CC BY
19
MICROBIOLOGY
© коллектив авторов, 2019
СавиноваТ. А.1, Бочарова Ю. А.1, Лазарева А. в.1, Чеботарь И. в.2, Маянский Н. А.3
РАЗНООБРАЗИЕ ИНТЕГРОНОВ У ßM^-НЕСУЩИХ КАРБАПЕНЕМРЕЗИСТЕНТНЫХ КЛИНИЧЕСКИХ ИЗОЛЯТОВ PSEUDOMONAS AERUGINOSA
1ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр здоровья детей Минздрава РФ», 119296, Москва, Россия;
2ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора», 111123, Москва, Россия; 3Российская детская клиническая больница ФГБОУ во РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, 119571, Москва, Россия
Рост распространённости продуцента металло^-лактамаз (МБЛ) Pseudomonas aeruginosa в популяциях внутриболь-ничнъа патогенов связан с клональным распространением и/или горизонтальным переносом МБЛ в составе мобильных генетических элементов, в том числе интегронов.
Цель: охарактеризовать генетическое окружение гена, кодирующего бета-лактамазу VIM-2, в популяции карбапенем-резистентнъх (Карба-Р) клинических изолятов P. aeruginosa. Детекцию интегронов класса 1 проводили методом ПЦР. Типирование интегронов, несущих bla^-генную кассету, осуществляли с помощью анализа полиморфизма длин рестрик-ционнъо: фрагментов (RFLP, PCR-restriction fragment length polymorphism) с последующим секвенированием вариабельных регионов интегрона. В популяции P. aeruginosa выявлено пять типов bla j-несущих интегронов: ST654-изоляты, составлявшие более 50% Карба-Р популяции, являлись носителями In56; ST235-изоляты содержали In559 (26°% Карба-Р изолятов); STlll-изоляты (19% Карба-Р изолятов) характеризовались Ы59-подобной структурой интегрона; по одному ST235-изоляту являлись носителями In59 и In249. За исключением In56, несущего единственную генную кассету blaVlM/_2, выявленные типы интегронов характеризовались наличием дополнительным генов резистентности к триметоприму и/ или аминогликозидам. В исследованной популяции P. aeruginosa не выявлено новых типов интегронов. Наблюдаемая корреляция типа интегрона с определёнными STможет свидетельствовать о преимущественной диссеминации клинически значимым детерминант резистентности, связанной с клональным распространением эпидемических линий ST111, ST654 и ST235. Особенности вариабельным участков интегронов могут быть использованы для эпидемиологической характеристики клинических изолятов P. aeruginosa.
Ключевые слова: Pseudomonas aeruginosa; карбапенемрезистентность; металло^-лактамазы; VIM-2; интегроны.
Для цитирования: Савинова Т. А., БочароваЮ. А., ЛазареваА. В., Чеботарь И. В., МаянскийН. А. Разнообразие интегронов у blapj^-несущих карбапенемрезистентным клинических изолятов Pseudomonas aeruginosa. Клиническая лабораторая диагностика. 2019; 64 (8): 497-502. DOI: http://dx.doi.org/WJ882im69-2084-2019-64-8-497-502 Savinova T.A.1, Bocharova Yu.A.1, Lazareva A.V.1, Chebotar I.V.2, Mayanskiy N.A.3
INTEGRON DIVERSITY IN BLAmi -CARRYING CARBAPENEM-RESISTANT CLINICAL PSEUDOMONAS AERUGINOSA ISOLATES
National Medical Research Center for Children's Health Federal state autonomous institution of the Russian Federation Ministry of Health, Russia, 119296, Moscow, Russia;
2Central Research Institute of Epidemiology of the Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-being Surveillance, 111123, Moscow, Russia;
3Russian Children's Clinical Hospital, Pirogov Russian national Research Medical University of the Russian Federation Ministry of Health, 119571, Moscow, Russia
The growing prevalence of metallo-ß-lactamase (MBL)-producing Pseudomonas aeruginosa in nosocomial pathogen populations has been attributed to their clonal .spread, and/or horizontal transfer of MBL determinants in mobile genetic elements, including integrons. To characterize the genetic background of the beta-lactamase VIM-2 encoding gene in the population of carbapenem-resistant (Carba-R) P. aeruginosa clinical isolates.The detection of class 1 integrons was performed by PCR. Typing of the class 1 integrons containing the blaVIM gene cassette was performed by the PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) approach followed by sequencing of variable regions of class 1 integrons. Five types of the blanM_2-carrying integrons were identified: ST654-isolates accounting for more than 50% of the Carba-R population harbored In56; ST235-isolates contained In559 (26% Carba-R isolates); ST111-isolates (19% Carba-R isolates) were characterized by carrying In59-like integron; two ST235-isolates harboredIn59 and In249 each. Except In56, carrying the only blanMt2-gene cassette, all other identified integron types harbored the genes of resistance to trimethoprim and/or aminoglycosides. No new types of integrons were identified in the P. aeruginosa clinical isolates. The observed correlation of the integron type with specific STs indicates a clonal dissemination of significant resistance determinant producers - ST111, ST654 and ST235 epidemic lines. The features of the integron variable regions can be used for the epidemiological characterization of clinical P. aeruginosa isolates.
Keywords: Pseudomonas aeruginosa; resistance to carbapenems; metallo-ß-lactamase; VIM-2; integrons.
For citation: Savinova T. A., Bocharova Yu. A., Lazareva A. V., Chebotar I. V., Mayanskiy N. A. Integron diversity in blayjm -carrying carbapenem-resistant clinical Pseudomonas aeruginosa isolates. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2019; 64 (8): 497-502 (in Russ.) DOI: http://dx.doi.org/10.18821m69-2084-2019-64-8-497-502. For correspondence: Savinova T.A., Ph.D., Senior Research Fellow, Molecular microbiology Laboratory; e-mail: taniasavinova@gmail.com
Для корреспонденции: Савинова Татьяна Александровна, канд. биол. наук, ст.науч. сотр. лаб. мол.микробиологии; е-mail: taniasavinova@ gmail.com
МИКРОБИОЛОГИЯ
Information about authors:
Savinova T. A., https://orcid.org/0000-0002-5484-5098 Bocharova Yu.A., http://orcid.org/0000-0003-0197-0255 Lazareva A.V., https://orcid.org/0000-0001-7149-5387 Chebotar I.V., https://orcid.org/0000-0002-6691-2171 Mayanskiy N.A., https://orcid.org/0000-0001-8077-5313
Acknowledgment. The study was funded by Russian Foundation for Basic Research (project no. 18-015-00301). Conflict of interest. The authors declare no conflict of interests.
Received 16.05.2019 Accepted 25.06.2019
Введение. Pseudomonas aeruginosa, один из наиболее значимых оппортунистических патогенов, обладает природной резистентностью к широкому спектру антимикробных препаратов [1, 2]. Многие штаммы этого возбудителя могут быстро приобретать резистентность к таким стандартным противосинегнойным антибиотикам, как карбапенемы и аминогликозиды, нередко сохраняя чувствительность только к колистину [3-5].
Хотя резистентность к карбапенемам у P aeruginosa в основном связана с мутациями, приводящими к потере или инактивации порина OprD, или гиперэкспрессией эффлюксных систем [6], высокие уровни резистентности обычно бывают опосредованы продукцией карба-пенемаз, в первую очередь металло^-лактамаз (МБЛ) [7]. Инфекции, вызванные МБЛ-продуцирующими изо-лятами P. aeruginosa, связаны с более высокой смертностью и с более высокой частотой инвазивных заболеваний по сравнению с инфекциями, вызванными МБЛ-негативными изолятами [8-10].
Носительство МБЛ обычно коррелирует с определёнными генетическими линиями P. aeruginosa, клонами высокого эпидемического риска, которые обладают способностью приобретать и/или экспрессировать гены резистентности [11]. К международным клонам, обладающим множественной лекарственной устойчивостью, относятся сиквенс-типы (ST) 111, 175, 235 и др. [11]. Наиболее распространёнными МБЛ в мире являются ферменты типа VIM и IMP, гены которых локализованы на интегронах класса 1 [7,12]. Кроме генов МБЛ,
интегроны этого класса часто несут детерминанты резистентности к другим классам антибиотиков, в том числе к аминогликозидам и триметоприму [7]. Интегроны не являются самораспространяемыми мобильными генетическими элементами (МГЭ), они активно переносятся за счёт транспозонов, которые, в свою очередь, могут располагаться в плазмидах или хромосомах.
Мы описали генетическую структуру популяции карбапенемрезистентных (Карба-Р) клинических изо-лятов P. aeruginosa, выделенных в стационарах Москвы в 2012-2016 гг. [13]. Эта структура отличается доминированием небольшого числа международных клонов на фоне высокого разнообразия неродственных сиквенс-типов. Ведущим механизмом резистентности к карба-пенемам у исследованных изолятов является продукция карбапенемазы VIM-2 [13]. В настоящем исследовании мы провели анализ генетического окружения гена bla-и его взаимосвязи с клональными линиями, домини-
VM-2 '
рующими в популяции Карба-Р P aeruginosa.
Материал и методы. Карба-Р клинические изоляты P. aeruginosa, продуцирующие карбапенемазу VIM-2, выделены в трёх стационарах г. Москвы в период с 2012 по 2017 г. Для характеристики клональной структуры популяции использован метод мультилокусного сиквенс-типирования (МЛСТ) (https://pubmlst.org/paeruginosa/).
Амплификацию и секвенирование blaVM проводили с использованием ранее описанных праймеров и условий [14]. Присутствие интегрона класса 1 определяли с использованием праймеров, специфических для 5' и
Праймеры для детекции и определения генетической структуры Wa -несущих интегронов
Название Последовательность праймера (5'—3') Цель Ссылка
праймера
5'CS GCCTGTTCGGTTCGTAAGCT Амплификация региона между 5'CS и Ь1апи для детекции интегрона, RFLP и секвенирования [15]
tniC CGATCTCTGCGAAGAACTCG Амплификация региона между Ь1ауи[ и МС для детекции интегрона, RFLP и секвенирования [15]
VIM-F AGTGGTGAGTATCCGACAG Амплификация региона между Ыауи и МС или между Ь1а-У1М и sulI для детекции интегрона, RFLP и секвенирования [16]
VIM-R ATGAAAGTGCGTGGAGAC Амплификация региона между 5'CS и Ь1апи или между М1 и Ь1аУ1М для детекции интегрона, RFLP и секвенирования [16]
INT-FN ATGCCCGTTCCATACAGAAGCT Амплификация региона между М1 и Ь1аУ1М для детекции интегрона, RFLP и секвенирования Данное исследование
Sul-RN AACGCCGACTTCAGCTTTTGAA Амплификация региона между Ь1аУ1М и suU для детекции интегрона, RFLP и секвенирования Данное исследование
VIM2-For CGCTCAGTCGTTGAGTAG Секвенирование региона между Ь1а и sulI или МС [17]
VIM2-Rev CTTACTCAAAAGTTTGAACAT Секвенирование региона между М1 или 5'CS и Ь1апи [17]
INT-For CTTCYARAAAACCGAGGATGC Секвенирование региона между М1 и Ь1ауи[ [17]
QacF ATCGCAATAGTTGGCGAAGT Секвенирование региона между qacEK1 и [17]
QacR CGGATGTTGCGATTACTTCG Секвенирование региона между Ь1ауии и qacEK1 [18]
MICROBIOLOGY
Рис. 1. Структура интегрона класса 1.
А - схема интегрона с тремя генными кассетами. Серые участки - концевые невариабельные регионы интегрона, черный прямоугольник - сайт интеграции аМ, белые участки - высоковариабельный регион, включающий генные кассеты; кругами показаны рекомбинационные сайты аПС. Рс и Р2 - кассетные промоторы, Р. , - промотор интегразы; ОРС - открытая рамка считывания. Б - места отжига праймеров.
3' консервативных сегментов интегрона (CS, conserved segment) и консервативных регионов blaVIM Для амплификации 5'-части использовали праймеры 5'CS/INT-FN и VIM-R, для амплификации 3'-части использовали праймеры VIM-F и tniC/Sul-RN (см.таблицу, рис. 1).
Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (RFLP, PCR-restriction fragment length polymorphism) применяли для анализа вариабельных регионов интегронов класса 1, несущих bla^-генную кассету. Для каждого интегрон-несущего изолята получали два ам-пликона (5'- и 3'-регион), которые подвергали обработке эндонуклеазой рестрикции TaqI (Thermo Fisher Scientific). Дальнейший анализ образующихся фрагментов проводили методом электрофореза в 2% агарозном геле. От одного до пяти изолятов, представляющих каждый RFLP-тип, отбирали для секвенирования вариабельных регионов интегрона с использованием амплификацион-ных праймеров и дополнительных праймеров для секве-нирования (см.табл. 1, рис. 1). Структуру интегрона анализировали с использованием алгоритма BLAST, номер интегрона присваивали в соответствии с базой данных INTEGRALL [http://integrall.bio.ua.pt].
Результаты. Проанализированы 64 Карба-Р изолята, содержащих bla которые относились к трём сиквенс-типам: ST654 («=33), ST235 (n=19), ST111 (n=12). Методом рестрикционного анализа идентифицировано четыре RFLP-типа интегронов (рис. 2). При помощи секве-нирования репрезентативных изолятов удалось выявить пять типов интегронов класса 1 (рис. 3).
Более 50% Карба-Р изолятов относились к RFLP-типу I (см.рис. 2). Эти изоляты несли интегрон типа In56 (GenBank AF191564) и обладали ST654. Этот интегрон содержал единственную генную кассету bla M_2, связанную с резистентностью к бета-лактамам. Выявленный интегрон имел ряд отличий от референсной последовательности In56, в том числе он содержал два промотора PcW и P2 с более высокой эффективностью экспрессии вместо одного «слабого» промотора PcW. Активная форма Р2-промотора получена путём инсерции 3 п.о. в область гена intll. 3'-последовательность выявленного
нами интегрона обладала необычной структурой, имея в своем составе участок 5'CS-региона и ген sull.
Карба-Р изоляты P. aeruginosa RFLP-типа II составляли 26% от выборки (см.рис. 2, 3); все они несли интегрон In559 (GenBank AM749810) и относились к ST235. Особенностью этого интегрона являлось отсутствие 3'CS-региона, обнаруживаемого у большинства интегронов класса 1 в клинически значимых бактериях. Этот консервативный регион обычно включает гибридную генную кассету, несущую qacE и sull, в интактном виде опосредующих резистентность к четвертичным аммониевым соединениям и сульфаниламидам, соответственно [19]. Выявленный In559 в З'-регионе содержал ген tniC, кодирующий резольвазу транспозона Tn5090 [14]. Кроме blal/IMi_p
Рис. 2. RFLP-типы интегронов.
M - маркер молекулярного веса; I - In56 (ST654, n=33); II - In559 (ST235, n=17);
III - In59 (ST235, n=1) и ЬЗ^подобный (ST111, n=12); IV -In249 (ST235, n=1).
МИКРОБИОЛОГИЯ
N (%) изолятов
1п56 33 (52)
(AF191564)
1п559 17(26)
(АМ749810)
1п59- 12 (19)
подобный
(KY860571)
1п59 1(2)
(AF263519)
1п249 1(2)
(АМ087404)
ST Кассетный Вариабельный промотор регион (и.о.)
Структура интегрона
654 PcW/P2
111
235 235
Pc S
Pc S Pc S
1143
^ intl
часть 5'CS
blaviM-з
>11 Sul1 >
235 PcH2 2713 ^ intl aacA7 У blaViM-2 y dfrB5 y aacC5b^ tniC
2373 ^ intl aacA29^ blaViM-2 y aacA29^
qacEAl
sull
>
2373 ^ i"tl
1811 ^ïï
aacA29^ blayiM-2 У aacA29^ aacA4 y
qacEAl
sull
>
blaviM-2
У qacEAl sull y
Рис. 3. Распределение и генетическая структура bla^-^-несущих интегронов.
Номера интегронов присвоены в соответствии с базой данных INTEGRALL. Номера референсных последовательностей в GeneBank представлены в скобках. Вариабельный регион расположен между геном интегразы (intI) и 3CS (conserved sequence, консервативная последовательность). 5' и 3CS интегронов класса 1 выделены светло-серым цветом, а blaVIM2 генные кассеты - темно-серым цветом
интегрон нёс гены аминогликозид-ацетилтрансферазы (aacA7, aacA5) и дигидрофолатредуктазы (dfrB5), опосредующие резистентность к аминогликозидам и тримето-приму, соответственно (см. рис. 3).
1п59-подо6ный интегрон выявлен у 12 (19%) Карба-Р изолятов (см. рис. 2, 3). Все изоляты относились к ST111 и имели RFLP-тип III. Описываемый интегрон включал blaVIM2, фланкированный генами аминогликозид-ацетилтрансферазы - aacA29a (см.рис.3). Референсный In59 (GenBank AF263519) в третьей позиции вариабельного региона содержит aacA29b вместо aacA29a. Ферменты, кодируемые генами aacA29a и aacA29b, различались по четырём аминокислотам. Отличия от рефе-ренсного In59 затронули некодирующие регионы: две и пять точечных мутаций в промоторном регионе PcS и attC-сайте первой генной кассеты (aacA29a), соответственно, и инсерция одной пары оснований в рекомби-национном сайте attC третьей генной кассеты. Секвени-рование единственного ST235-изолята, относившегося к RFLP-типу III, показало типичную для In59 структуру: aacA29a/ blaVIM JaacA29b.
В одном Карба-Р ST235-изоляте с RFLP-типом IV выявлен редкий интегрон In249 (GenBank AM087404). Вариабельный регион этого интегрона содержал две генные кассеты: aacA4 и blaTm, п. В отличие от рефе-
VIM-2 г т
ренсной последовательности In249, обнаруженный интегрон имел дупликацию 19 п.о. в attC сайте генной кассеты aacA4, связанной с резистентностью к амино-гликозидам.
Обсуждение. Разнообразие МБЛ-кодирующих ин-тегронов класса 1 изучено среди 64 продуцирующих карбапенемазу VIM-2 изолятов P. aeruginosa, выделенных в трёх стационарах г. Москвы. На фоне общего генетического разнообразия Карба-Р изолятов, blaVIM2-продуцирующие штаммы P. aeruginosa относились всего к трём клональным линиям (ST654, 235, 111).
Все ST654-изоляты относились к RFLP-типу I и несли интегрон In56. Согласно базе данных INTEGRALL, референсный интегрон этого типа содержит одну генную кассету, blanM2. Отличия от референсного интегрона состояли в особенностях генетического окружения генной кассеты, а именно в типе промотора и структуре 3'-региона интегрона. 3'-последовательность имела структуру, аналогичную структуре In1206 (GenBank KR337991), описанного в 2015 г. в изолятах, выделенных в Великобритании [20]. Подобный необычный 3'-регион, но с добавлением генной кассеты aadB, кодирующей аминогликозид-аденилтрасферазу, ранее обнаружен у ST654-изолята из Швеции, который, по-видимому, импортирован из Туниса [21].
В долговременном эпидемиологическом исследовании P. aeruginosa в Беларуси, Казахстане, России рост частоты Карба-Р изолятов в 2008-2010 г. г. связан с распространением доминирующего МБЛ-продуцирующего ST235-клона. Ген blaVIM-2 обнаружен у подавляющего большинства МБЛ-изолятов (99,6%) преимущественно в составе интегрона In559 (95,6%), у незначительной части изолятов выявлены интегроны In599, In340, In464, In620 (4,3%) [22]. Такая распространённость In559 среди ST235-изолятов характерна и для проанализированной популяции. Семнадцать из 19 Карба-Р ST235-изолятов несли интегрон In559 (GenBank AM749810). Отсутствие консервативного 3'CS-региона и наличие вместо него гена резольвазы tniC в составе In559 является характерной чертой интегронов класса 1, входящих в состав Tn5090-подобных транспозонов. bla^^-содержащие интегроны с аналогичным составом генных кассет и структурой обнаружены ранее в изолятах, выделенных в России (GenBank AM749810, DQ522233), США (GenBank AY943084), Тайване, Норвегии (GenBank FM165436) [21-24], Монголии (GenBank KT768111) [25], Танзании (GeneBank KC630981) [26].
Впервые изолят с референсной структурой интегрона In59 выделен во Франции в 1998 г. (GenBank AF263519), затем в Австрии [27]. По данным MLST эти изоляты относились к CC111. Все STlll-изоляты, проанализированные в данном исследовании, относились к RFLP-типу III и несли bla в составе 1п59-подобного интегрона. Аналогичный состав и структура интегрона (aacA29a/ blaV]MJaacA29a) выявлены у продуцирующих VIM-2 STlll-изолятов P. aeruginosa, выделенных в Чехии (GenBank KY860571) [28]. В нашей коллекции один изолят с классической структурой интегрона In59 относился к ST235.
Резистентность к карбапенемам одного ST235-изолята обусловлена наличием blavlM2 в составе интегрона In249. От референсной последовательности он отличался дупликацией в сайте attC генной кассеты aa-cA4. Такая особенность характерна для интегрона In238 из штамма SMART1130 Serratia marcescens (LC169580), выделенного в Чехии в 2013 году, и In259 из штамма IR-PA-2 Pseudomonas aeruginosa (AY574992), выделенного в 2004 году в Китае. Китайский интегрон имел сходную последовательность вариабельного региона в З'-области. Аминокислотная последовательность кодируемой геном aacA4 аминогликозид-б'-Ж-ацетилтрансферазы в составе интегрона In249 несла замены Leu90Ser и Gly71Ser по сравнению с In238 из штамма SMART1130 и In259 из штамма IRPA-2, соответственно. In238 и In249 также различались по типу VIM: интегрон из Serratia marcescens содержал генную кассету blarM[_4.
Несмотря на то что интегроны являются МГЭ и имеют механизмы для распространения в составе плазмид или транспозонов, большинство генов МБЛ «заякорены» в хромосоме [28]. Поскольку в настоящем исследовании не выявлено новых типов интегронов и наблюдалась корреляция типа интегрона с определёнными ST, можно утверждать, что диссеминация клинически важных детерминант резистентности, таких как гены МБЛ, связана в первую очередь с клональным распространением генетических линий высокого эпидемического риска ST111, ST654 (100% изолятов этих ST являются носителями blaVMl2) и ST235 (65% изолятов этого ST являются носителями blaVMl2) [13]. Изменения в составе blaV1M_,-несущих интегронов, затрагивающие вариабельные области, в том числе промоторные и рекомбинаци-онные сайты, и приводящие к появлению новых инте-гронных структур, свидетельствуют о продолжающейся эволюции бактерий. Это обосновывает необходимость дальнейшего изучения МГЭ, их локализации и распространения в популяции клинически значимых бактерий, в том числе P. aeruginosa.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Работа выполнена при поддержке РФФИ (проект № 18-015-00301).
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1-12, 14-28 см. REFERENCES)
13. Савинова Т.А., Лазарева А.В., Шамина О.В., Крыжановская О.А., Чеботарь И.В., Маянский Н.А. Генотипы и носительство металло^-лактамаз среди карбапенемрезистентных Pseudomonas aeruginosa, выделенных у детей в г. Москве. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2018; 20(4): 370-4.
REFERENCES
1. Driscoll J.A., Brody S.L., Kollef M.H. The epidemiology, patho-
MICROBIOLOGY
genesis and treatment of Pseudomonas aeruginosa infections. Drugs 2007; 67: 351-68.
2. Lister P.D., Wolter D.J., Hanson N.D. Antibacterial-resistant Pseudomonas aeruginosa: clinical impact and complex regulation of chromosomally encoded resistance mechanisms. Clin. Microbiol. Rev. 2009; 22: 582- 610.
3. Andrade S.S., Jones R.N., Gales A.C., Sader H.S. Increasing prevalence of antimicrobial resistance among Pseudomonas aeruginosa isolates in Latin American medical centres: 5 year report of the SENTRY Antimicrobial Surveillance Program (1997-2001). J An-timicrob Chemother. 2003; 52: 140-1.
4. Lim T.P., Lee W., Tan T.Y. et al. Effective antibiotics in combination against extreme drug-resistant Pseudomonas aeruginosa with decreased susceptibility to polymyxin B. PLoS One. 2011; 6: e28177.
5. Cabot G., Ocampo-Sosa A.A., Dominguez M.A., et al. Spanish Network for Research in Infectious Diseases (REIPI). Genetic markers of widespread extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa high-risk clones. Antimicrob. Agents Chemother. 2012; 56: 6349-57.
6. Breidenstein E.B.M., de la Fuente-Nunez C., Hancock R.E.W. Pseudomonas aeruginosa: all roads lead to resistance. Trends Microbiol. 2011; 19: 419-26.
7. Cornaglia G., Giamarellou H., Rossolini G.M. Metallo-ß-lactamases: a last frontier for ß-lactams? Lancet Infect. Dis. 2011; 11: 381-93.
8. Laupland K.B., Parkins M.D., Church D.L., Gregson D.B., Louie T.J., Conly J.M., Elsayed S., and Pitout J.D. Population-based epi-demiological study of infections caused by carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa in the Calgary Health Region: importance of metallo-ß-lactamase (MBL)-producing strains. J. Infect. Dis. 2005; 192:1606-12.
9. Zavascki A.P., Barth A.L., Fernandes J.F., Moro A.L., Goncalves A.L., and Goldani L.Z. Reappraisal of Pseudomonas aeruginosa hospital acquired pneumonia mortality in the era of metallo-ß-lactamase-mediated multidrug resistance: a prospective observational study. Crit. Care. 2006; 10: R114.
10. Zavascki A.P., Barth A.L., and Goldani L.Z. Nosocomial bloodstream infections due to metallo-ß-lactamase-producing Pseudomonas aeruginosa. J. Antimicrob. Chemother. 2008; 61:1183-5.
11. Woodford N., Turton J.F., Livermore D.M. Multiresistant Gramnegative bacteria: the role of high-risk clones in the dissemination of antibiotic resistance. FEMS Microbiol Rev 2011; 35: 736-55.
12. Stokes H.W., Martinez E., Roy Chowdhury P. et al. Class 1 integro-nassociated spread of resistance regions in Pseudomonas aerugino-sa: plasmid or chromosomal platforms? J. Antimicrob. Chemother. 2012; 67: 1799-800.
13. Savinova T.A., Lazareva A.V., Shamina O.V., Kryzhanovskaya O.A., Chebotar I.V., Mayanskiy N.A. Genotypes and metal-ß-lactamases carriage in carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa isolated from children in Moscow. Klinicheskaya mikrobiologiya i antimik-robnaya khimioterapiya. 2018; 20(4): 370-4. (in Russian)
14. Shibata N., Doi Y., Yamane K., Yagi T., Kurokawa H., Shibayama K., Kato H., Kai K., Arakawa Y. PCR typing of genetic determinants for metallo-beta-lactamases and integrases carried by gramnegative bacteria isolated in Japan, with focus on the class 3 inte-gron. J. Clin. Microbiol. 2003; 41(12): 5407-13.
15. Toleman M.A., Vinodh H., Sekar U., Kamat V., Walsh T.R. BlaVJlM2 -harboring integrons isolated in India, Russia, and the United States arise from an ancestral class 1 integron predating the formation of the 3 conserved sequence Antimicrob. Agents Chemother. 2007; 51: 2636-8.
16. Miriagou V., Tzelepi E., Gianneli D., and Tzouvelekis L.S. Escheri-chia coli with a self-transferable, multi-resistant plasmid coding for the metallo-ß-lactamase VIM-1. Antimicrob. Agents Chemother. 2003; 47: 395-7.
17. Siarkou V.I., Vitti D., Protonotariou E., Ikonomidis A., Sofianou D. Molecular epidemiology of outbreak-related pseudomonas aerugi-nosa strains carrying the novel variant blaVIM-17 metallo-beta-lacta-mase gene. Antimicrob. Agents Chemother. 2009; 53(4): 1325-30.
18. Toleman M.A., Biedenbach D., Bennett D.M., Jones R.N., and Walsh T.R. Italian metallo-beta-lactamases: a national problem?
МИКРОБИОЛОГИЯ
Report from the SENTRY Antimicrobial Surveillance Programme. J. Antimicrob. Chemother. 2005; 55: 61-70.
19. Paulsen I.T., Littlejohn T.G., Rädström P., Sundström L., Sköld O., Swedberg G., Skurray R.A. The 3' Conserved Segment of Integrons Contains a Gene Associated with Multidrug Resistance to Antiseptics and Disinfectants. Antimicrob. Agents Chemother. 1993; 37(4): 761-8.
20. Wright L.L., Turton J.F., Hopkins K.L., Livermore D.M., Woodford N. Genetic environment of metallo-ß-lactamase genes in Pseudomonas aeruginosa isolates from the UK. J. Antimicrob. Chemother. 2015 Dec; 70(12): 3250-8.
21. Samuelsen O., Toleman M.A., Sundsfjord A. et al. Molecular epidemiology of metallo-b-lactamase-producing Pseudomonas aeruginosa isolates from Norway and Sweden shows import of international clones and local clonal expansion. Antimicrob. Agents Chemother. 2010; 54: 346-52.
22. Edelstein M.V., Skleenova E.N., Shevchenko O.V., D'souza J.W., Tapalski D.V., Azizov I.S., Sukhorukova M.V., Pavlukov R.A., Kozlov R.S., Toleman M.A., Walsh T.R. Spread of extensively resistant VIM-2-positive ST235 Pseudomonas aerugino-sa in Belarus, Kazakhstan, and Russia: a longitudinal epidemiologi-cal and clinical study. Lancet Infect. Dis. 2013;13(10): 867-76.
23. Lolans K., Queenan A.M., Bush K., Sahud A., Quinn J.P. First nosocomial outbreak of Pseudomonas aeruginosa producing an integron-borne metallo-ß-lactamase (VIM-2) in the United States. Antimicrob. Agents Chemother. 2005; 49: 3538-40.
24. Yan J.J., Hsueh P.R., Lu J.J., Chang F.Y., Ko W.C., Wu J.J. Characterization of acquired ß-lactamases and their genetic support in
multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates in Taiwan: the prevalence of unusual integrons. J. Antimicrob. Chemother 2006; 58: 530-6.
25. Baljin B., Baldan G., Chimeddorj B., Tulgaa K., Gunchin B., Sandag T., Pfeffer K., MacKenzie C.R., Wendel A.F. Faecal Carriage of GramNegative Multidrug Resistant Bacteria among Patients Hospitalized in Two Centres in Ulaanbaatar, Mongolia. PLoS One. 2016;11(12): e0168146.
26. Moyo S., Haldorsen B., Aboud S., Blomberg B., Maselle S.Y., Sundsfjord A., Langeland N., Samuelsen 0. Identification of VIM-2-producing Pseudomonas aeruginosa from Tanzania is associated with sequence types 244 and 640 and the location of blaVIM-2 in a TniC integron. Antimicrob. Agents Chemother. 2015;59(1): 682-5.
27. Duljasz W., Gniadkowski M., Sitter S., Wojna A., and Jebelean C. First organisms with acquired metallo-ß-lactamases (IMP-13, IMP-22, and VIM-2) reported in Austria. Antimicrob. Agents Chemother. 2009; 53: 2221-2.
28. Papagiannitsis C.C., Medvecky M., Chudejova K., Skalova A., Ro-tova V., Spanelova P., Jakubu V., Zemlickova H., Hrabak J. Czech Participants of the European Antimicrobial Resistance Surveillance Network. Molecular Characterization of Carbapenemase-Producing Pseudomonas aeruginosa of Czech Origin and Evidence for Clon-al Spread of Extensively Resistant Sequence Type 357 Expressing IMP-7 Metallo-ß-Lactamase. Antimicrob. Agents Chemother. 2017; 61(12): e01811-7.
Поступила 16.05.19 Принята к печати 25.06.19
