CC BY
7УДК 616-097:618.12-007.274 РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ИЛ-6 В ТКАНИ ТАЗОВЫХ ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ СПАЕК РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА У ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА
А. А. Давыдова1 , А. Н. Сулима2, А. А. Алексеев2
'Кафедра патологической анатомии с секционным курсом, 2кафедра акушерства, гинекологии и перинатологии ФПО,
Медицинская академия имени С. И. Георгиевского
ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского»
Адрес переписки: бул. Ленина 5/7, г. Симферополь, 295006, Республика Крым, Российская Федерация
E-mail: akzag@mail.ru, ironlady@ukr.net
distribution of il-6 in pelvis peritoneal adhesions of various etiologies
at reproductive age women
А. А. Davydova, А. N. Sulima, A. A. Alekseev
summary
Interleukin-6 (IL-6) is one of the cytokines, secreted by activated monocytes/macrophages, fibroblasts, endothelial cells in injuries' of different etiologes, like inflammation, trauma, hypoxia, exposure of bacterial endotoxin. In our study, we measured the expression of IL-6 in pelvic adhesions removed by laparoscopic access at reproductive age women. It is determined high expression of IL-6 at adhesion considerably that developed on the background of external endometriosis. While pelvic adhesions of inflammatory genesis, and especially postoperative adhesions were characterized by weak expression, and in a number of observations almost complete absence of staining. Such characteristics of IL-6 as a system device hold the need for more active management of patients with external genital endometriosis, using anti-inflammatory and immunomodulatory therapy.
резюме
интерлейкин-6 (ил-6) является одним из цитокинов, который секретируется активированными моноцитами/макрофагами, фибробластами, эндотелиальными клетками при повреждениях различной этиологии, в том числе при воспалении, травмах, гипоксии. воздействии бактериального эндотоксина. В данном исследовании проводилось определение экспрессии ил-6 в ткани тазовых спаек, удаленных путем лапароскопического доступа у женщин репродуктивного возраста. Установлен высокий уровень экспрессии IL-6 в спайках, развившихся на фоне наружного генитального эндометриоза. Тазовые спайки воспалительного генеза, а также послеоперационные спайки характеризовались слабой экспрессией, а в ряде наблюдений почти полным отсутствием окрашивания. Учитывая особенности ил-6 как системного коммуникатора имеет место необходимость более активного ведения больных с наружным генитальным эндометриозом, используя противовоспалительную и, возможно, иммуномодулирующую терапию.
Ключевые слова: тазовые перитонеальные спайки, морфология, интерлейкин-6.
Интерлейкин-6 (ИЛ-6) является одним из цитокинов, который секретируется, активированными моноцитами/макрофагами, фибробластами, эндотелиальными клетками при повреждениях различной этиологии, в том числе при воспалении, травмах, гипоксии. В данном исследовании проводилось определение экспрессии миокина ИЛ-6 в ткани спаек, удаленных путем лапароскопического доступа, у женщин репродуктивного возраста. Установлена высокая экспрессия ИЛ-6 в спайках, развившихся на фоне наружного генитального эн-дометриоза. В то время как спайки воспалительного генеза, а также послеоперационные спайки характеризовались слабой экспрессией, а в ряде наблюдений практически полным отсутствием окрашивания.
Спаечный процесс является результатом нарушения нормального течения воспалительно-репа-ративных процессов, о чем могут свидетельствовать факторы местной резистентности (фагоцитарная активность нейтрофилов, макрофагов, цитоки-нов, и другие). Кроме того, цитокины регулируют
функциональную активность фибробластов, являющихся клетками эдгекторами при построении соединительнотканных спаек [1, 5, 9, 10, 11].
Существуют данные, свидетельствующие о значительном возрастании содержания ИЛ-1 и ИЛ-8 в перитонеальной жидкости и повышении уровня продукции этих цитокинов перитонеальными макрофагами у пациенток с острыми воспалительными гинекологическими заболеваниями [4, 9, 11]. Повышенная продукция ИЛ-1 и ФНО-а при воспалении инфекционной или травматической природы коррелирует с возрастанием количества и тяжести спаек [2, 3, 9]. В отличие от ИЛ-1 и ФНО-а, о роли ИЛ-6 в процессе спайкообразования существуют противоречивые данные. Некоторые авторы полагают, что ИЛ-6 участвует в формировании спаек, проявляя свойства провоспалительного ци-токина [8, 10]. По мнению других исследователей [11, 12], его концентрация не коррелирует с наличием и тяжестью перитонеальных спаек.
Другие цитокины, напротив, препятствуют образованию спаек, как в случае с ИЛ-4, подавля-
ющим активность моноцитов и макрофагов, и ИЛ-10, который обнаружен в брюшной полости при минимальном количестве спаек [1, 4, 7, 8]. Тем не менее, количество ИЛ-10 возрастает в перито-неальной жидкости больных на поздних стадиях бактериальной инфекции, кроме того, продукция ИЛ-10 фибробластами из спаек повышена по сравнению с нормальными перитонеальными фибро-бластами. Эти данные косвенным образом свидетельствуют об участии ИЛ-10 в ингибировании перитонеального воспаления [9, 11, 12]. Наличие подобных противоречий указывает на то, что вопросы адгезиогенеза остаются до сих пор предметом научных дискуссий.
Определение экспрессии и исследование ИЛ-6 в тканях спаек различного генеза у пациенток репродуктивного возраста может оказать существенную помощь в прогнозировании их образования и рецидива.
Цель исследования - изучить особенности экспрессии и распределения ИЛ-6 в ткани тазовых пе-ритонеальных спаек различного происхождения у женщин репродуктивного возраста.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалом для настоящего исследования послужили фрагменты операционного материала (спайки и их участки) п = 100, полученные у женщин репродуктивного возраста при проведении оперативной лапароскопии. 38 спаек от пациенток, имеющих в анамнезе хронические воспалительные заболевания органов малого таза, 32 спайки от пациенток, имеющих эндометриоидную болезнь (12 пациенток с эндометриомами яичников и 20 пациенток с наружным перитонеальным эндометрио-зом) и 30 пациенток, перенесших ранее операции на органах малого таза и брюшной полости. Показаниями для оперативного лечения явились: бесплодие, объемные образования в яичниках, хроническая тазовая боль или их сочетание.
Каждый пациент получал подробную информацию об исследовании и предоставлял информированное согласие на участие в нем.
Спайки малого таза с целью исследования получали при проведении лапароскопии по следующей методике: спайка малого таза вытягивалась через троакар, промывалась в физиологическом растворе (0,9% хлорида натрия) с последующей консервацией материала в 10% нейтральном растворе формалина (50 мл) в течение 24 часов.
Во время проведения морфологического исследования спайки подвергали проводке по стандартной методике с использованием парафиновой заливки и окрашивали гематоксилином и эозином. Иммуногистохимическое исследование проводилось по стандартной методике с использованием парафиновых блоков, реактивов компании Dako и моноклональных антител к ИЛ-6 (Anti-IL-6 antibody (ab6672)) компании Abcam. с автоматической системой окрашивания Dako Cytomation. Фотографирование осуществляли цифровой камерой OLYMPUS C 5050Z с установленной на микроскопе OLYMPUS CX 41 фотокамерой DCM 130.
Для оценки результатов иммуногистохимиче-ского исследования проводили подсчет количества позитивно-окрашенных клеток в 10 полях зрения на 400-кратном увеличении микроскопа, с учетом интенсивности окрашивания клеток. Интенсивность окрашивания оценивалась в квадратных пикселях с помощью программы ImageJ. Затем полученные результаты пересчитывали по системе HScore. S=1a+2b+3c, где a - процент слабоокрашен-ных клеток, b - умеренно окрашенных, c - процент клеток с высокой степенью экспрессии.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При иммуногистохимическом исследовании спаек, полученных у женщин, перенесших оперативное вмешательство на органах малого таза, с соблюдением всех правил асептики и антисептики, и у которых послеоперационный период протекал без патологии, экспрессия ИЛ-6 была чрезвычайно низкой и составляла 33±0,2 балла, а в ряде наблюдений обнаруживались лишь единичные позитивно-окрашенные клетки в стенках артерий (Рис. 1).
Рис. 1. Слабовыраженная экспрессия ИЛ-6 в тазовой послеоперационной спайке. ИГХ. Ув. 400.
ных клеток (лимфоциты, макрофаги) и в самих очагах эндометриоза (Рис. 4), что, по-видимому, обусловлено повышенной секрецией ИЛ-6 стро-
мальными эндометриальными клетками.
Рис. 2. Умеренно выраженная экспрессия ИЛ-6 в мезотелиальных клетках спайки воспалительного генеза. ИГХ Ув. 400.
Ткани спаек у женщин, имевших в анамнезе воспалительные заболевания органов малого таза, характеризовались слабой, реже умеренной, экспрессией ИЛ-6, составлявшей 65±0,3б. Позитивное окрашивание выявлялось, прежде всего, в цитоплазме мезотелиоцитов, покрывающих спайку и стенках артерий (Рис. 2). Слабая и очагово умеренная экспрессия ИЛ-6 определялась в полях рыхлой соединительной ткани, в цитоплазме фи-бробластов.
Иммуногистохимическое исследование материала спаек, полученного у пациенток с наружным генитальным эндометриозом, характеризовалось выраженной экспрессией ИЛ-6. Наиболее часто отмечалось диффузное умеренно выраженное окрашивание фибробластов и стенок артерий (Рис. 3), составлявшее 154±0,6 балла, а также мезотелиоци-тов.
Рис. 3. Выраженная экспрессия ИЛ-6 в ткани спайки при наружном генитальном эндометриозе. ИГХ. Ув.400.
Кроме того, отмечалась очаговая выраженная экспрессия в местах скопления иммунокомпетент-
Рис. 4. Очаговые скопления ИЛ-6-позитивно окрашенных клеток в спайке при наружном генитальном эндометриозе. ИГХ. Ув. 100.
выводы
1. Вне зависимости от генеза и морфологических особенностей спаек у женщин репродуктивного возраста, при иммуногистохимическом исследовании ИЛ-6 отмечалось окрашивание тканей различной степени интенсивности.
2. Наибольшая степень экспрессии маркера ИЛ-6 обнаруживалась в ткани спаек у пациенток с наружным генитальным эндометриозом.
3. Учитывая особенности ИЛ-6 как системного коммуникатора, имеет место необходимость более активного ведения пациенток с наружным гени-тальным эндометриозом с целью профилактики развития спаечного процесса органов малого таза, с применением противовоспалительной и иммуно-модулирующей терапии.
лиТЕРАТУРА
1. Binnebösel M. et al. Morphology, quality, and composition in mature human peritoneal adhesions// Langenbeck's Archives of SurgeryKi - 2007. - Vol. 10. -P. 10-17.
2. W. Brokelman, M. Lensvelt, I. Borel Rinkes, J. Klinkenbijl, M. Reijnen Peritoneal changes due to laparoscopic surgery // Surg Endosc. Jan. - 2011. - Vol. 25, # 1. - P. 1-9.
3. Duron J. J. Postoperative intraperitoneal adhesion pathophysiology // Colorectal Dis. - 2007. -Vol. 9. - Suppl. 2. - P. 14-24.
4. Imudia A.N. et al., Pathogenesis of intraabdominal and pelvic adhesion development// Semin Reprod Med. - 2008. - Vol. 26, # 4. - P. 289-297.
5. Jacobi C. A., Wenger F., Opitz I., Müller J.M. Immunologic changes during minimally invasive surgery // Dig Surg. - 2002. - Vol. 19, # 6. - P. 459-463.
6. Kuhry E., Jeekel J., Bonjer H. J. Effect of lapa-roscopy on the immune system // Semin Laparosc Surg. - 2004. - Vol. 11, # 1. - P. 37-44.
7. Oboh A., Trehan A. K. Pelvic adhesion formation at second-look surgery after laparoscopic partial and total peritoneal excision for women with endometriosis // Gynecol Surg, 2007. - Vol. 4. - P. 261-265.
8. Ohzato H., Yoshizaki K., Nishimoto N., Ogata A., Tagoh H., Monden M., Gotoh M., Kishimoto T., Mori T. Interleukin-6 as a new indicator of inflammatory status: detection of serum levels of interleukin-6 and C-reactive protein after surgery // Surgery. 1992. - Vol. 111, # 2. - P. 201-209.
9. Ordemann J., Jacobi C. A., Schwenk W., Stösslein R., Müller J. M. Cellular and humoral inflammatory response after laparoscopic and
conventional resections // Surg Endosc. - 2001. - Vol. 15, # 6. - P. 600-608.
10. K. L. Sharpe-Timms, H. Nabli, R.L. Zimmer, J.A. Birt, J.W. Davis Inflammatory cytokines differentially up-regulate human endometrial haptoglobin production in women with endometriosis // Hum Reprod. May. - 2010. - Vol. 25, # 5. - P. 12411250.
11. Sietses C., Beelen R. H., Meijer S., Cuesta M. A. Immunological consequences of laparoscopic surgery, speculations on the cause and clinical implications // Langenbecks Arch Surg. - 1999. - Vol. 384, # 3. - P. 250-258.
12. Yao V., Platell C., Hall J. C. Peritoneal mesothelial cells produce inflammatory related cytokines // ANZ J Surg. - 2004. - Vol. 74, # 11. - P. 997-1002.
