Публикации по проблеме Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

ния больных и даже к смерти. Необходимость определения объема лечебных и реабилитационных мер у пациентов, подвергшихся воздействию токсических факторов с образованием дисгемоглобинов, требует измерения их уровня в крови; это требование закреплено в Приказе Минздравсоцразвития РФ от 12.04.2011 № 302н и в Порядках диагностики и лечения ряда заболеваний. Среди большого количества методов определения концентрации COHb и MetHb в крови наиболее распространены спектрофотометрические - классические двухволновые и многоволновые с применением мультиком-понентного анализа.

Целью нашего исследования являлось сравнение аналитических характеристик методов определения уровня дис-гемоглобинов на анализаторе неотложных состояний ABL-825 и отечественном ко-оксиметре ПолиГЕМ-Экспресс (многоволновая спектрофотометрия лизированной крови в кювете или в одноразовом картридже), а также «ручных» двухволновых спектрофотометрических методов с изобес-тической точкой: для определения COHb и для определения MetHb (по Evelyn-Malloy). В исследовании использовались контрольные материалы фирмы Instrumentation Laboratory на основе человеческого гемоглобина с аттестованными значениями COHb и MetHb, а также специально приготовленные в лабораторных условиях образцы крови, содержащие разные количества COHb и MetHb и позволяющие оценить рабочие характеристики методов и приборов, взаимную интерференцию показателей и их связь с уровнем общего гемоглобина.

Результаты измерений показали, что уровни дисгемогло-бинов в исследуемом диапазоне значений (Hb 70-250 г/л, COHb до 80%, MetHb до 80%) при определении различными методами в основном соответствуют друг другу, разница не превышает нескольких процентов. При физиологиче-

ской концентрации дисгемоглобинов (до 2-3%) показатели точности весьма условны, но это не имеет клинического значения. Вместе с тем измерения образцов с одинаковым уровнем НЬ и разной долей дисгемоглобинов на гемоглобинометрах НетоСие 201 (азидметгемоглобиновый метод с измерением при Х=570 и 880 нм), МиниГЕМ-Экспресс (фотометрия лизата крови без трансформации НЬ при Х=530 и 880 нм) и МиниГЕМ 540 (цианидный метод, Х=540 нм) показали, что в образцах с высоким содержанием СОНЬ (>20%) наблюдается существенное завышение значения общего гемоглобина (до +20% на МиниГЕМ-Экспресс и до +30% на НетоСие 201) по сравнению с референтным ге-миглобинцианидным методом. Это влияние, связанное со спектральными особенностями аналитов, необходимо учитывать при исследовании крови пациентов с отравлением угарным газом. Кроме того, в ходе экспериментов был выявлен небольшой, в пределах 1-1,5%, эффект взаимной интерференции дисгемоглобинов.

Следует отметить конструкцию одноразовых картриджей ГЕМОЛАИН НЬ в отечественных приборах, позволяющих быстро и удобно определить уровни НЬ, СОНЬ и MetHb в образце крови. Измерения в картриджах показали очень близкие результаты с определением в кюветах.

Клинически значимые сдвиги уровня карбокси- и метге-моглобина могут с достаточной точностью быть определены ко-оксиметрией образцов цельной крови, подвергающейся гемолизу в аппарате (в кювете или в картридже). Метод обладает значительными преимуществами перед спектрофото-метрией, выполняющейся в «ручном» режиме, и может быть рекомендован к широкому использованию в клинической практике, особенно с учетом появления на рынке приборов отечественной разработки с хорошими аналитическими характеристиками.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ПРОБЛЕМЕ

Н.К. Гуськова, И.Б. Лысенко, Л.Я. Розенко, Е.А. Гусь-кова, А.С. Ноздричева. Интегральные лейкоцитарные индексы - факторы прогноза эффективности лечения солидных новообразований. ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздрава России, Ростов-на-Дону

Цель исследования - изучение VCS-параметров лейкоцитов периферической крови, анализ значимости их различных соотношений, т.е. интегральных показателей, в оценке эффективности лечения больных с солидными новообразованиями.

Используемый подход определяется тем, что количественная оценка изменений структурно-функциональных характеристик отдельных клеточных популяций может по совокупности полученной информации существенно расширить диагностический и прогностический потенциал общеклинического анализа крови.

Исследования проведены у пациентов с рецидивами и метастазами рака шейки матки (РШМ) - 35 человек, рака носоглотки (РН) - 37 человек, неходжкинскими лимфомами (НХЛ) с поражением костного мозга - 40 человек в возрасте 48-79 лет. Больные РШМ и РН получили 3-6 курсов специфического лечения, больные НХЛ - 4 курса ПХТ в режиме СНОР с применением аутомиелохимиотерапии. В крови всех больных до начала лечения и перед каждым последующим курсом исследовали VCS-показатели клеток крови: V-объем, C-электрическая проводимость, S-светорассеяние (BeckmanCoulterLH500, США). Расчетным путем определяли интегральные показатели для рака носоглотки - MVNe/#Ne, MVLy/#Ly (отношение объема нейтрофилов и лимфоцитов к их абсолютному количеству); рака шейки матки - MVNe/MSNe (отношение объема нейтрофилов к величине светорассеяния) и SDVNexSDVLy/100,

SDVNexSDVMo/100, SDVLyxSDVMo/100 (SDVNe, Ly и Мо -стандартное отклонение объема нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов); НХЛ - МУЬу и УЬу/СЬу (отношение объема лимфоцитов к их электрической проводимости). Полученные данные по комбинации анализируемых параметров сопоставляли со значениями индексов у больных до начала лечения и у лиц контрольной группы (60 женщин и мужчин аналогичного возраста без онкологической патологии). Было установлено, что значения индексов у больных достоверно превышают аналогичные показатели у лиц контрольной группы. Частота повышения - 100%. Отмечено изменение значений индексов в зависимости от результатов лечения. Эффективность лечения оценивали по степени регрессии опухоли, которая варьировала в пределах от 0 до 100%. Так, у больных при достижении значимого клинического эффекта (частичная или полная регрессия) отмечалось снижение изученных показателей до уровня значений в контрольной группе либо еще ниже. При неблагоприятном течении заболевания (стабилизация или прогрессирование) - оставались на исходном уровне или увеличивались. Взаимосвязь показателей регрессии опухоли с изменениями лейкоцитарных индексов подтверждена результатами дисперсионного анализа, который показал, что из всех организованных факторов наибольшее влияние на выраженность изменений интегральных показателей оказало состояние больных. В этой связи нами были установлены «пороговые» («критические») значения индексов, не превышающие М±2т по результатам обследования лиц контрольной группы:

- при РН: для МУ№/#№ и МУЬу/^у - 45 (в контроле <45);

- при РШМ: для МУ№/М5№ - 1 (в контроле <1); для SDVNexSDVLy/100, SDVNexSDVMo/100 и SDVLyxSDVMo/100 - 3,5 (в контроле <3,5);

- при НХЛ: для MVLy - 80 fl, для VLy/CLy - 0,73 (в контроле <80 fl и <0,73). (Патенты: № 2526830 от 02.07.14, № 23653928 от 27.04.09, № 2526796 от 02.07.14).

Таким образом, при установлении значений лейкоцитарных индексов на уровне, превышающем «пороговый», можно констатировать генерализацию злокачественного процесса и плохой прогноз течения заболевания, при значениях ниже «порогового» - отсутствие генерализации и благоприятный прогноз. Данные свидетельствуют, что интегральные показатели лейкоцитов отражают чувствительность больных с солидными новообразованиями к проводимой терапии и могут быть использованы в оценке эффективности лечения и прогноза течения заболевания.

И.А. Новикова, Е.Ю. Златник, И.Б. Лысенко, Т.Ф. Пуш-карева, Н.В. Николаева, В.В. Дмитриева, Е.А. Капуза, О.В. Козюк, О.Н. Шатохина. Сравнительный анализ Т-клеточного состава лимфоцитов костного мозга у больных НХЛ на этапах терапии. ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздрава РФ, г. Ростов-на-Дону

Задачи исследования - охарактеризовать Т-лимфоцитар-ный состав нетрансформированного костного мозга у больных НХЛ до начала и после проведения 2 курсов химиотерапии (ХТ).

У 20 больных В-клеточными НХЛ с инициальным поражением костного мозга до начала лечения и после 2 курсов ХТ была оценена немалигнизированная популяция Т-лимфоцитов костного мозга. Для иммунофенотипирования костный мозг в количестве 0,5-1 мл забирался в пробирки Уасишпег (BD, USA) с сухим ЭДТА. Подготовка проб была осуществлена по методике окрашивание-лизис-отмывка с использованием прибора Lyse-Washassistant. Анализ антигенной экспрессии был проведен на проточном цитометре FACSCantoII (Becton Dickinson, USA). Кроме диагностической для лимфом панели антител, включающей маркеры основных линий дифференцировки, были использованы и маркеры Т- и NK-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD16+56+).

После проведения 2 курсов ХТ отмечается повышение содержания нетрансформированных Т(CD3+)-лимфоцитов с 39,9±2,8 до 54,7±2,1% (p<0,05). Относительное содержание Т-лимфоцитов с хелперно-индукторным фенотипом (CD3+CD4+) до начала терапии было низким и составляло 14,1±0,7%, по окончании 2 курса ХТ произошло его статистически достоверное повышение до 23,5±1,7% (p<0,05). При этом увеличение процентного содержания CD3+CD8+ Т-цитотоксических лимфоцитов с 22,8±1,5 до 26,1±1,4% было статистически недостоверным, как и изменение иммуно-регуляторного индекса (с 0,98±0,06 до 1,1±0,02).

При поражении злокачественным процессом костного мозга больных В-клеточными НХЛ у них происходит не только системное, но и локальное истощение Т-клеточного звена, а химиотерапия, вызывая элиминацию опухолевых клеток, способствует его восстановлению, о чем можно судить по накоплению нетрансформированной Т-лимфоцитарной популяции среди костномозговых клеток.

Н.В. Давыдова, Б.Ю. Гумилевский, К.Д. Капланов, В.Н. Павловская, Е.П. Трусова. Сравнительная оценка плотности поверхностных рецепторов лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе. ГУЗ «Консультативно-диагностическая поликлиника № 2», ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет», ГБУЗ «Волгоградский областной клинический онкологический диспансер № 1»

В-клеточный хронический лимфолейкоз является одним из наиболее часто встречающихся вариантов лимфопроли-феративных заболеваний в европейской популяции и в Волгоградской области в частности. Диагноз обязательно подтверждается установлением иммунофенотипа опухолевых клеток методом проточной цитофлуориметрии. Характерным для данного заболевания является наличие экспрессии основных антигенов CD45+/CD20+/CD19+/CD5+/CD23+. Однако уровень экспрессии, зависящий от плотности распределения

поверхностных рецепторов и, соответственно, связывания моноклональных антител, обеспечивающих интенсивность флуоресценции, значительно варьирует у разных пациентов.

Поэтому целью настоящего исследования было определение интенсивности свечения основных маркеров и сравнительный ретроспективный анализ с учетом клинических данных, стадии заболевания, ответа на проводимую терапию для выявления закономерностей, связанных с особенностями заболевания и прогнозом.

Для этого необходимо выбрать группу пациентов с В-ХЛЛ, провести иммунофенотипирование и определить, кроме наличия экспрессии основных маркеров, степень интенсивности свечения (Mean - средняя геометрическая интенсивность свечения клеток), разделить пациентов на группы по степени риска по клиническим показателям (стадия по RAI-Binet, ответ на проводимую терапию), провести сравнительную статистическую обработку данных.

В группу пациентов взяли 30 человек (17 мужчин и 13 женщин) в возрасте от 47 до 82 лет на момент обследования в ГБУЗ «ВОКОД № 1» с июня 2010 по май 2011 г. У 16 человек была установлена 1(А) стадия, 10 человек - 2(В) стадия, 4 человека - 3-4(С) стадия по RAI-Binet.

Иммунофенотипирование проводилось на приборе Beck-manCoulterFC500 с использованием моноклональных антител Beckman Coulter, всем пациентам проводилось стандартизированное исследование панели антигенов (3-цветная проточная цитофлуориметрия).

Мы обнаружили значительные различия интенсивности свечения всех маркеров, максимальные и минимальные значения Mean отличались в 6-7 раз у разных пациентов.

Но, несмотря на выявленные особенности, при статистическом исследовании после разделения больных на клинические группы в соответствии со стадией заболевания мы не обнаружили достоверных отличий в интенсивности свечения и, соответственно, плотности рецепторов опухолевых лимфоцитов.

Из вышеизложенного можно сделать вывод, что плотность рецепторов лимфоцитов исследованных нами CD45, CD20, CD19, CD5, CD23 не связана со стадией заболевания.

Б.Г. Городецкий', С.А. Луговская', М.Е. Почтарь', Л.С. Аль-Ради2, Е.В. Наумова'. Исследование иммунофеноти-пических маркеров волосатоклеточного лейкоза методом проточной цитометрии. 1Кафедра клинической лабораторной диагностики ГБОУ ДПО РМАПО Минздрава РФ; 2ФГБУ Гематологический центр Минздрава РФ

Волосатоклеточный лейкоз (BKJI) - лимфопролифера-тивное заболевание, протекающее с вовлечением костного мозга, селезенки, реже других органов. Наиболее часто в гемограмме наблюдается панцитопения, реже лейкоцитоз («вариантная» форма). При ВКЛ опухолевые клетки имеют характерные морфологические и иммунофенотипические особенности. Они экспрессируют CD19, CD20 (высокая плотность), CD11c, CD25, CD103, CD123, при этом экспрессия CD5, CD10, CD23 встречается редко. В связи с выраженной лейкопенией и низким числом циркулирующих опухолевых клеток морфологическая диагностика ВКЛ зачастую затруднена, в связи с этим поиск и характеристика их с использованием многоцветной проточной цитометрии в настоящее время является ведущим в диагностике волосато-клеточного лейкоза.

Цель работы - оценка экспрессии маркеров ВКЛ при классической и вариантной форме и разработка панелей для первичной диагностики и оценки минимальной остаточной болезни (МОБ).

Исследование было проведено у 75 первичных больных ВКЛ (25 женщин и 50 мужчин) в возрасте от 26 до 65 лет. Оценка МОБ изучаласьу 60 больных (24 женщины и 36 мужчин) в возрасте от 36 до 72 лет в динамике терапии. У 15 пациентов терапия включала ритуксимаб и интерферон-альфа, у 45 - в протокол лечения входили кладрибин и интерферон-альфа. Исследование иммунофенотипических характеристик

лейкоцитов методом проточной цитометрии проводилось на лазерном проточном цитофлюориметре BD FACSCanto™II Becton-Dickmson(^A) и FC-500 BeckmanCoulter(^A). Для исследования нами была сформирована диагностическая панель:

1. (CD20)FITC/(CD23)pE/(CD19)pC-5/(CD5)pC-7/(CD10)Apc /

(cd45)APC-CY7

2.(cd103)FITC/(lair1)PE/(cd25)PC-5/(cd11c)PC-7/(cd20)APC/ (cd45)apccY7

3. (k)FITC/(^)PE/(cd19)PC-7/(CD45)APC-CY7

Данные ретроспективного анализа 75 пациентов ВКЛ показали, что у 12% больных с классической формой на опухолевых клетках отмечалась абберантная экспрессия CD5, в то время как только у 20% больных с вариантной формой ВКЛ экспрессия CD5 отсутствовала. CD23 экспрессировался у 5% больных с классической формой и не наблюдался у пациентов с вариантной формой ВКЛ. Экспрессия CD11 отсутствовала у 17% больных с классической формой. Экспрессия CD103 отсутствовала у 21% больных. LAIR-1 выявлялся в 100% случаев ВКЛ, причем у 80% больных с «вариантной» формой наблюдалась высокая экспрессия данного маркера. CD25 отсутствовал у 24% больных с классической формой и абберантно экспрессировался у 20% больных с «вариантной» формой. Диагностика МОБ при ВКЛ осуществлялась с использованием панели: (CD103)FITC/(LAIR1)pE/(CD25)pC5/

(CD11C)pc-7/(CD19)APc/(CD45)APc-cY7;iKTappaFiTc ^ambdV

(cm^pcyccm^pc-^^^cm^Apc-cY,

Многоцветная проточная цитометрия с использованием разработанной нами панели моноклональных антител, дает возможность установить диагноз ВКЛ и провести дифференциальную диагностику с другими лимфопролиферативными заболеваниями. У всех больных ВКЛ регистрировалась высокая экспрессия LAIR-1 на опухолевых В-лимфоцитах, в то время как экспрессия CD103, CD11c, CD25 была вариабельной. Разработана панель для определения МОБ при ВКЛ и доказана нецелесообразность включения в панель для диагностики МОБ таких маркеров, как CD25 и CD20, у пациентов, находящихся на терапии ритуксимабом.

Е.Ю. Златник, И.Б. Лысенко, Н.В. Николаева, О.Н. Ша-тохина, Е.А. Капуза, Т. Ф. Пушкарева, В.В. Дмитриева, О.В. Козюк, Г.И. Закора, К.А. Новоселова. Воздействие химио-препаратов in vitro на гибель клеток костного мозга больных множественной миеломой. ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Министерства здравоохранения РФ, г. Ростов-на-Дону

Цель исследования - изучить влияние сверхмалых концентраций химиопрепаратов in vitro на индукцию апоптоза и некроза в клетках костного мозга (ККМ) больных множественной миеломой.

Пунктат костного мозга в объеме 5-7 мл брали в гепа-ринизированную среду 199 с соблюдением правил асептики, выделяли клетки белой крови, включая зрелые и бластные формы, в градиенте фиколл-верографина (р 1,077-1,078) и доводили до концентрации (2-3)*106/мл. Затем их обрабатывали препаратами, разведенными изотоническим раствором NaCl в концентрации 1*10-6: винкристином, доксорубици-ном, преднизолоном, циклофосфаном, алкераном, этопози-дом, цитарабином, цисплатином, винбластином, реафероном. Длительность инкубации с препаратами при 37 оС составляла 30-60 мин, после чего ККМ осаждали и проводили стандартный аннексиновый тест, а также определяли мембранную экспрессию апоптотического маркера CD95.

В исследованных пробах больных до инкубации с препаратами ранний апоптоз был выявлен в 7,5±2,1% клеток, некроз - в 6,0±2,1%, при этом CD95 экспрессировали 8,2±3,4% ККМ. Под влиянием сверхмалых концентраций винкристина ранний апоптоз был выявлен у 8,8±3,0%, поздний у 3,0±0,9%, некроз у 10,0±1,3%, экспрессия CD95 у 10,4±3,6% ККМ. После инкубации с винбластином показатели составляли 13,5±4,0, 0, 8,2±2,9, 14,5±3,2%; с преднизолоном 8,75±2,6,

4,3±1,8, 8,0±2,1, 13±6,4; алкераном 10,3±4,6, 0, 9,3±3,3, 13,6±2,6 соответственно. Наиболее эффективным стимулятором апоптоза явился винбластин, остальные препараты вызывали преимущественно некротическую гибель или вообще не действовали в указанной концентрации.

Приведенные данные свидетельствуют об индивидуальной реакции клеток костного мозга больных множественной миеломой на различные химиопрепараты.

А.М. Вартанян, О.В. Виноградова, М.С. Закревская, Ю.П. Коваленко. Опыт изучения влияния количества нор-мобластов на истинное количество лейкоцитов у недоношенных детей в условиях перинатального центра. ГБУЗ «Детская краевая клиническая больница» г. Краснодар

Современные гематологические анализаторы способны предоставлять большое количество информации, правильно воспользоваться которой главная задача специалистов лабораторной службы. Чтение гистограмм, скаттерограмм и специальных «флагов» требует дополнительных знаний и умений. Работа на анализаторах разного уровня вносит свои коррективы в алгоритм исследований. При исследовании гемограммы недоношенных детей с помощью автоматического гематологического анализатора одной из самых значимых задач, по нашему мнению, является оценка зависимости общего количества лейкоцитов от количества нормобластов. Актуальность данной проблемы заключается в том, что большинство лабораторий оснащено гематологическими анализаторами, не обладающими возможностью дифференцировать нормобласт от лимфоцита. Вследствие этого гематологический анализатор «воспринимает» нормобласт за лейкоцит, таким образом, выдавая ложное количество лейкоцитов.

Цель: изучить возможность автоматического геманализа-тора Sysmex XS-1000i дифференцировать клетки крови недоношенных детей в условиях реанимационного отделения.

Работа проводилась на базе экстренной лаборатории перинатального центра «Детской краевой клинической больницы» г Краснодара. Обследовались пациенты отделения реанимации и интенсивной терапии недоношенных детей. Для исследования использовалась капиллярная кровь недоношенных новорожденных с различным сроком гестации (от 1 дня жизни до 25 дней). Всего было обработано 100 проб крови. Анализ периферической крови проводился на высокотехнологичном гематологическом анализаторе Sysmex XS-1000i («Sysmex Corporation», Япония), способном производить развернутый анализ крови, в том числе дифференци-ровку лейкоцитов на 5 субпопуляций.

В ходе исследования не было выявлено четкой зависимости истинного количества лейкоцитов в гемограммах, полученных при помощи автоматического анализатора Sysmex XS-1000i, от количества нормобластов в исследуемых образцах крови. При изучении влияния возраста обследованных младенцев на количество нормобластов в их крови нами было отмечено некоторое снижение количества нормобластов спустя 10 сут с момента рождения. Исследование образцов периферической крови недоношенных новорожденных на автоматическом гематологическом анализаторе позволило нам выявить, что влияние количества нормобластов на общее количество лейкоцитов отображается на дисплее монитора анализатора в виде «флагов» - «NRBC» в 100%. У 100% исследуемых образцов изменялась гистограмма, на которой четко отмечалась фракция тени эритроцитов, а в некоторых случаях пик этой фракции находился на уровне пика фракции лейкоцитов. Также встречались гистограммы, в которых тени эритроцитов плавно сливались с лейкоцитами.

Исходя из полученных данных, нами был сделан вывод, что у недоношенных детей необходима микроскопия мазков крови с целью подсчета лейкоцитарной формулы, количества нормобластов и коррекции количества лейкоцитов, независимо от того, каким гематологическим анализатором оснащено лечебное учреждение. Наличие «флагов», скаттерограмм, гистограмм значительно облегчает задачу, направляя исследователя по пути оптимизации диагностического процесса.

Полученные нами данные полностью совпадают с мнением большинства авторов о необходимости просмотра мазков крови. У детей частота микроскопии мазков может варьировать от 38 до 87%. В случае исследования гемограммы недоношенных детей нами предлагается 100% просмотр мазков во избежание выдачи заключений с неистинным количеством лейкоцитов.

Проведенная нами работа полностью подтверждает мнение, высказанное Pinzonetal (2008): «Важно, чтобы каждая лаборатория самостоятельно определяла эффективность работы своих анализаторов и оптимизировала рабочий процесс, принимая во внимание, что разные анализаторы оказывают разное влияние на эффективность работы».

Г.Н. Зубрихина, В.Н. Блиндарь, И.И. Матвеева, Е.А. Демина. Особенности показателей метаболизма железа у больных распространенными стадиями лимфомы Ходжкина до лечения. ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина», г Москва

Цель и задачи: анализ показателей периферической крови у больных с распространенными стадиями лимфомы Ходжкина (ЛХ), не получавших ранее лечения, с целью дифференциальной диагностики анемического синдрома (АС).

У 23 больных лимфомой Ходжкина распространенными стадиями заболевания, не получавших ранее лечения, проведено исследование периферической крови. Больные имели дополнительные неблагоприятные прогностические факторы, такие как наличие большой массы опухоли и агрессивное течение заболевания. Клинический анализ проводился на гематологическом анализаторе Sysmex XE-2100. Из показателей красной крови помимо числа эритроцитов (RBC) и содержания в них гемоглобина (HGB) оценивали расчетные показатели: средний объем эритроцита (MCV), среднее содержание (MCH) и среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците (MCHC), а также содержание фрагментоци-тов (FRC). Анализировали абсолютное и относительное число ретикулоцитов (RET) и ретикулоцитарные индексы, характеризующие степень зрелости RET. Исследовали концентрацию гемоглобина в ретикулоците (RET-HE). В плазме крови методом иммуноферментного анализа определяли содержание ферритина (ФР) с помощью наборов фирмы «Orgentec Diagnostika GmbH» (Германия), растворимый рецептор трансферрина (рТФР) — с помощью наборов фирмы «BioVendor» (Чехия) и уровень эндогенного эритропоэтина (ЭПО) — с помощью наборов фирмы «Biomerica» (США). Число микро- и макроцитов, гипо- и гиперхромных эритроцитов определяли на анализаторе Advia-120 (США). У всех больных подсчитывали лейкоцитарную формулу и исследовали морфологию эритроцитов.

У больных ЛХ с распространенными стадиями до лечения был выявлен значительный (р<0,001) лейкоцитоз и тромбоцитоз. Анемия диагностирована у 19 больных (83%), была микроцитарной гипохромной с низкими показателями RET-HE, что можно было расценить как железодефицитную анемию (ЖДА). Однако у 18 больных содержание ФР было высоким (более 100 нг/мл) с низким уровнем рТФР (менее 2 мкг/мл) и неадекватно низким степени анемии содержанием ЭПО (менее 100 мЕ/мл). Отмечался высокий уровень фрагментоцитов (более 2,2% по сравнению с контролем -0,02%). Данные случаи были расценены как случаи анемии хронических заболеваний (АХЗ) с функциональным дефицитом железа. Функциональным дефицитом железа называют ситуацию, когда, несмотря на наличие несомненно достаточных его запасов, эритропоэз неадекватно обеспечивается железом. Железо депонировано в клетках мононуклеарных фагоцитов без вторичного его высвобождения цитокинами. У 1 больного выявлена ЖДА на основании низких показателей ФР (менее 22 нг/мл), высокого уровня рТФР (4 мкг/мл) и адекватного степени анемии повышенного содержания ЭПО (более 100 мЕ/мл). У 4 больных ЛХ АС не выявлен, однако у всех был микроцитоз и гипохромия эритроцитов. У двух из них содержание ФР было высоким (132, 145 нг/мл), уровень

рТФР оказался в пределах нормы. Этих больных можно было отнести в группу с латентной формой АХЗ с функциональным дефицитом железа.

Особенностью АС у больных лимфомой Ходжкина с распространенными стадиями заболевания до лечения является наличие АХЗ с выраженным функциональным дефицитом железа. Характерным является микроцитоз, гипохромия эритроцитов с низким содержанием RET-HE, что на основании клинического анализа крови может диагностироваться как ЖДА. Однако высокая концентрация ФР с низким или нормальным содержанием рТФР и низким уровнем ЭПО, не соответствующим степени анемии, свидетельствует об АХЗ. Для дифференциальной диагностики АХЗ и ЖДА необходимо дополнительно к клиническому анализу крови определять ФР, рТФР, ЭПО.

С.А. Клочкова-Абельянц, Г.С. Суржикова. Уровень эритропоэтина при анемиях хронических заболеваний. ГБОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей» Минздрава РФ г Новокузнецка

Анемии хронических заболеваний (АХЗ) являются частью гематологического стресс-синдрома. Согласно современным представлениям, патогенез АХЗ мультифакторный, и в его основе лежит иммуноопосредованный механизм. Активация иммунной системы при воспалительных инфекционных и неинфекционных процессах индуцирует образование про-воспалительных цитокинов, которые могут подавлять экспрессию ЭПО-гена в почечной ткани. Снижение продукции эритропоэтина (ЭПО) оказывает значимое влияние на формирование анемического синдрома.

Целью настоящего исследования явилось определение уровня эритропоэтина при АХЗ и оценка адекватности продукции эритропоэтина при данных состояниях.

Были обследованы 296 женщин в возрасте от 16 до 60 лет с анемическим синдромом, из них 193 с АХЗ, при этом у 121 женщины диагностирована анемия, развившаяся на фоне ревматоидного артрита (РА), у 72 - АХЗ при бактериальных инфекциях (хронический тонзиллит, бактериальный эндокардит, хронический пиелонефрит), у 103 женщин была выявлена железодефицитная анемия (ЖДА) (группа сравнения). Контрольную группу составили 79 практически здоровых женщин. Характер анемии устанавливали на основании результатов исследования метаболизма железа с учетом клинических и гематологических данных. Содержание эритро-поэтина в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с использованием тест-систем фирмы «Вектор-Бест».

Математическая обработка данных проведена с помощью прикладных программ «Microsoft Excel» - 2000, «Biostat», Version 4.03. Результаты обрабатывали с помощью /-критерия Стьюдента и определяли значимость различий (р). Разницу двух сравниваемых величин считали достоверной при р<0,05. Для проверки гипотезы о «нормальности» распределения признака у сравниваемых групп использовали критерий Колмогорова-Смирнова.

Концентрация эритропоэтина у больных ЖДА в среднем составила 77,05±2,3 мМЕ/мл, варьируя от 45 мМЕ/мл до 110 мМЕ/мл, против 14,85±0,61 мМЕ/мл у здоровых женщин (р=0,001). При АХЗ на фоне РА и при бактериальных инфекциях содержание эритропоэтина было также повышенным по сравнению с уровнем его у здоровых лиц и составило 21,26±0,85 и 22,27±0,91 мМЕ/мл, с колебаниями от 15-30 и 14-36 мМЕ/мл соответственно (р=0,001).

Значимой корреляции концентрации эритропоэтина с уровнем гемоглобина при АХЗ на фоне РА и при бактериальных инфекциях нами не обнаружено, в то время как при ЖДА выявлена обратная взаимосвязь между уровнем гемоглобина и ЭПО (r=-0,68) (р=0,000).

В отличие от здоровых и больных ЖДА, у которых экспрессия ЭПО обратно пропорциональна степени оксиге-нации тканей и уровню гемоглобина, у больных с анемией хронических заболеваний продукция эритропоэтина оказа-

лась неадекватна степени выраженности анемии. Критерием неадекватно низкой продукции ЭПО степени тяжести анемии является коэффициент ^(О)ЭПО/^(П)ЭПО (отношение логарифма определяемого (О) уровня ЭПО (в сыворотке обследуемого пациента) к логарифму предполагаемого (П) уровня ЭПО (в сыворотке пациента с ЖДА с тем же уровнем гемоглобина). Продукцию ЭПО считают неадекватно низкой степени анемии при к^(О)ЭПО/^(П)ЭПО<0,9. В наших исследованиях ^(О)ЭПО/^(П)ЭПО у больных с АХЗ на фоне РА и при бактериальных инфекциях составил 0,704 и 0,714 соответственно.

Патогенетический эффект эритропоэтина заключается в противодействии антипролиферативному влиянию ци-токинов, стимуляции синтеза гема в эритроидных клетках костного мозга, уменьшению величины «неэффективного эритропоэза». Неадекватно низкая продукция эритропоэ-тина степени тяжести анемии является обоснованием для терапевтического применения эритропоэзстимулирующих препаратов.

Ю.И. Жиленкова', О.Ю. Верлинский2, С.С. Бессмельцев3, Т.М. Ивашикина4, А.В. Козлов'. Подходы к дифференциальной диагностике микроцитарных гипохромных анемий.

Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова; 2Институт репродуктивной генетики, Чикаго, США; 3ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА России»; 4СПб ГУЗ Детский консультативно-диагностический центр

Ранняя диагностика гемоглобинопатий становится актуальной в России в связи с активной миграцией населения. Осложнения, связанные как с наличием гемоглобинопатии, так и с проводимым лечением, могут стать значимой медицинской проблемой.

Цель работы - разработка лабораторных подходов к дифференциальной диагностике микроцитарных гипохромных анемий.

Для дифференциальной диагностики микроцитарных гипохромных анемий нами предложен лабораторный алгоритм, включающий электрофоретические и молекулярно-биологические методы исследования. Для его апробации обследованы 57 пациентов различных возрастных групп, находившихся на обследовании и лечении в СПб ГУЗ ДКДЦ и ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии» в Санкт-Петербурге. Пациенты были распределены по двум группам. Основную группу составили 37 пациентов с гемо-глобинопатиями (19 мужчин, 18 женщин, возраст 2-58 лет). Критерии включения: микроцитоз (MCV<80 фл), гипохромия (МСН<27 пг), концентрация железа в сыворотке крови (для женщин >9 мкмоль/л, для мужчин >11,6 мкмоль/л) и фер-ритина (для женщин >12 мкг/л, для мужчин >15 мкмоль/л). Диагноз гемоглобинопатии подтверждали с помощью разделения фракций гемоглобина методом капиллярного электрофореза (MINICAP, Sebia, Франция), электрофореза на агарозе и изоэлектрофокусирования (SAS1 и SAS2 Helena, Великобритания). Мутации бета-глобинового гена определяли методом обратной гибридизации продуктов мультиплекс-ПЦР с олигонуклеотидными зондами, фиксированными на стрипах (ViennaLab Diagnostics, Австрия).

В группу сравнения были включены 20 пациентов с ми-кроцитарными гипохромными анемиями (9 мужчин, 11 женщин, возраст 2-54 года). Критерии включения - доказанная микроцитарная гипохромная анемии без гемоглобинопатии. Материалом для исследования служила венозная кровь.

В биоматериале, полученном от 37 пациентов основной группы, было обнаружено:

1. большая и промежуточная форма бета-талассемии - у 5 пациентов (значительное увеличение Hb F>10% (от 26,9 до 30,9%), молекулярно-биологический анализ выявил 2 гомозиготы (2 Р+/Р+) и 3 компаунд гетерозиготы (2 р0/р0 и 1 р0/ р+);

2. малая форма бета-талассемии - у 30 пациентов (увеличение Hb А2 >3%, от 3,9 до 6,6%, и/или Hb F >1%, от 1,2 до 8,4%), МБА выявил 1 компаунд гетерозиготу ф0/р+) и 29

гетерозигот ф0 или р+);

3. сочетанная форма бета-талассемии с гемоглобинопатией D - у 1 (увеличение НЬ F до 3,8% и НЬ D до 8,8%) - гомозигота (Р+/Р+);

4. серповидно-клеточная анемия - у 1 пациента при полном отсутствии НЬ А на фоне НЬ S 85,1%, НЬ F 11,9% и НЬ А2 3% - гомозигота по НЬ S.

Была определена структура мутаций: codon 8 (-АА) - 13; ^ 1.110 ^>А) - 12; ^оп 5 (-СТ) - 4; ^ 2.745 (С^) - 3; ^оп 8/9 - 2. Мутации ^ 1.5 ^>С), ^ 2.1 ^>А), ^ 1.6 (Т>С), 101 (С>Т), ^оп 6 (А>Т) - НЬ S - встречались по 1 разу.

В биоматериале, полученном от 20 пациентов группы сравнения, фракция НЬ А2 не превышала 3%, НЬ F - 1%.

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что определение фракций гемоглобина методом электрофореза позволяет подтвердить/опровергнуть диагноз гемоглобинопатии, а молекулярно-биологический анализ - уточнить форму гемоглобинопатии.

Сочетание методов электрофореза и молекулярно-биологического анализа позволило установить диагноз гемоглобинопатии и уточнить ее форму у обследованных нами пациентов, страдающих микроцитарными гипохромными анемиями.

А.И. Ермаков, Н.Г. Кобзева, И.А. Подайко, Л.Б. Гайковая, Т.В. Вавилова. Анализ популяционного состава лейкоцитов периферической крови при воспалительном процессе с использованием технологии HEMATOFLOW-CYTOD-ПТ®. Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург

Совершенствование лабораторных технологий предоставляет возможность проводить раннюю и эффективную оценку клеточного состава периферической крови с последовательным целенаправленным использованием возможностей проточной цитометрии на анализаторах ВесктапСоикеги панели реагентов CytoDiff®.

Целью настоящего исследования являлся анализ популяционного состава лейкоцитов периферической крови при остром и хроническом воспалении с использованием панели реагентов CytoDiff®.

В исследование были включены 40 человек: 25 пациентов в первые сутки поступления в клинику и 15 лиц без признаков воспалительного процесса, сопоставимых по возрасту и полу с основной группой. Больные были разделены на 2 подгруппы: I подгруппа («=16) с атеросклерозом артерий нижних конечностей в качестве модели хронического воспалительного процесса и II подгруппа («=9) - с гнойно-воспалительными заболеваниями различной локализации. Оценивали клеточный состав венозной крови с помощью дифференцированного подсчета лейкоцитов с использованием двухплатформенной технологии методом проточной ци-тометрии (ВесктапСоиКег, США).

Статистически достоверного различия по общему количеству лейкоцитов между подгруппами больных и в сопоставлении с донорами выявлено не было, хотя имел место разброс значений в подгруппе острого воспаления. У этих же больных отмечено значимое (р<0,05) снижение доли В-лимфоцитов, Т- и КК-лимфоцитов и абсолютного количества эозинофилов, а также относительного и абсолютного количества базофилов (р<0,001), что не выявляется стандартным клиническим анализом крови. Отмечена также тенденция к моноцитарной реакции в подгруппе с хроническим воспалением с увеличением CD16+ клеток по сравнению с донорами.

Одновременное использование анализа клеточных субпопуляций на гематологическом анализаторе и проточном цито-метре с фиксированной панелью антител предоставляет новые возможности быстрого исследования и дифференцировки клеточного состава. Снижение количества базофилов при остром воспалении, выявляемое новой технологией, может быть важным диагностическим критерием, что требует дальнейших ис-

следований на значительной выборке пациентов.

Данное исследование поддержано грантом компании «BECKMANCOULTER, INC.».

Д.Ю. Соснин, Б.Ф. Фалков, О.Г. Кубарев, А.Ю. Башкиров, Н.В. Поздин. Оценка качества распознавания клеток в мазках периферической крови системой автоматического анализа мазков крови VisionHema®Ultimate. ГБОУ ВПО «Пермский государственный медицинский университет им. акад. Е.А. Вагнера» Минздрава РФ, г. Пермь

Цель исследования: оценить скорость подсчета и правильность распознавания клеток в окрашенных мазках крови.

Скорость полного цикла исследования мазка крови при подсчете лейкоцитарной формулы из 100 лейкоцитов исследовали на системе автоматического анализа VisionHema®Ultimate (VHUltimate) («WestMedica», Австрия). Мазки крови (n=50) готовили из образцов ЭДТА стабилизированной венозной крови лиц, с нормальными показателями общего анализа крови. Содержание лейкоцитов в периферической крови составило 6,2±1,8109/л и колебалось от 4,8-109/л до 9,1-109/л. Для оценки правильности распознавания клеток периферической крови классификатором VHUltimate рассчитывали значения диагностической чувствительности (ДЧ), диагностической специфичности (ДС) и диагностической эффективности (ДЭ) для каждого класса лейкоцитов.

Средняя скорость цикла сканирования одного стеклопре-парата системой VisionHemaUltimate составила 1'42"±32" (минуты/секунды), из них около половины времени 39"-41" система затрачивала на перемещение стеклопрепарата из штатива на предметный столик и обратно в штатив, считывание штрих-кода, нанесение иммерсионного масла. Собственное время сбора галереи клеток составило около 1'15'' ± 17''.

Эффективность работы классификатора составила более 96% для всех оцениваемых типов нормальных клеток, обычно присутствующих в мазке крови человека. Наиболее высокие значения достигнуты для сегментоядерных нейтрофилов (ДЧ 98%, ДС 97%, ДЭ 99%), для лимфоцитов (ДЧ 98%, ДС 99%, ДЭ 99%), для моноцитов (ДЧ 97%, ДС 98%, ДЭ 98%). Для эозинофилов и базофилов показатели распознавания составили соответственно (ДЧ 94%, ДС 98%, ДЭ 96%) и (ДЧ 86%, ДС 99%, ДЭ 97%). Для палочкоядерных нейтрофилов операционные критерии составили (ДЧ 89%, ДС 96%, ДЭ 99%) и превышали 85%.

Высокая правильность распознавания системой VHUl-timate клеток в мазках периферической крови уменьшила время валидации результатов анализа сотрудником клинико-диагностической лаборатории (КДЛ). Среднее время, затраченное сотрудником КДЛ на проверку, корректировку и утверждение результатов, представленных системой VHUlti-mate, составило 15"-20" (секунд).

Учитывая, что система способна функционировать 24 ч в сутки, расчетная производительность системы достигает примерно 700 стеклопрепаратов в сутки.

Полученные результаты тестирования системы автоматического анализа свидетельствуют о высокой эффективности работы системы VisionHema®Ultimate.

Л.Ю. Гривцова, Н.Н. Тупицин. Диагностика острых лейкозов в соответствии с концепцией EuroFlow. Лаборатория иммунологии гемопоэза ФГБНУ РОНЦ им. Н.Н. Блохи-на, Москва

Диагностика лейкозов и лимфопролиферативных заболеваний на сегодняшний день является одним из важнейших вопросов в современной клинической лабораторной диагностики, от которого напрямую зависит правильно поставленный диагноз и, как следствие, адекватно назначенная терапия. На сегодняшний день доступно большое количество реагентов и тест-систем, но общепринятой схемы, стандартных панелей моноклональных антител, которые бы использовались во всех онкогематологических лабораториях, в России на сегодняшний момент нет. В этом вопросе, к сожалению, и по сей день каждая лаборатория проявляет самостоятельность, которая приводит к невозможности сравнить результаты между

двумя отдельно взятыми лабораториями, и в некоторых случаях вызывают сомнение подобранные комбинации антител.

В течение года в лаборатории иммунологии гемопоэза Российского онкологического научного центра им. Н. Н. Блохина проводилась работа по внедрению и адаптации концепции EuroFlow, общепризнанной в крупнейших гематологический центрах Европы и мира. Концепция, которая зарекомендовала себя как мощный диагностический инструмент, представляет собой набор стандартизованных подобранных панелей моноклональных антител, опробированных в 11 лабораториях в течение 10 лет для диагностики всех нозологических форм лимфопролиферативных заболеваний и лейкозов. В реалии нашей лабораторной практики мы представляем наш опыт диагностики острых лейкозов с учетом данной концепции и опыта, накопленного за время работы. Работа производилась на приборе BDFACSCantoII (производства BDBiosciences, США), для воспроизводства панелей EuroFlow использовались моноклональные антитела производства BDBiosciences, США.

Постановка скрининговых проб для острых лейкозов -проба acuteleukemiaoptimizationtube - проводилась согласно протоколам, рекомендованным фирмой-производителем и описанным в работах EuroFlow. Панель для диагностики острых лейкозов согласно EuroFlow - это всего лишь одна пробирка с 8 антителами различной специфичности. Их сочетание/взаимоисключение позволяет в более чем 98% случаев диагностировать и дифференцировать линейно острый лейкоз. Уже на данном этапе возможно определиться с типом бластных клеток - лимфоидные Т- или В- либо миело-идные. Для идентификации бластной популяции стандартно на всех этапах диагностики, включая скрининг, используется CD45 антиген. В пробе оцениваются 3 цитоплазматических маркера линейной принадлежности - CD3 (T-клетки), МРО (миелоидная линия). В качестве наиболее специфичного цитоплазматического маркера В-клеток принят CD79b, а не традиционный CD22, ввиду того, что цитоплазматическая экспрессия CD22 не является специфичной для В-клеток, экспрессию его демонстрируют также и нормальные базофи-лы, тучные клетки и плазмоцитоидные дендритные клетки. В качестве маркера клеток-предшественников справедливо выбран CD34, а не TdT, именно CD34-антиген экспресси-рован на предшественниках всех линий без исключения. В большинстве случаев (69%) бласты мономорфно экспрес-сировали в цитоплазме CD79а и CD19 на мембране, часть бластных клеток были CD34-положительными.

Точно выверенная комбинация антител с успехом себя оправдала, в нашей лаборатории мы продолжим адаптировать и внедрять другие стандартизованные панели, рекомендованные EuroFlow.

А.И. Мининкова', А.И. Костин', С.А. Луговская2, М.Е. Почтарь2. Оценка количества тромбоцитов и тром-боцитарных параметров, измеряемых гематологическим анализатором CELL-DYN SAPPHIRE (ABBOTT LABORATORIES S.A., США). 1ГБУЗ ГКБ им С.П. Боткина ДЗМ; 2Кафедра клинической лабораторной диагностики ГБОУ ДПО РМАПО Минздрава РФ

Цель - сравнить подсчет числа тромбоцитов оптическим и импедансным методами на гематологическом анализаторе CELL-DYN Sapphire (Abbott Laboratories S.A., США). Получить референтные значения количества тромбоцитов и тромбоцитарных параметров (MpV (средний объем тромбоцитов), pDW (показатель анизоцитоза тромбоцитов), pCT (тромбокрит), %rp (процент ретикулярных тромбоцитов). Изучить стабильность тромбоцитарных параметров крови (pLT, MpV, pDW, pCT, %rp) в течение суток.

В качестве объекта исследования использовались образцы венозной крови 54 практически здоровых людей, собранные в закрытые системы взятия крови S-Monovette® производства фирмы SARSTEDT (Германия) с К2-ЭДТА. Взятие крови осуществлялось утром натощак. Все пробы анализировались через 2 и 3 ч после взятия, 17 проб дополнительно иссле-

довались через 24 ч после взятия крови. Между исследованиями образцы хранились при комнатной температуре. На гематологическом анализаторе CELL-DYN Sapphire при каждом исследовании из цельной венозной крови проводилось определение количества тромбоцитов двумя методами оптическим (РиГо) и импедансным (PLT.) , а также MPV, PDW, PCT, %rP. Для статистического анализа результатов исследования использовалась программа GraphPadPrism (GraphPad Software, Inc., США). Данные представлены в виде медианы, 5-95 процентиль. Вследствие небольшого количества людей в выборке при сравнении двух различных методов измерения тромбоцитов (54 образца) и динамики тромбоцитарных параметров во времени (17 проб) использовались непараметрические критерии (критерий Манна-Уитни для двух независимых групп, критерий Вилкоксона для двух групп, тест Фрэйдмана - для сравнения трех и более зависимых групп). Различия считались достоверными при p<0,05.

При сравнении двух различных методов подсчета числа тромбоцитов, измеренных через 2 ч после взятия крови («=54, непараметрический критерий Манна-Уитни, р=0,6385) и через сутки («=17, непараметрический критерий Манна-Уитни, р=0,1376), статистически достоверной разницы выявлено не было. Референтные значения числа тромбоцитов, измеренных двумя методами (PLTo и PLTi), установленные для образцов венозной крови, исследованных через 2 ч после взятия, составили 244,5-109/л (146,3-316,8) и 245,0-109/л (143,3-304,3) соответственно. Получены следующие референтные значения тромбоцитарных параметров на анализаторе CELL-DYN Sapphire: MPV - 8,205 фл (6,660-9,903), PDW - 16,20 GSD (15,20-17,55), PCT - 1,99% (1,438-2,470), % rP - 2,46% (1,001-6,258).

При анализе числа тромбоцитов (PLTo) в динамике было установлено достоверное снижение их через сутки после хранения крови при комнатной температуре - с 261,0-109/л (144,0-321,0) до 227,0-109/л (133,0-288,0). Такие же изменения были отмечены при определении PCT с 2,09 (1,48-2,65) до 1,69 (1,16-2,35). При изучении изменения числа тромбоцитов, измеренных импедансным методом (PLTi), а также MPV, RDW и %rP в динамике хранения крови достоверных различий не установлено.

Выводы. 1. Количество тромбоцитов, подсчитанных им-педансным и оптическим методом на гематологическом анализаторе CELL-DYN Sapphire, у практически здоровых лиц достоверно не отличается.

2. Хранение проб в вакуумных пробирках с К2-ЭДТА при комнатной температуре в течение суток не влияет на PLTi, MPV, PDW и %rP, в то время как PLTo и величина PCT снижаются.

А.И. Мининкова', С.А. Луговская2, М.Е. Почтарь2. Сравнение подсчета числа тромбоцитов и их параметров на трех гематологических анализаторах (ADVIA 2120 (SIEMENSHEALTHCAREDIAGNOSTICSINC, США), CELL-DYN SAPPHIRE (ABBOTT LABORATORIESS.A., США), UNICEL® DXH800 (BECKMAN COULTER®, США). 1ГБУЗ ГКБ им. С.П. Боткина ДЗМ; 2Кафедра клинической лабораторной диагностики ГБОУ ДПО РМАПО Минздрава РФ

Цель: сравнить подсчет числа тромбоцитов (PLT) и тром-боцитарных параметров на гематологических анализаторах: ADVIA 2120 (Siemens HealthcareDiagnosticsInc, США), CELL-DYN Sapphire (Abbott Laboratories S.A., США), Uni-Cel® DxH800 (Beckman Coulter®, США).

Использовались образцы венозной крови 40 пациентов, собранные в закрытые системы взятия крови S-Monovette® производства фирмы SARSTEDT (Германия) с К2-ЭДТА. У 14 человек имела место тромбоцитопения (PLT< 150-109/л), у 22 PLT было в области среднего диапазона определения (mi« =135-109/л, max=560-109/n) и у 4 больных отмечался тромбоцитоз (PLT> 600-109/л). Цельная венозная кровь в течение 2 часов исследовалась поочередно на следующих анализаторах: ADVIA 2120, CELL-DYN Sapphire и UniCel

DxH800. Подсчет PLT оптическим методом (PLTo) выполнялся на ADVIA 2120 и CELL-DYN Sapphire, импедансным методом (PLTi) - на CELL-DYN Sapphire и UniCel DxH800. Кроме того, на всех приборах измерялись тромбоцитарные параметры: MPV (средний объем тромбоцитов), PCT (тром-бокрит), PDW (показатель анизоцитоза тромбоцитов) анализировался только на CELL-DYN Sapphire и UniCel DxH800, которые определяли данный показатель одним методом (геометрическое стандартное отклонение (GSD) в абсолютных числах). Для статистического анализа результатов исследования использовалась программа GraphPadPrism (GraphPad Software, Inc., США). Значения показателей представлены в виде медианы, 5% и 95% процентиль. Вследствие небольшого числа пациентов в выборке при сравнении приборов использовались непараметрические критерии (тест Фрэйдмана - для сравнения трех и более зависимых групп, тест Вил-коксона - для сравнения двух зависимых групп), и различия считались достоверными при p<0,05. Для всех приборов был высчитан ранговый коэффициент корреляции Спирмена.

При сравнении подсчета числа PLT, определенного на общей выборке («=40), получена хорошая корреляция значений PLT на всех анализаторах (r=0,99). Однако выявлены достоверные отличия (p<0,01 и p<0,05) между результатами анализа PLT на CELL-DYN Sapphire (PLTo=208,0-109/n (26,06-852,7) и PLTi =210,0-109/л (31,16-1014,0)), UniCel DxH800 (190,0-109/л (26,0-847,8)) и ADVIA 2120 (194,0-109/л (30,90-893,3)). CELL-DYN Sapphire показал более высокие значения PLT по сравнению с другими анализаторами. При анализе работы трех приборов на уровне среднего диапазона определения количества тромбоцитов («=22) были получены данные, аналогичные общей выборке. При сравнении MPV, измеренного на трех приборах («=40), анализатор UniCel DxH800 показал достоверно большие значения (8,95 фл (7,21-12,73)) (p<0,05), чем приборы ADVIA 2120 (7,90 фл (6,61-12,19)) и CELL-DYN Sapphire (8,18 фл (5,96-13,56)). Значения PCT не отличались на всех анализаторах. Параметр PDW на приборе UniCel DxH800 был достоверно выше (16,90GSD (15,72-18,46)) (p<0,05), чем на анализаторе CELL-DYN Sapphire (16,20GSD (13,92-19,10)).

Выводы. 1. Выявлена хорошая корреляция значений PLT на всех гематологических анализаторах (r = 0,99).

2. На уровне средних значений тромбоцитов все приборы показали аналогичные результаты подсчета числа тромбоцитов.

3. Прибор UniCel DxH800 показал достоверно более высокие значения MPV по сравнению с анализаторами CELL- и ADVIA 2120 (p<0,05).

4. Параметр анизоцитоза тромбоцитов (PDW), измеренный на приборе CELL-DYN Sapphire, был достоверно ниже, чем на анализаторе UniCel DxH (p<0,05).

5. Значения тромбокрита (PCT) не отличались на всех трех гематологических анализаторах (ADVIA 2120, CELL-DYN Sapphire, UniCel® DxH800).

С.Л. Вовк, А.Д.Черемных, А.Ф. Гараева, М.М. Коваль. Результаты работы ФГБНУ «НИИ медицинской генетики» г. Томска по обследованию больных хроническим миело-лейкозом в 2014 г. ФГБНУ «НИИ медицинской генетики», Томск

Для диагностики и лечения хронического миелолейко-за (ХМЛ) в 2014 г. нами было проведено 105 стандартных цитогенетических анализов клеток костного мозга у предположительно больных ХМЛ. В 16 случаях, кроме методов стандартной цитогенетики, использовался FISH-метод для выявления филадельфийской хромосомы первичным пациентам с типичной клинической картиной ХМЛ, у которых при кариотипировании был обнаружен нормальный карио-тип, и в 2 случаях для подтверждения диагноза у больных со сложными вариантными транслокациями. Кроме того, для выявления химерного гена BCR-ABL (12) и оценки терапии больных ХМЛ (91) проводились молекулярно-генетические исследования (ПЦР).

В 2014 г. из 42 обследованных пациентов с предполагаемым диагнозом ХМЛ 12 человек являлись впервые выявленными больными, что составило 28,6%. У 10 была обнаружена типичная транслокация t (9; 22) в 100% митозов, в двух (17%) случаях были выявлены вариантные транслокации с вовлечением других хромосом t (3; 9; 22), t (9; 17; 22). У одного больного при стандартном цитогенетическом анализе, кроме филадельфийской хромосомы, обнаружена конституциональная перестройка 45,XY,der (13; 14), что подтверждено кариотипированием лимфоцитов периферической крови. Такое большое количество выявленных больных можно объяснить тем, что в НИИМГ обследуются жители не только Томской, но и Кемеровской области.

Результаты терапии больных ХМЛ оценивались с помощью стандартного цитогенетического анализа с GTG-окрашиванием и молекулярно-генетического ПЦР в реальном времени. Полный цитогенетический ответ (ПЦО) был получен у 24 пациентов. У одной пациентки в процессе лечения наблюдалось появление трисомии по 8-й хромосоме. Частичный цитогенетический ответ (ЧЦО) - у 6 человек; малый цитогенетический ответ (МЦО) - у 2; минимальный цитогенетический ответ (МинЦО) - у 3 пациентов. Потеря ПЦО выявлена у 3 человек и появление ^17)(с|) - маркера бластного криза, у одного из этих пациентов.

Всего хромосомные нарушения в группе больных гемо-бластозами встречались в 36 (34,3%) случаях.

В.В. Шувакина, В.П. Федотов, Н.Н. Безенкова, Т.В. Федотова. Неонатальный скрининг в Центрально-Черноземном регионе России с 1988 по 2015 г. БУЗ ВО «ВОКБ № 1», Медико-генетическая консультация, г. Воронеж

Воронежская межобластная медико-генетическая консультация проводит массовый неонатальный скрининг на фенилкетонурию (ФКУ) с 1988 г. в Центрально-Черноземном регионе (ЦЧР) с населением 8,7 млн человек (число родов 70 тыс. в год). В разные периоды проведения скрининга число обследуемых территорий менялось от 3 до 7 областей ЦЧ. Это было связано с поэтапностью внедрения скрининга, а также с переходом некоторых областей на самостоятельное обследование своих новорожденных на ФКУ. Охват составил более 98%.

С 1988 по 1991 г. обследовали новорожденных микробиологическим тестом Гатри - полуколичественный метод определения фенилаланина (ФА) в сухих пятнах крови.

С 1991 г. используется флуорометрический метод Fluoroskаn-2 (Labsystems), с 2002 г VICTOR-2 ^аИас). Количественный метод с высокой точностью измерения.

С 2013 г. обследование новорожденных проводится на полностью автоматизированной системе AutoDELFIA. Это система для чувствительного и специфичного количественного анализа аналитов.

За 27 лет скрининга в ЦЧР лабораторией обследовано более 1 млн 392 тыс. новорожденных. Выявлены 219 больных ФКУ детей. Установлена частота ФКУ 1:6356.

В воронежской популяции за весь период обследованы на ФКУ 548 390 новорожденных. Выявлены 80 детей с фенилкетонурией (ФКУ). Частота составила 1:6854. У 94% выявленных детей с ФКУ на фоне диетотерапии достигнут хороший результат.

Новорожденным с ФКУ проведена прямая ДНК-диагностика гена фенилаланингидроксилазы по мажорной мутации (делеция F408) в лабораториях молекулярной генетики РАМН (г. С.-Петербург, г. Москва) и молекулярно-генетической лаборатории (г. Воронеж). При повторном деторождении пренатально (в сроке 9-10 нед беременности) проведена ДНК-диагностика ФКУ в шести воронежских семьях. Гомозиготного состояния по мутантному гену фени-лаланингидроксилазы ни у одного из плодов не обнаружено. Родились здоровые дети, что было подтверждено биохимическим методом после родов, и психомоторное развитие их происходило в соответствии с возрастом.

Скрининг новорожденных на ФКУ позволил установить

частоту заболеваний в Центральном Черноземье (1:6356) и успешно использовать эту модель для профилактики других тяжелых метаболических дефектов.

С 1993 г. проводится неонатальный скрининг на врожденный гипотиреоз (ВГ). Обследовано 972 тыс. детей. Выявлено 176 больных с ВГ. Частота 1:5522.

С 2006 г. Национальный приоритет здравоохранения России позволил вести расширенный неонатальный скрининг на 3 новых дефекта: муковисцидоз, адреногенитальный синдром, галактоземию. Лабораторией обследовано 200 тыс. новорожденных.

Выявлено и подтверждено молекулярно-генетическим исследованием:

37 новорожденных со стойким повышением ИРТ. Частота муковисцидоза 1:5405; 2) 13 случаев адреногенитального синдрома (1:15400); 3) 3 случая галактоземии (1:66 700).

В 18 семьях больных проведена успешная дородовая ДНК-диагностика, в 4 случаях предотвращено рождение больных детей с метаболическим дефектом.

С 2012 г. лаборатория участвует в международной (СДС) программе внешней оценки качества исследований при проведении неонатального скрининга. Лабораторией получен сертификат качества международного образца (CDCATLAN-TA, GEORGIA (USA).

Для повышения эффективности проведения неонатально-го скрининга используется программа «НеоСкринРегистр». Программное обеспечение разработано Воронежской МГК в соответствии с приказом МЗ РФ № 185 от 22.03.2006 г.

Ю.С. Яковлева12, С.Л. Вовк1, Н.Б. Торхова', ЛИ. Диденко1, О.Б. Луканина1. Анализ хромосомной патологии у плода в рамках пренатального скрининга I триместра беременности в Томске и Томской области. 1ФГБНУ «НИИ медицинской генетики, 2БГОУ ВПО СибГМУ Минздрава России

Согласно Постановлению Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2009 г № 1159, с ноября 2010 г. Томская область участвует в проекте по пренатальной диагностике нарушений развития ребенка. Исследования сывороточных маркеров осуществляются на автоматических анализаторах BrahmsKryptor и DelfiaExpres. Расчет риска хромосомной патологии проводится с помощью программ Astraia и LaifCycle c учетом возраста беременной, ультразвуковых и сывороточных маркеров. Все беременные из женских консультаций города и области направляются в Генетическую клинику ФГБНУ «НИИ медицинской генетики» или Областной перинатальный центр на УЗИ в сроке 11-14 нед. Одновременно проводятся исследования крови на сывороточные маркеры (PAPP-A и ß-ХГЧ), рассчитывается индивидуальный риск рождения ребенка с хромосомной патологией.

За период с ноября 2010 по декабрь 2014 г. в Томске и Томской области по данной программе была обследована 45 191 беременная женщина. В группу риска с границами риска 1/100 для программы Astraia и 1/250 для программы LaifCycle, вошли 1186 женщин, что составило 2,6%. Хромосомная патология была выявлена в 210 случаях (17,8%). Спектр хромосомных нарушений представлен числовыми и структурными нарушениями: синдром Дауна диагностирован у 112 плодов (53,3%), синдром Патау - в 11 случаях, синдром Эд-вардса - 27 случаев. Нарушения в системе половых хромосом (синдром Клайнфельтера, синдром Шерешевского-Тернера) отмечены у 26 плодов, в остальных случаях отмечены транслокации и полиплоидия у плода. Следует отметить, что число беременных, прошедших инвазивную пренатальную диагностику, значительно увеличилось в 2014 г; так, в 2011 г. были обследованы 119 беременных, в 2012 г. - 139, в 2013 г. - 234, а в 2014 г. - 518 женщин. При анализе групп беременных женщин, прошедших инвазивную пренатальную диагностику, у которых была выявлена хромосомная патология, выяснилось, что наибольшее число патологии у плода диагностировано в группе риска по сочетанным маркерам (УЗИ, PAPP-A, ß-ХГЧ). Однако синдром Шерешевского-Тернера был выявлен по показаниям УЗ-маркеров. Нельзя не заметить, что

количество выявленной хромосомной патологии в Томске и Томской области остается в пределах 8-12%. Следует отметить, что всего в 2014 г в Томске и Томской области родились 16 детей с синдромом Дауна. Родители пятерых сознательно отказались от инвазивной пренатальной диагностики, хотя относились к группе высокого риска, три супружеские пары пролонгировали беременности с диагностированной хромосомной патологией у плода по собственному желанию, 8 беременных не проходили скрининговые исследования по неизвестным причинам. Таким образом, итогом проведения пренатального скрининга является снижение рождения числа детей с тяжелой хромосомной патологией.

А.А. Лузянина, М.Г. Минаева, О.С. Изместьева, И.Л. Ершова, В.А. Бирюков, Н.В. Северская. Исследование фактора, индуцированного гипоксией 1а (ИГЕ-1а), при патологии предстательной железы. Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба - филиал ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский радиологический центр» Минздрава РФ, Обнинск

Гипоксия является одним из важных звеньев в патогенезе опухолевого процесса. Активная пролиферация опухолевых клеток в условиях неполноценного кровоснабжения приводит к выработке веществ, запускающих каскад реакций, направленных на адаптацию клеток к гипоксии, и одним из них является фактор, индуцированный гипоксией 1а (НШ-1а).

Цель исследования - оценить уровень НШ-1а у больных раком предстательной железы до лечения и через 1 мес после брахитерапии.

В исследование вошли 47 пациентов с морфологически верифицированным диагнозом локализованного рака предстательной железы (РПЖ) до лечения. В качестве контроля были обследованы 35 пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (ДГПЖ) и 45 потенциально здоровых мужчин, сопоставимых по возрасту с исследуемой группой (69±6 и 65±7 лет соответственно). Исследовали концентрацию общего простатического специфического антигена (ПСА) методом ИФА на автоматическом анализаторе (TOSOH, Япония) и уровень НШ-1а - методом ИФА с использованием коммерческих наборов (СшаЫо, Франция). 10 больным РПЖ была проведена лучевая брахитерапия с использованием микрокапсул 1251 в монорежиме, остальным -комбинированная терапия (брахитерапия + гормонотерапия). В динамике оценивали уровень ПСА и НШ-1 а через 1 мес после брахитерапии в монорежиме. Пациенты, дополнительно получающие гормонотерапию, не включены в анализ.

Уровень ПСА в группе больных РПЖ до лечения составил 10,5±1,1 нг/мл, в группе ДГПЖ 5,5±0,3 нг/мл, в контрольной группе 0,39±0,05 нг/мл. Уровень НШ-1а при РПЖ до лечения составил 676,6±268,5 пг/мл (95% ДИ 543,1-810,2 пг/мл) и был достоверно выше по сравнению с группой ДГПЖ - 322,8±194,5 пг/мл (р=0,02, М^) и здоровыми 313,7±268,5 пг/мл (р=0,02, В группе брахитерапии («=10) через 1 мес после лечения уровень ПСА снизился с 9,9±5,6 до 3,1 ± 1,9 нг/мл (р<0,001, парный t-test). Уровень НШ-1а уменьшился незначительно с 668,9±308,9 до 557,7±231,1 пг/мл (р=0,27, парный t-test).

У больных РПЖ повышена концентрация НШ-1а по сравнению с ДГПЖ и здоровыми. В ранний период (через 1 мес) после брахитерапии ПСА является более чувствительным маркером эффективности лечения. Возможность использования НШ-1а в качестве прогностического маркера РПЖ требует проведения дальнейших исследований в отдаленные сроки после лечения.

Е.В. Олемпиева, О.Н. Халимова, Л.В. Макарова. Лабораторная диагностика хронического абактериального простатита. Медико-санитарная часть УФСБ России по Ростовской области, г. Ростов-на-Дону

Распространенность хронического простатита составляет 20-45% среди трудоспособного населения мужчин. При этом существует неоднозначная частота встречаемости отдельных видов простатита: острый бактериальный простатит выявля-

ется в 5-10% случаев, хронический бактериальный простатит - 6-10%, наиболее встречаемой формой заболевания является хронический абактериальный простатит (ХАП) - 80-90%. Современные медицинские технологии не позволяют достоверно обозначить механизмы развития ХП, особенно абактериального. В большинстве случаев этиология, патогенез и патофизиология ХАП остаются неустановленными. Поскольку в настоящее время активные формы кислорода занимают ведущее место в патогенезе деструкции тканей, вызванной развитием воспалительной реакции, то нам представляется целесообразным изучить состояние антиоксидантной защиты у пациентов с верифицированным ХАП.

Целью данного исследования явилось изучение состояния антиоксидантного статуса пациентов с хроническим абактериальным простатитом.

Обследованы 48 пациентов с верифицированным ХАП (клиническая группа), в контрольную группу вошли 30 практически здоровых добровольцев. Пациенты контрольной и клинической группы были сопоставимы по возрасту, не имели острой сопутствующей патологии. Группы обследуемых были сформированы согласно правилам проведения клинических испытаний (GSP) после получения информированного согласия. Материалом для исследования были выбраны эритроциты венозной крови и эякулят, в которых определяли активность ферментов антиоксидантной защиты - суперок-сидисмутазу (СОД), каталазу.

Установлено, что в эритроцитах пациентов клинической группы отмечается угнетение активности СОД на 10,3% относительно контроля, тогда как активность каталазы достоверно превышает его на 23,5%. Можно полагать, что хронический абактериальный простатит характеризуется нарушением процесса диссмутации супероксидного анион-радикала вследствие истощения резервов СОД или нарушения синтеза данного энзима. В эякуляте отмечается синхронный рост активности СОД и каталазы на 38,2 и 53,8% соответственно. Данные изменения сопровождаются избыточной продукцией активных форм кислорода, таких как супероксидный анион-радикал и пероксид водорода. Генерация активных форм кислорода служит причиной повреждения эндотелия сосудистой стенки и подлежащих тканей при воспалении и пости-шемическом поражении. Очевидно, формируется «порочный круг», усиливающий деструктивные процессы на местном уровне. Поскольку речь идет об однонаправленных изменениях анализируемых аналитов, то мы полагаем, что имеет место формирование адаптивной реакции, направленной на избыточную продукцию пероксида водорода, который может служить эндотелийнезависимым фактором регуляции тонуса сосудистой стенки. С другой стороны, избыточная продукция пероксида водорода оказывает активирующее действие на фактор транскрипции NF-kB (nuclear factor kB), который играет ключевую роль в развитии воспалительного процесса, регулируя экспрессию белков острой фазы, молекул адгезии и провоспалительных цитокинов.

Таким образом, на основании полученного фактического материала можно говорить, что хронический абактериальный простатит относится к заболеваниям свободно-радикальной природы, а ведущая роль в развитии патологического процесса принадлежит активным формам кислорода. В этой связи помимо стандартных методов лабораторной диагностики хронического простатита целесообразно проводить исследование антиоксидантного статуса. Можно полагать, что для коррекции выявленных нарушений наряду с традиционной медикаментозной терапией данным пациентам показана коррекция антиоксидантного статуса.

И.И. Долгушин, А.Ю. Савочкина, А.А. Савельева. Анализ показателей семенной жидкости у мужчин с высоким уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов. ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России

Стандартная спермограмма, выполненная согласно рекомендациям ВОЗ (2010), занимает ключевую позицию при оценке репродуктивного здоровья мужчины. Однако прогно-

стическая ценность данного анализа ограничена. В связи с этим зачастую исследователи находятся в поиске новых маркеров бесплодия. Степень фрагментации ДНК сперматозоидов является новым показателем оценки качества семенной жидкости. К настоящему времени накоплено много данных, зачастую противоречивых, относительно взаимосвязи уровня фрагментации ДНК мужских половых клеток и стандартных показателей семенной жидкости. Одним из известных, но малоизученных ферментов семенной жидкости является ДНКаза I.

Цель исследования - оценить стандартные показатели спермограммы, а также концентрацию ДНКазы I семенной жидкости у мужчин с повышенным уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов.

Для решения поставленной задачи были обследованы 30 практически здоровых мужчин. Отсутствие инфекций половых путей подтверждали методом ПЦР. Группу контроля («=16) составили лица с нормозооспермией, степень фрагментации ДНК сперматозоидов <30%. В исследуемую группу вошли мужчины («=14), у которых фрагментация ДНК сперматозоидов была >30%. Показатели спермограммы учитывались согласно рекомендациям ВОЗ, 2010. Целостность хроматина в сперматозоидах мужчин оценивалась согласно методу SCD (sperm chromatin dispersion) (HaloSperm, Halotech, Испания). Полученные данные обрабатывали пакетом программ SPSS-17.0 с применением непараметрического метода U-критерий Манна-Уитни для расчета уровня значимости. Различия считались статистически значимыми при р<0,05 и учитывались как тенденции при 0,05<р<0,10.

Изменения среди физико-химических параметров семенной жидкости отмечены при измерении объема, а именно у лиц с повышенным уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов объем эякулята ниже по сравнению с группой контроля. При изучении параметров кинезисограммы получены более низкое число прогрессивно подвижных сперматозоидов в исследуемой группе и увеличение количества неподвижных половых клеток по сравнению с группой контроля. При изучении морфологии сперматозоидов обнаружено более высокое число патологий шейки по сравнению с группой контроля. Отмечена тенденция к снижению жизнеспособности сперматозоидов в группе мужчин с повышенной фрагментацией ДНК сперматозоидов. Сравнение уровня концентрации ДНКазы I показало, что у лиц с повышенной фрагментацией ДНК сперматозоидов фиксировались значительно более высокие значения концентрации данного фермента.

Выводы. 1. Уровень фрагментации ДНК сперматозоидов связан со стандартными показателями семенной жидкости.

2. При повышенной фрагментации ДНК сперматозоидов изменяется концентрация ДНКазы I семенной жидкости.

Е.Ю. Васильева, М.А. Карпенко, Г.А. Березовская, В.А. Юдина, Е.Е. Казакова, Т.В. Вавилова. Ростовые факторы в прогнозе рестенозов коронарных артерий у пациентов ишемической болезнью сердца, подвергшихся чрескож-ным коронарным вмешательствам. Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр Минздрава РФ, Санкт-Петербург

Нарушение функции эндотелия является ранним индикатором развития и прогрессирования ишемической болезни сердца (ИБС) и других сосудистых заболеваний. Существенное влияние на его состояние оказывают ростовые факторы, обладающие широким спектром биологического воздействия.

Целью исследования являлось изучение концентрации ростовых факторов у больных хронической ИБС, подвергшихся чрескожным коронарным вмешательствам, и их взаимосвязь с рестенозом коронарных артерий.

В исследование включены 108 человек: 75 пациентов (16 женщин, 59 мужчин) с диагнозом ИБС, стабильная стенокардия II-III ФК, средний возраст 58±8 лет, имеющих показания к реваскуляризации миокарда, и 33 практически здоровых донора, сопоставимых по полу и возрасту. Всем больным было

выполнено стентирование коронарных артерий в СЗФМИЦ. По результатам годичного проспективного наблюдения при условии стандартной терапии пациенты были разделены на 2 группы: I группа («=66) с благоприятным течением отдаленного послеоперационного периода, II группа («=9) - больные, у которых в течение года развился рестеноз коронарных артерий. Всем включенным в исследование была измерена концентрация васкулоэндотелиального фактора роста (VEGF-A), тромбоцитарного фактора роста (PDGF-AA), фактора роста фибробластов 2 (FGFbasic) и трансформирующего фактора роста p1 (TGF-P1) в сыворотке методом иммуноферментно-го анализа с помощью планшетного ридера «ВioRad», США. Образцы венозной крови брали у пациентов в первые сутки пребывания в стационаре, до вмешательства.

Значения концентрации TGF-P1 и FGF basic были существенно ниже в группе пациентов с ИБС по отношению к группе контроля (10 067 против 37 843 пг/мл и 2,47 против 9,42 пг/мл соответственно; р<0,001), в то время как в отношении VEGF-A и PDGF-AA таких различий не выявлено. Вероятным объяснением может быть потребление и/или истощение продукции факторов роста при активном атероскле-ротическом процессе. В группах больных с различными клиническими результатами в отдаленные сроки после операции (развитие рестенозов или неосложненное течение) анализ концентрации факторов роста до вмешательства не показал значимых отличий.

У больных, страдающих хронической формой ИБС, отмечается снижение концентрации фактора роста фибробластов 2 и трансформирующего фактора роста-р1 до вмешательства на коронарных артериях по сравнению со здоровыми донорами. Корреляции этих изменений с исходами лечения в течение года не выявлено. Необходимо продолжение проспективного наблюдения с динамической оценкой содержания факторов и увеличением выборки больных.

Л.В. Кремнева, С.Н. Суплотов. Оценка скорости клубочковой фильтрации у больных хронической ИБС с предиабетом после коронарного шунтирования. ГБОУ ВПО Тюменский государственный медицинский университет Минздрава РФ, г. Тюмень

Цель исследования - выявление предикторов снижения скорости клубочковой фильтрации в связи с коронарным шунтированием у больных хронической ИБС с ранними нарушениями углеводного обмена.

В исследование включали больных хронической ИБС с ранними нарушениями углеводного обмена (НУО), госпитализированных в клинику для операции коронарного шунтирования (КШ). Критерии исключения из исследования - возраст >75 лет, сахарный диабет, инфаркт миокарда и инсульт давностью менее двух месяцев, обострение язвенной болезни, острые и период обострения хронических заболеваний, тяжелые болезни почек, печени, легких, терминальная хроническая сердечная недостаточность (ХСН), онкологическая патология. Больным проводили обследование, включавшее общий анализ крови, мочи, биохимические показатели крови, в том числе креатинин, пероральный тест толерантности к глюкозе (ПТТГ), ЭКГ, ЭХО-кардиографию, коронарографию по методике М.Р. Judkins (1967). Содержание креатинина в крови определяли по методу Jaffe на аппарате SynchronCXSystems фирмы BeckmanCoulter (США). Функцию почек оценивали по скорости клубочковой фильтрации (СКФ) в соответствии с классификацией хронической болезни почек NKF/KDOQI (2002). СКФ рассчитывали по формуле CKD-EPI. Всем больным проводили ПТТГ по стандартной методике. Критерии установления диагноза ранних НУО (предиабета), включавших гипергликемию натощак (при двухкратном исследовании >5,5<6,1 ммоль/л) и нарушенный тест толерантности к глюкозе (НТТГ) (через 2 ч после нагрузки глюкозой >7,8<11,1 ммоль/л), были общепринятыми. Содержание глюкозы в крови определяли электрохимическим методом с помощью чип-сенсоров на аппарате BIOSENC_lineclinic (Германия). На вторые и третьи сутки

после КШ, при необходимости в более поздние сроки повторно определяли содержание креатинина в крови и рассчитывали СКФ. О развитии дисфункции почек в связи с КШ судили по снижению СКФ ниже 60 мл/мин/1,73 м2.

СКФ определена как минимум трижды после КШ у 48 из 54 больных с ранними НУО. Средний возраст больных хронической ИБС с предиабетом составил 60±7,4 года, длительность ИБС - 6,2±5,4 года. Мужчин было 37 (77,1%), женщин 11 (22,9%).

Стенокардия напряжения II ФК выявлена у 6 (12,5%), III ФК - у 37 (77,1%), IV ФК - у 5 (10,4%), ХСН I ФК - у 1 (2,1%), II ФК - у 19 (39,6%), III ФК - у 28 (58,3%) лиц. Артериальную гипертонию имели 46 (95,8%) человек. СКФ <60 мл/мин/1,73 м2 до КШ выявлена у 1 (2,1%) больного. Операция КШ в условиях искусственного кровообращения (ИК) выполнена у 42 (87,5%), на работающем сердце - у 6 (12,5%) лиц. Длительность ИК составила 94,8±23, окклюзии аорты -45,5±15 мин. Число анастомозов на одного пациента составило 2,8±0,8. При статистической обработке материалов непрерывные переменные представлены как M±SD. Предикторы снижения СКФ <60 мл/мин/1,73 м2 после КШ определяли методом пошагового регрессионного анализа.

Зарегистрировано снижение СКФ после хирургической реваскуляризации миокарда в сравнении с исходным уровнем с 91±18,8 до 80±30 мл/мин/1,73 м2 (р=0,010). Число больных, имевших СКФ <60 мл/мин/1,73 м2 после КШ, увеличилось с 2,1% (1 пациент) до 22,9% (11 больных) (p<0,064). Доля лиц со снижением СКФ < 60 мл/мин/1,73 м2 после КШ составила 21,7% (10 пациентов). Максимальное снижение СКФ происходило на первые-вторые сутки после КШ и было транзитор-ным.

Для выявления предикторов снижения СКФ <60 мл/ мин/1,73 м2 после КШ выборка больных поделена на 2 группы: со СКФ после КШ <60 мл/мин/1,73 м2 («=11) и >60 мл/ мин/1,73 м2 («=37). У пациентов двух групп проанализированы клинические, биохимические, ЭХОКГ, ангиографи-ческие параметры, уровни гликемии при ПТТГ, показатели оперативного вмешательства, проводимая терапия (68 показателей). Снижение СКФ <60 мл/мин/1,73 м2 было ассоциировано с более старшим возрастом (63±7,2 и 59±7,2 года, p=0,039)), более низкой исходной СКФ (82±21,2 и 93±17,6 мл/мин/1,73 м2, p=0,010), большей продолжительностью ИК (108±25 и 90±21 мин, p=0,030). Указанные показатели включены в пошаговый логистический регрессионный анализ. Предиктором снижения СКФ <60 мл/мин/1,73 м2 в связи с КШ явился показатель продолжительности ИК (ß=0,034, Х2=4,232, p=0,040, относительный риск 1,035, 95% доверительный интервал 1,002-1,069).

Среди больных хронической ИБС с предиабетом доля лиц со снижением СКФ <60 мл/мин/1,73 м2 после КШ составила 21,7%. Увеличение продолжительности ИК более 108±25 мин значимо повышало относительный риск снижения СКФ <60 мл/мин/1,73 м2 после вмешательства.

А.И. Пиянзин, В.В. Петрова, О.М. Назаркина, Н.В. Жукова, А.А. Баканов, О.В. Назаровская, М.Р. Сапкина, Е.А. Мош-кина, Т.В. Балацкая. Диагностическое значение определения микроальбуминурии у детей с инсулинозависимым сахарным диабетом. КГБУЗ Алтайская краевая клиническая детская больница, г. Барнаул; ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул

Одним из ранних признаков поражения почек у больных сахарным диабетом является микроальбуминурия. В настоящее время недостаточно изучен вопрос возможности использования данного теста для оценки степени поражения различных органов у детей и подростков, страдающих сахарным диабетом.

Цель - оценить эффективность выявления повышенного уровня альбумина в моче у детей с инсулинозависимым сахарным диабетом, имеющих различные осложнения.

Обследованы 45 девочек и 46 мальчиков в возрасте от 6 до 17 лет, находившихся на лечении в Алтайской краевой кли-

нической детской больнице с диагнозом инсулинозависимый сахарный диабет. Клинические диагнозы были выставлены в соответствии с Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем (МКБ-10). Количественное определение уровня экскреции альбуминов с мочой проводили иммунотурбидиметрическим методом (набор реагентов фирмы «HumanGmbH», Германия).

Процент детей без осложнений сахарного диабета составил 19%, выявляемость микроальбуминурии в этой группе 30%. Частота детей, имеющих осложнения сахарного диабета, была 81%, повышенный уровень микроальбуминурии у них был 47%. У детей с множественными осложнениями инсулинозависимого диабета частота обнаружения микроальбуминурии составила 51%. Отмечается значительно более низкий уровень микроальбинурии у детей с неврологическими осложнениями сахарного диабета - 23%. Повышенный уровень альбуминурии выявлялся чаще у детей старше 11 лет - 78%.

Высокий процент выявления микроальбуминурии у детей с множественными осложнениями инсулинозависимого сахарного диабета показывает ценность данного лабораторного теста в том, что он отражает не только функцию почек, но является маркером системного поражения органов. Определение микроальбуминов мочи должно быть неотъемлемой частью комплексной оценки состояния и прогноза детей с инсулинозависимым сахарным диабетом.

Н.М. Лазарева, С.В. Лапин, А.Л. Маслянский, В А. Добронравов, Е.П. Иливанова, В.Л. Эмануэль. Диагностическая и прогностическая значимость аутоантител при системных заболеваниях соединительной ткани. ГБОУ ВПО ПСПбГМУ им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Санкт-Петербург

Системные заболевания соединительной ткани - это ряд ревматических заболеваний, характеризующихся системным воспалением различных органов и систем, сочетающимся с развитием аутоиммунных и иммунокомплексных процессов, избыточным фиброзообразованием и появлением аутоанти-тел.

Цель и задачи - уточнить роль серологических методов определения аутоантител в диагностике и прогнозе системных заболеваний соединительной ткани. Определить спектр аутоантител для дифференциальной диагностики и предсказания специфических осложнений у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией.

Были исследованы сыворотки крови пациентов с подозрением на системные заболевания соединительной ткани («=981), больных системной красной волчанкой («=151), в том числе с поражением почек («=36), больных системной склеродермией («=67), контрольную группу составили 70 условно здоровых лиц. Для выявления аутоантител применялись следующие диагностические методы с использованием диагностических тест-систем разных производителей: метод непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ), метод твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), метод лайн-блоттинга.

Диагностическая чувствительность выявления антину-клеарного фактора (АНФ) оказалась 86 и 84%, антител к экстрагируемому ядерному антигену 50 и 68%, антител к дсДНК 56 и 38%. Диагностическая специфичность АНФ - 95% вне зависимости от тест-системы, антител к экстрагируемому ядерному антигену 100 и 80%, антител к дсДНК 100%. У больных системной красной волчанкой антитела к дсДНК были обнаружены в 43% (15/35) случаев, антитела к комплексу дсДНК-нуклеосомы в 51% (18/35), антитела к нуклеосомам в 35% (11/31) и антитела к C1q компоненту комплемента в 55% (17/31) случаев. У больных системной склеродермией АНФ был выявлен в 100% (67/67) случаев. При использовании метода лайн-блоттинга аутоантитела были выявлены в 94% (63/67). Антитела к Scl-70 достоверно чаще встречаются при диффузной, а антитела к CENP-A при лимитированной форме заболевания (39% против 15%, р=0,04). Помимо анти-

тел к Scl-70 и белкам центромер (CENP-A/В) диагностическое значение имеют антитела к семейству РНК-полимераз (RP-11/155). Антитела к минорным нуклеолярным антигенам (PMScl-100/75, NOR-90, Ku, Th/To) изолированно встречались в 9% (6/67) случаев, что может свидетельствовать о повышении диагностической информативности используемого метода лайн-блоттинга в диагностике системной склеродермией.

Выявление АНФ вне зависимости от производителя представляет воспроизводимую и надежную технологию выявления аутоантител, что и позволяет рассматривать этот метод в качестве «золотого стандарта» при лабораторном выявлении АНА. В то же время мы обнаружили, что скрининговые методы выявления АНА, основанные на ИФА, с помощью реактивов разных производителей имеют неудовлетворительную сходимость. Антитела к дсДНК, дсДНК-нуклеосомы, нукле-осомам и C1q компоненту комплемента важны в диагностике поражения почек у больных системной красной волчанкой, в частности у пациентов III и IV классами гломерунефрита. Наличие зависимости СКФ и антител к нуклеосомам и C1q компоненту комплемента отражает степень поражения почек и прогрессирующего развития хронической болезни почек. Использование расширенного лайн-блоттинга, содержащего 13 аутоантигенов, позволило определить аутоантитела в 94% (63/67), то есть была отмечена тенденция к увеличению обнаружения положительных результатов с 61 до 94% случаев. Таким образом, использование метода лайн-блоттинга с широким спектром аутоантигенов в сочетании с АНФ может быть рекомендовано в комплексной диагностике данного заболевания.

С.Н. Колюбаева, А.М. Иванов, О.В. Скачкова, К.О. Кулагина, И.С. Петрова. Исследование однонуклеотидных полиморфизмов генов, ассоциированных с эффективностью и токсичностью терапевтического лечения ревматоидного артрита. Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург

На сегодняшний день установлено, что различия ответа на лекарственную терапию обусловлены вариантами нуклео-тидной последовательности генов, кодирующих ферменты метаболизма лекарств, молекулы-переносчики лекарств и рецепторы, взаимодействующие с лекарствами. В отличие от других изменяющихся факторов (возраст, функциональное состояние органов, терапия и др.) наследственная детерминированность ответа остается постоянной в течение всей жизни индивида, при этом вклад генетических факторов в вариабельность реакции составляет от 20 до 95%.

В работе были исследованы однонуклеотидные полиморфизмы генов (ОНП), ассоциированых с нарушениями обмена фолатного цикла (MTHFR, MTR, MTRR) и с метаболизмом варфарина (CYP2C9, CYP4F2, VRORC1). Кроме того, исследовали аллели гена HLA-DRB1, который, как показано, детерминирует тяжесть эрозивного процесса при ревматоидном артрите, а также, возможно, играет важную роль в прогнозировании ответа на лечение базовыми противовоспалительными препаратами.

Всего проанализированы 47 пациентов с ревматоидным артритом (средний возраст 54 года) ДНК выделяли, используя наборы «ГС-Генетика» (ДНК-Технология, Россия). Амплификацию и детекцию проводили на приборе ДТ-lite того же производителя.

При анализе генов HLA-DRB1 1/3 больных имела генотип, содержащий аллель *04, при этом половина из них встречалась в гомозиготном состоянии. Вторым более часто выявляемым вариантом - генотип, содержащий аллель *01 (17%), затем генотип с аллелем *11 и *03 по 15%, генотип с аллелем *07 (13%). Остальные генотипы распределились в более низких процентах приблизительно одинаково.

При анализе генов, связанных c обменом фолатного цикла, в группе больных с генотипом HLADRB1 *04*V, представляющей (по данным литературы) «самый высокий риск» заболевания ревматоидным артритом, нарушения выявлены

во всех исследуемых генах (100%). При этом в вариантах гена MTHFR, который, как полагают, связан с эффективностью и токсичностью терапии, у 4 пациентов в виде гомозиготы. В генах JHTR и MTRR, усиливающих действие гена MTHFR, гомозиготные ОНП встречались чаще. Что касается генов, ассоциированных с метаболизмом варфарина, то наиболее часто ОНП выявлялись в генах VKORC1 (62,5%) и CYP4F2 (56%). В группе больных с «менее выраженным риском» заболевания ревматоидным артритом (содержащие в своем генотипе аллели *01, *0,3 *07 и *11) ОНП в генах фолатного цикла встречались в 90% в MTHFR гене, 42% в MTR гене и 76% в MTRR гене. Наконец, в группе с «более низким риском» заболевания ревматоидным артритом ОНП в MTHFR гене встречаются в 75% случаев, вMTR гене в 50% и в MTRR в 100%. Что касается ОНП в генах CYP2C9, VKORC1 и CYP4F2, то процентный их состав не отличался в двух последних группах.

Таким образом, сопоставляя три группы больных с разными генотипами HLADRB1 по предрасположенности к заболеванию ревматоидным артритом, можно предположить, что более значительную роль в ответе на терапию играет полиморфизм генов фолатного цикла. Что касается генов HLA-DRB1, то, по-видимому, кроме аллелей, которые определяют «риск» развития заболевания, существуют аллели, которые обладают протективным действием. Это может объяснить наличие различного сочетания аллелей в группе больных ревматоидным артритом.

ММ. Федорова, М.С. Булгаков, А.П. Ройтман, В.В. Долгов, А.Г. Автандилов. Оценка уровня оксидативного стресса у больных с нейроциркуляторной астенией по концентрации изопростана-8. ГБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования, Москва

При длительном воздействии различных повреждающих факторов (гипоксия, интоксикация, воспаление, гемодина-мическая перегрузка и др.) функционирование эндотелия постепенно нарушается - возникает его дисфункция. Увеличение содержания вазоконстрикторных простагландинов и свободных радикалов вызывает уменьшение активности оксида азота. Маркером оксидативного стресса может выступать изопростан-8.

Цель исследования - определить роль маркера оксидативного стресса изопростана-8 и его влияние на эндотелиальную функцию у молодых людей с нейроциркуляторной астенией.

Исследование проведено с участием 96 мужчин в возрасте от 17 до 28 лет с подтвержденным диагнозом нейроцир-куляторная астения (НЦА) в анамнезе или установленным впервые в момент прохождения исследования.

Все пациенты были разделены на две группы:

I группа - 41 пациент с НЦА с частыми обострениями (от 3 раз в год и более) и наличием очагов хронической инфекции (ОРВИ, синуситы, тонзиллиты, фарингиты, отиты).

II группа - 34 пациента с НЦА, имеющие высокий уровень психоэмоционального стресса.

Также были обследованы практически здоровые мужчины (21 человек, которые составили группу сравнения).

Для определения роли оксидативного стресса в развитии нарушений гемодинамики и для оценки внутрисосудистых воспалительных процессов у пациентов с НЦА был проведен анализ полученных результатов изопростана-8 (набор производства «Cayman chemical», референсные значения от 40 до 100 пг/мл) и С-реактивного белка высокочувствительным методом (ВЧ СРБ) (производитель ЗАО «Вектор-Бест»).

Данные представлены в виде M±m, где M - среднее арифметическое значение, m - стандартная ошибка средней величины.

При проведении оценки лабораторных исследований было отмечено повышение уровня изопростана-8 у пациентов с НЦА. В I группе уровень изопростана-8 достоверно (р<0,05) превышал допустимые значения и составил 143,18±21,09 пг/мл. В группе пациентов с психоэмоциональными стрессами отмечалась тенденция к увеличению изопростана-8 до

128,04±17,77, а в группе контроля указанные значения составили 98,78±16,18 пг/мл. Концентрация СРБ в I группе составила 0,54±0,036 мг/л, во II - 0,48±0,053 мг/л, а в группе сравнения уровень СРБ был наименьшим и составил 0,43±0,047 мг/л.

Необходимо отметить, что уровень изопростана находился в пределах допустимых значений лишь в группе сравнения, в то время как показатели СРБ не превышали допустимой нормы ни в одной из групп, но в I и II группах были выше, чем в группе сравнения.

Уровень маркера оксидативного стресса изопростана-8 достоверно превышает допустимые значения нормы у пациентов с НЦА, имеющих частые обострения очагов хронической инфекции, и имеет тенденцию к росту у пациентов с психоэмоциональным стрессом.

Ю.С. Белова, Г.П. Гладилин. Оценка неспецифической резистентности у детей с врожденным вывихом бедра. ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского» Минздрава России, Саратов

Важной проблемой развития современного общества является разработка методов прогнозирования и профилактики заболеваний населения, в первую очередь детского. В последнее время все больше внимания уделяется состоянию неспецифической резистентности организма, которая в первую очередь реагирует на изменение внутренних и внешних факторов.

Цель - оптимизация оценки неспецифической резистентности организма у детей с врожденным вывихом бедра.

Были обследованы 52 ребенка с врожденным вывихом бедра в возрасте от 7 мес до 8 лет. Контрольную группу составили 20 условно здоровых детей соответствующего возраста. Всем детям первоначально проводилось клиническое обследование с помощью стандартных методов (оценка жалоб, детальный сбор анамнеза с выявлением факторов, влияющих на иммунный статус, определение общего соматического и ортопедического статуса), проводилось рентгенологическое исследование тазобедренных суставов в переднезад-ней проекции. Осуществлялось лабораторное исследование, включавшее проведение общепринятых (СОЭ, гемоглобин, подсчет лейкоцитарной формулы, общий белок, альбумин, глюкоза, мочевина, С-реактивный протеин, фракции билирубина) и специальных тестов, характеризовавших обмен соединительной ткани (олигомерный матриксный протеин хряща и сульфатированные гликозаминогликаны), проводимые с помощью иммуноферментного метода с использованием соответствующих тест-систем, кроме того, определялось содержание средне-молекулярных пептидов, интегрального показателя метаболических нарушений по методу Габриэлян Н.И. и соавт. Проводилось определение некоторых классов иммуноглобулинов ^А, IgG, IgM. Достоверными считались данные при показателе вероятности р<0,05.

Среди обследованных выделялась группа детей, у которых помимо клинической картины основного заболевания отмечались слабость, общая температурная реакция, у некоторых детей наблюдались плохой аппетит, неспокойный сон, раздражительность, плаксивость, некоторая агрессия по отношению к другим детям. В анамнезе у этой группы пациентов нередки были острые респираторные вирусные инфекции, их рецидив на фоне гнойничкового поражения кожи и слизистых оболочек (стоматит, конъюнктив глаз), часто наблюдались различные проявления аллергических реакций. Исследование лабораторных показателей показало общую отрицательную направленность изменения практически всех изучаемых показателей. При этом обращало на себя внимание значительное статистически достоверное (р<0,05) повышение в сыворотке крови содержания олигомерного матриксного протеина хряща и средне-молекулярных пептидов на фоне повышенного уровня сульфатированных гли-козаминогликанов и иммуноглобулина ^А по сравнению с данными, имевшимися у условно здоровых детей. Таким об-

разом, у обследованных детей с врожденным вывихом бедра имелись выраженные метаболические нарушения, проявлявшиеся нарушением в обменных процессах соединительной ткани и напряженностью иммунологических реакций. В ходе проведенного исследования были выявлены критерии оценки неспецифической резистентности организма у детей с врожденным вывихом бедра с помощью определения уровня хрящевого олигомерного матриксного протеина - маркера обмена хрящевой ткани и содержания средне-молекулярных пептидов - интегрального показателя метаболических нарушений.

Данной категории больных целесообразно проводить дополнительную медикаментозную терапию, направленную на повышение компенсаторных возможностей детского организма и иммунологического потенциала.

П.В. Начаров', М.О. Кустов2. Влияние местной аутоге-мотерапии на систему иммунитета у больных бактериальным наружным диффузным отитом. 'ФГБУ «Санкт-Петербургский НИИ уха, горла, носа и речи» Минздрава России, г. Санкт-Петербург; 2ГБОУ ВПО «СЗГМУ им. И.И. Мечникова» Минздрава России, г. Санкт-Петербург

Нарушения в системе иммунитета и часто нерациональное использование антимикробных, гормональных средств в медицине способствуют неуклонному росту численности больных наружными отитами, а также неэффективности методов традиционной терапии при данной патологии (Рязан-цев С.В. и соавт., 2009; Заварзин Б.А., Аникин И.А., 2011). Местная аутогемотерапия, воздействуя непосредственно на очаг воспаления, нормализует репаративные процессы (Широков В.С., 1998; Петросян Н.Э., 2004). Вместе с тем сведений о применении местной аутогемотерапии в лечении больных бактериальными наружными диффузными отитами (БНДО) нами не найдено. Не изучены и биологические механизмы воздействия местной аутогемотерапии на систему иммунитета.

Цель исследования - изучить влияние местной аутогемо-терапии на показатели иммунной системы у больных БНДО.

Задачи - изучить в крови уровни реактанов острой фазы воспаления (СРБ и LBP-белка) и фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов у больных БНДО до и после различных схем лечения.

Обследованы 68 пациентов с БНДО в возрасте от 18 до 65 лет. В контрольную группу вошли 32 здоровых добровольца. Больным группы № 1 (п=32) назначалась традиционная терапия: амоксиклав 1 г 2 раза в день внутрь, а также туалет наружного слухового прохода. В группе № 2 (п=36) наряду с традиционной терапией назначали местную аутоге-мотерапию. Больным обеих групп выполнено определение в крови фагоцитарной активности нейтрофильных грану-лоцитов (Лебедев К.А., Понякина И.Д., 1990), содержания белка, связывающего липополисахарид, (ЬВР) методом ИФА и С-реактивного белка (СРБ) иммунотурбидиметрическим методом.

При использовании местной аутогемотерапии в течение первых четырех часов оталгия исчезла у 72,2% больных; за первые сутки ушная боль регрессировала у 94,4% человек. На фоне традиционной терапии у 50% больных БНДО болевой синдром сохранялся в течение 4-5 сут. У всех больных БНДО до лечения наблюдалось снижение фагоцитоза в нейтрофилах (ФН) (р<0,001) и фагоцитарного индекса нейтрофилов (ФИН) (р<0,001). После традиционного лечения у пациентов в группе № 1 нарушения фагоцитоза (снижение ФН и ФИН) еще больше усугубились (р<0,001). В результате использования комплексной терапии у больных БНДО выявлена положительная динамика фагоцитарной активности нейтрофилов (р<0,001). У 87% больных БНДО до лечения установлено повышение в крови уровня СРБ. Кроме того, у пациентов в группе № 2 выявлено увеличение концентрации в крови и другого реактанта острой фазы воспаления - LBP-белка (р<0,01). Вместе с тем у больных в первой группе содержание белка, связывающего ли-пополисахарид, не отличалось от нормы, что свидетельствует

о меньшей выраженности воспалительной реакции. Под воздействием комплексной терапии достоверно раньше (p<0,001) по сравнению с традиционной терапией наблюдалось снижение концентрации С-реактивного белка в крови. Высокий уровень LBP-белка у пациентов группы № 2 после проведенного комплексного лечения нормализовался.

Полученные данные свидетельствуют о более эффективном воздействии местной аутогемотерапии по сравнению с традиционной терапией на иммунную систему больных БНДО, о ее постепенном модулирующем воздействии на фагоцитарную активность нейтрофилов, а также выраженном противовоспалительном эффекте.

Г.М. Баишева, К.Н. Мельник, И.В. Горбачева, Ю.В. Пер-вова, В.И. Потехина. Влияние структурированной воды на состояние цитокинового профиля ротовой жидкости. ГБОУ ВПО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России, г. Самара; ГБУЗ СО «Тольяттин-ская городская клиническая больница № 5», г. Тольятти

С учетом высокой потребности организма человека в воде, множественности функций, выполняемых ею для обеспечения среды тканей, органов, биомолекул, и активного воздействия на процессы, протекающие в организме, представляет интерес изучение влияния структурированной воды на содержание интерлейкинов в ротовой жидкости.

В рандомизированном, плацебо-контролируемом исследовании приняли участие 85 добровольцев. Участники были разделены на три группы, сопоставимые по полу и возрасту. 30 человек употребляли структурированную воду из расчета 30-35 мл на кг массы тела. Две группы сравнения: контрольная - 25 человек, придерживающихся привычного питьевого режима, и 30 человек - плацебо-контролируемая группа. Структурированную воду получали электромагнитным прибором «Аквадиск» (ОАО «Аква-Система», г. Москва).

В качестве объекта для изучения влияния характера питьевого режима на состояние цитокинового профиля была выбрана ротовая жидкость, обеспечивающая неинвазивность и возможность биоиндикации на большом массиве испытуемых. Сбор, транспортировка, обработка и хранение осуществлялись по стандартизированному протоколу.

Исследование цитокинового профиля проводили методом ИФА тест-системами фирмы «Вектор-БЕСТ» (г Новосибирск) на спектрофотометре Sunrise (Tecan, Австрия). Изучено содержание ИЛ-ф, ИЛ-4, ИЛ-6.

Установлено, что динамика показателей в ротовой жидкости опытной и контрольной групп различна. Содержание ИЛ-ф у участников со свободным питьевым режимом менялось несущественно; у лиц, употреблявших структурированную воду, снижалось через 1,5 мес и увеличивалось через 3 мес по сравнению с исходным уровнем. Уровень ИЛ-6 через 1,5 мес возрастал и удерживался на высоких цифрах. Аналогичная тенденция прослеживалась и относительно ИЛ-4.

Интерлейкины, как известно, являются динамичным показателем, содержание которых зависит от многих факторов: бактериального обсеменения, гипоксии, травмы, воспаления. На протяжении трехмесячного наблюдения уровень этих биорегуляторов в контрольной и плацебо-контролируемой группах также менялся. Следует отметить специфику цито-кинового ответа на прием структурированной воды. Это аргументирует ее моделирующее влияние на метаболические, иммунные процессы в организме.

А.В. Москалев, А.И. Карпищенко, В.Я. Апчел. Особенности клеточного иммунного гомеостаза у лиц c язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H. pylori и грибами C. albicans. Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург

Эрадикационная терапия H. fylori способствует формированию вторичной иммунологической недостаточности (ВИН), и на этом фоне инициируется персистенция грибов рода Candida.

Цель исследования - выявление изменений иммунологической реактивности у лиц с язвенной болезнью двенадцати-

перстной кишки (ЯБДК), контаминацией H. ру1оп и перси-стенцией C. albicans.

Обследованы 37 больных с ЯБДК в возрасте 28-44 года. Контрольную группу составили 12 здоровых человек такого же возраста. Изучались количественные показатели иммуно-компетентных клеток с фенотипом: CD3, CD4, CD8, CD19, CD16, CD56, CD3+DR+, CD25+, CD11b+ методом проточной цитофлюориметрии («BectonDickinson»). Культуральные методы включали идентификацию грибов рода кандида.

Установлено снижение количества лимфоцитов с фенотипом CD3+, CD4+. На этом фоне выявлена повышенная экспрессия активационных маркеров (CD25, CD11b, HLADR). Важным аспектом изменения клеточного гомеостаза является снижение количества натуральных киллеров (CD16). При оценке биоптатов слизистой оболочки желудка установлена обсемененность грибами в 64% случаев. Причем в половине случаев колонизация связана с C. albicans, остальные -C. crusei. Выраженность изменений клеточного гомеостаза, обсемененность грибами и H. ру1оп коррелировали с тяжестью ВИН.

Таким образом, возникает необходимость о внесении изменений в традиционные схемы эрадикационной терапии с возможным дополнением антимикотиками и современными иммуномодуляторами, позволяющими нормализовать иммунологическую реактивность и повысить микробицидность эффекторных клеток.

А.В. Москалев, А.И. Карпищенко, А.С. Рудой, В.Я. Апчел. Особенности формирования дисфункций иммунного ответа у лиц с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, эрозивными и хроническими гастритами, ассоциированными с наследственными нарушениями соединительной ткани. Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург

Несмотря на достижения последних лет в изучении им-мунопатогенеза язвенной болезни, гастритов, их проблема остается по-прежнему актуальной. Особенно сложными и недостаточно изученными являются вопросы иммунопатоге-неза гастритов и язвенной болезни у лиц с наследственными нарушениями соединительной ткани (ННСТ).

Цель исследования - выявить взаимосвязь продукции ци-токинов и развития морфологических изменений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки у больных, страдающих эрозивными и хроническими гастритами, язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, ассоциированными с ННСТ различной степени выраженности.

Обследованы 78 мужчин, страдающих ЯБДК, и 81 мужчина молодого возраста (22,2±1,4 года), страдающих эрозивными и хроническими гастритами, которые по выраженности признаков соединительнотканных нарушений были распределены на две группы. Продукцию цитокинов: TNF-a, IFNg, IL - 1ß 2, 6, 8, 10 исследовали с помощью твердофазного ИФА с помощью диагностических тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск).

Установлено, что ведущая роль в развитии неэффективного иммунного воспаления в изучаемых вариантах патологии принадлежит иммуновоспалительным процессам, сопровождающим ННСТ, а не контаминации H. pylori. Степень выраженности ННСТ является основным фактором и в возникновении атрофических изменений слизистой оболочки желудка, что сопровождалось преимущественно мононукле-арной инфильтрацией в слизистую оболочку.

Развитие острого периода как ЯДК, так и ХЭГ сопровождалось повышением концентрации провоспалительных цитокинов, которая снижалась в периоде ремиссии. Однако выраженность этой динамики в группах существенно отличалась. Так, при ЯДК в периоде обострения профили провос-палительных цитокинов (IL-1ß, IL-6, IL-8, TNFa, IFNy) были гораздо выше в группе с выраженной симптоматикой ННСТ по сравнению с показателями группы с умеренной симптоматикой. В группе больных, страдающих ХЭГ, количественные показатели провоспалительных цитокинов у лиц с выражен-

ной симптоматикой ННСТ были близки к данным больных, страдающих язвенной болезнью только по профилям ШЫу. Выраженная контаминация Н. ру1оп способствовала увеличению концентрации ГЬ-8 во всех группах. К особенностям исследуемых профилей цитокинов необходимо отнести значительное увеличение концентрации ГЬ-6 и отсутствие значимого повышения концентрации Т№-а у больных с ННСТ в группе больных, страдающих ХЭГ, по сравнению с показателями больных ЯДК.

На основании профилей цитокинов установлено, что тенденция развития иммуновоспалительного процесса у больных, страдающих ЯДК, связана преимущественно с Тх-1 типа, а у больных с хроническими и эрозивными гастритами -Тх-2 типа. Выявленные изменения иммунного гомеостаза свидетельствуют о сформировавшихся нарушениях в структуре регуляторных и эффекторных звеньев иммунологической реактивности.

Е.В. Абакушина, Ю.В. Маризина, И.А. Пасова, Б.А. Бер-дов. Уровень цитокинов №N-7 и Т№Еа в сыворотке крови онкологических больных. МРНЦ им. А.Ф. Цыба - филиал ФГБУ «ФМИЦ им. П.А. Герцена» Минздрава России, Калужская область, г. Обнинск

Одним из главных продуцентов интерферона-гамма (ШЫ-у) в организме является популяция натуральных киллеров или ЫК-клеток, благодаря чему ЫК-клетки играют важную роль в регуляции адаптивного иммунного ответа и противоопухолевом иммунном ответе. Фактор некроза опухоли-альфа (ТОТа) - внеклеточный белок, многофункциональный провоспалительный цитокин, синтезируется в основном макрофагами и лимфоцитами. Он обладает прямым цитотокси-ческим действием на клетки опухоли и участвует в развитии аутоиммунных процессов.

Цель исследования - оценить уровень цитокинов ШЫ-у и Т№а в сыворотке крови больных раком желудка и толстой кишки с различной распространенностью опухолевого процесса.

В работе оценен уровень цитокинов у 57 первичных больных с гистологически подтвержденным диагнозом: рак желудка - 19 человек (Т14Ы0 3М01) в возрасте 46-80 лет, рак толстой кишки - 38 человек (Т24М02М01) в возрасте 42-82 лет. Контрольную группу составляли 60 здоровых добровольцев. Содержание цитокинов в сыворотках крови определяли с помощью иммуноферментного анализа.

В контрольной группе среднее количество ШЫ-у в сыворотке крови составило 2,4 пг/мл. При раке желудка концентрация сывороточного ШЫ-у возрастала в среднем до 16,5 пг/ мл (р<0,001), что в 7 раз выше в контрольной группе, а при раке кишечника увеличивалась до 14,9 пг/мл (р<0,001), что выше в 6 раз. Полученные данные свидетельствуют в пользу активации противоопухолевого иммунного ответа у больных раком желудка и толстой кишки. В то же время развитие опухоли у пациентов указывает на то, что этот ответ не эффективен. Возможную иммунорезистентность опухоли можно связать с превалирующим влиянием супрессорных факторов, вырабатываемых как лимфоцитами, так и опухолевыми клетками, но данное явление требует дополнительного изучения.

Среднее количество сывороточного цитокина Т№а в контрольной группе составило 0,54 пг/мл. При раке желудка концентрация возрастала до 12,8 пг/мл, а при раке кишечника до 9,3 пг/мл, что достоверно отличалось от контрольной группы в 24 и 17 раз соответственно. Также выявлено, что содержание ТОТа было повышено у 69% больных раком желудка и у 72% больных раком толстого кишечника, среди которых доля пациентов с наличием регионарных и отдаленных метастазов составляла 36 и 39% соответственно. Содержание ШЫ-у было повышено у 80% больных раком желудка и у всех пациентов больных раком толстой кишки, у 20 и 40% из которых в стадии Т3 4Ы13М1 и Т2 4Ы12М1 соответственно были выявлены регионарные и отдаленные метастазы.

Высокий уровень цитокинов ШЫ-у и ТОТ-ав сыворотки крови больных раком желудка и толстой кишки может яв-

ляться отражением тяжести заболеванияи степени распространенности опухолевого процесса.

С.П. Олимпиева, С.А. Павлова, В.В. Киликовский, О.А. Федосенко, Т.В. Веденьева, Л.В. Павлушкина, Т.В. Потапова, Н.А. Семенова, О.Н. Титова, Т.А. Филатова. Оценка истинной информативности - метода двойного нормирования при иммунофенотипировании субпопуляций клеток крови. Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова, г Москва; ГБУЗ ДГКБ № 13 им. Н.Ф. Филатова ДЗМ

Цель: оценка перспективности использования метода двойного нормирования исходных лабораторных данных при выявлении паттерна иммунофенотипирования.

Задача: поиск методов, позволяющих исключить влияние возраста при анализе и клинической интерпретации результатов лабораторных исследований.

Исследование проведено на ретроспективных данных, включающих результаты иммунофенотипирования у 166 детей. Возраст детей, включенных в исследование, находился в диапазоне от 0,04 до 17,8 года.

Иммунофенотипирование проводилось в лаборатории биохимии и иммунологии на проточном цитофлуориметре компании Beckman Coulter серии Cytomics FC 500. Данная работа включала оценку клеточного звена иммунитета и неспецифической резистентности организма.

Статистический анализ данных проводился с использованием критерия Стьюдента (Т-критерия) для нормально распределенных показателей и непараметрического критерия -точного метода Фишера, не зависящего от характера распределения показателя. Для формирования графиков, а также для проверки нормальности распределения количественных признаков получения описательной статистики и проведения сравнения сформированных групп пациентов использованы пакеты программ EXCEL 2010 и Statistica 6.0.

В каждом отдельном возрастном диапазоне было проведено двойное нормирование:

• нормирование значений по медиане (деление всех значений показателя в каждой возрастной подвыборке на соответствующую медиану;

• нормирование разброса с использованием межквар-тильного интервала в качестве центрального и формирование трех градаций признака.

Данное двойное преобразование показателей привело к тому, что медиана значений по совокупной выборке при любом возрасте была равна единице, а распределение каждого показателя было представлено в единой шкале с тремя значениями, независимо от возрастного диапазона.

Таким образом, полученные нами результаты подтверждают возможность применения данного преобразования для выявления информативных показателей и описания характерных изменений иммунной системы, связанных с конкретной патологией, независимо от возраста. Использование предложенного двойного нормирования позволит более точно выявлять информативные лабораторные показатели, необходимые для обоснования патогенетических моделей заболеваний. Сделать более точной и обоснованной дифференциальную диагностику и прогнозирование развития этих заболеваний в процессе лечения.

В дальнейшем возможность исключения зависимости показателей от возраста позволит более эффективно сравнивать исследования, проводимые на разных по возрасту группах.

Е.А. Бородин2, М.А. Штарберг2, А.Г. Приходько', В.П. Колосов1, ЮМ. Перельман1. Анализ продуктов окислительной модификации липидов в конденсате выдыхаемого воздуха при исследовании осмотической реактивности дыхательных путей. Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания, г Благовещенск; 2Амурская государственная медицинская академия, г. Благовещенск

Конденсат выдыхаемого воздуха (КВВ) используется в качестве биоматериала для исследования содержания продуктов окислительной модификации липидов в выдыхаемом

воздухе по величинам поглощения липидных экстрактов из КВВ в УФ-области спектра. В оригинальном методе осуществляется экстракция липидов из образцов КВВ смесью гептан:изопропанол 1:1, измерение поглощения изопропа-нольной и гептановой фаз экстракта при 220 нм (неокислен-ный липид), 232 нм (диеновые конъюгаты) и 278 нм (конъ-югированные диены и кетодиены) и расчет двух индексов окисленности: Е233/Е220 и Е278/Е220. Ряд авторов предлагают также измерять поглощение при 400 нм и относить его к основаниям Шиффа. Оригинальный метод не предусматривает регистрации спектров поглощения в УФ-диапазоне и ограничен измерением поглощения при указанных длинах волн.

Цель исследования: усовершенствовать метод исследования содержания продуктов окислительной модификации липидов в конденсате выдыхаемого воздуха. Нами внесены коррективы в описанный метод. Сбор образцов КВВ проводили в утренние часы после двукратного ополаскивания ротовой полости дистиллированной водой на протяжении 20 мин при спокойном дыхании обследуемого. Для сбора образцов КВВ использовали аппарат ECoScreen II (Erich Jaeger, Германия), снабженный клапанной системой, позволяющей осуществлять вдох из атмосферного воздуха, а выдох - в устройство, конденсирующее пары выдыхаемого воздуха. Пробирки с полученным материалом сохраняли в морозильной камере при -70 °С. Липиды из образцов КВВ экстрагировали по методу Блайя-Дайера (0,4 мл КВВ + 3 мл смесь хлороформ:метанол 1:2) с последующим расслоением фаз добавлением 1,5 мл воды, перемешиванием, центрифугированием, упариванием хлороформенной фазы на роторном испарителе и растворением содержимого колбочки для упаривания в 3 мл этанола. Спектры поглощения липидных экстрактов из КВВ регистрировали на спектрофотометре UNICO 284 по дифференциальной схеме против этанола в диапазоне 190-500 нм. Выявлены три пика поглощения при 206, 233 и в ряде образцов при 278 нм. Поглощение при 400 нм соответствовало базовой линии. Исходя из полученных результатов, следует отказаться от измерения поглощения при 220 нм как не соответствующего максимуму поглощения неокисленно-го липида. Для оценки степени окисленности липидов КВВ оправданно использовать следующие показатели: содержание диеновых конъюгатов в нмоль/мл, рассчитываемое с учетом разведения КВВ при экстракции и коэффициента мольной экстинции для диеновых конъюгатов 0,22*106 М-1см-1, и два относительных показателя Е233/Е206 и Е278/Е206. Для оценки общего содержания липидов в образцах КВВ можно использовать поглощение при 206 нм (Е206).

Мы воспользовались описанным методом при исследовании осмотической реактивности дыхательных путей больных бронхиальной астмой (БА) с помощью проведения гипо- и гиперосмолярных проб. В сравнении со здоровыми людьми в образцах КВВ больных БА выявляется значительно большее содержание липидов согласно величинам Е206 и Е233. По изменению содержания липидов и степени их окисленности в получаемых образцах КВВ после проведения гипо- и гипе-росмолярных проб с вдыханием аэрозоля дистиллированной воды или гипертонического раствора NaCl соответственно можно судить о наличии или отсутствии осмотической гиперреактивности дыхательных путей.

Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (№ 14-25-00019)

Д.Е. Наумов, Е.А. Бородин, М.А. Штарберг, А.Г. При-ходько, Е.В. Ушакова, В.П. Колосов, Ю.М. Перельман. Показатели перекисного окисления липидов в конденсате выдыхаемого воздуха у больных бронхиальной астмой при бронхоспазме, индуцированном гиперосмолярностью. ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания», г. Благовещенск

Одним из триггеров бронхоспазма при бронхиальной астме (БА) может являться увеличение осмолярности бронхиального секрета, возникающее при гипервентиляции в

условиях выполнения физической нагрузки либо вдыхании холодного воздуха, содержащего малое количество водяных паров. Установлено, что повышение осмолярности активирует воспалительный ответ в дыхательных путях, сопровождающийся выбросом провоспалительных медиаторов (ги-стамин, интерлейкины). Учитывая тесную связь воспаления и оксидативного стресса с возможностью взаимного потенцирования для данных процессов, целью настоящего исследования было изучить изменения показателей перекисного окисления липидов (ПОЛ) в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) при гиперосмотической бронхопровокации.

В исследование были включены 39 больных персистирую-щей БА легкой и средней степени тяжести, преимущественно с неконтролируемым течением заболевания. Средний возраст обследованных составил 41,8±1,43 года, преобладали лица женского пола (66,7%). Всем больным проводилась спирометрия до и после бронхопровокационной пробы с 3-минутной ингаляцией гипертонического раствора NaCl (4,5%) через небулайзер. Реакция считалась положительной при снижении ОФВ1 на 10% и более от исходного (ДОФВ1). Сбор КВВ выполнялся с помощью аппарата ECoScreen II (Erich Jaeger, Германия) в течение 20 мин до и после проведения бронхо-провокации при спокойном дыхании. После сбора пробирки с КВВ хранили при -70 °С до проведения анализа. Экстракцию липидов производили по методу Блайя-Дайера с добавлением к образцу смеси хлороформ-метанол (1:2), последующим центрифугированием и упариванием хлороформной фазы на роторном испарителе. После растворения осадка в 96% этаноле образец исследовали методом спектрофотометрии с регистрацией пиков поглощения на 206 нм - для неокис-ленных липидов, 233 нм - для диеновых конъюгатов (ДК) и 278 нм - для кетодиенов (КД) и сопряженных триенов (СТ). По полученным значениям оптической плотности вычисляли индексы окисленности липидов Е233/Е206 и Е278/Е206 по первичным и вторичным продуктам соответственно.

Гиперосмотическая гиперреактивность дыхательных путей была обнаружена в 31% случаев (группа 1). В группу 2 были отнесены пациенты без повышенной реактивности на гиперосмотический стимул. Среднее падение ОФВ1 в ответ на провокационную пробу среди больных группы 1 составило -12 (-16; -11)%, а в группе 2 -1,4 (-5; 1,66)%, p<0,001. Базовые параметры вентиляционной функции легких также имели тенденцию к более низким значениям среди лиц с положительной реакцией на гипертонический раствор: для форсированной жизненной емкости легких (ФЖЕЛ) и пиковой объемной скорости выдоха отмечалось статистически значимое различие. Содержание продуктов ПОЛ в КВВ до бронхопровокационной пробы не отличалось у пациентов двух групп. Однако после пробы у больных группы 1 начинало увеличиваться содержание окисленных липидных продуктов с появлением значимых различий для индекса Е233/Е206 (0,19 (0,16; 0,31) и 0,14 (0,08; 0,19) для 1-й и 2-й групп соответственно, p=0,02). При анализе взаимосвязей наибольшее число корреляций было обнаружено для параметра ДФЖЕЛ (с содержанием ДК (r=-0,43,p=0,005), КД и СТ (r=-0,37,p=0,01), индексами окисленности Е233/Е206 (r=-0,4, p=0,01) и Е278/Е206 (r=-0,39, p=0,01), гидроперекисями липидов (r=-0,44, p=0,006)). Относительный прирост индекса окисленно-сти для первичных продуктов (ДЕ233/Е206) был обратно ассоциирован с амплитудой снижения параметров вентиляционной функции легких (ДФЖЕЛ (r=-0,44, p=0,004), ДОФВ1 (r=-0,36, p=0,02), ДМОС50 (r=-0,37, p=0,01)). Аналогичные корреляции отмечались между ДФЖЕЛ, ДОФВ1 и изменением содержания гидроперекисей липидов (r=-0,46, p=0,004 и r=-0,39, p=0,01 соответственно).

Таким образом, реакция дыхательных путей на гипе-росмолярность сопровождается активацией оксидативного стресса с увеличением продуктов ПОЛ в КВВ.

Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (грант № 14-25-00019).

ЮМ. Перелъман', Е.А. Бородин1 2, М.А. Штарберг2, А.Г. Приходъко', А.Б. Пирогов', Е.В. Ушакова', Д.Е. Наумов', С.В. Нарышкина1,2. Роль перекисного окисления липидов в формировании реакции дыхательных путей больных бронхиальной астмой на гипоосмолярный стимул. 'Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания, Благовещенск; 2Амурская государственная медицинская академия, Благовещенск

Имеются единичные сведения о повышенном содержании перекиси водорода и гидроперекисей липидов у больных БА с осмотической гиперреактивностью бронхов, что указывает на усиление процессов свободнорадикального окисления и ассоциируется с утяжелением реакции дыхательных путей на осмотический стимул.

Цель исследования заключалась в изучении содержания продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) у больных бронхиальной астмой (БА) в ответ на гипоосмолярный стимул.

У 46 больных БА и 11 здоровых лиц исследовали содержание продуктов ПОЛ в КВВ перед и после 3-минутной бронхопровокационной пробы с ингаляцией дистиллированной воды (ИДВ). Осмотическую гиперреактивность дыхательных путей диагностировали при падении объема форсированного выдоха за 1 с (АОФВ^ более чем на 10%. Сбор КВВ выполнялся при помощи аппарата ECoScreen II (Erich Jaeger, Германия). Пробирки с полученным материалом немедленно помещали в морозильную камеру при температуре -70 °С, где они хранились до проведения биохимических исследований. Содержание в КВВ продуктов ПОЛ - конъюги-рованных диенов и триенов (кетодиенов) - исследовали по ультрафиолетовым спектрам поглощения липидных экстрактов, регистрацию которых проводили на спектрофотометре Unico 2804 по двухлучевой схеме в диапазоне длин волн 200-500 нм против этанола. Содержание диеновых конъюга-тов выражали в единицах оптической плотности при 233 нм, а содержание конъюгированных триенов (кетодиенов) - в единицах оптической плотности при 278 нм. Максимум пика поглощения неокисленных липидов приходился в анализируемых образцах на 206 нм. Для расчета индекса окислен-ности липидов по первичным и вторичным продуктам ПОЛ использовали отношение поглощения при 233 нм к 206 нм (Е233/Е206) и отношение поглощения при 278 нм к 206 нм (Е278/Е206) соответственно.

По результатам пробы с ИДВ больные были разделены на 2 группы: в первую вошли 28 пациентов с гиперреактивностью дыхательных путей на ИДВ (АОФВ1 -13,8±2,1%), во вторую - 18 больных с отсутствием реакции на ИДВ (АОФВ1 -3,6±0,8%, p<0,001). Перед воздействием гипоосмотическо-го триггера величина Е206, отражающая содержание неокис-ленных липидов в КВВ, у больных 1-й группы (0,29±0,03) существенно превышала ее уровень у больных 2-й группы (0,19±0,02, р<0,05) и в обеих группах больных достоверно отличалась от здоровых лиц (0,12±0,03, р<0,001; р<0,01 соответственно). Аналогичная тенденция получена и для Е233, отражающего содержание диеновых коньюгатов (0,04±0,009; 0,03±0,004, р<0,05; 0,02±0,001, р<0,05; р<0,05 соответственно). Индекс окисленности липидов (Е233/Е206) у больных 1-й группы оказался достоверно более низким по отношению к больным 2-й группы и здоровым (0,14±0,01; 0,15±0,01; 0,18±0,01; р<0,01, <0,05 соответственно). В ответ на брон-хопровокационную пробу у больных 1-й группы было зарегистрировано увеличение индекса окисленности липидов (Е233/Е206) до 25,7%, связанное с относительным возрастанием концентрации первичных продуктов ПОЛ после ИДВ. Во 2-й группе и у здоровых лиц регистрировалось снижение Е233/Е206 на 20 и 5,6% соответственно, следствие снижения содержания диеновых конъюгатов. Установлена тесная связь между реакцией бронхов (АОФВ1) на ИДВ и величиной Е233, полученной в ответ на гипоосмотический стимул (r=-0,35; р<0,05). Таким образом, у больных БА с гиперреактивностью бронхов на гипоосмотический стимул происходит активация

оксидативного стресса в дыхательных путях с увеличением содержания первичных продуктов липопероксидации.

Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (№14-25-00019).

А.Б. Пирогов, А.Г. Приходько, Е.В. Ушакова, Г.А. Макарова, ЮМ. Перельман, С.В. Нарышкина, В.П. Колосов. Активность миелопероксидазы нейтрофилов крови больных бронхиальной астмой с гиперреактивностью дыхательных путей на гипоосмолярный стимул. Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания, г. Благовещенск

Сведения о роли миелопероксидазы (МПО) нейтрофиль-ных лейкоцитов как фактора прогрессирования оксидативно-го стресса у больных бронхиальной астмой (БА) с гиперреактивностью дыхательных путей на гипоосмолярный стимул отсутствуют. Целью настоящей работы явилось определение содержания МПО нейтрофилов у больных БА с гиперреактивностью дыхательных путей на гипоосмолярный стимул.

У 48 больных с частично контролирумым течением БА легкой и средней степени тяжести (средний возраст 44,7±1,57 года) исследовали вентиляционную функцию легких и уровень содержания МПО нейтрофилов в сыворотке крови перед и после проведения стандартной 3-минутной бронхопровокационной пробы с ультразвуковой ингаляцией дистиллированной воды (ИДВ). Осмотическую гиперреактивность дыхательных путей диагностировали при падении объема форсированного выдоха за 1 с (АОФВ1) более чем на 10% от исходной величины показателя. Количество МПО в сыворотке крови определяли методом твердофазного имму-ноферментного анализа с использованием коммерческого набора Bender MedSystems, США (Кат. № BMS2038). Перед началом исследования образцы разводили 1:50 разбавителем образцов. МПО образцов, стандартов и контрольных образцов связывались со специфичными к МПО антителами, сорбированными в лунках микропланшета. После ряда инку-баций с реагентами для амплификаций и промывки в лунки добавляли субстратный раствор, который взаимодействовал с пероксидазой хрена с образованием окрашенного раствора. Интенсивность окраски измеряли при длине волны 450 нм. Концентрацию МПО в полученных образцах сравнивали со стандартной кривой, построенной по 7 разведениям стандарта.

Результаты исследования. После пробы ИДВ больные были разделены на 2 группы, в первую вошли 28 пациентов с гиперреактивностью дыхательных путей на ИДВ (АОФВ1 -13,8±2,13%), вторую составили 20 больных с отсутствием реакции на ИДВ (АОФВ1 -3,5±0,73%, p<0,001). Базовые уровни МПО в сыворотке крови больных 1-й и 2-й групп составили 159,7±26,02 и 171,5±30,56 нг/мл (p>0,05), соответственно и достоверно превышали уровень контроля (61,5±7,72 нг/мл, p<0,001; p<0,01). После пробы ИДВ содержание МПО у пациентов 1-й группы возросло до 190,7±42,26 нг/мл (АМПО = 31,0±32,3 нг/мл), у пациентов 2-й группы достоверно снизилось до 83,5±12,02 нг/мл (АМПО=-88,0±24,9, р<0,01), что свидетельствовало об усиленном использовании МПО в катализе окисления функциональных групп биологически важных молекул и об активации роли фермента в поддержании интенсифицирующегося в результате гипоосмо-лярной стимуляции респираторного оксидативного стресса. Во 2-й группе внеклеточная концентрация МПО вследствие использования фермента в процессе образования и утилизации высокореакционноспособных соединений снизилась и приблизилась к показателю контроля. Индикатором эскалации оксидативного стресса после ИДВ в 1-й группе явилось увеличение уровня внеклеточной МПО, обусловленного, наиболее вероятно, «истощением» количества фермента внутри азурофильных гранул нейтрофилов на фоне повышенной активности и чрезвычайного выброса МПО из клеток.

Таким образом, у больных БА с гиперреактивностью дыхательных путей на гипоосмолярный стимул бронхопро-вокационная проба привела к значительно более высокому

сдвигу окислительно-восстановительного статуса крови в сторону нарастания уровня МПО, связанного со стимуляцией дыхательного взрыва в лейкоцитах и секрецией фермента во внеклеточную среду, чем у пациентов с отрицательной реакцией на ИДВ. Измерение внеклеточной концентрации МПО может служить биологическим маркером осмотической гиперреактивности дыхательных путей.

Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (№14-25-00019).

Н.Ф. Ильясова', Э.А. Имельбаева2, А.Ж. Гильманов2, А.И. Имельбаев2. Исследование маркеров онкологических заболеваний в условиях центральной районной больницы. 1ГБУЗ «Баймакская городская больница», г Баймак; 2ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, г Уфа

Население, прикрепленное к Баймакской городской больнице, составляет более 17 400 человек. В рамках реализации приоритетного Национального проекта «Здоровье» больница была оснащена лабораторным оборудованием и получила возможность проводить профилактические осмотры населения на современном уровне. В соответствии с приказами Минздрава Республики Башкортостан и Российской Федерации в ЦРБ разработан алгоритм исследований населения на выявление предопухолевых и опухолевых заболеваний женской половой сферы, молочной железы, колоректальной локализации, простаты, органов дыхания.

Для отбора лиц с подозрением на опухолевые заболевания указанных локализаций в КДЛ горбольницы организовано проведение комплексных клинических и лабораторных исследований, включающих первичный осмотр и консультацию врача-специалиста (гинеколог, терапевт, хирург, онколог), рентгенографию, маммографию, ультразвуковые, эндоскопические исследования, цитологический скрининг и определение содержания в плазме крови опухолевых маркеров (ОМ) - АФП, ХГЧ, ПСА, СА125, СА15-3, СА19-9, РЭА - методом иммуноферментного анализа (ИФА). ИФА-исследование ОМ существенно повышает качество обследования пациентов, способствует уточнению диагноза, позволяет проводить мониторинг эффективности лечения.

С 2011 г в лаборатории было внедрено определение 5 «базовых» опухолевых маркеров (АФП, ХГЧ, ПСА, СА125, РЭА), с 2012 г - еще двух (СА15-3 и СА19-9). Наиболее востребованы анализы на простатспецифический антиген - на его долю приходится до 62% от общего числа определений ОМ, на долю СА125 - от 39 до 43% исследований. В целом отмечается рост числа исследований на ОМ за последние 3 года - с 1329 до 2161 анализов в год.

Исследования ОМ в условиях собственной КДЛ высоко востребованы в городской больнице г Баймак, они позволяют проводить эффективную профилактику и своевременную диагностику опухолевых заболеваний. Оснащение лаборатории современным оборудованием сделало доступным многие виды анализов для населения города. Результаты деятельности лаборатории свидетельствуют о необходимости сохранения и развития лабораторного скрининга, тесного сотрудничества лаборатории с врачами-клиницистами - онкологами, акушерами-гинекологами, эндоскопистами, терапевтами, специалистами УЗИ.

И.В. Кудаева, Е.В. Катаманова, Л.Б. Маснавиева, О.В. Попкова, О.А. Дьякович, И. Ещина. Изменение нейрохимических показателей в динамике обследования лиц, экспонированных винилхлоридом. ФГБНУ «ВосточноСибирский институт медико-экологических исследований», Ангарск

Цель настоящего исследования состояла в изучении нейрохимических показателей у лиц с нарушениями нервно-психической сферы (НПС), экспонированных винилхлори-дом.

В условиях стационара клиники ФГБНУ ВСИМЭИ проведено проспективное когортное обследование 120 работающих производства винилхлорида. Клиническое обследование

пациентов основывалось на классификационных критериях болезней и состояний, согласно МКБ X пересмотра. Нейрохимические показатели: содержание катехоламинов дофамина (DA), норадреналина (NA), адреналина (AD), их метаболитов норметанефрина (NMN) и метанефрина (MN), а также гистамина определяли в плазме, полученной с применением ЭДТА, BDNF - в сыворотке крови твердофазным конкурентным иммуноферментным методом при помощи соответствующих тест-наборов. Для сравнения количественных признаков в двух связанных выборках был применен Wilcoxon Matched Pairs Test. Результаты представлены в виде медианы и интерквартильного размаха (25-й и 75-й процентили). Критический уровень значимости р принимался равным 0,05.

Клиническая картина патологии нервной системы стажи-рованных рабочих, контактирующих с винилхлоридом, была представлена астеническим (эмоционально лабильным) расстройством (52,6±7,5%) и вегетативной дисфункцией с периферическими вегетативными нарушениями в конечностях, кардиоваскулярными нарушениями (47,3±6,8%). Когнитивные расстройства носили легкий характер, встречались у 16,2±2,5%. При энцефалопатии сочетанного и токсического генеза (8,1±2,9%) регистрировалось органическое расстройство в 2,7±1,2% случаев и при профессиональном заболевании - у 2,7±1,2% обследованных. По результатам медицинского осмотра были сформированы группы клинического риска. В группу лиц с доклинической стадией нарушений НПС вошли работающие с функциональными изменениями или с нарушениями, характерными для начальной или других стадий профессиональных нейроинтоксикаций. Группу с клинической стадией нарушений НПС составили лица с вегетативной дистонией, астеническим синдромом или не-врозоподобными расстройствами, полиневропатией, энцефалопатией, психоорганическим синдромом. Группа сравнения была представлена обследованными со стажем работы с токсикантом более 5 лет, не имевшими признаков нарушений НПС (стажированные работающие).

В ходе исследования нейромедиаторов и нейротрофи-ческих факторов в крови у работающих, экспонированных ВХ, без признаков нарушений НПС было зарегистрировано статистически значимое увеличение уровня AD в 4 (0,07-17,8) (р=0,04) раза и NA в 2,5 (0,9-8,6) раза (р=0,003) без модификации содержания других нейротрансмиттеров в динамике обследования. При этом уровень их метаболитов (MN и NMN) не подвергался изменению. В то же время статистически значимо изменились коэффициенты, отражающие степень метаболизма норадреналина: увеличилось значение NA/NMN с 0,38 (0,21-1,82) до 5,0 (3,8-11,5) (р=0,043) и уменьшилось отношение DA/NA с 1,61 (1,013,08) до 0,16 (0,08-0,32) (р=0,008). На границе статистической значимости находилось изменение коэффициента AD/MN: с 1286 (611-7800) до 12 811 (288-25833) (р=0,06). В группе лиц с доклинической стадией нарушений НПС статистически значимых изменений нейрохимических показателей выявлено не было. У работающих с клинической стадией нарушений НПС зарегистрировано статистически значимое увеличение концентрации гистамина на 60 (11,5; 281,7)% (р-0,049). В динамике обследования изменился также уровень BDNF: с 11 (9,1-13,2) нг/мл до 5,4 (5,4-5,8) нг/мл (р=0,043).

Таким образом, воздействие винилхлорида в период до формирования нарушений НПС сопровождается изменением содержания катехоламинов, при наличии клинических проявлений нарушений НПС - модификацией уровня BDNF и гистамина.

Г.Г. Бадамшина1, Р.У. Хайруллин2, А.Б. Бакиров1, А.Ж. Гильманов2, О.В. ВалееваК Холинэстераза сыворотки крови у работников промышленного производства. 'ФБУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека»; 2ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа

Холинэстеразы (ХЭ) - семейство ферментов класса гидро-

лаз. Изменение активности сывороточной ХЭ - секреторного фермента печени - важный диагностический показатель, отражающий ряд патологических состояний пищеварительной, сердечно-сосудистой, мочевой, нервной, эндокринной и других систем организма. Однако сведений об активности ХЭ в сыворотке крови у работников промышленного производства, подвергающихся воздействию химических факторов, в современной научной литературе мало, и они достаточно разрознены.

Целью настоящей работы было выявление особенностей изменения активности сывороточной ХЭ у работников предприятий нефтехимического комплекса. Группу обследованных составили 79 мужчин различных профессий, средний возраст которых составлял 39±1,3 года, средний стаж 11,8±1,1 лет. Определение активности ХЭ в сыворотке крови у обследованных производили на автоматическом биохимическом анализаторе VITR0S-350 с использованием реагентов фирмы «Johnson & Johnson» (США); референтным интервалом считали значения активности ХЭ 5300-12 900 МЕ/л, указанные в инструкциях к наборам. Полученные данные статистически обрабатывали; оценку зависимости активности ХЭ от рабочего стажа проводили с применением корреляционного анализа, оценку влияния профессии и стажа - однофакторным и двухфакторным дисперсионным анализом.

Результаты исследований показали, что у обследованных работников средняя активность сывороточной ХЭ составляла 8170±266,9 МЕ/л и не выходила за референтные пределы. Достоверных различий между группами работников с различным стажем выявлено не было, но наблюдалась тенденция к возрастанию активности сывороточной ХЭ в зависимости от стажа (r=0,50; p<0,05). Сильная прямая корреляционная зависимость от стажа была определена у водителей (r=0,8), слесарей по ремонту оборудования (r=0,88) и промывальщиков-пропарщиков (r=1), обратная зависимость - у лаборантов (r= -0,94) и маляров (r= -0,99). Однофакторный дисперсионный анализ показал недостоверное слабое влияние фактора стажа (q2=6%, F=1,67, p>0,05) и достоверное влияние средней силы фактора профессии (q2=46%, F=6,54, р<0,01) на активность ХЭ. Результаты двухфакторного дисперсионного анализа были несколько иными: совместная доля влияния стажа и профессии на уровень активности ХЭ оказался значительно более высоким (q2=72%, F=2,51, р<0,01), чем их влияние по отдельности, а доля неучтенных в исследовании факторов составляла лишь 28%.

Проведенное исследование свидетельствует о перспективности дальнейшего изучения активности сывороточной ХЭ у работников промышленных предприятий с учетом действия химических производственных факторов и влияния иных факторов (условий труда, питания, приема лекарственных препаратов, вредных привычек и др.). Субнормальные сдвиги активности секреторного фермента печени и баркера печеночного анаболизма могут отражать слабое ингибирую-щее либо «раздражающее» действие токсических факторов на клетки печени как важнейшего органа, выполняющего множество функций (метаболическую, депонирующую, де-токсикационную и др.).

В свою очередь определение степени изменений активности сывороточной ХЭ при адекватной математической обработке, позволяющей учесть действие сопутствующих факторов, связанных с образом жизни, может использоваться как один из маркеров субтоксического действия вредных производственных факторов на организм работающих.

Г.В. Тимашева1, А.Б. Бакиров1, Э.Ф. Репина1, В.Т. Ахмет-шина1, А.Ж. Гильманов2, А.С. ХафизоваК Лабораторные методы оценки темпов старения организма у работников нефтехимического предприятия. 'ФБУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека»; 2ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа

Одной из нерешенных первоочередных задач охраны здоровья работающего населения является профилактика ускоренного или преждевременного старения работающих во вредных производственных условиях. Решение этой задачи требует разработки показателей для количественной оценки процесса старения. Большую популярность получил т.н. «биологический возраст», который в целом адекватен для оценки функционального статуса организма и состояния здоровья человека.

При воздействии вредных условий труда темп старения организма возрастает, что приводит к нарушению состояния здоровья работника и развитию хронических профессиональных заболеваний, а также общих заболеваний с временной утратой трудоспособности. Так, установлен ускоренный темп биологического старения работающих на химических и металлургических производствах (Максимов С.А., 2005), в частности, в отношении сердечно-сосудистой системы и биологических тканей (Саноцкий И.В., 1997). Однако количество подобных исследований, связанных с действием вредных химических веществ, недостаточно, если учитывать значительный контингент работающих в нефтехимической промышленности.

Нами проведена оценка биологического возраста (БВ) у работников производства синтетических каучуков ОАО «Нижнекамскнефтехим» - аппаратчиков, слесарей по ремонту оборудования, слесарей КИПиА, которые в ходе работы подвергались воздействию предельных и непредельных углеводородов, толуола, изопрена, дивинила. Причем если при стабильном технологическом процессе концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны не превышают ПДК, то при чистке агрегатов, ремонте оборудования, загрузке ингредиентов вручную они могут возрастать до 3-5 ПДК.

Расчет БВ обследованных производился по гематологическим и биохимическим показателям (СОЭ, количество моноцитов в периферической крови, содержание мочевины, креатинина и общего белка в сыворотке крови) с использованием методики, разработанной в Пермской государственной медицинской академии Л.М. Белозеровой. Индивидуальная величина БВ сопоставлялась с календарным возрастом (КВ) и должным биологическим возрастом (ДБВ), определенным по методу А.С. Башкиревой и С.С. Коновалова (2004).

Как показали исследования, средний БВ рабочих данного производства (56,9 года) значительно превышал ДБВ (40,7 лет при среднем стаже 14,6 года), что означает выраженное постарение организма работников, особенно аппаратчиков и слесарей по ремонту оборудования. При стаже 5-10 лет средняя величина ДБВ превышала реальный КВ на 7,2 года; при стаже 11-15 лет разница составляла 5,5 года; при стаже более 16 лет средние значения КВ практически соответствовали ДБВ (разница менее 1,1 года). Различия между среднегруп-повыми величинами КВ и ДБВ в возрасте 20-29 лет были равны 8,9 года; в возрасте 30-39 лет - 5,8 года. С возрастанием календарного возраста разница между ним и ДБВ уменьшалась и в возрастной группе 40-49 лет составляла 1,6 года. Полученные результаты свидетельствуют о том, что темп старения на производстве синтетических каучуков наиболее выражен в молодом возрасте и при небольшом стаже.

Таким образом, проведенные нами исследования биологического возраста выявили преждевременное постарение организма у работников производства синтетических каучу-ков. Полученные результаты нацеливают на разработку мер по профилактике неблагоприятного влияния производственных факторов на организм работающих, особенно на состояние здоровья молодого контингента.

Н.Л. Жемчужнова, Е.В. Олемпиева, А.Н. Соколов, О.Н. Халимова, С.Г. Нешин. Лабораторная оценка клинической эффективности общей воздушной криотерапии у лиц опасных профессий. Медико-санитарная часть УФСБ России по Ростовской области, г. Ростов-на-Дону

Восстановление профессионального здоровья лиц опасных профессий является одной из актуальных проблем вос-

становительной медицины. Применение современных физиотерапевтических методов, таких как криотерапия, показало, что эта методика оказывает неспецифичное корригирующее действие на адаптационный потенциал организма.

Целью исследования явилась оценка эффективности общей воздушной криотерапии (ОВКТ) у лиц опасных профессий с метаболическим синдромом (МС).

Материалом для исследования выбраны биохимические критерии диагностики окислительного стресса. В качестве используемых технологий применялось определение активности супероксиддисмутазы (СОД), каталазы (Кат), глутати-онпероксидазы (ГП), миелопероксидазы (МПО), содержание восстановленного глутатиона (GSH), содержание молекул средней массы (МСМ) и малонового диальдегида (МДА). Контрольная группа представлена 35 практически здоровыми добровольцами без признаков соматических заболеваний. Группу сравнения составили 30 пациентов с верифицированным МС, которыеполучали курс ОВКТ. Процедуры проводили под непосредственным врачебным контролем после проведения инструктажа и оценки общего состояния пациентов. Процедуры отпускались повторно с интервалом 20 мин, ежедневно в течение 10 дней на аппарате «CrioSpace Cabin». Забор крови осуществлялся до и после полного курса реабилитационных мероприятий.

Обнаружено, что у пациентов с МС до лечения отмечается активация СОД на 222%, Кат на 215%, ГП на 173% при незначительном росте количества GSH на 4%, при этом активность МПО возросла на 22% относительно контроля. В данной группе регистрируется интенсификация процессов свободно-радикального окисления: рост концентрации МДА составил 237% при отсутствии признаков эндотоксемии, поскольку имеет место снижение концентрации МСМ на 38%.

После курса лечения достоверных отличий в активности СОД не выявлено, при этом рост активности Кат составил 77% при снижении активности ГП на 39% на фоне снижения GSH на 8% относительно фоновых показателей группы сравнения (до лечения), при этом активность МПО угнетается на 32%. Что касается параметров, отражающих деструктивные изменения, то после лечения нами были получены следующие результаты. У пациентов с МС уровень МСМ снижается на 13% при более значимом снижении уровня МДА на 42%. Выявленные изменения метаболизма со стороны энзимов первой линии антиоксидантной защиты после проведения предложенной схемы лечения пациентов с МС остаются выше референтных показателей контрольной группы, что свидетельствует о стимуляции защитных механизмов от окислительного стресса на этапе инициации процессов свободно-радикального окисления.

Таким образом, у пациентов с метаболическим синдромом имеет место формирование окислительного стресса вследствие дисрегуляции антиоксидантной защиты. После физиотерапевтического лечения отмечается повышение функционально-метаболической активности клеток крови, особое значение приобретает стимуляция каталазной активности.

Полученные результаты дают возможность проводить своевременную коррекцию нарушений метаболизма у пациентов с МС, а отобранные лабораторно-диагностические тесты могут быть использованы для анализа клинической эффективности проводимой коррекции.

Н.В. Ходарев, Н.Л. Жемчужнова, Е.В. Олемпиева, И.А. Свищева. Значимые лабораторные критерии в оценке эффективности реабилитационных мероприятий у лиц опасных профессий. Медико-санитарная часть УФСБ России по Ростовской области, г. Ростов-на-Дону

Широкое использование методов лабораторной диагностики нашло применение не только в классическом диагностическом процессе, но и имеет большое значение для научной деятельности врачей смежных специальностей в качестве верификации заболевания, оценки клинической эффективности лечебных технологий.

Целью исследования явилась оценка эффективности реабилитационных мероприятий у лиц опасных профессий с невротическими и соматоформными расстройствами (СДВНС).

Материалом для исследования выбраны биохимические критерии диагностики окислительного стресса. В качестве используемых технологий применялось определение активности глутатионпероксидазы (ГП), миелопероксидазы (МПО), содержание восстановленного глутатиона (GSH), содержание молекул средней массы (МСМ) и малонового диальдегида (МДА). Контрольная группа представлена 35 практически здоровыми добровольцами без признаков соматических заболеваний. Группу сравнения составили 33 пациента с СДВНС, для лечения которых использовалась традиционная терапия в соответствии со стандартом. Реабилитация включала применение психофармакологической коррекции, физиотерапию (массаж, водолечение), лечебную физкультуру, медико-психологические воздействия. Забор крови осуществлялся до и после полного курса реабилитационных мероприятий.

Обнаружено, что у пациентов с СДВНС до лечения отмечается активация ГП на 251% при незначительном росте количества GSH на 8%, при этом активность МПО возросла на 125% относительно контроля. В данной группе регистрируется рост интенсивности процессов свободно-радикального окисления: имеет место рост концентрации МДА на 79%. Очевидно, что сохранение структурной организации мембран эритроцитов у пациентов группы сравнения обусловлено мембранопротекторными свойствами GSH. Мы полагаем, что изменение концентрации GSH может служить лабораторно-диагностическим критерием степени тяжести заболевания. Важно указать, что не выявлены признаки эн-дотоксемии у пациентов с СДВНС, поскольку имеет место снижение концентрации МСМ на 61%.

После проведенного курса лечения выявлено снижение активности ГП на 32% на фоне роста концентрации GSH на 12% относительно фоновых показателей группы сравнения (до лечения), при этом активность МПО увеличивалась на 62%. Что касается параметров, отражающих деструктивные изменения, то после лечения нами были получены следующие результаты. У пациентов с СДВНС уровень МСМ снижается на 9% при отсутствии значимых отличий в уровне МДА. Выявленные изменения метаболизма после проведения стандартной схемы лечения пациентов с СДВНС остаются выше референтных показателей контрольной группы, что свидетельствует о напряжении защитных механизмов от окислительного стресса.

Таким образом, невротические нарушения и соматоформ-ные расстройства могут быть отнесены к группе заболеваний свободно-радикальной природы и сопровождаются развитием окислительного стресса. Проведенное исследование показало, что для повышения эффективности реабилитационных мероприятий пациентам с невротическими нарушениями и соматоформными расстройствами целесообразно в общую схему лечения дополнительно назначать тиоловые анти-оксиданты с целью увеличения функциональных резервов антиоксидантной защиты. Полученные результаты дают возможность проводить своевременную диагностику СДВНС на ранней стадии заболевания, а отобранные лабораторно-диагностические тесты могут быть использованы для анализа клинической эффективности проводимой коррекции.

Г.З. Хакимова1, Э.А. Имельбаева2, А.Ж. Гильманов2, А.И. Волкова'. О возможностях цитологической диагностики онкозаболеваний в условиях поселковой больницы. 'Приютовский корпус Белебеевской центральной районной больницы, пос. Приютово; 2ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа

В поселке городского типа Приютово Белебеевского района Республики Башкортостан (население района более 20 000 человек) основной клиникой является Приютовский

корпус Белебеевской ЦРБ, стационар которого рассчитан на 97 коек, поликлиника - на 600 посещений в смену. В рамках реализации программы «Предупреждение и борьба с социально значимыми заболеваниями» (подпрограммы «Онкология», «Безопасное материнство», «Инфекции, передаваемые половым путем») проводится обследование населения на предопухолевые и опухолевые заболевания женской половой сферы, молочной железы, простаты, органов дыхания, колоректальной локализации. Цитологические исследования осуществляются с 2005 г. после обучения врача-лаборанта методам цитологической диагностики.

Отбор лиц с подозрением на опухолевые заболевания проводится с использованием комплекса клинических и лабораторных исследований, включающего осмотр и консультацию специалистов (гинеколог, терапевт, хирург, онколог), рентгенографию, маммографию, эндоскопические исследования, цитологический скрининг и определение онкомар-керов (АФП, ХГЧ, ПСА, СА-125) методом ИФА. В задачи врача-цитолога, кроме диагностики онкопатологии по препаратам из органов больных, входит участие в ежегодных профилактических осмотрах женского населения, выявление инфекций, фоновых и предопухолевых процессов, косвенная характеристика гормонального статуса. Лаборатория обеспечивает цитологическими исследованиями население района и г. Белебей, в среднем исследуется более 45 000 мазков в год. Охват цитологическим скринингом женского населения (более 33 000 человек из 3 ближайших сельских районов) составляет 97,5%. Биоматериал в основном получают в ходе гинекологического обследования, но в лабораторию также направляют препараты, получаемые хирургами и онкологом. Мазки после фиксации окрашивают по Романовскому-Гимзе, на диагностику отбирается около 15% мазков. При обнаружении в препаратах признаков воспаления или инфекции больные обследуются на ЗППП; при выявлении умеренной или тяжелой дисплазии, рака или при подозрении на него больные направляются на дополнительное исследование опухолевых маркеров и далее на лечение в Республиканский онкологический диспансер.

Оснащенность смотрового кабинета больницы кольпоско-пом создает возможность проводить более детальную диагностику патологии шейки матки. За год в среднем выявляется 4-5 случаев рака женской половой сферы, 30-38 дисплазий, более 4700 случаев воспалительной патологии (в 90-122 случаях -трихомонадной этиологии), 30-60 лейкоплакий, 700-850 эрозий шейки матки, в 440-500 случаях выявляется гиперплазия цилиндрического эпителия, в 250-300 случаях - бактериальный вагиноз. Работа КДЛ в составе ЦРБ со штатным врачом-цитологом позволяет рационально использовать материальные ресурсы, но предъявляет особые требования к качеству цитологической диагностики, в том числе к квалификации врачей и лаборантов. Так, контроль качества цитологического исследования проводится на преаналитическом, аналитическом и постаналитическом этапах; доля неудовлетворительных (неинформативных) мазков составляет около 8%.

Таким образом, хорошо поставленная цитологическая диагностика даже в условиях больницы в поселке позволяет в кратчайшие сроки получить необходимую информацию и при необходимости направлять больных в онкодиспансер с готовыми результатами обследования. Результаты деятельности лаборатории свидетельствует о необходимости сохранения и развития цитологических исследований в первичном звене здравоохранения (где это возможно), что существенно повышает их доступность для пациентов.

А.А. Бучинская, И.В. Золкина, И.С. Мамедов, П.Б. Глагов-ский. Количественное определение катехоламинов в крови и моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией. ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва

Цель - определение уровня катехоламинов в плазме и моче, которые играют ведущую роль в организме в качестве гормонов и нейротрансмиттеров, для диагностики феохро-

моцитомы и некоторых других опухолей нервной системы. Адреналин и норадреналин являются маркерами активности симпатической нервной системы, а также важным параметром в хронической сердечной недостаточности, коронарных заболеваниях сердца, диабете, атеросклерозе, острой астме и др. Также информация об уровне содержания катехоламинов полезна с научной точки зрения при исследовании стресса, спортивной медицине.

Используемый метод анализа высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) с электрохимической детекцией (ЭХ). Аналитическое оборудование: хроматограф и детектор фирмы Shimadzu (Япония). Хроматографическая колонка AgilentZorbaxEclipseXDB-C18 3,5 мкм, скорость потока 1 мл/мин, рабочий потенциал 400-500 мВ (относительно Ag/AgQ электрода). Время хроматографического анализа 18 мин. Извлечение катехоламинов происходит посредством твердофазной экстракции. Процедуру пробоподготовки необходимо проводить незамедлительно после забора крови и центрифугирования. Если нет такой возможности, необходимо сразу после центрифугирования заморозить плазму (-18-20 °С). В случае если в качестве биоматериала используется моча, ее необходимо собирать в течение суток и добавлять консервант.

Степень извлечения из мочи составляет 81% (норадрена-лин), 69% (адреналин), 73% (дофамин). Степень извлечения из плазмы составляет 72% (норадреналин), 70% (адреналин), 68% (дофамин). Калибровочная зависимость линейна в определяемом диапазоне значений (3-1000 мкг/л в случае мочи и 15-10 000 нг/л). Нижний предел количественного определения составляет 3 мкг/л для всех катехоламинов в моче. В плазме крови предел обнаружения норадреналина и адреналина составляет 15 нг/л, дофамина - 30 нг/л. Референтные значения норадреналина в моче <97 мкг/л, адреналина <27 мкг/л, дофамина <500 мкг/л. Референтные значения норадре-налина в плазме 70-750 нг/л, адреналина <110 нг/л, дофамина <87 нг/л.

Теперь для диагностики таких болезней, как феохромо-цитома, можно использовать простой, дешевый и быстрый метод ВЭЖХ/ЭХ. Пробоподготовка проста в исполнении, а методика дает возможность определять одновременно три маркера - норадреналин, адреналин и дофамин. Это важно, поскольку при нормальной концентрации одного гормона концентрация другого может быть завышена.

И.В. Золкина, С.С. Аушкап, П.Б. Глаговский, Н.В. Лифан-цева, И.С. Мамедов. Определение стероидных гормонов в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - масс-спектрометрии. ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва

Цель - определение стероидных гормонов в крови для выявления гормональных расстройств и для мониторинга при лечении заболеваний, связанных с нарушениями функционирования эндокринной системы. Задачи - разработать высокоточный и современный метод количественного определения стероидных гормонов в крови.

Метод определения - ВЭЖХ/МС. Аналитическое оборудование - жидкостной хроматограф ShimadzuNexera и масс-спектрометр с тройным квадруполем ABSciexQTrap 4500. Разделение веществ происходит с использованием обращенно-фазовой хроматографии. Для селективной детекции используется режим МКМ (МиШр1еЯеасйоп-Мопйоп^). Пробоподготовка заключается в проведении твердофазной экстракции целевых веществ из крови. Метод разработан для количественного определения концентрации 13 стероидных гормонов: альдостерона, кор-тизола, кортизона, кортикостерона, 11-дезоксикортизола, андростендиона, дегидроэпиандростерона (ДЭА), дегидроэпиандростерон-сульфата (ДЭАС), дигидротесто-стерона, эстрадиола, 17а-гидроксипрогестерона, прогестерона и тестостерона.

Пределы обнаружения лежат в диапазоне от 0,01 мкг/л до 100 мкг/л в зависимости от аналита. Степень извлечения всех

аналитов близка к 100%. Коэффициент вариации концентраций каждого образца контроля качества не превышает 15%.

Определение количества стероидных гормонов в крови крайне важно для диагностики и в процессе лечения множества расстройств, связанных с нарушением функционирования эндокринной системы. Среди таких расстройств можно выделить синдром Кушинга, гиперальдостеронизм, андро-генитальный синдром, гипогонадизм, остеопороз, синдром поликистозных яичников. Особенно важно определение гормонов в детском возрасте, когда расстройства эндокринной системы могут повлечь за собой серьезные нарушения в развитии.

И.С. Мамедов, И.В. Золкина, П.Б. Глаговский, Н.В. Лифан-цева. Определение лекарственных веществ в крови методом тандемной масс-спектрометрии. ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, г Москва

Цель - определение лекарственных препаратов в крови при терапевтическом лечении эпилепсии, сердечнососудистой недостаточности, больных после трансплантации.

Задачи - разработать точный метод количественного определения лекарственных веществ в крови.

Используемый метод - ВЭЖХ/МС. Аналитическое оборудование - жидкостной хроматограф и масс-спектрометр с тройным квадруполем LCMS-8030 фирмы Shimadzu (Япония). Подбор хроматографических условий проводится отдельно для каждого определяемого лекарственного вещества. Для селективной детекции используется режим SRM ^екСвСКеасйопМопкоп^). Пробоподготовка заключается в осаждении белка или в экстракции вещества из плазмы или крови.

Пределы обнаружения лежат в диапазоне от 1 до 100 нг в зависимости от аналита. Степень извлечения варьируется от 70 до 98%. Коэффициент вариации концентраций каждого образца контроля качества не превышает 15%.

Терапевтический лекарственный мониторинг - способ контроля и наблюдения за распределением вводимых в организм лекарственных препаратов путем определения их концентрации в крови. ТЛМ крайне важен, если лекарственное средство имеет узкий интервал эффективности, узкий терапевтический/токсический индекс. Данный анализ позволяет оптимизировать индивидуальный режим дозирования, объяснить недостаточную эффективность, предотвратить/объяснить токсические эффекты, оценить влияние лекарственных взаимодействий.

Э.В. Некрасов, Г.А. Макарова, Д.Е. Наумов, А.Г. Приходь-ко, Е.В. Ушакова, Ю.М. Перельман. Использование иммуно-ферментного анализа для оценки секреции муцинов дыхательной системой человека. Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания, г. Благовещенск

Гиперсекреция муцинов является одним из факторов обструкции дыхательных путей при бронхиальной астме (БА). Анализ содержания муцинов в секретах дыхательных путей позволяет оценить их вклад в развитие патогенеза заболевания, а выяснение механизмов секреции муцинов позволит разработать пути контроля этого процесса. Основными гель-формирующими муцинами дыхательной системы человека являются муцины МПС5АС и МПС5В. Различные методы были использованы для оценки содержания муцинов, включая иммуногистохимические исследования для клеточной локализации и полуколичественной оценки в биоптатах, количественный Вестерн-блоттинг, методы протеомики и иммуноферментный анализ в различных секретах дыхательных путей. Количественный анализ муцинов осложняется чрезвычайно большими размерами их молекул, физическими свойствами и возможными посттрансляционными модификациями молекул.

Цель: количественный анализ содержания муцинов МПС5АС и МПС5В непосредственно в биологических жидкостях, полученных неинвазивными способами из верхних (назальный лаваж) и нижних (конденсат выдыхаемого воз-

духа) дыхательных путей с использованием коммерческих наборов для ИФА.

Секрецию муцинов слизистой носа оценивали в лаваж-ной жидкости, отобранной из носовой полости у 9 пациентов с БА без выраженных обструктивных нарушений и 3 здоровых добровольцев. У 6 пациентов и 1 здорового добровольца проводили также повторный отбор лаважной жидкости через различные промежутки времени (от нескольких дней до нескольких месяцев). Для исследования секреции муцинов нижними дыхательными путями использовали конденсат выдыхаемого воздуха (КВВ), собранный у 40 пациентов с БА. Содержание муцинов MUC5AC и MUC5B определяли с использованием наборов для ИФА SEA756Hu и SEA684Hu (Cloud-Clone Corp., США) согласно инструкции производителя.

Поскольку назальная лаважная жидкость (НЛЖ) приготовлена на основе 0,9% NaCl, для расчета концентрации муцинов в этих образцах были использованы собственные значения бланков оптической плотности, отличающиеся меньшей величиной по сравнению с бланком растворителя, поставляемого с набором, на 19 и 13% для муцинов MUC5AC и MUC5B соответственно. Обнаруженная базовая концентрация муцинов оказалась неожиданно низкой и составляла 0-0,431 нг/мл при среднем значении 0,098 и стандартном отклонении 0,090 нг/мл («=19) для MUC5AC и 0-3,06 нг/мл (1±0,67 нг/мл, «=19) для MUC5B. Корреляция между значениями концентрации муцинов в образцах при повторном отборе НЛЖ у участников эксперимента была высокой для MUC5AC (r=0,93) и сравнительно низкой для MUC5B (r=0,45). Различия между образцами, полученными у астматиков и здоровых лиц, не были существенными: у больных БА 0,098±0,102 и 0,97±0,76 нг/мл, у здоровых лиц 0,099±0,024 и 1,15±0,11 нг/мл для MUC5AC и MUC5B, соответственно. В КВВ базовую концентрацию муцинов удалось определить в 10 (26%) и 13 (34%) образцах для муцинов MUC5AC и MUC5B соответственно. В этих образцах концентрация муцина MUC5B варьировала в диапазоне от 0,4 до 2,7 нг/мл (0,9±0,8, «=13) при заявленном пределе обнаружения для данного набора 0,248 нг/мл, муцина MUC5AC - от 0,039 до 0,095 нг/мл (0,050±0,017, «=10) при пределе обнаружения 0,030 нг/мл.

Количественное определение базового уровня муцинов MUC5AC и MUC5B имеет ограниченную диагностическую ценность при прямом определении в НЛЖ и особенно в КВВ методом ИФА в связи с низким содержанием этих компонентов и значительным варьированием показателей между больными. Изменения в уровне этих муцинов в ответ на специфический стимул, а также специальная пробоподготовка образцов (концентрирование, модификация молекул) могут быть более информативными.

Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (грант №.14-25-00019).

М.Ю. Первакова, В.Л. Эмануэль, А.А. Шумилов, О.Н. Титова, А.Л. Чудинов, И.Б. Беляева, С.В. Лапин. Выявление мутантных форм белка альфа-1-антитрипсина методом изоэлектрофокусирования у пациентов с хронической легочной патологией. Научно-методический центр по молекулярной медицине МЗ РФ ПСПбГМУ им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Санкт-Петербург

Дефицит альфа-1-антитрипсина (А1АТ), возникающий вследствие мутаций в гене Pi, является фактором наследственной предрасположенности к хронической обструк-тивной болезни легких (ХОБЛ), а также ассоциирован с протеиназа-3-позитивным васкулитом (П3ПВ).

Целью данного исследования является оценка распространенности мутантных фенотипов А1АТ у больных с хронической легочной патологией: ХОБЛ, гранулематозом Ве-генера.

Задачи: 1. Адаптировать метод изоэлектрофокусирования для определения фенотипов А1АТ в условиях практической лаборатории; 2. Произвести сбор клинического материала у

следующих категорий больных: больные ХОБЛ II и III стадии, больные с П3ПВ, здоровые доноры; 3. Произвести в набранных группах определение фенотипов А1АТ, определить концентрации А1АТ турбидиметрическим методом; 4. Проследить взаимосвязь патологических фенотипов А1АТ с особенностями клинической картины заболеваний; 5. Оценить распространенность фенотипов в данных группах больных и сделать заключение о роли мутантных форм А1АТ в патогенезе названных заболеваний.

Были собраны три группы больных: ХОБЛ II и III стадии: 27 человек, больные П3ПВ: 30 человек, здоровые доноры: 30 человек. Для фенотипирования А1АТ использовался метод изоэлектрофокусирования с иммуноблоттингом с помощью оборудования для горизонтального электрофореза (Pharmacia, Швеция). Для создания градиента pH были использованы амфолиты pH 4,2-4,9 (GEhealthcare, Швеция). Селективная окраска А1АТ достигалась с помощью конъюгированных с пероксидазой хрена козьих антител (Bethyllaboratories, Швеция). Количественное измерение содержания А1АТ проводилось на биохимическом анализаторе А15 (Biosystems, Испания) методом иммунотурбидиметрии (SentinelDiagnostics, Италия).

Среди 27 больных ХОБЛ было выявлено 18,5% (5/27) мутантных фенотипов А1АТ: 3PiMZ, 1PiMS и 1PiSS. Из 30 больных с П3ПВ 20% (6/30) оказались носителями мутантных фенотипов: 1PiZZ, 3PiMZ, 2PiMF. При этом мутантные фенотипы А1АТ были обнаружены только при тех формах П3ПВ, которые сопровождались поражением легких. Среди 20 здоровых доноров было выявлено 2 носителей гетерозиготных мутантных фенотипов (6,5%). Из всех вышеперечисленных больных только у двух обладателя мутантных фенотипов А1АТ: PiZZ и PiMZ, оба с П3ПВ, концентрация А1АТ была ниже предела референтных значений, указанных производителем.

У значительного числа пациентов с ХОБЛ и П3ПВ были обнаружены мутантные формы А1АТ, при этом их появление в большей части случаев не сопровождалось снижением концентрации А1АТ в сыворотке крови, что свидетельствует о том, что на патогенез ХОБЛ и П3ПВ оказывает существенное влияние не сниженная концентрация молекул А1АТ, а их нарушенная функциональная активность, что делает необходимым использование качественного теста для выявления дефицита А1АТ. Большой процент фенотипов (20%) среди больных П3ПВ свидетельствует о том, что роль дефицита А1АТ в развитии аутоиммунного воспаления при П3ПВ недооценена, а среди пациентов с П3ПВ целесообразно проводить скрининг на дефицит А1АТ для выявления лиц с показаниями к заместительной терапии.

Н.Н. Зыбина, О.В. Тихомирова. Мелатонин в практике клинической лабораторной диагностики. ФГБУ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова» МЧС России

Наиболее изученной является диагностическая значимость мелатонина и его производных при инсомнии. Рассматривается участие мелатонина в патогенезе метаболического синдрома, сердечно-сосудистой и цереброваскулярной патологии, диабета, онкопатологии. Препараты мелатонина широко применяются в клинической практике. Вместе с тем определение мелатонина в крови и его производных в моче не используется в повседневной клинической практике. Это связано с ярко выраженным циркадианным ритмом выработки мелатонина, широкими пределами индивидуальных колебаний, отсутствием стандартизации методов и общепринятых показателей референтного интервала.

Цель исследования: стандартизация протокола определения экскреции основного производного мелатонина, определение пределов референтных величин в рамках разработанного протокола и диагностической значимости определения мелатонина при инсомнии, метаболическом синдроме (МС) и болезнях системы кровообращения (БСК).

Проведено исследование содержания 6-сульфато-

ксимелатонина (6-оксиМТ) методом твердофазного имму-ноферментного анализа ELISA (Buhlmann Laboratories AG, Швейцария) в вечерней, ночной и дневной порциях мочи 130 пациентов с инсомнией, МС и БСК.

При выполнении исследований был разработан протокол преаналитического этапа определения 6 оксиМТ, особенностью которого являлось отнесение к ночной порции всех порций мочи во время сна и утренней порции мочи, а к дневной порции мочи - всех остальных порций вне зависимости от времени. Значимым для инсомнии было не только снижение пикового значения синтеза мелатонина, но и выраженный сдвиг этого пика с ночного на вечернее время. Полученные данные свидетельствуют о сниженном синтезе ночного ме-латонина у пациентов с инсомнией. Выявлена достоверная связь между синтезом ночного мелатонина и характеристиками сна. Были определены варианты нижней границы референтного интервала по первой квартиле (6 мкг за ночь) или по 37,5% перцентиле (8 мкг).

Был выявлен достоверно более низкий уровень экскреции ночного 6-оксиМТ у пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией II стадии (ДЭ II) - 9,4±1,5 мкг (при ДЭ I - 17,7±2,8 мкг, р<0,05), что сочеталось с более высоким уровнем СРБвч, выраженной микроальбуминурией и нарушением толерантности к глюкозе. Выраженное влияние на снижение уровня экскреции 6-оксиМТ оказывает прием бета-блокаторов. В группе пациентов с БСК, которые не принимали бета-блокаторы, уровень экскреции 6-оксиМТ меньше 8 мкг был ассоциирован с более старшим возрастом, большей выраженностью патологического процесса и признаков метаболического синдрома. При этом доля экскреции вечернего 6-оксиМТ была в среднем в два раза больше, чем в группе с ночной экскрецией 6-оксиМТ больше 8,0 мкг (28,9±8,3 против 11,9±2,7%, р<0,05), а соотношение ночной и дневной экскреции 6-оксиМТ было более чем в два раза ниже. Характерным для обследованных пациентов был также высокий уровень дневной экскреции 6-оксиМТ более чем в 30% случаев.

Стандартизация преаналитического этапа определения метаболитов мелатонина в моче должна стать обязательной процедурой при использовании этого теста в диагностических целях. Данные об экскреции 6-оксиМТ могут стать основанием для определения дополнительных показаний к назначению мелатонина при лечении инсомнии. В оценке метаболизма мелатонина в клинической практике, кроме уровня ночной экскреции его метаболитов, важным может оказаться уровень дневной и вечерней экскреции и соотношение этих параметров.

В.Ф. Нестеров, Л.А. Пестряева. Роль ферментов клеточного энергообмена в прогнозировании первичной слабости родовой деятельности. ФГБУ «НИИ ОММ» Минздрава России, г. Екатеринбург

Проблема первичной слабости родовой деятельности является одной из наиболее актуальных в современном акушерстве. В последние годы в мировой науке появились новые концептуальные воззрения на инициацию сократительной деятельности матки. Несмотря на очевидные успехи в исследовании механизмов регуляции сократительной деятельности матки в эксперименте и в клинике, этиология и патогенез СРД остаются недостаточно изученными, не уточнена роль митохондриальных нарушений в механизме энергетического дефицита при АРД в конце беременности и в родах. Поэтому в нашем исследовании мы решили оценить роль ферментов клеточного энергообмена в прогнозировании первичной слабости родовой деятельности.

Проведено проспективное когортное исследование, в которое были включены 67 соматически здоровых первобе-ременных женщин. У этих женщин в сроке доношенной беременности за 3-4 дня до предполагаемой даты родов исследовалась активность ферментов клеточного энергообмена -сукцинатдегидрогеназа, альфаглицерофосфатдегидрогеназа, в лимфоцитах периферической крови цитохимическим мето-

дом в модификации Р.П. Нарциссова. Использовались готовые тест-системы фирмы ООО «Поликом» (Москва). Анализ изображения клетки выполняют с помощью микровидеографического комплекса открытого типа пятого поколения (Испания) SCA фирмы MicroptikS.L., который включает в себя: оптический блок (микроскоп Leika 1000), видеокамеру, компьютер, пакет модульных программ, необходимых для анализа изображения. Подсчет гранул диформазана производили в 100 лимфоцитах по методике Нахласа и соавт. в модификации Р.П. Нарциссова. Затем по формуле, предложенной Кеплоу в модификации Astaldi и Verga, высчитывали средний цитохимический коэффициент (СЦК), отражающий соотношение популяций лимфоцитов с различной активностью фермента. По исходу родов пациентки были разделены на 2 группы: 1-я (основная) - 23 пациентки с осложненным течением родов в виде первичной слабости родовой деятельности, 2-я (контрольная) - 44 пациентки с физиологическими родами. Была проведена оценка роли ферментов, забор которых производился накануне родов.

В основной группе имелось достоверное повышение сукцинатдегидрогеназы - 2,3±0,06 усл. ед. против 1,87±0,04 усл. ед. в группе контроля, и достоверное повышение аль-фаглицеросфатдегидрогензы - 1,74±0,36 усл. ед., тогда как в группе женщин с физиологическими родами этот показатель составил 1,51±0,l6 усл. ед. (p<0,05).

Повышение активности этих ферментов накануне родов, свидетельствуюет об уже имеющейся активации метаболических процессов, что может привести к преждевременному истощению ферментных систем митохондрий, развитию ди-задаптации и реализоваться в гипотоническую дисфункцию матки во время родового акта. В связи с чем эти показатели можно использовать в прогнозе первичной слабости родовой деятельности у первородящих женщин.

Е.В. Олемпиева. Изменение каллекреин-кининовой системы у женщин репродуктивного возраста при гипертонической болезни. Медико-санитарная часть УФСБ России по Ростовской области, г. Ростов-на-Дону

Среди нейрогуморальных механизмов, определяющих состояние сердечно-сосудистой системы, важнейшее место занимает калликреин-кининовая система (ККС), имеющая тесную биохимическую и функциональную связь как с ренин-ангиотензиновой системой (РААС), так и с эндотели-альными факторами.

Цель исследования: оценка активности ККС, а также параметров, отражающих функциональную активность ней-трофилов, у женщин репродуктивного возраста при гипертонической болезни I стадии I степени.

Выделено две группы обследуемых женщин. Контрольная группа представлена 30 практически здоровыми женщинами репродуктивного возраста без признаков сердечнососудистой патологии (22,3±1,2 года). Клиническая группа состояла из 45 женщин репродуктивного возраста с верифицированной гипертонической болезнью (ГБ) I стадии I степени (28,6±2,4 года).

В сыворотке крови определяли общую аргинин-эстеразную активность (ОБАЭЭ), активность калликреина (КК) и содержание прекалликреина (ПК), активность а1-протеиназного ингибитора (а1-ПИ) и а2-макроглобулина (а2-МГ), активность лейкоцитарной эластазы. Статистическую обработку данных проводили по определению средней арифметической, ошибки средней. О достоверности показателей контрольной и клинической групп судили по величине t-критерия Стьюдента после проверки распределения на нормальность. Статистически достоверными считали отличия, соответствующие оценке ошибки вероятности р<0,05.

Установлено, что у женщин с ГБ отмечается увеличение протеолитического потенциала крови, что документируется ростом активности ОБАЭЭ на 28,5% относительно контрольной группы. Кроме того, зарегистрировано снижение ПК на 22% при одновременном росте активности КК на 196,2%. Процесс кининогенеза оценивали по коэффициенту калли-

креинообразования (ККО), который превышал показатели контрольной группы на 280,7%, что также свидетельствует о повышенной продукции КК. Таким образом, у женщин при ГБ отмечается избыточная продукция КК, биологические эффекты которого могут реализоваться по нескольким основным направлениям: гидролиз ВМК с образованием брадики-нина, стимуляция дегрануляции полиморфноядерных лейкоцитов с высвобождением протеиназ и активация проренина. Патогенетические функции КК наиболее ярко проявляются при недостаточности его ингибиторов. Так, уровень а2-МГ сыворотки крови имел тенденцию к снижению на 6,9% при незначительном росте активности а1-ПИ на 13,2%. При этом коэффициент ингибирования оказался выше на 21,6% относительно контрольной группы. Функционирование ККС связано с гранулоцитами крови. Известно, что появление в крови гранулоцитарной эластазы приводит к гидролизу КК, активного фактора Хагемана, фибриногена, антитромбина III, компонентов комплемента. В ходе исследования установлена тенденция к росту активности лейкоцитарной эластазы на 8,1%. Учитывая тот факт, что у женщин данной клинической группы имеется подъем артериального давления, то, по-видимому, отмечается активация ангиотензинпревращаю-щего фермента (АПФ) и снижается продукция или увеличивается распад основного вазодилататора - брадикинина.

Таким образом, у женщин при начальной стадии развития гипертонической болезни отмечается активация калликреи-нообразования, направленная на развитие биохимических и морфологических основ развития ангиопатий, что сопровождается активацией РААС, повышением активности поли-морфноядерных лейкоцитов и их дегрануляцией, а это в свою очередь нарушает процессы синтеза и созревания основных компонентов соединительной ткани сосудистой стенки.

В.С. Демидова, Т.А. Ушакова, А.А. Звягин, А.Э. Бобровни-ков, О.В. Медова, Р.П. Терехова. Оптимизация лабораторной диагностики сепсиса при хирургической инфекции. ФГБУ «Институт хирургии им. А.В. Вишневского» Минздрава России, Москва

Цель - оптимизация лабораторной диагностики сепсиса при хирургической инфекции путем мониторинга маркеров воспаления.

Обследованы в динамике 27 хирургических пациентов с инфекционными осложнениями: сепсис (w=16); SIRS с декомпенсацией сопутствующих заболеваний (n=11) и с ожоговой травмой (n=141). Пострадавшие от ожогов распределены на 4 группы: I - локальные ожоги, II - обширные ожоги (ИФ <90), III - выжившие (ИФ >100), IV - летальный исход (ИФ >100). Лабораторные тесты: Р^ЕР (пг/мл): иммунохеми-люминесцентный метод; PCT (нг/мл): полуколичественный метод; CRP (мг/л): иммунохемилюминесцентный метод.

В связи с тем, что бактериемия стала необлигатным признаком для диагностики сепсиса, востребованность в исследовании PCT остается высокой и имеет тенденцию к росту: 2011 г. - 203, 2012 г. - 309 и 2013 г. - 367 анализов при примерно одинаковом числе госпитализированных пациентов. Отмечен также рост «отрицательных» результатов PCT (<0,5>) с 67% от общего числа исследований до 77%. Частота результата, отражающего угрозу генерализации инфекции (<10>), составила всего 10-13% от общего числа обследованных за три года. При поступлении в палату интенсивной терапии (ПИТ) у пациентов с сепсисом и в дальнейшем неблагоприятным исходом (n=12) уровень Р^ЕР составил 1544,92±426,71, что достоверно (p=0,023) выше, чем при благоприятном исходе 590,75±270,87. У умерших в дальнейшем пациентов в динамике отмечено достоверное (p=0,035) нарастание его уровня до 3827,5±1744,3, с эпизодами подъема до 20 000 и выше. Наиболее высокие уровни Р^ЕР (до 22 542) обнаружены у пациентов с сепсисом, оперированных по поводу онкозаболеваний органов брюшной полости. У выживших отмечено снижение и в дальнейшем нормализация уровня Р^ЕР, как и уровня CRE5, который не имел достоверных отличий: у погибших пациентов он составил 140,88±14,29 с тенденцией к на-

растанию в динамике; у выживших - 144,8±20,7, с тенденцией к снижению в дальнейшем. Уровень PCT колебался от 0,5 до 2 у всех пациентов при поступлении их в ПИТ. У умерших в дальнейшем пациентов в процессе лечения наблюдались периодические подъемы PCT от >0,5 до 10 и более, тогда как у выживших выявлено четкое снижение до значений <0,5. Пациенты с SIRS при поступление в ПИТ имели высокие уровни P-SEP от 400 до 4516 (при альвеококкозе - 10 207); CRP - от 59 до 229, PCT - от 0,5 до >10. При благоприятном исходе все маркеры в динамике имели тенденцию к снижению. При неблагоприятном исходе при поступлении в ПИТ уровень пресепсина в среднем составил 1261,63±482,25, в дальнейшем наблюдали возрастание до 2000,2±495,34. При этом CRP у умерших был в среднем 148,85±15,55, а уровень PCT >0,5 и имел тенденцию к нарастанию до >10. Отдельно оценивали маркеры сепсиса у пациентов с ожоговой травмой. Анализ базовых результатов с включением исследования CRP и P-SEP в зависимости от развившегося сепсиса и исхода продемонстрировал резкие отличия в уровне воспалительного ответа на травму. У пациентов I группы, несмотря на локальность поражения, выявлено повышение CRP: М=13,68±2,87 (n=7) на фоне нормальных значений P-SEP: 21,3±4,3 (n=6) и PCT (<0,5). Пострадавшие II группы имели системный воспалительный ответ (СВО) на обширное поражение, что отразилось в повышении CRP: M=57,69±5,87 («=13) и P-SEP: 81,3±17,7 («=16), при этом PCT оставался в пределах >0,5 с эпизодами до 2. Наиболее тяжелые больные III и IV групп продемонстрировали резкие отличия в уровне воспалительного ответа на травму. А именно: выявлено логичное повышение CRP: М=166±20,86 («=13) и P-SEP: 451,15±44,03 («=26) с периодическими подъемами PCT до 2-10 («=59) у всех пациентов III группы. Однако в «септической» составляющей с благоприятным исходом (IIIa) отмечен дальнейший рост P-SEP: 632,3±74,26 («=10) и PCT (частый тренд к 10 ng/ml) на фоне относительного снижения CRP: M=137,6±27,4 («=16). Наконец, у больных IV группы (сепсис, неблагоприятный в дальнейшем исход) отмечено при поступлении сравнительное снижение P-SEP: 402,66±67,49 («=9) и CRP: М=110,56±24,52 («=9) при стойком тренде PCT>10. Дальнейший мониторинг этих больных (IV группа) демонстрировал подъем P-SEP до: 6488,1±1926,97. При этом у выживших пострадавших Ша группы отмечено менее значительное повышение P-SEP: 2098±875,77. Выявлено также, что у выживших пациентов с пневмонией уровень P-SEP достигал более высоких цифр 2922,8±1711,98 («=5), чем без пневмонии: 1744,88±534,9 («=8).

Основной путь (алгоритм) преддиагностики генерализации инфекции состоит в комплексном мониторинге маркеров воспаления для определения адаптивности уровня воспалительного ответа на травму или операцию. P-SEP является наиболее информативным лабораторным показателем ранней диагностики сепсиса, мониторинга его тяжести и прогнозирования неблагоприятных исходов. По нашим данным, CRP и P-SEP в большей степени маркеры уровня воспаления, тогда как PCT отражает степень угнетения адаптивного воспаления, сопровождаемого развитием полиорганной недостаточности и тяжелого сепсиса.

В.В. Кулабухов, В.С. Демидова, А.Н. Кудрявцев, А.Г. Чи-жов, Р.П. Терехова, А.А. Баранова. Исследование динамики пресепсина и прокальцитонина у тяжелообожженных пострадавших и общехирургических пациентов с инфекционными осложнениями. ФГБУ «Институт хирургии им. А.В. Вишневского» Минздрава России, Москва

Цель - сравнить диагностический потенциал лабораторных маркеров сепсиса - пресепсина (P-SEP) и прокальцитонина (PCT) у пациентов с инфекционными осложнениями в общехирургической практике и у больных с термическим поражением.

Количественное определение P-SEP проводили иммуно-хемилюминесцентным методом (PATHFAST, Япония), PCT -иммунологическим методом (miniVIDAS, Франция). Про-

веден ретроспективный анализ диагностической значимости данных маркеров сепсиса у 134 больных хирургического профиля (45 (33,6%) пациентов с термической травмой) с признаками инфекционного процесса. Для оценки качества диагностической модели сепсиса проводили ЯОС-анализ исследованных маркеров, сравнение эффективности их применения проводили по значению показателя АиС. Объективную ценность маркеров определяли вычислением чувствительности и специфичности.

У пациентов имело место осложненное инфекцией течение хирургического заболевания. Инфекционный процесс носил локальный характер у 91 (67,9%) пациента, развитие сепсиса было отмечено у 43 (32,1%) больных. На данные проведенного ЯОС-анализа для показателей РСТ у общехирургических больных в первые часы после проявления клинических симптомов сепсиса оказали влияние более низкие значения уровня маркера. При удовлетворительных значениях АиС в 0,88, чувствительности 0,81, специфичности 0,92 порог отсечения оказался в пределах 0,45 нг/мл. В период 12-24 ч от момента поступления у пациентов с сепсисом наблюдался значительный прирост показателей РСТ, что отразилось в повышении порога отсечения до уровня 1,31 нг/мл при показателе АиС в 0,946, чувствительности 0,88, специфичности 0,87. В динамике наблюдения отмечали значительную достоверность в различиях показателей РСТ между пациентами с сепсисом и локально протекающим инфекционным процессом. Была подтверждена статистически значимая разница между динамикой изменений уровня РСТ у больных, умерших от сепсиса, и переживших заболевание. Качество диагностической модели сепсиса на основании уровней Р^ЕР с использованием ЯОС-анализа в период 6 ч от развития клинических симптомов генерализованной инфекции у пациентов общехирургического профиля также было недостаточным, показатель АиС 0,767, порог отсечения 975 пг/мл, чувствительность 0,61, специфичность 0,99. Через 12-24 ч отмечалось существенное повышение показателя АиС для Р^ЕР до уровня 0,95 при пороге отсечения 930 пг/мл, чувствительность 0,9, специфичность 0,98. У пострадавших с ожогами наблюдали значительное количество случаев неспецифического повышения уровней РСТ. В данной группе пациентов значение показателя АиС для РСТ составило 0,67, при этом чувствительность отмечалась на уровне 0,68, специфичность 0,67 при пороге отсечения 0,58 нг/мл. У большинства пациентов с ожогами повышение уровня Р^ЕР при развитии сепсиса имело место в первые сутки от момента начала заболевания. Максимальных значений маркер достигал на 2-4-е сутки. При проведении ЯОС-анализа для показателей Р^ЕР у ожоговых пациентов АиС составило 0,86, чувствительность - 0,84, специфичность - 0,88 при пороге отсечения 567 пг/мл. В исследовании были отмечены достоверные различия в показателях уровня исследуемых маркеров между умершими и выжившими пациентами с сепсисом в обеих наблюдаемых группах. В дисперсионном анализе ANOVA с повторяемыми измерениями: F=9,2 при р=0,000001 для прокальцитонина; F=86,4 при р=0,00001 для пресепсина.

Выводы. 1. При оценке качества диагностических моделей сепсиса у больных общехирургического профиля про-кальцитонин и пресепсин показали сходные результаты -АиС (0,946 и 0,95 соответственно), при условии повторного исследования их уровней через 12-24 ч от момента развития клинических симптомов сепсиса.

2. Прокальцитонин имеет значительно меньшие диагностические возможности в отношении постановки диагноза «сепсис» у больных с ожоговой травмой АиС (0,67).

3. Пресепсин у ожоговых пациентов с инфекционными осложнениями показал очень хорошее качество в диагностической модели сепсиса с уровнем АиС 0,86.

4. Уровни пресепсина и прокальцитонина достоверно различались у умерших и выживших пациентов с сепсисом в обеих наблюдаемых группах.

Е.Н. Шопова, М.А. Саевец, И.В. Фомичева. Мониторинг уровня пресепсина и липополисахаридсвязывающего протеина в периоперационном периоде у отягощенной категории кардиохирургических больных с сахарным диабетом. ФГБУ «Федеральный центр сердечно-сосудистой хирургии» Минздрава РФ, г. Челябинск

Цель и задача исследования: провести параллельное динамическое исследование уровней пресепсина (ПСП) и ли-пополисахаридсвязывающего протеина (ЛСП) с целью оценки их диагностической и прогностической роли - как одних из гуморальных факторов, свидетельствующих об интенсивности фагоцитоза и возможности их использования как предикторов в развитии системного воспалительного ответа и связанных с ним ранних послеоперационных осложнений у кардиохирургических пациентов с сахарным диабетом после операций, выполненных в условиях искусственного кровообращения (ИК).

Проведено исследование в до- и послеоперационном периоде у основной группы кардиохирургических пациентов численностью 12 человек с ишемической болезнью сердца (ИБС), стенокардией II-III ФК, хронической сердечной недостаточностью (ХСН) I-ПА (функциональный класс по NYHА II-III), в возрасте от 50 до 70 лет, с сопутствующим сахарным диабетом 2-го типа. Контрольную группу составили 28 кардиохирургических пациентов с той же патологией, но не имеющих в качестве сопутствующего заболевания сахарный диабет (СД). Пациенты с осложненными формами ИБС в обследование включены не были. Всем пациентам выполнена операция коронарная реваскуляризация миокарда в условиях ИК с использованием холодовой кровяной кар-диоплегии. Регистрировались демографические данные, параметры операции (длительность ИК, время пережатия аорты), оценка тяжести состояния по APACHE II, в динамике (до операции, далее, на утро первых суток после вмешательства (18-20 ч), на 3-5-е сутки и на 7-10-е сутки после операции) фиксировались рутинные клинико-биохимические показатели. Определение уровней ПСП и ЛСП проведено в те же дни иммунохемилюминесцентным методом на автоматических анализаторах IMMULITE® 2000XPi (SiemensHealthcareDiag-nostics, США), PATHFAST (MitsubishiChemicalMedienceCor-poration, Япония). Данные представлены в виде медианы и интерквартильного размаха - Me (P25-P75).

До операции у всех больных отсутствовали клинико-лабораторные признаки инфекции. Исходные уровни ЛСП у пациентов основной и контрольной групп находились в пределах нормы и составляли 8,08 (7,35-9,63) и 7,93 (6,5810,74) мкг/мл соответственно. Дооперационные уровни ПСП у 6 (50%) из 12 пациентов в основной группе и у 19 (68%) из контрольной группы превышали верхнюю границу нормы, составив 568 (401,5-691) и 561 (450-850) пг/мл соответственно. Ранние послеоперационные осложнения развились у 3 (25%) пациентов с СД и у 4 (14%) из контрольной группы. Все они имели повышенный исходный уровень ПСП. В послеоперационном периоде динамика биомаркеров была однотипной: в первые сутки уровень аналитов у пациентов обеих групп достоверно (р<0,01) повышался, достигая максимума к 3 суткам. К седьмым суткам послеоперационного периода уровень биомаркеров снижался (р<0,01), хотя и оставался повышенным (р<0,01) по сравнению с исходными значениями. При этом у пациентов с осложнениями как инфекционной, так и неинфекционной природы, несмотря на однотипную динамику изменения исследуемых биомаркеров, отмечались более высокие значения в группах, чем в случае не осложненного течения послеоперационного периода.

Однотипная динамика уровней ПСП и ЛСП отражает возможность использования данных показателей как гуморальных факторов, свидетельствующих об активации фагоцитоза в раннем послеоперационном периоде в ответ на многофакторное воздействие, связанное с оперативным вмешательством в условиях ИК, которое само по себе уже является мощным индуктором системного воспалительного ответа.

Кроме того, повышенные дооперационные уровни ПСП могут быть маркером наличия хронического системного воспаления у отягощенной категории кардиохирургических больных, обусловленного выраженными дезаптационными общими реакциями и сниженным адаптационным резервом всего сердечно-сосудистого русла в условиях выраженной трансформации сердечно-сосудистого патоморфоза, комор-бидности и мультифокального характера поражения. Все это необходимо учитывать для адекватной оценки пограничного уровня ПСП (cut-off), позволяющего с точной достоверностью прогнозировать развитие системных инфекционных осложнений в раннем послеоперационном периоде у данной категории больных.

О.А. Гусякова, Ф.Н. Гильмиярова, ВМ. Радомская, Н.И. Гергель, Ю.В. Мякишева, М.А. Прилепина, И.В. Горбачева, Г.М. Баишева, Ю.В. Первова, Д.О. Горбачев. Необходимость разработки референтных значений содержания витаминов в крови. ГБОУ ВПО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России, г. Самара

Для профилактики осложнений у матери и плода беременным назначают витаминно-минеральные комплексы. Трудности в интерпретации результатов при лабораторном контроле содержания витаминов в крови связаны с отсутствием референтных значений для данных показателей у беременных.

Цель исследования - оценка обеспеченности организма беременной витаминами и минеральными элементами.

Обследованы 94 женщины беременных в сроки 30-40 нед гестации, возраст которых колебался от 20 до 39 лет. В крови определяли содержание железа, свободного Т4, витаминов D (25-ОН), В12, фолиевой кислоты, кальция, магния, неорганического фосфора электрохемилюминесцентным методом на анализаторе Elecsys 2010 и на биохимических анализаторах Hithachi 202 и Integra 400 плюс. Анализ полученных результатов проведен с помощью компьютерной программы Statis-tica 6.0.

Анализ показателей крови у беременных выявил их существенные колебания в референтном диапазоне. Наиболее значительные отличия определены для содержания кальция: у 34% они были в нижнем диапазоне, в единичных случаях были ниже нормы для небеременных женщин, у 10% были в верхнем диапазоне, у 33% превышали уровень 2,5 ммоль/л. Очевидно, что высокий процент беременных с повышенным уровнем кальция был связан с высоким содержанием витамина D (25-ОН): у 42% уровень витамина превышал норму -100 нг/мл. Нельзя исключить негативное влияние высокого содержания D (25-ОН) на плод: велика опасность раннего закрытия родничков, развития кальциноза в организме.

В отношении магния тенденция противоположная. Этот показатель у 28% беременных был ниже 0,7 ммоль/л. Известно, что магний необходим для большего числа ферментативных реакций и прежде всего - энергетического обмена. Его дефицит может привести к задержке развития плода. Также в организме беременных недостаточно неорганических фосфатов: у 55% его уровень находился в нижнем диапазоне референтных значений.

Из изученных витаминов наиболее значительный недостаток определен для витамина В12 - у 52% беременных показатель был ниже 220 нг/мл. Известна роль этого витамина в обмене нуклеиновых кислот. Его недостаток может привести к нарушению роста и дифференцировки клеток и тканей плода. В нижнем диапазоне референтного интервала находились показатели фолиевой кислоты у 33% беременных, железа - у 24% обследованных. Недостаток кобаламина и фолатов создает условия повышенного риска развития врожденной патологии плода.

Очевидно, что свой вклад в дисбаланс витаминов и минеральных веществ в организме беременных мог быть обусловлен сдвигами в эндокринной системе, в частности, изменениями тиреоидного статуса. Установлено, что у каждой 10-й беременной уровень свободного Т4 был ниже 12 пмоль/л.

Таким образом, при назначении беременным витаминно-минеральных комплексов необходимо осуществлять лабораторный мониторинг содержания витаминов В12, D (25-ОН), фолиевой кислоты, кальция, магния, фосфора, ТТГ и свободного Т4. Очевидна необходимость разработки референтных-значений для содержания витаминов в крови с учетом биологической вариабельности показателей, связанной с возрастом, полом, группой крови, беременностью.

Н.Б. Теряева. Референтные интервалы ТТГ: о чем молчат руководства. ФГБНУ «НИИ нейрохирургии им. акад. Н.Н. Бурденко», Москва

Границы референтного диапазона для тиреотропного гормона (ТТГ) в справочной литературе по иммунохимии представлены практически одинаково - как 0,4-4 мЕ/л (с небольшими вариациями) и многими специалистами лабораторной диагностики воспринимаются как безусловная истина. Дискуссии относительно верхней границы референтного диапазона активно протекали в среде эндокринологов, несколько в стороне от лабораторного сообщества. Так, по данным популяционных исследований, уровень ТТГ у большинства здоровых испытуемых не превышает 2-2,5 мЕ/л. Область относительно высоких значений (свыше 2,5 мЕ/л) представляет лишь незначительная часть выборки, обладатели таких значений часто оказываются носителями ранних признаков патологии щитовидной железы и склонны к развитию клинически значимого гипотиреоза. В начале 2000-х гг. в литературе активно обсуждался вопрос о пересмотре верхней границы референтного диапазона ТТГ, однако это предложение вызвало много споров и в итоге принято не было. Вместе с тем клинические исследования все чаще свидетельствуют, что характерные для гипотиреоза деструктивные изменения в различных тканях начинают формироваться уже при минимальных отклонениях функции щитовидной железы, при значениях ТТГ выше 2,5 мЕ/л. Так или иначе, использование значения 4 мЕ/л в качестве верхнего порога референтного интервала нельзя считать бесспорным. Определенная настороженность в отношении значений ТТГ 2,5-4 отражается и в самых последних рекомендациях ведущих экспертных сообществ: Американской Ассоциации Клинических Эндокринологов и Американской Тиреоидной Ассоциации (2012 г.), а также Европейской Тиреоидной Ассоциации (2013 г.) -настороженность, которая никак не отражается в значениях референтных интервалов.

Обсуждение этого вопроса заставляет задуматься о том, что привычные подходы к оценке лабораторных показателей не всегда способны объективно отражать диагностическую значимость полученных значений. Латентная патология и функциональные колебания активности систем органов могут несколько размывать границы физиологических состояний, а формальный статистический расчет - скрывать реальную картину распределения значений показателя в популяции. Возможно, в таких случаях ключом к решению многих проблем может оказаться идеология биологической вариации или использование порогов принятия клинических решений.

О.Н. Старцева, М.Ю. Фролова, Н.Н. Зыбина. Интегральная оценка состояния системы гемостаза у пациентов с заболеваниями системы кровообращения. ФГБУ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова» МЧС России

Известно, что у пациентов с заболеваниями системы кровообращения имеют место стойкие изменения системы гемостаза, несмотря на проводимую патогенетическую терапию. Однако, по нашим данным, использование скрининговых коагулогических тестов не позволяет объективно оценивать эти изменения.

Целью нашей работы стало выявление связи показателей теста тромбодинамики (ТД) с исследуемыми параметрами системы гемостаза, тромбоэластометрии и другими биохимическими показателями у пациентов с заболеваниями системы кровообращения.

Для решения поставленных задач были обследованы 76 пациентов в возрасте от 47 до 83 лет (средний возраст 63±12,5 года) с установленными диагнозами заболеваний сердечно-сосудистой системы и цереброваскулярными заболеваниями.

Метод тромбодинамики основан на визуализации роста фибринового сгустка, максимально приближенного к естественным условиям, с помощью регистратора. Рост сгустка происходит в тонком слое плазмы от поверхности вставки-активатора, покрытой иммобилизованным тканевым фактором. В качестве основных параметров теста ТД определяли время задержки начала образования сгустка (Tlag), скорость роста сгустка (V), время появления спонтанных сгустков (Tsp) и дополнительные параметры: размер фибринового сгустка (CS) и его плотность (D).

Параллельно с показателями тромбодинамики была проведена оценка состояния системы плазменного гемостаза скрининговыми методами, сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, дисфункции эндотелия и активации плазменного гемостаза, тромбоэластометрия.

Кроме того, всем пациентам было выполнено исследование основных биохимических показателей углеводного, ли-пидного и белкового обмена.

Результаты исследования показали, что параметры скри-нинговых коагулогических тестов находились в пределах референтных интервалов, тогда как показатели ТД соответствовали референтным значениям лишь в 2,6% случаев. Из проанализированных параметров наибольшие изменения наблюдались в скорости роста сгустка и времени появления спонтанных сгустков. Например, скорость роста сгустка в группе обследованных пациентов была значительно увеличена и составляла 62,4±12,8 мкм/мин (референтный интервал: 24,5±2,25 мкм/мин), а время появления спонтанных сгустков -14,9±6,9 мин (в норме спонтанные сгустки не образуются).

Анализ корреляционных связей показал, что статистически достоверная отрицательная корреляция имеется между скоростью роста сгустка (V) и АПТВ (г=-0,42, р<0,005) и положительные корреляции между V и FW (r=0,3, р<0,005), Tsp и FW (r =0,4, р<0,005), Tsp и PAI-1 (r=0,34, р<0,005). Также мы обнаружили сильные корреляционные связи между показателями тромбодинамики и тромбоэластометрии: CS и I-СТ (r=-0,59, р<0,005), V и I-СТ (r=-0,51, р<0,005), V и MCF (r=-0,54, р < 0,005). Следует отметить положительные корреляционные связи всех параметров теста тромбодинамики с определением экспрессии P-селектина (все коэффициенты корреляции превышали значение 0,5 при р<0,005). Кроме того, корреляционный анализ выявил достоверные положительные связи показателей тромбодинамики с основными биохимическими маркерами сахарного диабета, атеросклероза и риска развития сердечно-сосудистых заболеваний.

Результаты данного исследования показывают, что в перспективе тест тромбодинамики может быть полезен в комплексной оценке состояния системы гемостаза у пациентов с заболеваниями системы кровообращения.

Р.М. Саляхова, А.С. Бакирова, И.Р. Тимершина, А.Ж. Гильманов. Информативность базовых коагуляционных тестов при применении варфарина и Прадаксы. ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ; ГБУЗ РБ «Республиканская клиническая больница им. Г.Г. Куватова», г. Уфа

Неуклонный рост распространенности тромбозов и эм-болий во всех странах, высокий процент летальности вызывают необходимость совершенствования профилактики и лечения тромботических состояний. В последние годы отмечается увеличение ассортимента антикоагулянтных средств с улучшенными фармакологическими свойствами, что позволяет делать более точный подбор тактики лечения у больных с тромботическими состояниями.

Целью нашего исследования было определение информативности базовых коагуляционных тестов у больных с венозным тромбоэмболизмом (ВТЭ) при применении перо-

ральных антикоагулянтов (варфарина и Прадаксы). Варфа-рин - популярный непрямой антикоагулянт, подавляющий витамин-К-зависимый синтез факторов свертывания - не лишен недостатков: действует лишь на 3-5-й день применения; требует регулярного определения МНО; проникает через плаценту и может оказывать тератогенное действие; эффект в ряде случаев нестабилен и зависим от действия других лекарственных препаратов и пищевых факторов. В то же время Прадакса (дабигатран) - препарат нового поколения: быстро всасывается, превращаясь в активную форму в крови и в печени; обеспечивает стойкую и предсказуемую антикоагуляцию, оказывая прямое ингибирующее действие на тромбин; не требует постоянного контроля МНО и корректировки дозы; эффективен в случаях плохой переносимости варфарина или устойчивости к нему; эффект мало зависит от действия других лекарств и не зависит от пищевых факторов.

Под наблюдением находились 34 пациента отделения сосудистой хирургии с верифицированным тромбозом глубоких вен нижних конечностей (ТГВНК) со средним возрастом 50±5,7 года (мужчины - 57%, женщины - 43%). В первую группу вошли 15 пациентов, которым впервые был назначен варфарин; во вторую группу - 14 человек, принимавших вар-фарин ранее и продолжающих его прием; третью группу составили 5 пациентов, начинавших принимать варфарин, но ввиду его неэффективности переведенных на Прадаксу. На коагулометрах «SysmexCA-1500» и АСКа-02 «Астра» проводилось определение базовых плазменных показателей гемостаза пациентов (ПВ / протромбин по Квику / МНО, индекс АПТВ, концентрация фибриногена).

В результате проведенных исследований у пациентов с ТГВНК были исходно отмечены гиперкоагуляционные сдвиги базовых показателей гемостаза, наиболее выраженные в 1-й и 3-й группах. На 5-е сутки применения варфарина в 1-й и 2-й группах МНО увеличилось, достигнув целевого уровня (2,2 и 2,12), а протромбин по Квику снизился с 77-66 до 29-25%. Вместе с тем у пациентов из третьей группы терапевтический эффект от варфарина на 5-е сутки отсутствовал или был незначительным, что потребовало замены препарата. На фоне приема Прадаксы (на 10-е сутки наблюдения по сравнению с 5-м днем) у этих пациентов было отмечено труднообъяснимое снижение иАПТВ (в среднем в 1,5 раза) и разнонаправленные сдвиги показателей протромбина по Квику, МНО и фибриногена (чаще небольшие, но у некоторых больных значительные - до 1,5 раза). При этом общей тенденции изменений, кроме иАПТВ, не прослеживалось.

Таким образом, применение варфарина у большинства больных (86%) с ВТЭ сопровождается гипокоагуляционны-ми сдвигами плазменного гемостаза, хорошо мониторируе-мыми с помощью теста МНО / протромбина по Квику. В то же время при приеме Прадаксы базовые коагуляционные тесты (фибриноген, иАПТВ, протромбин по Квику, ПВ, МНО) оказываются практически неинформативными. В этой ситуации лабораторный мониторинг либо вовсе не требуется (как и указано в информационных материалах к препарату), либо нужно использовать чувствительные к Прадаксе лабораторные тесты (например, ТВ с разведенным тромбиновым реагентом), либо оценивать динамику маркеров тромбинемии Р-димер, Т-АТ, F1+2, FM и др.).

Е.А. Бормотова, А.А. Тотолян, А.Д. Золотарева, Т.В. Гупалова. Использование рекомбинантного альбумин-связывающего белка в тест-системах для определения микроальбуминурии. ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург

Наиболее значимыми патологиями, обусловливающими нарушение экскреции белка с мочой, являются сахарный диабет (СД) и артериальная гипертензия (АГ) - именно эти заболевания наиболее опасны для поражения почек. Одним

из ранних признаков поражения почек у больных СД и АГ является микроальбуминурия (МАУ). Только эта ранняя (доклиническая) стадия развития поражения почек является единственной обратимой при своевременном назначении медикаментозной терапии. Практически все применяемые в настоящее время диагностические тест-системы для выявления МАУ являются зарубежными и предназначены для иммунологического полуколичественного и количественного определения концентрации альбумина (ЧСА) в моче.

В настоящей работе нами разработаны отечественные количественные тест-системы для определения МАУ у больных СД и АГ. В них впервые применен рекомби-нантный ЧСА-связывающий белок стрептококка вместо обычно используемых антител. Использование рекомби-нантного белка позволяет исключить трудоемкий процесс приготовления специфических антител к ЧСА (для которого используются лабораторные животные), избежать неспецифических «фоновых» реакций, часто встречающихся в иммунологии, стандартизовать используемый ЧСА-связывающий белок и таким образом стабилизировать всю систему анализа.

Метод для количественного определения МАУ на планшетах: на твердую поверхность полистиролового планшета иммобилизуется препарат ЧСА-связывающего белка, на который наносятся анализируемые пробы мочи одновременно с ЧСА, меченным пероксидазой хрена. ЧСА пробы и меченый ЧСА конкурируют за рекомбинантный белок, иммобилизованный на твердой фазе. Ферментативная активность твердой фазы, т.е. комплекса иммобилизованного полипептида с меченым ЧСА, обратно пропорциональна концентрации ЧСА в анализируемом образце мочи.

Экспресс-метод для количественного определения МАУ на микрочипе. Решение задачи постоянного скрининга и мониторинга больных СД и АГ требует создания специфического и чувствительного экспресс-метода, допускающего одновременный анализ нескольких десятков образцов мочи. Для создания такого метода использована микрочиповая технология в сочетании с рекомбинантным ЧСА-связывающим белком и компьютерной программой для обсчета данных чиповой диагностики, которая обрабатывает оцифрованный микрочип с нанесенными на него контрольными точками и образцами мочи, выводит отчет с результатами в pdf-файл.

На нитроцеллюлозную мембрану-матрицу размером 1 см2 наносятся пробы мочи пациентов и ряд контрольных проб стандартного препарата ЧСА для построения калибровочной кривой (200; 100; 50; 25; 12,5; 6,25 мкг/мл), используя автоматический принтер для микропечати BioOdyssey СaПigrapher miniarrayer (Bio-Rad). Мембрана инкубируется в блокирующем растворе (2% молоко, разведенное в растворе фосфатного буфера с хлористым натрием (ФСБ)) с ЧСА-связывающим белком, меченным пероксидазой. Затем мембрана промывается последовательно блокирующим раствором и раствором ФСБ и окрашивается раствором тетра-метилбензидина. На мембране четко проявляются пятна, разная степень окрашивания которых соответствует различным концентрациям ЧСА в стандартных пробах и пробах мочи. Концентрация ЧСА в пробах определяется с помощью компьютерной программы.

Тест-система для количественного определения МАУ и микрочип для скрининга и мониторинга МАУ были использованы параллельно для определения 116 проб мочи, взятых у больных с СД и АГ. Данные, полученные двумя методами, практически совпали. Было обнаружено наличие МАУ у 18 пациентов. У 6 пациентов концентрация альбумина в моче превышала значение 200 мкг/мл, то есть у них наблюдалась макроальбуминурия.