CC BY
0
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
Дубинкин И. В.
К ВОПРОСУ О ПАРЦИАЛЬНЫХ АНТИГЕНАХ RHE
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Подбор иммунологически совместимых пар донор — реципиент при трансфузиях эритроцитсодержащих компонентов крови по системе Резус в соответствии с нормативно-правовой базой в Российской Федерации проводится на основе определения антигенов: D, С, с, Е, е. При этом наибольшее внимание в законодательном порядкеуделяется идентификацииу доноров слабых и парциальных вариантов антигена RhD как наиболее сильного иммуногена. Вместе с тем аллоиммунизация антигеном RhE также может быть связана как с гемотрансфузиями без учета фенотипа по RhE, так и с парциальными вариантами RhE, подобно парциальным RhD. Для определения парциальных RhE в составе типирующих реагентов необходимо присутствие нескольких моноклональных антител, направленных к разным антигенным детерминантам RhE. Альтернативой является гено-типирование RHCE.
Цель работы. Исследование природы редких случаев расхождения результатов серологического определения антигена RhE реагентами разных производителей.
Материалы и методы. Исследовали образцы крови 4037 кадровых доноров ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России. В работе использовали тест-системы (Immucor), гелевые карты (BioRad, Grifols), реагенты (Millipore, Immucor, Гематолог) и моноклональные антитела анти-RhE: MS12, MS80, MS258, MS260 (Millipore). Поиск мутаций в гене RHCE проводили методом прямого автоматического секвенирования по Сэнгеру как с прямого, так и с обратного прайме-ров на приборе ABI Prism 3130XL (Applied Biosystems).
Результаты и обсуждение. При сравнительном фенотипи-ровании эритроцитов 4037 кадровых доноров ФГБУ «НМИЦ
гематологии» Минздрава России различными диагностическими системами было отмечено два случая расхождения в результатах определения антигена RhE (0,05% от всех тестированных доноров). Реагенты ЭритротестТМ цоликлон Анти-Е Супер (производитель «Гематолог» разных серий: 463, 512 и др.) и моноклональные антитела MS-80 (Millipore) не выявляли антиген RhE на эритроцитах двух доноров ни на плоскости, ни в пробирках, ни в гелевых картах с нейтральным гелем. В то же время с реагентами других производителей, состоящих из смеси как минимум двух монокло-нальных антител, в том числе в тестах на плоскости, в гелевых картах и в планшетах, антиген RhE был четко идентифицирован. Секвенирование гена RHCE такого донора «О.» показало замену в первом экзоне c.48G>C, что соответствует аминокислотной замене p.Trpl6Cys (не влияет на антигенные детерминанты RhE) и в четвертом экзоне с.500Т>А, что приводит к замене аминокислоты p.Metl67Lys. Замена p.Metl67Lys характеризует антиген RhE вариант I (Ew). В базе данных «1000 Genomes» частота такой мутации оценивается в 0,02%. Антиген RhE является сильным иммуногеном и трансфузии донорских эритроцитов с парциальным RhE реципиентам ее (в Российской Федерации таких около 70%) могут приводить к аллоиммунизации и появлению аллоан-тител анти-RhE.
Заключение. Для выявления большинства парциальных антигенов RhE у доноров вне зависимости от метода исследования необходимо применять реагенты на основе смеси из нескольких охарактеризованных моноклональных антител, направленных к разным эпитопам RhE, или применять генотипирование RHCE в качестве методавыбора.
Дубняк Д. С., Рисинская Н. В., Дроков М. Ю., Васильева В. А., Старикова О. С., Масликова У. В., Кольгаева Э. И., Давыдова Ю. О., Капранов Н. М., Гальцева И. В., Кузьмина Л. А., Судариков А. Б., Паровичникова Е. Н.
РАСЩЕПЛЕННЫЙ ХИМЕРИЗМ СРЕДИ Т-РЕГУЛЯТОРНЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ АЛЛОГЕННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Под успешной трансплантацией аллогенных гемо-поэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) подразумевается становление полного донорского химеризма, когда в костном мозге/ периферической крови не выявляется клеток, принадлежащих реципиенту. Существует понятие расщепленный химеризм, при котором в разных клеточных популяциях у одного пациента не совпадают значения химеризма, то есть клетки донора и реципиента в разных популяциях представлены в разных соотношениях.
Цель работы. Оценить становление расщепленного химеризма в Т-клетках периферической крови на ранних сроках после алло-ТГСК.
Материалы и методы. В исследование включено 42 пациента после алло-ТГСК с диагнозом острый лейкоз. Подробная характеристика групп пациентов указана в таблице. На +30, 60, 90-й день после алло-ТГСК был произведен забор периферической крови. Выполнено выделение мононуклеаров с использованием градиента плотности фиколла (1,077 г/л). Проводилась магнитная сепарация клеток, использовали магниты серии MACS (Milteney Biotec, Германия). Сначала выполнялась негативная селекция CD4+CD25" клеток. Благодаря магнитному полю клетки, на которых были зафиксированы антитела (все клетки, за исключением CD4+), конъюгированные с оксидом железа, задерживались. Далее выполнялась позитивная селекция CD4+CD25+ клеток при помощи колонки для магнитной сепарации. Из полученной клеточной суспензии была произведена экстракция ДНК с использованием наборов для выделения ДНК/РНК «Ампли Прайм РИБО-преп». Химеризм в образцах ДНК определялся при помощи метода STR-PCR (полимеразная цепная реакция с панелью праймеров
к локусам коротких тандемных повторов (short tandem repeat) человека. Процент донорского химеризма вычислялся с помощью стандартных формул.
Результаты и обсуждение. На рисунке представлена диаграмма значений химеризма в костном мозге и среди Т-рег, Т-конвенциональных клеток (Т-кон). У всех пациентов в первые 3 месяца после трансплантации мы наблюдали значимые различия между долей процентов клеток с хозяйским генотипом в клетках костного мозга и отдельных популяциях Т-клеток: Т-рег (CD4+CD25+), Т-кон клеток (CD4+CD25"). На +30-Й день алло-ТГСК получены различия в доле клеток с хозяйским генотипом между исследуемыми клетками костного мозга и Т-кон клетками (р=0,0012), между клетками костного мозга в сравнении с Т-рег клетками (р=0,0016). На +60-Й день алло-ТГСК достоверные различия между клетками костного мозга и среди Т-кон клеток (р=0,029). На +90-й день алло-ТГСК различия в показателях химеризма в клетках костного мозга и среди Т-кон клеток (р=0,035), в клетках костного мозга в сравнении с Т-рег клетками (р=0,012).
Заключение. Становление донорского химеризма имеет разнонаправленную структуру. Среди клеток костного мозгау пациентов после алло-ТГСК может формироваться полный донорский химеризм. Отдельные же популяции клеток, в том числе регуля-торные, могут иметь достаточно существенные различия по своей генетической структуре — более половины клеток могут сохранять примесь хозяйского кроветворения. Изучение химеризма в различных субпопуляциях клеток позволяет в более ранние сроки прогнозировать развитие осложнений, возникающих после алло-ТГСК.
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Таблица. Клиническая характеристика пациентов
Диагноз
Острый миелобластный лейкоз п=32
Острый лимфобластный лейкоз п=10
Огатус заболевания
Первая ремиссия/вторая ремиссия 29/11
Рецидив п=2
Возраст 35,5 (19-66)
Пол м/ж 19/23
Режим кондиционирования MAC/ RIC 16/26
Профилактика РТПХ
ПТ-ЦФ п=14
лАТГ п=21
Другие схемы профилактики п=7
Донор
Родственный HLA-совместимый п=14
Родственный частично совместимый (гаплоидентичный) п=3
Неродственный HLA-совместимый п=15
Неродственный частично совместимый п=10
Источник трансплантата
Костный мозг/стволовые клетки крови 24/18
Дудина Г. А., Мубудзаде Ч. К., Гатапова С. С., Кремнева Н. В., Немыкин В. Н., Чудных С. М.
ОЦЕНКА ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ С0УГО-19 У ВИЧ-ПОЗИТИВНЫХ ПАЦИЕНТОВ С ЛИМФОМАМИ. ОПЫТ ОДНОГО ЦЕНТРА
ГБУЗ «МКНЦ имени А. С. Логинова» ДЗМ
Введение. Стандартная АРВТ, показанная пациентам с иммунодефицитом, не защищает от тяжелых проявлений COVID-19. А иммуносупрессоры могут повысить связанные с коронавирусом риски.
Цель работы. Оценить тяжесть течения инфекции, вызванной COVID-19, в группе ВИЧ-положительных пациентов с лимфомами.
Материалы и методы. Проанализировано 20 ВИЧ-позитивных пациентов в возрасте 32—62 лет МКНЦ им. A.C. Логинова за период с марта 2020 по ноябрь 2021 года, имеющих лимфопролиферативное заболевание, перенесших COVID-19. Анализ проводился на основе обработки данных из автоматизированной информационной системы «АСКЛЕПИУС» и посредством дистанционного контакта с пациентом по телефону в случае, если необходимая для исследования информация отсутствовала в информационной системе.
Результаты и обсуждение. С апреля 2020 по октябрь 2021 г. в гематологических отделениях МКНЦ им. A.C. Логинова проходили курсы программной химиотерапии 20 ВИЧ-позитивных пациентов с лимфомами, перенесших COVID-19. Из них: 12 мужчин, 8 женщин, с медианой возраста31,5 года. Структура лимфом следующая: 8 пациентов с ДВККЛ, 4 с лимфомой Ходжкина, 3 с лимфомой Беркитта, 3 с плазмобластной лимфомой, 1 с фолликулярной и 1 пациент с первичной медиастинальной лимфомой. 19 пациентов имели ВИЧ в стадии 4В и 1 в стадии 4А, 100% принимали APT на момент заболевания COVID-19. По количеству CD4+ клеток пациенты разделены на 4 группы: 20% отнесены к группе с количеством клеток до 50/мкл, 10 (50%) количество клеток 100-300, 3 (15%) — от 300 до 700 клеток и 3 (15%) свыше 700 клеток У 13 исследованных COVID-19 протекал
в легкой форме, у 5 со средней тяжестью (2 с диагнозом плазмобластной лимфомы и 3 с ДВККЛ). Все пациенты со средней тяжестью заболевания находились на индукционных курсах лечения и не имели ремиссии заболевания; 2 пациента (лимфо-ма Беркитта, плазмобластная лимфома) переболели COVID-19 в тяжелой форме и находились на первом курсе химиотерапии. Данные пациенты не относились к группе высокого риска тяжелого течения COVID-19 по принятой классификации пациентов без иммунодефицита. Это были молодые пациенты без патологии дыхательной и сердечно-сосудистой системы. Из 5 переболевших COVID-19 в среднетяжелой и тяжелой форме 3 имели С04+ менее 50 кл/мкл, а 2 в диапазоне 100—300 кл/мкл. Корреляции вирусной нагрузки с уровнем С04 и тяжестью течения COVID-19 не отмечено. Удлинение межкурсового интервала, связанное с обнаружением вируса методом ПЦР, отмеченоу 10 пациентов. У 10 пациентов факт перенесенной инфекции зарегистрирован определением виража антител к COVID-19. У 7 человек наблюдалось длительное увеличение более 5 месяцев ^М при отсутствии вируса в мазках из носоглотки, определяемой методом ПЦР.
Заключение. При анализе данных указанной когорты пациентов обнаружена связь между количеством С04+ лимфоцитов и тяжестью течения коронавирусной инфекции: более низкое содержание С04+ клеток предрасполагало к более тяжелому течению СОУЮ-19. Тяжесть лимфом также коррелировала с более тяжелым течением инфекции COVID-19. Длительное повышение уровня иммуноглобулина М и его связь с возможным персистиро-ванием вируса SARS-COV-2 на фоне иммунодефицитного состояния требует дальнейшего изучения.
Ефремова Е. В., Милеева Е. С., Булдаков И. А., Мотыко Е. В., Папаян Л. П., Корсакова Н. Е., Силина Н. Н., Мартынкевич И. С.,
Волошин С. В.
ЧАСТОТА ТРОМБОТИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ У БОЛЬНЫХ РН-НЕГАТИВНЫМИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ДРАЙВЕРНЫХ И ЭПИГЕНЕТИЧЕСКИХ
МУТАЦИЙ ВЫСОКОГО МОЛЕКУЛЯРНОГО РИСКА
ФГБУ «РосНИИГТ ФМБА России»
Введение. РЬ-негативные миелопролиферативные новообразования (МПН) — клональные заболевания, характеризующиеся пролиферацией миелоидного ростка вследствие генетических аберраций, приводящих к активации клеточных сигнальных путей без стимуляции. К наиболее частым нозологическим формам
относятся истинная полицитемия (ИП), эссенциальная тромбо-цитемия (ЭТ), первичный миелофиброз (ПМФ). Клиническая картина этих заболеваний крайне гетерогенна, однако объединяют их известные на сегодня мутации: ЛАК2У617Р которая встречается при всех трех нозологических формах, САЬК и МРЬ,
