилильным силикагелем с размером частиц 5 мкм (Lichrospher 100 RP-8 размером 250х4,6 мм).
При разработке методики идентификации и количественного определения ми-рамистина для приготовления подвижной фазы применялись различные системы растворителей. При использовании в качестве подвижной фазы смесей: метанол -
0,15 М аммония дигидрофосфат (30:70), ацетонитрил - 0,15 М аммония дигидрофосфат (20:80 и 30:70) пик мирамистина был асимметричным и размытым.
Приемлемые результаты были получены при использовании в качестве подвижной фазы 0,5 М раствора аммония ацетата в смеси метанол - вода в различных соотношениях (80:20; 85:15; 90:10; 93:7; 95:5). При дальнейшей оптимизации условий элюирования установлено соотношение компонентов подвижной фазы (0,5 М раствор аммония ацетата: смесь метанол -вода в соотношении 93:7; рН=6,7), при котором форма пика мирамистина соответствует критериям пригодности хроматографической системы (коэффициент асимметрии пика (Т) - не более 2, количество теоретических тарелок (N) - не менее 2000). Изменение значения рН подвижной фазы (± 0,5) не оказывало существенного влияния на время удерживания мирамистина.
Извлечение мирамистина из гидрогелевых матриц проводили, используя в качестве экстрагентов: подвижную фазу, воду для инъекций, метанол, изопропанол и спирт этиловый различной концентрации. Максимальное извлечение мирамистина (100 %) из матриц наблюдалось при использовании 9б % спирта этилового (табл. 1).
Кроме того, одним из важных факторов для обеспечения наиболее полного экстрагирования действующих веществ является соотношение количества образца и экстрагента, а также степень измельчения образца. Благодаря наличию в трехмерной полимерной структуре пор гидрогелевые пластины способны впитывать большое количество растворителя. Экспериментально были подобраны соотношения навески гидрогеля и количества экстрагента. В результате проведенных исследований с учетом степени набухания гидрогелевых матриц установлено оптимальное соотношение навески гидрогелевых пластин и экстрагента - 1:4, при котором концентрация мирамистина в экстракте соответствует диапазону применения методики. При соотношении 1:1 гидрогелевые пластины полностью впитывают экстрагент, т.к. их максимальная степень набухания составляет около 3,0; при использовании большего количества растворителя (например, при соотношении 1:З; 1:б и т. д.) концентрация мирамистина в испытуемом растворе находится ниже диапазона применения методики.
Таблица 1 - Влияние экстрагента и степени измельчения гидрогелевых матриц на степень ______________________________ извлечения мирамистина_________________________________
Экстрагент Размер фрагментов гидрогелевых матриц при измельчении, мм Степень извлечения мира-мистина из гидрогелевой матрицы, %
0,5 М раствор аммония ацетата в смеси метанол - вода (93:7) 5х5 Не детектируется
Вода 5х5 Не детектируется
Метанол 5х5 Не детектируется
Изопропанол 5х5 Не детектируется
70 % спирт этиловый 5х5 60 %
5х5 9 З %
96 % спирт этиловый 2х2 100 %
10х10 70 %
Полное извлечение мирамистина 9б % спиртом этиловым происходит при измельчении гидрогелевых пластин до фрагментов размером около 2х2 мм (таблица 1). С уменьшением размеров фрагментов при измельчении увеличивается набухае-мость гидрогелевых пластин, что усложняет процесс дальнейшей пробоподготовки (необходимо применение центрифугирования, дополнительной фильтрации, большие потери экстракта).
Была изучена зависимость количества извлеченного действующего вещества из полимерных матриц от времени экстракции. Процесс экстракции мирамистина из гидрогелевых матриц проводили при соотношении навески гидрогелевой пла-
100 П
стины и 9б % спирта этилового - 1:4. Концентрация антисептика в пробе составляла
0,1 мг/мл. Для определения оптимального времени экстракции мирамистина из гидрогелевых пластин проводили анализ в течение 5 часов через равные промежутки времени: 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 и 5,0 часов.
Результаты исследования зависимости степени извлечения действующего вещества от времени экстракции представлены на рисунке 3. Максимальный выход мирамистина из матрицы и установление концентрационного равновесия наблюдается при экстракции в течение 3 часов.
80
б0
40
20
0,5
1,5
2,5
3,5
4,5
время экстракции, ч
0
1
2
3
4
Рисунок 3 - Зависимость степени извлечения мирамистина из гидрогелевых матриц от времени экстракции
Установлено, что при использовании в качестве экстрагента 9б % спирта этилового в соотношении к навеске измельченной (размеры около 2х2 мм) гидрогелевой пластины 4:1 при экстракции в течение 3 часов степень извлечения мирамистина достигает 100 %.
В результате проведенных исследований разработана методика идентификации и количественного определения мира-мистина в гидрогелевых полимерных матрицах с применением ВЭЖХ:
- колонка Lichrospher 100 RP-8 размером 250х4,б мм, заполненная октилсилильным силикагелем с размером частиц 5 мкм;
- подвижная фаза: 0,5 М раствор аммония ацетата в смеси метанол - вода (93:7);
- скорость подвижной фазы - 1,0 мл/мин;
- детектирование при длине волны - 2б1 нм;
- температура колонки - 20 °С;
- объем вводимой пробы - 100 мкл;
- количество повторных инжекций - 3.
Доказана пригодность хроматографической системы: коэффициент асимметрии пика составил 1,б; эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику мира-мистина на хроматограммах раствора РСО мирамистина -3500 теоретических тарелок; относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площадей пиков мирамистина на хроматограммах раствора РСО мирамистина -не более 2,0 %. На рис. б представлена типичная хроматограмма экстракта из гидрогелевых пластин с мирамистином, полученная с использованием разработанной методики. Время удерживания пика мира-мистина совпадает со временем удержива-
ния на хроматограмме раствора РСО (рисунок 4).
Разработанная методика ВЭЖХ также рекомендована для определения подлинности мирамистина в гидрогелевых пластинах. Идентификацию действующего вещества проводят по определению време-
ни удерживания основного пика на хроматограмме мирамистина, экстрагированного из матрицы, которое должно соответствовать времени удерживания мирамистина при хроматографировании раствора РСО (рисунки 4, б).
Рисунок 4 - Типичная хроматограмма раствора РСО мирамистина (время удерживания ми-
рамистина - 4,84 мин)
Рисунок 5 - Типичная хроматограмма экстракта из гидрогелевых пластин, не содержащих
действующих веществ (раствор «плацебо»)
Рисунок б - Типичная хроматограмма экстракта из лекарственного средства «Гидрогелевые пластины мирамистина 0,05 %» (время удерживания мирамистина - 4,88 мин)
Таблица 2 - Определение линейности разработанной методики
Концентрация мирамистина в раст-воре, % от норми-руемого значения Концентрация мирамистина в растворе, мг/мл Площадь пика мирамистина в испытуемом растворе, Si
S1 S2 S3 S средн.
70 0,0б775 295,1 294,1 295,7 295,0
90 0,08710 383,3 371,5 384,3 379,7
100 0,09б78 42б,7 427,2 425,1 42б,3
110 0,10б4б 4б8,3 471.3 470,б 470,1
130 0,12581 543,9 551,3 543,9 54б,4
Коэффициент аппроксимации(не менее 0,99) 0,9987
Пересечение с осью У (не более 2,0 % отклика номинальной концентрации) 0,3
Рисунок 7 - Зависимость площадей хроматографических пиков от концентрации мира-мистина в анализируемых растворах
Методика исследована в условиях повторяемости и внутрилабораторной воспроизводимости. Величина относительного стандартного отклонения при оценке повторяемости составила 3,55, при оценке
Правильность разработанной методики подтверждена соответствующими испыта-ниями. Было выполнено 3 определения для 3-х различных концентраций мирамистина (70 %, 100 % и 130 %). Сред-
В результате проведенных исследований разработана методика идентификации и количественного определения мира-мистина в гидрогелевых полимерных матрицах, которая включена в фармакопейную статью «Гидрогелевые пластины ми-рамистина 0,05 %» и используется для контроля качества лекарственного средства. Разработанная методика позволяет определять мирамистин в низких концентрациях по биологически активной части молекулы в присутствии остаточных количеств вспомогательных компонентов гидрогелей.
В отличие от обычно применяемых для количественного определения солей четвертичных аммониевых оснований методов ацидиметрии, аргентометрии или меркуриметрии методика ВЭЖХ исключает использование дорогостоящих и токсичных реагентов, требующих последующего сбора и утилизации остатков титран-та.
внутрилабораторной воспроизводимости -3,58, что свидетельствует о прецизионности методики. Статистическая обработка полученных результатов анализа представлена в таблице 3.
ний процент восстановления находился в пределах от 102,5 до 104,5 % (таблица 4), что соответствует критерию приемлемости.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1.Разработана методика количественного определения мирамистина в гидрогелевых полимерных матрицах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии.
2.Экспериментально подобраны условия пробоподготовки для определения мира-мистина в гидрогелевых пластинах: определен экстрагент (9б % спирт этиловый), соотношение навеска гидрогелевой пла-стины:экстрагент (1:4), время экстракции (3 часа).
3.Проведена валидация разработанной методики. В результате валидации показана пригодность хроматографической системы, установлены избирательность, линейность, повторяемость, воспроизводимость и правильность методики.
4.Разработанная методика определения мирамистина включена в фармакопейную статью на лекарственное средство «Гидро-
Таблица 3 - Статистическая обработка результатов анализа (p=0,95; n=12)
Xi Хср S2 S RSD,%
0,52; 0,52; 0,53 0,52; 0,49; 0,49 0,52; 0,52; 0,54 0,53; 0,49; 0,50 0,51 0,000299 0,01730 3,47
Таблица 4 - Определение правильности методики
70 % 100 % 130 % Раствор РСО
Масса навески РСО мирамистина m (m), мг 7,32 10,18 13,33 24,77
Средняя площадь пика мирамистина на хроматограммах испытуемого раствора (раствора РСО) Si(S0) 2б0,8 359,0 4бб,0 419,9
Процент восстановления (95,0 - 105,0) 104,5 103,4 102,5
гелевые пластины мирамистина 0,05 %» (разделы «Подлинность» и «Количественное определение» ВФС РБ 1028-06).
SUMMARY
Y.G. Charnetskaya, Y.G. Belkovskaya, T.V. Trukhachova, A.I. Zhebentyaev,
P.T. Petrov HPLC METHOD DEVELOPMENT AND VALIDATION FOR MYRAMISTIN DETERMINATION IN HYDROGEL POLYMER MATRIXES
A method for identification and quantification of myramistin (myristamidopro-pyldimethylammonium chloride) in novel dosage forms based on hydrogel polymer matrixes by high-performance liquid chromatographic assay with UV-detection was developed.
The most suitable chromatographic conditions have been found. These conditions comprised the use of a 0,25 mm long and 4,6 mm id chromatographic column packed with octylsilyl silicagel for chromatography with particle diameter of 5 |im (LiChrospher 100 RP-8), 0,5 M ammonia acetate dissolved in a mixture methanol: water (93 : 7) as a mobile phase with a flow rate of 1,0 ml/min, a 100 |il loop injector and a spectrophotometer detector set at 261 nm. The procedure for sample preparation was developed and optimized.
Results of validation of the abovementioned method were in compliance with acceptance criteria for specificity (placebo effect), linearity, repeatability, intermediate precision and accuracy.
Key words: high-performance liquid chromatographic, hydrogel polymer matrixes, myramistin.
ЛИТЕРАТУРА
1. Мирамистин: сб. материалов под ред. Ю.С. Кривошеина. - М.: Инфамед, 2001. -87 с.
2. Противомикробное и ранозаживляющее
средство на основе гидрогелевой полимерной матрицы: пат. 11060 Республика Беларусь: МПК (2006) А 61L 15/16/ Петров ПТ. [и др.]; заявитель и патентообладатель РУП «Белмедпрепараты» (BY); заявл.
21.10.2005; опубл. 30.06.2007 // Афщыйны
бюл. / Нац. цэнтр штэлектуал. уласнасщ. -2008. - № 4 (б3). - С. б2.
3. Государственная фармакопея Республики Беларусь: офиц. изд-ние / РУП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; ред. Г.В. Годовальников. - Минск: МГПТК полиграфии, 200б. - Т. 1. - б5б с.
4. Противомикробная активность новых лекарственных средств на основе гидрогелевых полимерных матриц / Ю. Г. Чернец-кая [и др.] // Вестник фармации - 2009. -№ 3. - С. б3 - 75.
5. Бенько, А. Н. Новые технологии лечения травматических дефектов мягких тканей конечностей с использованием лекарственных форм на основе гидрогеля: авто-реф. дис. ...канд. мед. наук:14.00.22/ А.Н. Бенько; ГУ «Республиканский научнопрактический центр травматологии и ортопедии». - Минск, 2008. - 27 с.
6. Карман, А. Д. Обоснование комплексно-
го метода лечения рожистого воспаления: автореф. дис. .канд. мед. наук:14.00.27/ А.Д. Карман; УО «Белорусский государственный медицинский университет». -
Минск, 2008. - 20 с.
7. Кобзарь, Г.Л. Применение ионометрии для анализа декаметоксина, мирамистина, этония и их лекарственных форм: авто-реф.дис ...канд. мед. наук:15.00.02/ Г.Л. Кобзарь; Националь-ный фармацевтический университет. - Харьков, 2005. - 20 с.
8. Георгиевский В.П. Технология и стан-
дартизация лекарств. Т.2 [Электронный ресурс]. - Режим доступа:
http://www.himi.oglib.ru/bgl/82б8.html. - Дата доступа: 14.05.2010.
9. СТБ 143б-2004 Производство лекарственных средств. Валидация методик испытаний. - Мн.: Госстандарт.
10. СТБ ИСО 5725-(1-б)-2002. Часть 1-б «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
Адрес для корреспонденции:
РУП «Белмедпрепараты»,
Республика Беларусь,
220007, г. Минск, ул. Фабрициуса, 30, тел./факс 8(017)220 31 42 e-mail: [email protected] Чернецкая Ю.Г.
Поступила 02.08.2010 г.
