Растения как перспективные источники ингибиторов амилазы при разработке функциональных продуктов питания и профилактики сахарного диабета Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 577.151 + 152.3+613.2.03

РАСТЕНИЯ КАК ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ИСТОчНИКИ ИНГИБИТОРОВ АМИЛАЗЫ ПРИ РАЗРАБОТКЕ

функциональных продуктов питания и профилактики сахарного диабета

© Р.В. Кунакова,

доктор химических наук,

академик АН РБ,

вице-президент АН РБ,

заведующая кафедрой,

Уфимский государственный университет

экономики и сервиса,

ул. Чернышевского, 145,

450078, г. Уфа, Российская Федерация,

эл. почта: kunakova@anrb.ru

© Р.А. Зайнуллин,

доктор химических наук,

профессор кафедры,

Уфимский государственный университет

экономики и сервиса,

ул. Чернышевского, 145,

450078, г. Уфа, Российская Федерация,

эл. почта: 5599032@mail.ru

© Э.К. Жуснутдинова,

доктор биологических наук, академик АН РБ,

заведующая лабораторией и отделом, Институт биохимии и генетики, Уфимский научный центр РАН, проспект Октября,71, 450054, г. Уфа, Российская Федерация, эл. почта: elzakh@mail.ru

© Б.И. Ялаев,

кандидат физико-математических наук, ассистент кафедры,

Башкирский государственный университет, ул. Заки Валиди, 32, 450076, г. Уфа, Российская Федерация, эл. почта: yalaev.bulat@yandex.ru

В статье рассмотрены и обобщены результаты исследований лекарственных растений как источников ингибиторов а-амилазы, а также представлены выводы о перспективах использования таких ингибиторов при разработке методов профилактики и лечения сахарного диабета.

Лекарственные растения являются доступными и возобновляемыми природными ресурсами для производства многих функциональных продуктов питания и фармакологических препаратов, для которых характерны высокая активность и эффективность при отсутствии побочных эффектов, наличие многогранных фармакологических свойств, например, способность оказывать благотворное влияние на состояние больных сахарным диабетом. Ферментативная кинетика и скрининг соединений, способных влиять на скорость протекания ферментативных реакций, являются одними из передовых и перспективных научно-исследовательских направлений, результаты которых вовлечены в развитие самых разных отраслей: медицины, пищевой промышленности и биотехнологий. Основой многих из этих направлений является регуляция ферментов, среди которых - их активация и ингибирование катализа.

В связи с этим актуальны исследования, совмещающие накопленные данные по ферментативной кинетике и биохимии, благодаря развитию которых открываются новые перспективы их применения для совершенствования технологических процессов и эффективных методов лечения болезней, связанных с метаболизмом ферментов. а-Амилаза задействована в ряде технологий пищевой промышленности, используется в качестве мишени при лечении некоторых заболеваний, и поэтому выявление и изучение регуляторов активности этого фермента имеет несомненную практическую значимость, как для профилактики сахарного диабета, так и для создания функциональных продуктов питания.

Ключевые слова: экологическая генетика, энзимы, а-амилаза, микронутриенты, гипергликемия, инсулин, диабет, ингибитор, функциональное питание

© Е.П. Сегура,

доктор химических наук, профессор группы нанобиоисследований, Автономный университет штата Коауила, бульвар В. Карранса и Хосе Карденас Вальдес,

25280, г. Сальтильо, штат Коауила, Мексика, эл. почта: psegura@uadec.edu.mx

© А.Д. Ильина,

доктор химических наук, руководитель группы нанобиоисследований, Автономный университет штата Коауила, бульвар В. Карранса и Хосе Карденас Вальдес,

25280, г. Сальтильо, штат Коауила, Мексика, эл. почта: anna_ilina@hotmail.com

..............ВЕСТНИК АКАДЕМИИ НАУК РБ/

О / 2016, том 21, № 1 (81) 1111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111

© R.V. Kunakova1, R.A. Zaynullin2, E.K. Khusnutdinova3, B.I. Yalaev4, E.P. Segura5, A.D. Ilyina6

PLANTS AS A VALUABLE SOURCE OF AMYLASE INHIBITORS IN CREATING FUNCTIONAL FOODS FOR DIABETES PREVENTION

12 Ufa State University of Economics and Service, 145, ulitsa Chernyshevskogo, 450078, Ufa, Russian Federation,

e-mail: 5599032@mail.ru

3 Institute of Biochemistry and Genetics, 71, prospekt Oktyabrya,

450054 Ufa, Russian Federation, e-mail: elzakh@mail.ru

4 Bashkir State University, 32, ulitsa Zaki Validi,

450076, Ufa, Russian Federation, e-mail: yalaev.bulat@yandex.ru

5,6 Universidad Autónoma del Estado de Coahuila,Boulevard V. Carranza and Jose Valdez Cardenas, Saltillo, 25280, Coahuila, Mexico, e-mail: anna ilina@hotmail.com

The paper considers and summarizes the research results on medicinal plants as a source of a-amylase inhibitors. It also describes the conclusions on the prospects for using such inhibitors to develop diabetes prevention and treatment strategies.

Medicinal plants are available and renewable natural resources for producing many functional foods and pharmaceutical preparations characterized by no adverse effects and the presence of multifaceted pharmacological properties, for instance, the capability to exert a beneficial effect on patients with diabetes mellitus. Enzyme kinetics and compounds screening capable of affecting the rate of enzymatic reactions are one of the highly advanced and promising research areas involved in a wide range of applications, including medicine, food industry and biotechnology. In many cases they are based on the regulation of enzymes, their activation and catalyst inhibition.

Thus, research combining already accumulated data on enzyme kinetics and biochemistry become topical today, and its development opens up new prospects for using them to improve technological processes and effective methods in the treatment of diseases associated with enzymatic metabolism. Alpha-amylase is used in a number of food processing technologies and as a target for treating some diseases. Therefore, identification and study of the regulators of the enzyme's activity is of undoubted practical importance both in preventing diabetes

and creating functional foods.

Key words: environmental genetics, enzymes, a-amylase, micronutrients, hyperglycemia, insulin, diabetes, inhibitor, functional food

Согласно данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), по состоянию на январь 2015 г. сахарный диабет (СД), наряду с сердечно-сосудистыми, онкологическими и хроническими респираторными болезнями, является одним из самых распространенных среди неинфекционных заболеваний. В 2014 г. уровень заболеваемости СД составил 9% среди населения старше 18 лет. В 2012 г. произошло 1,5 млн смертельных случаев по причине диабета. Несмотря на крупные успехи в клинической и экспериментальной терапии сахарного диабета, достигнутые за последние 20 лет, частота заболеваемости СД только увеличивается, и по прогнозам ВОЗ это тенденция будет сохраняться [1].

Сахарный диабет — это группа метаболических заболеваний, основой которых является гипергликемия — увеличение глюкозы в крови выше нормы, в результате дефицита секреции инсулина (СД 1-го типа) либо нару-

шения чувствительности тканей на действие инсулина (СД 2-го типа).

СД 2-го типа диагностируется примерно у 90% всех больных. К одним из самых распространенных способов лечения СД 2-го типа можно отнести регуляцию чувствительности тканей к инсулину, усиление активности инсулина в определенных тканях (мишенях) и ингибирование ферментов, расщепляющих углеводы для снижения уровня глюкозы в крови [2].

Первые два метода включают широкий диапазон методик лечения СД с применением различных синтетических лекарственных препаратов, для которых характерны нежелательные побочные эффекты. В то же время лечение СД 2-го типа с помощью специфических ингибиторов а-амилазы или а-глюкозидазы позволяет снижать уровень глюкозы в крови без значительных осложнений для организма. По этой причине ингибирование а-амилазы

016, том 21, № 1 (81) 111111111111111111111111111111111111111111111111111110

и а-глюкозидазы, играющих ключевую роль в усвоении крахмала и гликогена в кровь, рассматривается как одна из перспективных стратегий лечения гипергликемии (рис. 1).

Рис. 1. Обобщающая схема плана лечения сахарного диабета с использованием ингибиторов а-амилазы

К данной группе ингибиторов относятся соединения, конкурирующие с пищевыми углеводами за связывающие центры ферментов желудочно-кишечного тракта. Примером такого ингибитора является акарбоза (рис. 2)

[3].

он

Рис. 2. Акарбоза

Известно, что большое количество фармацевтических препаратов — это ингибиторы ферментов. Эти препараты дают фармакологам возможность направленного угнетения работы определенных ферментов путем воздействия на них высокоспецифичными химическими соединениями (ингибиторами) [4]. Так, в медицине особенно широкое признание получили ингибиторы протеаз для лечения патологических состояний, вызванных активацией протеолитических систем крови и тканей или, например, ингибиторы фибриноли-за, использующиеся для лечения и профилактики кровотечений. Ингибиторы холинэстеразы

приводят к накоплению нейромедиатора аце-тилхолина в синапсах и показаны при миастении, двигательных и чувствительных нарушениях при невритах, радикулитах и т.д. При лечении СД применяют ингибиторы а-ами-лизы и а-галактозидазы для снижения количества глюкозы в крови больных. В медицинской практике нередко удается с помощью антиферментных препаратов (тех же ингибиторов) стабилизировать состояние пациентов с шоковым состоянием, нормализировать некоторые биохимические показатели, вывести больных из токсемии [5; 6].

Ингибирование ферментов — это общефизиологический процесс. Для многих ферментов в организме существуют их соответствующие ингибиторы. Например, в тканях, которые синтезируют протеазы, одновременно вырабатываются ингибиторы протеолиза. Ряд сывороточных белков, таких, как а-2-ма-кроглобулин, при определенных условиях окружает молекулу протеолитического фермента и блокирует его каталитическую активность. Во всех биохимических циклах уровень накопления исходных и конечных продуктов автономно регулирует работу задействованных в них ферментов, предотвращая тем самым опасную для клетки нехватку либо избыточность продуктов. Снижение активности одного фермента в метаболическом пути ограничивает протекание и других реакций этого пути. Так, аминокислота тирозин регулирует уровень нейротрансмиттера норэпинифрина через действие трех ферментов. Соответственно, ингибирование 1-го фермента активируется при избыточном уровне норэпинифрина и тем самым останавливает реакцию ряда последующих реакций. Кроме этого, существует ряд ингибиторов различной природы (пептиды, полипептиды, флавоноиды и другие), которые идентифицированы у многих организмов и не являются исходным субстратом или конечным продуктом, а представляют собой отдельные высокоспецифичные или неспецифичные сложные соединения, которые могут прочно связываться с ферментом и блокировать его активность [7].

а-Амилаза или а-1,4-глюкан-4-глюка-ногидролаза — это гидролитический фермент, расщепляющий гликоген и крахмал до олиго-сахаридов различной длины с а-конфигура-цией, которые представляют собой смесь мальтозы, мальтотриозы и разветвленных

2016, том 21, № 1 (81) 111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111

олигосахаридов с 6—8 остатками глюкозы, содержащие а-1,4- и а-1,6 связи. В расщеплении крахмала участвуют и другие амилолити-ческие ферменты, однако вклад а-амилазы заключается в инициации этого процесса. Человеческая а-амилаза является ферментом, состоящим из 512 аминокислотных остатков, с молекулярной массой 57,5 кДа, и разделенным на 3 домена: А, В и С [2; 8; 9]. Для а-амилазы характерны слабокислые свойства, изоэлектрическая точка колеблется в пределах рН 4,2—5,7, является кальцийзависимым ферментом и обычно содержит от 1 до 4 атомов кальция. При кислотной или термической инактивации а-амилазы ионы Ca2+ оказывают стабилизирующее действие. По термостабильности а-амилазы различаются в зависимости от их происхождения: грибная а-амилаза быстрее разрушается при повышенной температуре, а-амилаза солода более термостабильна, самой термоустойчивой а-амилазой является бактериальная. Активный каталитический центр семейства а-амилаз в большинстве случаев представлен аминокислотными остатками аспарагиновой (Asp) и глютамино-вой (Glu) кислот, которые действуют в качестве лигандов Ca2+. В конформационных изменениях субстрата (крахмала) в активном центре энзима, по всей вероятности, участвуют последовательности аминокислотных остатков аргинина, гистидина и тирозина [10; 11; 12; 13; 14]. Показано, что панкреатические и слюнные амилазы обладают высокой степенью гомологии аминокислотной последовательности (97% общей последовательности и на 92% схожи каталитические домены). Амилаза — белок с третичной структурой, способный связываться с субстратом и вызывать гидролиз а-1,4 гликозидных связей. Активный центр а-амилазы находится между концевыми карбоксильными группами и В-доме-ном. Атомы Са2+ локализованы между А и В доменами и могут выступать в качестве стабилизаторов трехмерной структуры фермента и в то же время как аллостерические активаторы [5].

Существует 5 подвидов а-амилазы, гены которых локализованы в длинном плече 1-й хромосомы (1q21) (рис. 3): AMY1A, AMY1B, и AMY1C — кодирующие слюнные и AMY2A и AMY2B — кодирующие соответственно панкреатические амилазы [2]. У человека число копий (CNV) этих генов варьирует от 2 до 15

1q21

Рис.3. Локализация генов а-амилазы в длинном плече 1-й хромосомы человека

на геном соматической клетки, и соответственно выработка тканями ферментов пропорциональна количеству этих копий. Установлены межпопуля-ционные различия по среднему числу копий генов, предположительно возникшие под действием позитивного отбора при адаптации к пище, содержащей крахмал [15], что хорошо видно на примере генетических особенностей коренных народов Крайнего Севера.

Традиционный рацион питания у народов Крайнего Севера (саамов, ненцев, эскимосов и др.) по большей части ограничен мясом и животным жиром, их пища содержит минимум жизненно необходимых углеводов. Выяснилось, что метаболизм углеводов у этих народов отличен от метаболизма жителей внеарктических регионов: в ходе адаптации их организм снизил потребность в экзогенных углеводах, а необходимое их количество получает в результате усиленной стимуляции гормонов поджелудочной железы (инсулина и глюкагона), которые приводят к синтезу необходимых моносахаридов из аминокислот, поступающих с пищевыми белками. По этой причине у северян значительно снижена продукция пищеварительных ферментов, расщепляющих поли- и дисахариды, т.к. по большей части их рацион не содержит последних. В то же время пищевые сахара, которые употребляют жители внеарктических регионов, в основном представлены дисахаридами (сахароза, лактоза) и соответственно у них достаточно давно выработалась система продукции сложных ферментных комплексов, которые способны быстро расщеплять сложные сахара до моносахаров для их быстрого и эффективного всасывания через мембраны кишечной стенки [16].

Вместе с тем на заре глобализации и распространения европейских традиционных продуктов массового производства повседневный рацион питания у коренных северян стал со-

V /21

держать избыточное количество легкодоступных и усвояемых углеводов. Как сообщает А.И. Козлов, в 1920 г. морские зверобои Чукотки практически не употребляли ни покупного сахара, ни сладостей. В 1937 г. ежедневное потребление сахара сибирскими эскимосами составляло в среднем 30 г на человека, а сладостей в целом — 40 г. Сегодня отличий в потреблении сахара и сладостей между коренным жителем Чукотки и «среднестатистическим россиянином» уже нет: на того и другого ежесуточно приходится соответственно 58 и 65 г сахара, и 125 и 129 г сладостей в целом (включая столовый сахар) [16]. Это привело к увеличению частоты метаболических заболеваний.

Как можно видеть из этих примеров, стоит острая проблема коррекции структуры питания у населения различных регионов России, вызванная избыточным поступлением легкоусвояемых и доступных углеводов. Одним из способов такой коррекции может стать широкое внедрение в повседневный рацион питания ингибиторов ферментов расщепления углеводов.

Исследование и накопление данных по различным ингибиторам создает фундамент для решения ряда других задач, направленных на внедрение этих веществ в пищевую и медицинскую сферу, в т.ч. в практику лечения сахарного диабета.

Растения являются одними из самых важных источников химических соединений, способных эффективно ингибировать а-ами-лазу. Преимущество использования растительных ингибиторов в качестве терапевтических агентов при лечении сахарного диабета состоит в их доступности и легком способе выделения при помощи экстракции.

Марлес и Фарнес показали, что существует более 1 200 видов лечебных растений, использующихся для лечения диабета. Приблизительно для половины из них доказаны про-тивогипергликемические свойства и значительная их часть применима в пищевых целях [3].

Как показывают обобщающие данные, среди исследованных фитокомпонентов этих растений наиболее высокой ингибирующей активностью обладают фенольные соединения, флавоны (лютеолин, акацетин, билобе-тин, лоницерин) (рис. 4), флавононы (нарин-генин, гесперетин) (рис. 5), флавонолы (квер-цетин, рутин, кемпферол, гиперин) (рис. 6),

...........ВЕСТНИК АКАДЕМИИ НАУК РБ/

/2

флаванонолы, антоцианидины, флавандиолы, халконы, изофлавоны, катехины (рис. 7), полисахариды, гипогликаны, пептидогликаны, гуа-нидины, стероиды, гликопептиды, терпенои-ды и алкалоиды (морфин) (рис. 8). Сегодня большое количество исследований направлено на изучение именно фенольных соединений. Высокий ингибирующий потенциал наблюдается у флавонов и флавоновых групп. Танин (рис. 9) также известен способностью образовывать прочные комплексы с ферментами [2].

но.

он

он

он о

Рис.4. Лютеолин

но.

он

он о

Рис. 5. Нарингенин он

но.

он

"он он он

Рис. 6. Кверцетин

но.

о.

XX.

он

он

"он он

Рис. 7. Эпигаллокатехин НО'

~СН3

НО.......

Рис. 8. Морфин

HO

OH

экспериментальных крыс, причем установле-

Ингибиторы амилаз были найдены в се менах, по крайней мере, двадцати видов бобо вых, а также в зернах пшеницы и ржи. Также они были найдены у определенных видов рас тений из семейства миртовых: джамболан или ямболан (Syzygium cumini Ь.) (рис. 10) и гуайявы (Psidium guajava Ь.) (рис. 11), широко применяемых в традиционной системе лечения сахарного диабета в Индии. Показано, что в числе фитокомпонентов гуайявы противо-гипергликемическими свойствами обладают гликозиды, такие как стриктинин (рис. 12) и изоциктринин (рис. 13), которые широко используются при клиническом лечении сахарного диабета [17]. Для спиртового экстракта лотоса орехоносного (Nelumbo те^т Оаейп.) показано снижение уровня глюкозы у

Рис. 12. Стриктинин

HO

Рис. 13. Изоциктринин

Рис. 10. Джамболан

Рис. 11. Гуайява

ВЕСТНИК АКАДЕМИИ НАУК РБ /

/21

OH

N-CH

3

o=N'

Рис. 14. Стрептозоцин

Для буферных экстрактов из нескольких видов растений, а именно пажитника сенного (Trigonellafoenum-graceum L.), перца черного (Piper nigrum L.), баланитеса египетского

(Balanitesa egyptiaca L.), розмарина обыкновенного (Rosmarinus officinalis L.), камелии китайской (Camellia sinensis L.), кратомы (Mitragyna inermis L.), индийского финика (Tamarindus indica L.) и мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.) было также отмечено наличие ингибирующей активности а-ами-лазы: в среднем выше 45% снижения скорости на 0,2 г/мл раствора. В западной части Индии распространены растения, экстракты которых широко используют при лечении диабетиков. Это алоэ вера (Aloe vera L.), адансония пальчатая (Adansonia digitata L.), катарантус розовый (Catharanthus roseus L.), корица (Cinnamomum verum J.Presl), кокциния крупная (Coccinia grandis L.), манго индийское (Mangifera indica L.), шелковица белая (Morus alba L.), олеандр обыкновенный (Nerium oleander L.), базилик тонкоцветный (Ocimum tenuiflorum L.), харита-ки (Terminalia chebula Retz.), тиноспора серд-целистная (Tinospora cordifolia (Thunb.) Miers). Высокий процент ингибирования фермента (больше 30%) показали экстракты трав, традиционно используемых в монгольской медицине, а именно: родиола розовая (Rhodiola

rosea L.), смородина красивая (Ribespull chelum Turcz) и брусника обыкновенная (Vaccinium uliginosum L.). Метанольные, гексановые и хлороформные экстракты ливанских традиционных лекарственных растений рекомендуются в этой стране в качестве терапевтических веществ для лечения диабета [2]. Высокие проценты ингибирования были показаны также и для водных экстрактов некоторых индонезийских растений, а именно для патанги (Caesalpinia sappan L.) (96%) и каффир-лайма (Citrus hystrix L.) (41%) [3]. Ингибиторы а-амилазы идентифицированы также у азади-рахты индийской (Azadirachta indica A. Juss) [18], туласи (Ocimum tenuiflorum L.) и для некоторых видов растении у рода дубровник (Teucrium) [19].

Отмечена ингибирующая активность для некоторых видов растений, которые также произрастают на территории России: это козлятник лекарственный (Galega officinalis L.) (рис. 15), одуванчик лекарственный (Taraxacum officinale L.) (рис. 16), лен обыкновенный (Linum usitatisumum L.) (рис. 17), чеснок посевной (Allium sativum L.) (рис. 18) [2].

Рис. 15. Козлятник лекарственный

Рис. 16. Одуванчик лекарственный

Рис. 17. Лен обыкновенный

ВЕСТНИК АКАДЕМИИ НАУК РБ/

/2

Рис. 18. Чеснок посевной 2016, том 21, № 1 (81)

Роль фармакотерапевтического действия ингибиторов а-амилазы (ИАА) основан на блокирующем эффекте а-амилазы — фермента, расщепляющего сложные углеводы на поли- и олигосахариды. ИАА 1-го поколения были рекомендованы еще в 1980-е гг. для снижения углеводной нагрузки и ослабления гипергликемии. Первоочередно был использован водный экстракт белой фасоли (Phaseolu vulgaris L.), в котором был идентифицирован ингибитор фазеоламин (рис. 19). Однако для этого соединения была обнаружена низкая селективность связывания с ферментами, и по этой причине он вызывал множество нежелательных побочных эффектов. В дальнейшем были испытаны схожие структуры, среди которых наиболее перспективной оказалась акарбоза [20].

CH3

HO^-

ЧСНз

Рис. 19. Фазеоламин

Флавоноиды и их производные — это гетероциклические соединения, представляющие крупнейший класс растительных полифенолов. По химической структуре представляют собой гидроксипроизводные флавона (собственно флавоноиды), 2,3-диги-дрофлавона (флаваноны) изофлавона (изо-флавоноиды), 4-фенилкумарина (неофлаво-ноиды), а также флавоны с восстановленной карбонильной группой (флаванолы) [21].

Как показывают многочисленные исследования, этот класс соединений способен оказывать влияние на ход самых разнообразных физиологических процессов через различные механизмы. Их отличительным фармакологическим свойством является уменьшение проницаемости и ломкости стенок кровеносных сосудов благодаря антиоксидантному и мембраностабилизирующему действию. Содержащие их препараты также обладают спазмолитическим, противовоспалительным и диуретическим действием [22].

Сравнительно недавно было установлено, что флавоноиды оказывают влияние на регуляторные белки и разные белковые структуры, в т.ч. и на ферменты. Эффективность их взаимодействия с энзимами в сочетании с малой токсичностью позволяют применить их для решения самых разных технологических, фармацевтических и биотехнологических задач. Эти примеры дают основание исследовать ингибирующие способности фенольных соединений, содержащихся в растительных тканях и доступных для выделения, по отношению к наиболее изучаемым и применяемым ферментам, таким как а-амилазы [23].

Выделение из растений, произрастающих на территории республики Башкортостан, новых нетоксичных соединений, обладающих ингибирующей активностью, позволит осуществлять профилактику осложнений СД путем разработки на их основе функциональных продуктов питания, и даст стимул к развитию высокотехнологичных, наукоемких и импортзамещающих технологий.

ЛИТЕ РАТУРА

1. Информационный бюллетень Всемирной организации здравоохранения. Отчет от января 2015 г URL: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs355/ru (дата обращения: 29.09.2015).

2. de Sales P.M., de Souza P.M., Simeoni L.A, Silva E.C., Silveira D., Magalhaes P. de O. Inhibitory activity of -amylase and -glucosidase by plant extracts from the Brazilian cerrado. Planta Medica, 2012, vol. 78 no. 4, pp. 393-399.

3. Wijaya H.C., Rahminiwati M., Wu M.C., Lo D Inhibition of -glucosidase and -amylase activities of some Indonesian herbs: In vitro dtudy. The 12th ASEAN Food Conference. 16-18 June 2011. BITEC Bangna Bangkok, Thailand. 2011, pp. 285-287.

4. Ilyina A., Arredondo-Vald^s R., Farkhutdinov S.

Segura-Ceniceros E.P., Martínez-Hernández J.L., Zaynullin R., Kunakova R. Effect of betulin-containing extract from birch tree bark on -amylase activity in vitro and on weight gain of broiler chickens in vivo. Plant Foods for Human Nutrition, 2014, vol. 69, pp. 65-70.

5. Преимущества биотехнологии. С. 56. URL: http://www.soyconnection.com/pdf/usbs_position/ Russian/Russian_The_Benefits_of_Biotechnology_ Compendium_2011_LR.pdf. (дата обращения: 10.11. 2015).

6. Бабенко Ж.А. Использование ингибиторов ферментов в терапии различных заболеваний URL: http://www.scienceforum.ru/2014/pdf/2442.pdf (дата обращения: 10.11.2015).

7. Enzyme Inhibition. URL: https://www. rosehulman.edu/~brandt/Chem330/Enzyme_inhibition. pdf (дата обращения: 22.11.2015).

ВЕСТНИК АКАДЕМИИ НАУК РБ/

/ 2016, том 21, № 1 (81) llllllllllllllllllllllllllllllllllllllll...............

21, № 1 (81)