CC BY
21
УДК 619:615.45:636.4
РАЗРАБОТКА И АПРОБАЦИЯ СПОСОБА МИКРОКАПСУЛИРОВАНИЯ ПРОБИОТИКА ЛАКТОБИФАДОЛА
СЕИН ОБ.,
доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры хирургии и терапии, ФГБОУ ВО Курская ГСХА, тел. (4712) 53-15-55.
ЛОКТИОНОВА Е.А.,
аспирант кафедры хирургии и терапии, ФГБОУ ВО Курская ГСХА, тел. (4712) 53-15-55. ЧЕРНИКОВ Д.П.,
аспирант кафедры хирургии и терапии, ФГБОУ ВО Курская ГСХА, тел.(4712) 53-15-55.
Реферат. Описывается способ получения микрокапсулированного пробиотика лактобифа-дола и его апробация на лабораторных животных. Экспериментальная часть работы состояла из трёх этапов. Первый этап был посвящен определению оптимального варианта оболочки для микрокапсулирования лактобифадола. С этой целью было получено три варианта «пустых» микрокапсул и дана их физико-химическая характеристика. Во время второго этапа работы был получен микрокапсулированный лактобифадол с использованием оптимального варианта микрооболочки и проведена его бактериологическая оценка. Третий этап работы был посвящен апробации изготовленного препарата на кроликах. Оригинальность проведенных исследований заключается в использовании специального устройства для дозирования жидкости каплями разработанного авторами (Патент РФ №194572. - 2019 г.), которое обеспечивает одновременное формирование и дозированную подачу нескольких капель капсулированного вещества, что значительно ускоряет процесс микрокапсулирования. Полученные микрокапсулы представляли собой сферические частицы серого цвета размером от 0,55 до 0,75 мм, выход готовых микрокапсул составлял 80-85%. С использованием бактериологических исследований было установлено, что жизнеспособность пробиотических бактерий в изготовленном препарате достигала 1,5 104 клеток в 1,0 г микрокапсул. В контрольных препаратах она была ниже и находилась в пределах 1,5 102 - 1,5 103 в 1,0 г микрокапсул. Апробация полученного препарата показала, что он не оказывает отрицательного влияния на организм подопытных животных. Общее состояние, клинические и гематологические параметры у кроликов после скармливания препарата находились в пределах физиологических границ. Препарат рекомендуется к использованию в практике животноводства и ветеринарной медицине.
Ключевые слова: альгинат натрия, бактериологические исследования, гематологические показатели, кролики, кровь, лактобифадол, лейкограмма, пробиотик, фосфатный буфер.
DEVELOPMENT AND APPROBATION OF THE METHOD OF MICROCAPSULATION PROBIOTICS OF LACTOBIFADOL
SEIN O.B.,
Doctor of Biological Sciences, Professor, Professor of the Department of Surgery and Therapy, FSBEI HE Kursk State Agricultural Academy, tel. (4712) 53-15-55.
LOKTIONOVA E.A.,
Postgraduate student of the Department of Surgery and Therapy, Kursk State Agricultural Academy, tel. (4712) 53-15-55.
CHERNIKOV DP.,
Postgraduate student of the Department of Surgery and Therapy, Kursk State Agricultural Academy, tel. (4712) 53-15-55.
Essay. A method for obtaining a microencapsulated probiotic lactobifa-dol and its testing on laboratory animals is described. The experimental part of the work consisted of two stages. The first stage was devoted to determining the optimal variant of the shell for microencapsulation of lactobifadol. For this purpose, three versions of "empty" microcapsules were obtained and their physicochemical characteristics were given. During the second stage of the work, microencapsulated lactobifadol was obtained using the optimal version of the microshell and its bacteriological evaluation was carried out. The originality of the conducted research lies in the use of a special device for dispensing liquid with drops, developed by the authors (RF Patent No. 194572. - 2019), which ensures the simultaneous formation and dosed supply of several drops of the encapsulated substance, which significantly speeds up the process of microencapsulation. The resulting microcapsules were spherical gray particles with a size of 0.55 to 0.75 mm, the yield of finished microcapsules was 80-85%. Using bacteriological studies, it was found that the viability of probiotic bacteria in the prepared preparation reached 1.5 x 104 cells in 1.0 g of microcapsules. In the control preparations, it was lower and was in the range of 1.5 x 102 - 1.5 x 103 in 1.0 g of microcapsules. The approbation of the obtained preparation showed that it does not have a negative effect on the organism of experimental animals. The general condition, clinical and hematological parameters in rabbits after feeding the drug were within the physiological limits. The drug is recommended for use in animal husbandry and veterinary medicine.
Keywords: sodium alginate, bacteriological studies, hematological parameters, rabbits, blood, lactobifadol, leukogram, probiotic, phosphate buffer.
Введение. Как известно в отличие от многих стран Евросоюза в нашей стране разрешено применение кормовых антибиотиков в качестве добавок к рационам с целью стимуляции роста, повышения продуктивности и сохранности сельскохозяйственных животных. С одной стороны применение кормовых антибиотиков решает ряд важных проблем в животноводстве: подавляет сопутствующую микрофлору, предотвращает развитие желудочно-кишечных заболеваний и повышает продуктивность. Применение кормовых антибиотиков значительно уменьшает себестоимость животноводческой продукции. С другой стороны применение кормовых антибиотиков в животноводстве часто приводит к негативным последствиям. Это связано с тем, что после длительного их применения в желудочно-кишечном тракте вырабатывается антибиотикоустойчивая микрофлора, которая подавляет численность индигенной микрофлоры, что приводит к дисбактериозу, нарушению метаболизма, снижению естественной резистентности. При этом необходимо учесть тот факт, что антибиотики способны накапливаться в продуктах животноводства, с которыми они попадают в организм человека.
В последние годы в качестве альтернативы кормовым антибиотикам в животноводстве активно применяются пробиотики, являющиеся экологически безопасными препаратами. Основу пробиотиков составляют живые микроорганизмы: бифидобактерии, лактобактерии, эше-рихии, энтерококки. В состав пробиотических препаратов могут входить микроорганизмы, не
относящиеся к индигенной микрофлоре, но поддерживающие ее размножение и жизнедеятельность. К этой микрофлоре относятся дрожжи, спорообразующие бактерии рода Bacillus и
др. [1, 2, 3].
Использование пробиотиков при выращивании молодняка крупного рогатого скота вполне оправдано. Пробиотики способствуют развитию индигенной микрофлоры в желудочно-кишечном тракте, которая размножаясь и прикрепляясь к эпителиальным клеткам кишечника предотвращает размножение патогенных микроорганизмов, поступающих из внешней среды. Помимо этого нормофлора обеззараживает токсины, участвует в синтезе аминокислот, витаминов, ферментов, что активизирует обмен веществ [4, 5, 6].
Учитывая роль пробиотиков в организме животных, учеными разрабатываются, апробируются и внедряются новые пробиотические препараты в практику животноводства. В частности, получены микрокапсулированные про-биотики, которые покрыты микрокапсулой, предотвращающей негативное воздействие как внешней, так и внутренней среды на жизнедеятельность пробиотических бактерий [7, 8, 9]. Микрокапсулированные пробиотики защищены от кислой среды желудка и практически без потерь достигают кишечника, в котором капсулы разрушаются и пробиотические бактерии оказывают свое биологическое действие. В этой связи применение микрокапсулированных про-биотиков является весьма перспективным на-
правлением в животноводстве и ветеринарной медицине.
Цель и задачи исследования. Исходя из вышеизложенного, целью наших исследований являлась разработка нового способа микрокап-сулирования пробиотика лактобифадола и его апробация на лабораторных животных.
Материал и методика исследований. Используемый в качестве объекта микрокапсули-рования пробиотик лактобифадол в настоящее время нашел широкое применение в практике животноводства и ветеринарии.
Лактобифадол включает в свой состав высушенную массу молочнокислых бактерий Lac-tobacillus acidophilus (ЛГ 1 - ДЕП - ВГНКИ) и бифидобактерии Bifidobacterium adolescentis (В1 - ДЕП - ВГНКИ). При этом в одном грамме препарата содержится не менее 1,0 106 КОЕ живых клеток молочнокислых бактерий и 8,010' КОЕ живых клеток бифидобактерий.
Согласно наставлению, прилагаемому к препарату, лактобифадол помимо лакто - и би-фидобактерий, включает в свой состав комплекс незаменимых и заменимых аминокислот, органические кислоты, витамины, микроэлементы и другие биологически активные вещества. Лак-тобифадол не содержит генетически модифицированные штаммы бактерий. Противопоказания по его применению животным отсутствуют. Убой животных и использование продукции на фоне использования лактобифадола ограничений не имеет.
По данным исследователей [10, 11] после скармливания молодняку лактобифадол повышает естественную резистентность и профилак-тирует кишечные инфекции, способствует ускорению роста и увеличению приростов массы тела, повышает устойчивость к технологическим стрессам. Таким образом пробиотик лак-
тобифадол имеет все основания для его использования в качестве объекта микрокапсулирова-ния.
Экспериментальная часть работы состояла из трех этапов и проводилась по схеме представленной на рисунке 1.
Апробацию полученного микрокапсулиро-ванного лактобифадола проводили на кроликах породы советская шиншилла в условиях фермерского хозяйства «ИП КФХ Черников П. А.». Было сформировано три группы кроликов-аналогов по 7 голов в каждой. Животные всех групп находились в одинаковых условиях и получали полноценный рацион. Кролики 1 группы являлись контрольными и препарат не получали. Кроликам 2 (опытной) группы скармливали индивидуально с хлебным мякишем немикро-капсулированный лактобифадол в дозе 2,0 г на одно животное один раз в день в течение 15 дней подряд. Кроликам 3 (опытной) группы скармливали микрокапсулированный лактоби-фадол в дозе 2,0 г на одно животное по той же схеме, что и животным 2 опытной группы. Во время эксперимента за подопытными животными проводили наблюдение, учитывали поведенческие реакции и аппетит, регулярно измеряли температуру тела. При постановке на эксперимент и на 15 день эксперимента у кроликов всех групп брали кровь, в которой определяли общие гематологические показатели с использованием гематологического анализатора Abacus junior vet и общепринятых методик [12].
Полученные в ходе проведения экспериментов данные подвергались биометрической обработке (П.Ф. Рокицкий, 1973). Степень достоверности различий определяли с использованием критерия Стьюдента. Обработку цифрового материала проводили на ПК с приложением программ «Microsoft Excel».
1 этап работы 2 этап работы 3 этап работы
Рисунок 1 - Общая схема проведения экспериментов по получению и апробации микрокап-сулированного лактобифадола
Результаты исследований. В ходе выполнения экспериментов было использовано устройство для дозирования жидких веществ, разработанной нами конструкции (Патент РФ №194572. - 2019 г., авт. О.Б. Сеин и др.). Данное устройство (рисунок 2) включает корпус 1 с поршнем 2 в виде шприца и капельниц 3, которые вмонтированы в головную часть шприца по окружности вокруг отверстия ко-нюледержателя. При этом конюледержатель заменен на приспособление 4 имеющее патрубок 5 с резьбой, на которую навинчивается пробка-заглушка 6. К корпусу шприца и поршню крепятся две пружины 7, обеспечивающие плавное поступательное движение поршня при надавливании на него. Перед использованием устройство помещается в штатив и в него насасывается жидкость. Для этого скручивается пробка-заглушка с патрубка и с помощью поршня жидкость набирается внутрь устройства. После заполнения устройства жидкостью патрубок закрывается пробкой-заглушкой. Для дозирования жидкости в виде капель надавливают на поршень, который под действием пружин, плавно перемещается в корпусе устройства и дозируемая жидкость в виде капель выходит из капельниц. При этом наличие восьми капельниц значительно ускоряет процесс каплеобразования. Разработанное устройство обеспечивает одно-
временное формирование и дозированную подачу нескольких капель жидкого вещества.
Во время выполнения первого этапа работы было проведено три эксперимента. При проведении первого эксперимента получали 2 %-ный раствор альгината натрия при температуре 50° С с использованием водяной бани. Полученный раствор вносили с высоты 20-25 см в 0,2 М раствор кальция хлорида, который находился в состоянии постоянного перемешивания с использованием магнитной мешалки. С этой целью использовали устройство для дозирования жидкости каплями, которое позволяло значительно ускорить процесс капле-образования и формирования микрокапсул. После 30-минутного перемешивания, сформировавшиеся микрокапсулы оставляли еще на 60 минут в 0,4%-ном растворе хитозана для затвердевания оболочки. Затем микрокапсулы отделяли от раствора путем фильтрации на фильтре Шотта (диаметр пор 16 мкм) и высушивали при 30-35° С под вакуумом. Полученные микрокапсулы имели сферическую форму, светло-серую окраску, плотные при сдавливании пальцами, поверхность гладкая, средний диаметр капсул составлял 2,0±0,30 мм. После высушивания микрокапсулы приобретали светло-желтый цвет, размеры их достигали 0,5-0,7 мм.
б
Рисунок 2 - Устройство для дозирования жидких веществ (обозначение по тексту)
а - общий вид устройства; б - схема устройства
а
При проведении второго эксперимента в 50 мл 2%-го альгината натрия вносили 0,1 г активированного угля и перемешивали в магнитной мешалке до однородного состояния. Полученную суспензию с использованием устройства дозирования жидкости вносили в 0,2 М раствор хлорида кальция, который находился в состоянии постоянного перемешивания. Образовавшиеся микрокапсулы отделяли от раствора путем фильтрации на фильтре Шотта, помещали в 0,4%-ный раствор хитозана на 60 минут и высушивали при температуре 30-35°С под вакуумом. Полимерные микрокапсулы имели неправильную сферическую форму, светло-черную окраску, мягкую структуру, легко раздавливались при сдавливании пальцами, поверхность гладкая, средний диаметр капсул составлял 2,1±0,25 мм. После высушивания их структура становилась твердой и хрупкой, размеры достигали 1,1-1,7 мм.
Для проведения третьего эксперимента готовили 50 мл 2%-го альгината натрия. При постоянном перемешивании полученного раствора в магнитной мешалке, вносили в него 30 %-ный водный раствор танина в количестве 60 мл с использованием капельницы со скоростью 2,0 мл/мин. Перемешивание продолжали в течение 30 минут, после чего сформировавшиеся микрокапсулы отделяли путем фильтрации на фильтре Шотта и высушивали при 30-35° С. Полученные микрокапсулы представляли собой гранулы округлой формы, матового цвета, поверхность гладкая, легко разрушается при небольшом сдавливании, средний диаметр капсул составлял 2,0±0,20 мм. После высушивания микрокапсулы уменьшались в размере до 0,6-0,9 мм, при этом окраска микрокапсул приобретала светло-серый цвет, структура была твердой и хрупкой.
Анализ полученных результатов показал, что наиболее оптимальным вариантом являлся первый эксперимент, в котором использовали в качестве оболочки альгинат натрия и в качестве стабилизатора оболочек кальция хлорид. В этом случае микрокапсулы имели упругую структуру, при сдавливании не повреждались и не имели микротрещин.
При проведении второго этапа работы, с учетом результатов предыдущих серий экспериментов, был получен микрокапсулированный лактобифадол по схеме, представленной на рисунке 3. Микрокапсулированный препарат представлял собой микрокапсулы сферической формы размером 0,55-0,75 мм.
Полученный микрокапсулированный лакто-бифадол (рисунок 4) по разработанному нами способу был подвергнут бактериологическому анализу. В качестве контроля использовали препараты микрокапсулированного лактобифадола,
полученные с использованием способов представленных в патентах РФ №2545724 и №2570379 (А.А. Кролевец, О.Б. Сеин, И.А. Бога-чев. 2015).
Микрокапсулированные препараты помещали в фосфатный буфер при рН 7,6-7,8 с последующим титрованием культуры и высевом про-биотических бактерий на агарозованную среду. При этом, в качестве контроля использовали стандартную культуру в аналогичных разведениях.
Бактериологические исследования показали, что жизнеспособность пробиотических бактерий в изготовленном нами препарате составила 1,5 • 104 клеток в 1,0 г микрокапсул. В контрольных препаратах она была значительно ниже и соответственно составила - 1,5 102 и 1,5 103 в 1,0 г микрокапсул.
Результаты третьего этапа работы показали, что после скармливания микрокапсулиро-ванного лактобифадола общие состояние и аппетит у всех животных были хорошими, поведение активное, реакции на внешние раздражители адекватными, температура тела в пределах физиологических границ (38,8-39,0 °С).
В ходе исследования общих гематологических показателей (таблица 1) было установлено, что перед скармливанием препаратов между изучаемыми показателями у животных всех групп существенных различий не отмечалось (р>0,05) и они находились в пределах средних физиологических величин. Однако, на 15 день эксперимента у кроликов 2 и 3 опытных групп регистрировалось повышение гематокринной величины, эритроцитов и гемоглобина. При этом, у кроликов 3 опытной группы повышение эритроцитов и гемоглобина и повышение эритроцитов у кроликов 2 опытной группы, имело статистически достоверный характер (р<0,05) по сравнению с 1 контрольной группой и фоновыми показателями.
Со стороны лейкограммы (таблица 2) отмечалось достоверное (р<0,05) уменьшение базо-филов и эозинофилов в крови кроликов получавших немикрокапсулированный лактобифа-дол. У кроликов получавших микрокапсулиро-ванный препарат содержание данных клеток крови находилось на одинаковом уровне. При этом у животных 3 группы регистрировалось достоверное уменьшение (р<0,05) палочкоядер-ных нейтрофилов и моноцитов по сравнению с показателями, полученными до начала эксперимента.
Содержание общего количества лейкоцитов у кроликов, получавших препараты, повысилось, однако данное увеличение было несущественным (р>0,05).
5,0 г пробиотика лактобифадола вносят в 50,0 мл очищенной воды и перемешивают до однородного состояния в магнитной мешалке
С использованием устройства-дозатора с высоты 20 см полученную смесь диспергируют в 300 мл раствора кальция хлорида
Сформировавшиеся микрокапсулы отделяют фильтрованием
и помещают в 0,4-0,5%-ный раствор хитозана на 50-60 мин
Мирокапсулы отделяют на фильтре Шотта, промывают очищенной водой и высушивают при 30-35° С
Процесс диспергирования проводят при постоянном перемешивании в течение 20-25 мин
Полученную суспензию смешивают с 50,0 мл 4%-ного раствора альгината натрия
1
Полученные микрокапсулы представляют собой сферические частицы серо-желтого цвета размером от 0,55 до 0,75 мм. Выход готовых микрокапсул - 80-85%
Рисунок 3 - Схема получения микрокапсулированного лактобифадола
Рисунок 4 - Общий вид микрокапсул лактобифадола полученных с использованием разработанного способа: а - непосредственно после процесса микрокапсулирования; б - после высушивания
Таблица 1 - Общие гематологические показатели у кроликов, получавших микрокапсулированный и немикрокапсулированный лактобифадол_
Показатели Время исследования
До начала эксперимента На 15 день эксперимента
1 контрольная группа
СОЭ, мм/час 1,7±0,18 1,8±0,21
Гематокрит, % 37,5±1,4 37,2±1,9
Эритроциты, *1012/л 6,20±0,19 6,14±0,24
Лейкоциты, *109/л 7,23±0,21 7,35±0,20
Гемоглобин, г/л 106,4±4,0 102±3,8
2 опытная группа (немикрокапсулированный лактобифадол)
СОЭ, мм/час 1,5±0,28 1,7±0,21
Гематокрит, % 37,6±1,7 38,9±1,5
Эритроциты, *1012/л 6,11±0,12 6,89±0,10*-
Лейкоциты, *109/л 7,04±0,24 7,10±0,18
Гемоглобин, г/л 108,5±3,5 111,8±4,0
3 опытная группа (микрокапсулированный лактобифадол)
СОЭ, мм/час 1,6±0,20 2,0±0,19
Гематокрит, % 37,3±1,5 39,7±1,8
Эритроциты, *1012/л 6,14±0,10 7,05±0,11**
Лейкоциты, *109/л 7,34±0,24 7,46±0,20
Гемоглобин, г/л 110,4±3,0 118,0±3,1*«
Примечание: * - при р<0,05 по сравнению с соответствующими показателями 1 контрольной группы; • - при р<0,05 по сравнению с показателями полученными до начала эксперимента.
Таблица 2 - Содержание отдельных форм лейкоцитов у кроликов, получавших микрокапсулированный и немикрокапсулированный лактобифадол_
Показатели, % Норма Время исследования
До начала эксперимента На 15 день эксперимента
1 контрольная группа
Б 0 - 2 2,0±0,09 2,4±0,05*
Э 1 - 3 2,4±0,23 3,0±0,18
П 5 - 9 8,0±0,48 7,8±0,54
С 33 - 39 37,6±2,20 36,8±2,74
Л 43 - 62 47,4±3,07 47,0±3,14
Мон. 1 - 3 2,6±0,04 3,0±0,09*
2 опытная группа (немикрокапсулированный лактобш эадол)
Б 0 - 2 3,0±0,07* 2,0±0,02*
Э 1 - 3 3,0±0,28 2,0±0,09*
П 5 - 9 7,2±0,42 6,6±0,59
С 33 - 39 39,6±2,21 38,0±2,05
Л 43 - 62 44,2±3,04 48,4±3,11
Мон. 1 - 3 3,0±0,02* 3,0±0,01
3 опытная группа (микрокапсулированный лактобифадол)
Б 0 - 2 2,0±0,08 2,0±0,04*
Э 1 - 3 2,0±0,18 2,0±0,16*
П 5 - 9 7,6±0,19 6,0±0,65*
С 33 - 39 38,4±2,04 37,4±2,00
Л 43 - 62 47,0±3,05 50,0±3,04
Мон. 1 - 3 3,0±0,05* 2,6±0,08*
Примечание: * - при р<0,05 по сравнению с соответствующими показателями 1 контрольной группы; • - при р<0,05 по сравнению с показателями полученными до начала эксперимента.
Выявленные изменения со стороны изучаемых компонентов крови не выходили за границы физиологических норм, что в определенной степени, свидетельствует о безвредности изготовленного микрокапсулированного препарата.
Заключение. Разработанный нами способ получения микрокапсулированного лактоби-фадола не сложный в своем технологическом
исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и дефицитных реактивов. Полученный препарат не оказывает отрицательного влияния на организм кроликов, что подтверждает его безвредность. Микрокапсулирован-ный лактобифадол можно рекомендовать к использованию в практике животноводства и ветеринарной медицины.
Список использованных источников
1. Пробиотики и пребиотики в промышленном свиноводстве и птицеводстве / Д.С. Учасов, В.С. Буяров, Н.И. Ярован и др. - Орел: Изд-во Орел ГАУ, 2014. -163 с.
2. Тараканов Б.В. Механизм действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных // Ветеринария. - 2000. - №1. - С.47-54.
3. Тараканов Б.В. Эффективность целлобактерина при выращивании телят / Молочное и мясное скотоводство. - 200о. - №4. - С.14-16.
4. Панин А.Н., Малик Н.И., Илаев О.С. Пробиотики в животноводстве - состояние и перспективы // Ветеринария. - 2012. - №3. - С.3-8.
5. Малик Н.И., Панин А.Н. Ветеринарные пробиотические препараты // Ветеринария. -2001. - №1. - С.46-51.
6. Использование нового пробиотика энзимспорина при выращивании молодняка свиней / Р.В. Некрасов, М.Г. Чабаев, И.М. Магомедалиев. и др. // Зоотехния. - 2016. - №10. - С.13-17.
7. Коррекция физиологического статуса у животных с использованием нанокапсулирован-ных препаратов / О.Б. Сеин, А.А. Кролевец, В.А. Челноков, К.А. Толкачев // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №3. - С.64-66.
8. Рост и развитие молодняка крупного рогатого скота при скармливании нанокапсулиро-ванного пробиотика / О.Б. Сеин, А.А. Кролевец, В.А. Челноков, К.А. Толкачев // В кн.: Актуальные проблемы агропромышленного производства: материалы Международной научно-практической конференции. - Курск, 2013. - С.176-178.
9. Lee K.I., Heo T.R. Survival of Bifidobacterium longum immobilized in calcium alginate beads in simulated gastric juices and bile salt solution / Appl. Envizion. Microbiol. - 2000. - V.66. - P.869-973.
10. Данилевская Н.В., Кудинкин А.С. Влияние пробиотика лактобифадола на продуктивность поросят мясных пород на подсосе и доращивании // Ветеринария и кормление. - 2005. -№3. - С.16-17.
11. Суботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифадола (бифацидобактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность: автореф. дисс. ... докт. вет. наук: 16.00.03. - М., 1999. - 41 с.
12. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание / И.П. Кон-драхин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов и др. - М.: Аропромиздат, 1985. - 287 с.
13. Патент РФ №194572. - 2019 г. Устройство для дозирования жидкости каплями. Авт. О.Б. Сеин, Д.О. Сеин, Д.П. Черников, Е.А. Локтионова.
14. Патент РФ №2545742. - 2013 г. Способ инкапсуляции лактобифадола. Авт. А.А. Кроле-вец, О.Б. Сеин, И.А. Богачев.
15. Патент РФ №2570379. - 2014 г. Способ инкапсуляции лактобифадола. Авт. А.А. Кроле-вец, О.Б. Сеин, И.А. Богачев.
16. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. - Минск: Высшая школа, 1973. - 320 с.
Spisok ispoFzovanny'x istochnikov
1. Probiotiki i prebiotiki v promy'shlennom svinovodstve i pticevodstve / D.S. Uchasov, V.S. Buyarov, N.I. Yarovan i dr. - Orel: Izd-vo Orel GAU, 2014. -163 s.
2. Tarakanov B.V. Mexanizm dejstviya probiotikov na mikrofloru pishhevaritel'nogo trakta i organizm zhivotny'x // Veterinariya. - 2000. - №1. - S.47-54.
3. Tarakanov B.V. Effektivnosf cellobakterina pri vy'rashhivanii telyat / Molochnoe i myasnoe skotovodstvo. - 2000. - №4. - S.14-16.
4. Panin A.N., Malik N.I., Ilaev O.S. Probiotiki v zhivotnovodstve - sostoyanie i perspektivy' // Veterinariya. - 2012. - №3. - S.3-8.
5. Malik N.I., Panin A.N. Veterinarny'e probioticheskie preparaty' // Veterinariya. - 2001. - №1. - S.46-51.
6. Ispol'zovanie novogo probiotika e'nzimsporina pri vy'rashhivanii molodnyaka svinej / R.V. Nekrasov, M.G. Chabaev, I.M. Magomedaliev. i dr. // Zootexniya. - 2016. - №10. - S.13-17.
7. Korrekciya fiziologicheskogo statusa u zhivotny'x s ispol'zovaniem nanokapsulirovanny'x preparatov / O.B. Sein, A.A. Krolevecz, V.A. Chelnokov, K.A. Tolkachev // Vestnik Kurskoj gosudarstvennoj sel'skoxozyajstvennoj akademii. - 2013. - №3. - S.64-66.
8. Rost i razvitie molodnyaka krupnogo rogatogo skota pri skarmlivanii nanokapsuliro-vannogo probiotika / O.B. Sein, A.A. Krolevecz, V.A. Chelnokov, K.A. Tolkachev // V kn.: Aktual'ny'e problemy' agropromy'shlennogo proizvodstva: materialy' Mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii. - Kursk, 2013. - S.176-178.
9. Lee K.I., Heo T.R. Survival of Bifidobacterium longum immobilized in calcium alginate beads in simulated gastric juices and bile salt solution / Appl. Envizion. Microbiol. - 2000. - V.66. - P.869-973.
10. Danilevskaya N.V., Kudinkin A.S. Vliyanie probiotika laktobifadola na produktiv-nost' porosyat myasny'x porod na podsose i dorashhivanii // Veterinariya i kormlenie. - 2005. - №3. - S.16-17.
11. Subotin V.V. Biotexnologiya probiotika laktobifadola (bifacidobakterina) i ego lechebno-profilakticheskaya effektivnosf: avtoref. diss. ... dokt. vet. nauk: 16.00.03. - M., 1999. - 41 s.
12. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika v veterinarii: Spravochnoe izdanie / I.P. Kondraxin, N.V. Kurilov, A.G. Malaxov i dr. - M.: Aropromizdat, 1985. - 287 s.
13. Patent RF №194572. - 2019 g. Ustrojstvo dlya dozirovaniya zhidkosti kaplyami. Avt. O.B. Sein, D.O. Sein, D.P. Chernikov, E.A. Loktionova.
14. Patent RF №2545742. - 2013 g. Sposob inkapsulyacii laktobifadola. Avt. A.A. Krolevecz, O.B. Sein, I.A. Bogachev.
15. Patent RF №2570379. - 2014 g. Sposob inkapsulyacii laktobifadola. Avt. A.A. Krolevecz, O.B. Sein, I.A. Bogachev.
16. Rokiczkij P.F. Biologicheskaya statistika. - Minsk: Vy'sshaya shkola, 1973. - 320 s.
