CC BY
27
Медицинская иммунология 1999, Т. I, № 3-4 го 1999, СПб РОРААКИ
ОНКОИММУНОЛОГИЯ
Супрессия спонтанного и индуцированного апоптоза клеток лимфомы EL-4 ингибиторами хлорных каналов
Баев Д.В., Г усарова Г. А., Сапожников А.М.
Институт биоорганичиской химии
им. М.М.Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН
Москва, Россия
Программированная клеточная гибель (ПКГ, апоптоз) играет важную роль в функционировании иммунной системы. В последние годы расшифрованы многие механизмы апоптоза, однако изучение этого явления не теряет своей актуальности. Одним из характерных признаков ПКГ является уменьшение клеточного объема, в регуляции которого принимают участие селективные для ионов хлора каналы плазматических мембран. Такие каналы обнаружены практически на всех типах лимфоидных клеток, однако функции хлорных каналов в ПКГ лимфоцитов практически не охарактеризованы. Целью нашей работы было исследование влияния на апоптоз лимфоидных клеток ин-шбиции траисмембранных потоков хлора.
Анализ роли хлорных каналов в ПКГ проводился на клетках лимфомы EL-4, характеризующихся высоким уровнем спонтанного апоптоза при культивировании in vitro. В качестве экзогенного индуктора апоптоза использовали церамид С2. Модуляцию проницаемости мембран для ионов хлора осуществляли ингибиторами хлорных каналов (ИХК) SITS (4-acetamido-4-isothiocyanostilbene-2,2-disulphonic acid) и DIDS (4,4-diisothiocyanostilbene-2,2-disulphonicacid). Регистрацию апоптоза проводили с помощью метода проточной ци-тофлуориметрии по морфологическим характеристикам клеток и с использованием ДНК-специфического флуо-рохрома 7-аминоактиномицина D (7-AAD).
Было установлено, что DIDS н S1TS достоверно снижают уровень спонтанного апоптоза клеток EL-4, культивируемых в присутствии препаратов в течение 24 часов. Наиболее выраженная супрессия спонтанного апоптоза наблюдалась при концентрации ИХК в интервале 10-30 мкМ.
В этих условиях содержание апоптозпых клеток в опытных образцах снижалось, по сравнению с контрольными, на 15-25% для DIDS и на 30-45% для SITS. ИХК противодействовали также церамид-индуцированной ПКГ в культуре EL-4. Использованные дозы церамида увеличивали пул апоптозных клеток более чем в 2 раза за 24 часа инкубации, а присутствие в этих культурах 20 мкМ DIDS и SITS
приводило к снижению эффекта церамида на i 7-30% и 25-50% соответственно. Увеличение времени инкубации клеток с препаратами до 48 часов заметно усиливало эффективность защитного действия ИХК.
Таким образом, снижение проницаемости плазматической мембраны для ионов хлора приводит к торможению апоптоза клеток EL-4. Это может указывать на возможность экзогенной регуляции ПКГ лимфоидных клеток с помощью препаратов, модулирующих проводимость хлорных каналов клеточных мембран.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант №97-04-48723)
Прогностическое значение экспрессии антигена CD95(FAS/APO-1) при остром лимфобластном лейкозе у детей
Барышников А.Ю., Полосухин;» Е.Р.,Тупнцын H.H., Заботима Т.Н., Логачева 11.11., Шишкин Ю.В.
Российский онкологический научный центр им.
H.H.Блохина РАМН, Москва
Острые лейкозы занимают ведущее место в структуре заболеваемости гемобластозами, а острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ; является одним из самых распространенных опухолевых заболеваний детского возраста. Поэтому актуально выявление критериев, влияющих на прогноз заболевания. Одним из общепризнанных факторов является экспрессия антигена CD 10. Экспрессия же других маркеров имеет диагностическое, а не прогностическое значение. В последнее время внимание исследователей всего мира занимает антиген CD95(Fas/ АРО-1), опосредующий апоптоз. Показано, что способность клетки подвергаться апоптозу играет роль в развитии В-клеточных лимфом, а частота спонтанного апоптоза коррелируете прогрессией опухолевого процесса.
Целыо работы явилось изучение прогностической значимости экспрессии антигена CD95(Fas/APO-l) на бластных клетках костного мозга детей, больных ОЛЛ.
Материалы и методы: В исследование включена группа детей с ОЛЛ, получавших лечение в отделении лейкозов НИИ ДОиГ РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН в периоды с 1987 по 1989 г. (п=22) и с 1994 по 1997г. (п= 16). Экспрессию антигена CD95 исследовали с помощью моноклональных антител (МКА) IPO-4 и ICO-160 в реакции непрямой иммунофлуоресценции, учитываемой на проточном цитофлуо-риметре FACScan и флуоресцентном микроскопе Opton.
"Дни иммунологии в СПб '99 ’
Медицинская иммунология
Результаты: CD95 антиген был экспрессирован на 35,8±7,5% бластов костного мозга детей, имевших тотальный бластоз. Сравнение частоты встречаемости антигена при различных иммунологических нодвариантов показало, что наиболее часто (63%) экспрессия определялась при наиболее благоприяном пре-пре-В-подварианте ОЛЛ. Особый интерес представляет ретроспективный анализ обшей выживаемости у группы детей (п=22), которые находятся под наблюдением с 1987 по 1997 г. Анализ 10-летнен выживаемости показал, что медиана продолжительности жизни составляет, на момент исследования, 118,5 мес. В CD95' группе медиана общей выживаемости составляет только 24 мес. Медиана безрецидивной выживаемости у CD95* группы -115 мес., у CD95' группе-13,2 мес. Мы продолжили изучение экспрессии антигена в 1994 г., обследовав еще 16 детей. Корреляционный анализ по объединенной группе показал, что за исключением степени риска, ни один из иммунологических и клинико-гематологических показателей не коррелирует с экспрессией антигена CD95. Однако выявлена прямая корреляционная зависимость экспрессии антигена CD 10 и CD95 в группе больных пре-пре-В ОЛЛ (р<0,05). Медиана безрецидивной выживаемости в CD95’ группе не достигнута, так как более 50% детей находятся в ремиссии, в CD95' негативной группе медиана составила 19,5 мес. Различия в безрецидивной выживаемости нашли отражение в общей выживаемости: в CD95* группе медиана не достигнут, в CD95' негативной группе медиана состав ила 25,2 мес.
Заключение: Экспрессия антигена CD95 на мембране бластных клеток является прогностически благоприятным признаком, увеличивающим как безрецидивную, так и общую выживаемость, а отсутствие его экспрессии на поверхности бластов позволяет говорить о плохом прогнозе заболевания.
Использование иммунологических методов в диагностике опухолевых заболеваний
Власова И.А., Казанцева С.В., Бушуева Т.В.
Центральная научно-исследовательская паборатория Уральской Государственной медицинской академии Екатеринбург, Россия
Работа выполнена в рамках городской программы “Ранняя диагностика и профилактика онкологической заболеваемости населения г. Верхняя Пышма”, где проведено обследование рабочих вредных производств с последующим формированием групп риска по онкозаболеваемости.
Иммунологической лабораторией ЦНИЛ УГМА проведено определение количества онкомаркеров в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа на пла-шечном спектрофотометре Multiscan Plus, с программным обеспечением “Ифан". В работе были использованы маркеры—СЕА, AFP, СА-125, MCA фирмы LABSYSTEMS. Определение СА 15-3 проведено на люминесцентном иммуноанализаторе фирмы В YK-S ANGEC.
При профилактическом осмотре рабочих завода “Уралэлектромедь” онколог отбирал людей, которым необходимо провести иммунологическое исследование.
Всего было обследовано 96 человек. Они распределились следующим образом: цех электролиза меди — 33 человека, порошковый цех — 16, химикометаллургический цех (ХМЦ)— 13. остальные цеха— 14,т.е. рабочих из цехов обследовано — 76 человек; группу сравнения составили 20 больных, состоящих на учете у онколога по поводу злокачественных заболеваний.
У четырех мужчин из электролизного цеха было определено незначительное повышение величины раковоэмбрионального антигена (от 6 до 12 и/т1), при легальном обследовании у них не было выявлено никакой патологии. Резко повышенными были концентрации у одного обследованного из порошкового цеха (110.4 при норме СЕА — 3 и/т1). С помощью фиброгастроскопии у него выявлен рак желудка. В группе сравнения из четырех человек с диагнозом колоректальный рак относительно невысокие результаты выявлены у троих (5,0; 6,0; 10,0 и/т1). Уровень альфа-фетопротеина у всех обследованных не превышал нормальный (15 11/т1).
Так как большинство женщин, направленных онкологом на исследование, имели заболевание молочной железы, то на эту патологию анализ проведен по двум маркерам — СА 15-3 и МСА. Из 33 человек цеха электролиза меди обследовано 16 женщин, из них у троих уровень СА 15-3 был выше нормы (30 и/т1): 50,4; 42,7; 44,0 Іі/ті. В ХМЦ из 10 обследованных у четырех результат был выше нормы — 50,1; 53,1; 88,8; 44,011/т1. При цитологическом исследовании всем женщинам поставлен диагноз мастопатия (очаговая, фибрознокистозная и др.) В группе сравнения повышенные результаты были выявлены у четырех человек, из них диагноз рак молочной железы имела одна.
Муциноподобный раково-ассоциированный антиген (МСА) превышал норму в два раза у четырех пациенток электролизного цеха и у одной обследуемой в три раза (из ХМЦ).
У двух работниц ХМЦ по обеим исследованиям (СА 15-3 и МСА) показатели были выше нормы; такая же закономерность наблюдалась у одной женщины порошкового цеха, и у двоих — электролиза меди. В группе сравнения положительный результат по двум маркерам СА 15-3 и МСА отмечен у трех пациенток. У одной рабочей порошкового цеха превышали норму три онкомаркера: СА 15-3, СА-125, МСА (диагноз— фиброаденоматоз матки, мастопатия).
Из 16 работниц порошкового цеха у двоих было установлено незначительное увеличение СА-125 в сыворотке крови (52,0; 43,7 и/ш1), в химико-металлургическом цехе—у двоих (67,1 и 130,0 при норме 35 и/т1). Из группы сравнения одна, с диагнозом рак яичников, имела СА-125 — 34,6 и/т1; у двоих женщин, с диагнозом рак матки, значения СА-125 были в пределах нормы.
Таким образом, в обследованной группе рабочих положительные результаты имели 19 человек (25 %). Хотя основная часть их попала в так называемую “неопреде-
