Прогностическое значение исследования пролиферативной активностиопухолевых клеток при раке шейки матки Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

УДК 618.146-006:616-091.8

Т.Е. Белокриницкая1, Ю.Н. Пономарева1, Г.И. Ломнева2, Е.П. Маккавеев3

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ РАКЕ ШЕЙКИ МАТКИ

1Читинская государственная медицинская академия (Чита) 2Читинский областной диагностический центр (Чита) 3Читинское областное патологоанатомическое бюро (Чита)

Цель: изучение прогностической значимости пролиферативной активности клеток в опухолях шейки матки.

Материалы, и методы.: ретроспективное иммуногистохимическое исследование антигена интенсивности клеточного роста в 256 образцах опухолей шейки, матки ядер пролиферирующих клеток (PCNA), по степени экспрессии которого судили, об увеличении размеров первичного поражения шейки матки, распространенности злокачественного поражения и. снижения дифференцировки клеток ассоциированно с высоким уровнем экспрессии PCNA.

Результаты: установлена прямая, зависимость между клинической стадией заболевания и. индексом. PCNA Гиперэкспрессия. PCNA коррелирует, с уменьшением, показателей общей пятилетней выживаемости. Заключение: представленные данные демонстрируют, прогностическую целесообразность исследования. пролиферативной, активности опухолевых клеток при. цервикальном, раке.

Ключевые слова: пролиферативная активность, рак шейки матки

PROGNOSTIC SIGNIFICANCE OF PROLIFERATIVE ACTIVITY IN TUMOUR CELLS AT CERVICAL CANCER

T.E. Belokrinitskaya1, Y.N. Ponomaryova1» G.M. Lomneva2, Y.P. Makkaveyev3

1Chita State Medical Academy, Chita 2Chita Regional Diagnostic Centre, Chita 3Chita Regional Department of Pathomorphology, Chita

Aim: Study of proliferative activity of tumour cells as a factor of prognosis in cervical cancer.

Materials and methods: There was a retrospective immunohistochemical study of Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA), which determined, the level of proliferation in 256 patterns of cervical cancer.

Results: Sire increase of the primary tumour size, extension of the tumour and decrease of cell differentiation were associated, with the high level of PCNA expression. There was a direct dependence between the clinical disease stage and. PCNA index. Hyperexpression of PCNA correlates with, diminished, indices 5 year-period of general survival.

Conclusions: Presented, data show the prognostic necessity of investigation, of proliferative activity of tumour cells under cervical cancer.

Key words: proliferative activity, cervical cancer

Пролиферативная активность является одним из ключевых механизмов, определяющих как злокачественную трансформацию клеток, так и биологическое поведение уже возникших опухолей [3]. Использование современных иммунологических методов, в частности применение антител к нормальным ядерным белкам-регуляторам жизненного цикла клетки, позволяет определять интенсивность темпов клеточного роста для оценки течения и прогноза заболевания. Среди маркеров пролиферации перспективным является исследование антигена ядер пролиферирующих клеток (Proliferating Cell Nuclear Antigen) — PCNA, экспрессирующийся практически во всех фазах митотического цикла и соответственно отражающий величину пролиферативного пула [3, 4]. Индекс мечения PCNA используется для прогнозирования ответа на проводимую терапию, лучший прогноз отмечен у больных с высокими значениями пролиферативной активности в раковых опухолях шейки матки [7]. В ряде исследований отмечена корреляция между количеством клеток, ок-

рашенных РСЫА, и прогрессированием неопластического процесса цервикального эпителия [6, 8], в работах других авторов подобная закономерность не обнаружена [8].

Целью настоящего исследования явилось изучение прогностической значимости пролиферативной активности клеток в опухолях шейки матки.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалом для ретроспективного исследования служили 256 образцов тканей шейки матки, полученных при биопсии и хирургическом лечении больных раком шейки матки, находившихся на обследовании и лечении в Читинском областном онкологическом диспансере в период с 1998 — 2004 гг.

Возраст пациенток варьировал от 19 до 52 лет и составил в среднем 41,9 ± 6,9 года. По стадиям заболевания больные распределялись следующим образом: внутриэпителиальный рак — 71 (27,7 ± 14,0 %) больная, I стадия — 65 (25,4 ± 12,5 %), II стадия — 64 (25,0 ± 16,1 %) и III стадия — 56 (21,9 ± 9,5 %) паци-

енток. Диагностика заболеваний шейки матки включала клинические, кольпоскопические, цитогистоло-гические и иммуногистохимические методы исследования. Стадирование рака шейки матки проводилось в соответствии с гистологической классификацией опухолей женского полового тракта ВОЗ (1995), классификацией по системе ТЫМ и по системе БЮО (1997). В качестве контрольной группы использовали 50 образцов здоровых тканей шейки матки.

Определение пролиферативной активности проводили в лаборатории патоморфологии областного диагностического центра г. Читы. Для оценки интенсивности пролиферативных процессов использовали иммуногистохимическое определение индекса РСЫА. Исследование проводили на серийных парафиновых срезах толщиной 5 мкм. Срезы инкубировали с антителами к РСЫА («Оако», Дания, клон РС-10, предварительное разведение). Сроки инкубации составили 18ч при температуре 4 °С. Для иммунного окрашивания использовали стрептавидин-биотин-пероксидазный метод («Оако», Дания), во всех случаях проводили докрашивание ядер гематоксилином. Подсчет проводили в 20 произвольно выбранных полях зрения при увеличении х 200. Индексы мечения РСЫА рассчитывали как отношение числа позитивно окрашенных ядер к общему числу ядер [3, 4].

Данные представлены в виде М ± т, где М — среднее арифметическое, т — ошибка среднего. Для оценки статистически значимых различий полученных данных использовали критерий Стью-дента ({), критический уровень значимости принимался равным 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

В результате проведенного исследования установлена прямая зависимость между размерами первичного поражения шейки матки и индексом РСЫА (рис. 1). Так, при внутриэпителиальном раке средний уровень РСЫА составил 46,7 ± 9,2 %, при мик-роинвазивном — 51,4 ± 16,8 % и при инвазивном раке — 61,5 ± 19,5 % (соответственно р = 0,043 при

равнении показателей преинвазивного и микроин-вазивного рака и р = 0,000 при сравнении параметров микроинвазивных и инвазивных карцином). Таким образом, уровень пролиферативной активности опухолевых клеток был достоверно выше в случаях инвазивного роста по сравнению с микроинвазией и внутриэпителиальным поражением цервикального эпителия. Следует отметить, что позитивное окрашивание РСЫА в здоровых тканях шейки матки не превышало 10,5 ± 3,9 %.

Значение регионарных метастазов в клиническом течении рака шейки матки является одним из важных прогностических факторов, что связано с увеличением вероятности перехода от местно-регионарного распространения опухоли к отдаленному метастазированию [1]. Метастатическое поражение регионарных лимфатических узлов сочеталось с наиболее высокими значениями индекса РСЫА в первичных опухолях — 66,2 ± 10,2 % против 50,3 ± 8,9 % — в карциномах без поражения регионарных лимфатических узлов (р = 0,000) (рис. 2).

При оценке пролиферативной активности в зависимости от гистологического варианта и степени дифференцировки рака шейки матки выявлено, что в высоко- и умереннодифференцированных плоскоклеточных карциномах экспрессия РСЫА составила 57,3 ±12,1 %, а в низкодифференцированных опухолях — 64,7 ± 20,0 % (р = 0,003). Среди аденокарцином цервикального эпителия высокие значения индекса РСЫА 63,3 ± 19,6 % и 62,2 ± 12,4 % были отмечены соответственно в эн-дометриоидных опухолях и железисто-плоскоклеточном раке. Уровень экспрессии РСЫА в мезонеф-роидных карциномах составил 56,0 ±9,1 %. Взаимосвязи индекса РСЫА и степени дифференциров-ки железистого рака нами не было обнаружено.

Полученные нами результаты наглядно демонстрируют, что увеличение размеров первичного поражения шейки матки, снижение дифференцировки клеток и распространенности злокачественного поражения ассоциировано с высокими темпами клеточного роста. Прогрессия неопластического процесса

РСЫД,% 80 •

70

60

50

40

30

20

10

0

ш бНы

Т1А

Т1В

Т2

Т3

РСЫД,%

80

70 -

60 -

50 -

40 -

30 -

20 -

10 -

0 -

Рис. 1. Экспрессия PCNA в опухолях шейки матки в зависимости от размеров первичной опухоли.

N0 N1

Рис. 2. Метастатическое поражение регионарных лимфатических узлов в зависимости от экспрессии PCNA.

PCNA,% SO л

JO -

60 -

40 -30 -20 -10 -0 -

0 I II III

Рис. 3. Взамосвязь между экспрессией PCNA и стадией заболевания (FIGO).

от внутриэпителиального до инвазивного рака шейки матки сопровождается последовательным увеличением индекса РСЫА (рис. 3). При внутриэпители-альных опухолях средние значения индекса РСЫА составили 46,7 ±9,1 %, при I клинической стадии рака — 56,3 ± 16,8 %, при II — 62,5 ± 12,7 % и при III стадии заболевания — 63,5 ± 17,7 % (р = 0,000 при сравнении показателей внутриэпителиального поражения и I стадии карциномы, р = 0,020 при сравнении I и II стадии и р = 0,720 при сравнении II и III стадии).

Важнейшим фактором прогноза заболевания являются показатели выживаемости [1, 2]. У больных с медленно пролиферирующими карциномами с индексом РСЫА до 50 % нами обнаружено статистически достоверное увеличение показателя общей пятилетней выживаемости по сравнению с пациентками, опухоли которых характеризовались интенсивным клеточным ростом с индексом РСЫА более 50 % — 66,9 ± 26,0 % против 59,4 ± 19,5 % (р = 0,010).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании проведенного нами исследования, можно заключить, что определение пролиферативной активности опухолевых клеток позволяет охарактеризовать важные особенности биологических

свойств опухоли, определяющих в конечном итоге течение и прогноз заболевания. Гиперэкспрессия PCNA при раке шейки матки ассоциирована с низкой дифференцировкой опухоли, большей ее инва-зивностью и поражением регионарных лимфатических узлов, а также свидетельствует о неблагоприятном прогнозе клинического течения заболевания. Представленные данные, на наш взгляд, убедительно демонстрируют прогностическую целесообразность исследования пролиферативной активности опухолевых клеток при цервикальном раке.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии / Я.В. Бохман. — Л.: Медицина, 1989. — 464 с.

2. Пожарисский К.М. Значение иммуногисто-химических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний / К.М. Пожарисский, Е.Е. Леенман // Архив патологии. - 2000. - Т. 62, № 5. - С. 3-11.

3. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / Под ред. С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина. - Казань, 2004. - 456 с.

4. Хариет Э.Р. Иммуноцитохимия: электронная микроскопия / Э.Р. Хариет, К.С. Гаттер. // Молекулярная клиническая диагностика. Методы.: Пер. с англ.; Под ред. С. Херрингтон, Дж. Макги. - М.: Мир, 1999. - 558 с.

5. Pillai M.R. Tumour-proliferative fraction and growth factor expression as markers of tumour response to radiotherapy in cancer of the uterine cervix / M.R. Pillai, P.G. Jayaprakash, M.K. Nair // J. Cancer Res. Clin. Oncol. - 1998. - Vol. 124(8). - P. 456-461.

6. Proliferative activity in cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinoma / Y. Xue, Y. Feng, G. Zhu et al. // Chin. Med. Jour. (Engl). - 1999. -Apr; 112(4). - P. 373-375.

7. Shoji Y. Correlation of apoptosis with tumour cell differentiation, progression, and HPV infection in cervical carcinoma / Y. Shoji, M. Saegusa, Y. Takano // J. Clin. Pathol. - 1996. - 49:2. - P. 134-138.

8. Telomerase activity, MIB-1, PCNA, HPV 16 and p53 as diagnostic markers for cervical intraepithelial neoplasia / M. Herbsleb, U.B. Knudsen, T.F. Orntoft et al. // Gynecol. Oncol. - 2001. - Nov; 83(2). - P. 216-220.