CC BY
16
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ляется единственной активирующей вакциной в отношении TLR-3+ моноцитов. Все вакцины являлись мощными стимуляторами TLR-9, увеличивая экспрессию в среднем в 5 раз. Примечательным явился факт, что иммуноадъю-вантная (в 2 раза) и сплит-вакцина (в 4 раза) статически значимо повышали содержание клеток с экспрессией эн-досомального рецептора TLR-8.
Вывод. Все исследуемые вакцины обладали иммуностимулирующим действием в отношении эффекторов врожденного иммунитета, так как в культуре МЛПК индуцировали нарастание численности TLRs-экспресирующих клеток. Более сильным потенциалом обладала иммуноадъювантная вакцина, повышающая численность клеток с рецепторами распознавания в 1,36,8 раз.
СУЩЕСТВУЮТ ЛИ В-ЛИМФОЦИТЫ, ТОРМОЗЯЩИЕ ОБРАЗОВАНИЕ АНТИТЕЛ И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ?
Чернышова И.Н., Гаврилова М.В., Комарова Л.В., Снегирева Н.А.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия
Введение. Гуморальный иммунный ответ у животных и человека развивается по известным правилам. При первичном иммунном ответе максимальное число антитело-продуцентов (АОК) в селезенке мышей выявляется на 4-5-е сутки после введения антигена (АГ); на 6-7-е сутки происходит их снижение почти до исходного уровня. Помимо образования АОК, введение АГ приводит также к поликлональной активации В-лимфоцитов, причем оба процесса развиваются параллельно. Известно, что при ответе на Т-зависимые АГ важную роль в регуляции гуморального ответа играют Т-лимфоциты. В то же время о клетках, участвующих в регуляции синтеза/ секреции специфичных и поликлональных иммуноглобулинов (ИГ) при ответе на Т-независимые АГ 2-го типа (ТН-2 АГ), известно сравнительно немного. В последние годы появились данные о В-клетках, обладающих регуля-торными, в частности супрессорными, свойствами. Эти клетки получили название Breg. Свойства и функциональная активность Breg изучались, главным образом, на модели воспалительных и аутоиммунных процессов. Регуляторная (супрессорная) активность таких клеток обусловлена секрецией IL-10. Для Breg характерна экспрессия CDld и CD5, а также IgM и CD24. При этом CD23 на них отсутствует. Роль этих клеток в гуморальном иммунном ответе практически не изучалась. Часть Breg принадлежит к популяции В-1 лимфоцитов. Поскольку В-1 клетки отвечают, в основном, на ТН-2 АГ, изучение роли Breg в регуляции ответа на ТН-2 АГ представляется весьма актуальным.
Цель и задачи. Проверка предположения об участии IL-10-продуцирующих В-клеток в регуляции (угнетении) образования АТ и поликлональных ИГ при ответе на ТН-2 АГ. Определение динамики образования IL-10-секретирующих В-клеток и сопоставление ее с динамикой образования АОК и иммуноглобулин-продуцентов (ИГОК) при иммунизации мышей ТН-2 АГ.
Материалы и методы. Опыты проводили на мышах линии CBA. Мышей иммунизировали ТН-2 АГ — альфа (1—^3) декстраном в дозе 5 мкг/мышь. Клетки селезенки получали на 1, 4-7-е сутки после введения АГ. Затем методом иммуномагнитной сепарации выделяли CD^+В-
клетки (чистота 95-97%) и в них определяли число АОК, ИГОК и IL-10-секретирующих клеток (IL-10+B) методом ELISPOT. В этих же клетках оценивали содержание Breg клеток с фенотипом CD5+CD1dhiCD19+ и IL-10+ В-клеток с использованием набора Regulatory B cell isolation kit методом проточной цитометрии на Beckman Coulter EPICS XL.
Результаты. Установлено, что наибольшее число АОК (2458/млн B-клеток против 188/млн в норме) наблюдалось на 4-е сутки; к 6 суткам отмечалось снижение их содержания примерно в 2 раза, к 7 суткам — в 3 раза по сравнению с пиковым значением. Сходным образом изменялось содержание ИГОК в селезенке иммунизированных мышей.
Динамика образования IL-10+В-клеток в селезенке отличалась от таковой для АОК и ИГОК. Методом ELISPOT наибольшее увеличение IL-10-секретирующих В-клеток (примерно на 30% по сравнению с нормой) выявлено на 5-е сутки, на 7-й день их содержание возвращалось к исходному уровню. Методом проточной цитометрии установлена сходная динамика: на 6-й день после иммунизации содержание IL-10+В-клеток возрастало примерно в 2,5 раза и в последующие дни снижалось. Нужно отметить, что содержание IL-10+В-клеток в селезенке было незначительным и составляло 0,40,5%.
Выявление Breg клеток с фенотипом CD5+CD1dhiCD19+ (основные продуценты IL-10) показало, что количество таких клеток в селезенке мышей в норме составляло 0,3-0,8%. После иммунизации декстраном содержание CD5+CD1dhiCD19+ клеток на 4-й день возрастало примерно в 1,5 раза и сохранялось на таком уровне до 6 дня, после чего происходило снижение их числа. Возрастание уровня CD5+CD1dhiCD19+ клеток на 4-е сутки, можно объяснить тем, что В1-клетки, имеющие такой фенотип, являются основной популяцией, отвечающей на ТН-2 АГ, и также достигают максимума на 4-5-е сутки, как указано выше.
Заключение. Выявлены различия в динамике образования АОК, ИГОК и IL-10+В-клеток в селезенке мышей при иммунизации мышей ТН-2 АГ декстраном: снижение числа АОК и ИГОК коррелировало с увеличением содержания IL-10+В-клеток и Вreg с фенотипом CD5+CD1dhiCD19+. Полученные данные свидетельствуют о возможном участии Breg клеток, продуцирующих IL-10, в регуляции (угнетении) иммунного ответа на ТН-2 АГ.
ПРОТЕАСОМЫ ПЕЧЕНИ В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ И РАЗВИТИИ ТОЛЕРАНТНОСТИ К ТРАНСПЛАНТАТУ
Шарова Н.П.1, Карпова ЯД.1, Божок Г.А.2, Астахова Т.М.1, Ерохов П.А.1, Алабедалькарим Н.М.2, Устиченко В.Д.2, Легач Е.И.2, Люпина Ю.В.1
1ФГБУН «Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова» РАН, Москва, Россия 2 Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, Харьков, Украина
Введение. Протеасомы, мультисубъединичные про-теазы, регулируют многочисленные клеточные процессы, расщепляя или подвергая процессингу компоненты сигнальных путей, транскрипционные факторы и другие белки. Особые формы протеасом млекопитающих, иммунные протеасомы, содержащие протеолитические субъединицы LMP2, LMP10 и/или LMP7, обеспечивают
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
образование биологически активных пептидов, важных для межклеточных взаимодействий и инициации иммунных реакций. Полноразмерные белки и полипептиды средней длины проникают в протеолитическую камеру протеасом с помощью активаторов РА700 и РА28 соответственно. Разнообразие функций протеасом обусловлено уникальным сочетанием протеолитических субъединиц и активаторов в их структуре. В этой связи большой интерес представляет изучение множественных форм протеасом печени, играющей роль первичного лимфоидного органа в эмбриональный период, обладающей клетками врожденного иммунитета и в то же время обеспечивающей развитие толерантности к пищевым и другим чужеродным антигенам.
Цель и задачи. Изучение изменений в пуле протеасом печени крыс в раннем онтогенезе и развитии толерантности к трансплантату. Исследование экспрессии иммунных субъединиц LMP7 и LMP2 и активаторов РА700 и РА28 протеасом печени крыс в раннем развитии, а также у половозрелых животных с прижившимся и отторгнутым трансплантатом ткани эндокринных желез соответственно после индукции донор-специфической толерантности (ДСТ) и в ее отсутствие.
Материалы и методы. Протеасомы печени в раннем онтогенезе изучались на крысах Вистар. ДСТ индуцировали у крыс Август введением в портальную вену печени спленоцитов донора — крыс Вистар. Аллотран-сплантацию ткани яичников или щитовидной железы проводили под капсулу почки. Экспрессию иммунных субъединиц и активаторов протеасом в экстрактах печени оценивали методом Вестерн-блоттинга. Экспрессию иммунных субъединиц протеасом в клетках печени исследовали методами иммуногистохимии и проточной цитометрии.
Результаты. Обнаружен волнообразный характер экспрессии иммунных субъединиц LMP7 и LMP2 в раннем развитии печени. Иммунные субъединицы выявляются в печени крысы, начиная с 16-х эмбриональных суток (Э16). На Э18 их число удваивается и существенно снижается через несколько дней после рождения, что связано с присутствием Т- и В-лимфоцитов, обогащенных иммунными протеасомами, в печени в этот период и последующей миграцией их во вторичные лимфоидные органы. К 21-м постнатальным суткам уровень иммунных протеасом в печени снова возрастает за счет повышения их экспрессии в гепатоцитах, что сопровождается увеличением количества молекул МНС класса I. Очевидно, в этот период гепатоциты приобретают способность образовывать антигенные эпитопы для молекул МНС класса I с помощью иммунных протеасом и «показывать» свою дефектность клеткам иммунной системы в случае инфицирования или синтеза мутантных белков. Кроме того, в раннем онтогенезе крыс и у взрослых животных в печени выявляются обогащенные иммунными протеасомами АПК — клетки Купфера и эндотелиаль-ные клетки синусоидов, которые обеспечивают развитие толерантности. В экспериментах по трансплантации ткани эндокринных желез показано, что у животных с индукцией ДСТ и прижившимися трансплантатами значительно увеличивается число мононуклеарных клеток печени, экспрессирующих субъединицу LMP2, но не LMP7, по сравнению с контрольными группами животных. Обнаружено уменьшение уровня активатора РА700 и увеличение уровня активатора РА28 в печени крыс с прижившимся трансплантатом после индукции
ДСТ по сравнению с таковыми у контрольных крыс и у животных с отторгнутым трансплантатом.
Заключение. Полученные результаты указывают на то, что иммунные функции печени в раннем онтогенезе и у взрослых животных связаны с иммунными протеасомами, содержащими субъединицы LMP2 и LMP7. Развитие толерантности к трансплантату, очевидно, обеспечивается АПК печени, экспрессирующими иммунные протеасомы с субъединицей LMP2 и активатором РА28. Этот тип иммунных протеасом может служить новым маркером приживления трансплантатов.
Работа поддержана РФФИ (гранты № 15-04-03494-а и № 16-34-60083-мол_а_дк).
ВЛИЯНИЕ КАТЕХОЛАМИНОВ НА ПРОДУКЦИЮ ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 ß НЕЙТРОФИЛАМИ IN VITRO
Швыдченко И.Н.1, Гурьянова С.В.1, 2, Тамбовцева А.А.1, Сергеев С.В.1, Гронская А.С.1
1 Кубанский государственный университет физической культуры, спорта и туризма, Краснодар, Россия
2 Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва, Россия
Нейтрофилы играют важную роль в реакциях острой фазы воспаления и обеспечивают противоинфекционную защиту организма. Кроме того, благодаря своей способности секретировать широкий спектр хемокинов и цитоки-нов при активации, нейтрофилы вовлечены в регуляцию врожденного и адаптивного иммунного ответа. В настоящее время существуют данные о способности нейтрофи-лов секретировать цитокины при различных условиях, не связанных с патологией, в частности под воздействием физического стресса, однако механизмы этой секреции недостаточно исследованы, несмотря на то, что физические нагрузки являются повседневным фактором в жизни каждого человека. Катехоламины адреналин и нора-дреналин, высвобождаясь при физическом стрессе, могут регулировать иммунный и воспалительный ответ, модулировать цитокиновую сеть (Bergmann and Sauther, 2002). Эти эффекты во многом зависят от типа стимулируемого адренорецептора и их локализации. Адренорецепторы были обнаружены на всех иммунных клетках, в том числе и на нейтрофилах (Scanzano and Cosentino, 2015).
Целью настоящей работы было исследование им-муномодулирующего влияния катехоламинов адреналина и норадреналина, а также селективного агониста ß-адренорецепторов изопротеренола на продукцию нейтрофилами интерлейкина 1ß (IL-1ß) in vitro. В исследовании приняли участие 20 здоровых добровольцев обоего пола (средний возраст 19,4±0,26 лет). Все участники были полностью информированы о целях исследования и подписали добровольное информированное согласие на участие в нем. Нейтрофилы выделяли на градиенте плотности (1,077) с последующим осаждением эритроцитов декстраном и осмотическим лизисом. Проводили автоматический подсчет выделенных клеток с одновременной оценкой их жизнеспособности (не менее 90-98%) методом эксклюзии трипанового синего. Нейтрофилы ресуспендировали в среде RPMI 1640 с L-глутамином и 25 мМ HEPES с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 1% пенициллина-стрептомицина; инкубировали при 37 °С в 5% СО2 20 часов в концентрации 1 х 106 клеток/мл/лунку
