CC BY
24
Медиг/инская иммунология 1999, Т. l.Ns 3-4 Го 1999, СПб РОРААКИ
ОНКОИММУНОЛОГИЯ
Супрессия спонтанного и индуцированного апоптоза клеток лимфомы EL-4 ингибиторами хлорных каналов
Баев Д.В., Гусарова Г.А., Сапожников A.M.
Институт биоорганической химии
им. М.М.Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН
Москва, Россия
Программированная клеточная гибель (ПКГ, апоптоз) играет важную роль в функционировании иммунной системы. В последние годы расшифрованы многие механизмы апоптоза, однако изучение этого явления не теряет своей актуальности. Одним из характерных признаков ПКГ является уменьшение клеточного объема, в регуляции которого принимают участие селективные для ионов хлора каналы плазматических мембран. Такие каналы обнаружены практически на всех типах лимфоидных клеток, однако функции хлорных каналов в ПКГ лимфоцитов практически не охарактеризованы. Целью нашей работы было исследование влияния на апоптоз лимфоидных клеток ин-шбиции траисмембранных потоков хлора.
Анализ роли хлорных каналов в ПКГ проводился на клетках лимфомы EL-4, характеризующихся высоким уровнем спонтанного апоптоза при культивировании in vitro. В качестве экзогенного индуктора апоптоза использовали церамид С2. Модуляцию проницаемости мембран для ионов хлора осуществляли ингибиторами хлорных каналов (ИХК) SITS (4-acetamido-4-isothiocyanostilbene-2,2-disulphonic acid) и DIDS (4,4-diisothiocyanostilbene-2,2-disulphonicacid). Регистрацию апоптоза проводили с помощью метода проточной ци-тофлуориметрии по морфологическим характеристикам клеток и с использованием ДНК-специфического флуо-рохрома 7-аминоактиномицина D (7-AAD).
Было установлено, что DIDS п SITS достоверно снижают уровень спонтанного апоптоза клеток EL-4, культивируемых в присутствии препаратов в течение 24 часов. Наиболее выраженная супрессия спонтанного апоптоза наблюдалась при концентрации ИХК в интервале 10-30 мкМ. В этих условиях содержание апоптозпых клеток в опытных образцах снижалось, по сравнению с контрольными, на 15-25% для DIDS и на 30-45% для SITS. ИХК противодействовали также церамид-индуцированной ПКГ в культуре EL-4. Использованные дозы церамида увеличивали пул апоптозных клеток более чем в 2 раза за 24 часа инкубации, а присутствие в этих культурах 20 мкМ DIDS и SITS
приводило к снижению эффекта церамида на i 7-30" о и 25-50% соответственно. Увеличение времени инкубации клеток с препаратами до 48 часов заметно усиливало эффективность защитного действия ИХК.
Таким образом, снижение проницаемости плазматической мембраны для ионов хлора приводит к торможению апоптоза клеток EL-4. Это может указывать на возможность экзогенной регуляции ПКГ лимфоидных клеток с помощью препаратов, модулирующих проводимость хлорных каналов клеточных мембран.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант №97-04-48723)
Прогностическое значение экспрессии антигена CD95(FAS/APO-1) при остром лимфобластном лейкозе у детей
Барышников А.Ю., Полосухин;» Е.Р.,Тупицын H.H., Заботима Т.Н., Логачева H.H., Шишкин Ю.В.
Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Ь'лохина РАМН, Москва
Острые лейкозы занимают ведущее место в структуре заболеваемости гемобластозами, а острый лимфоб-ластный лейкоз (OJ1J1) является одним из самых распространенных опухолевых заболеваний детского возраста. Поэтому актуально выявление критериев, влияющих на прогноз заболевания. Одним из общепризнанных факторов является экспрессия антигена CD 10. Экспрессия же других маркеров имеет диагностическое, а не прогностическое значение. В последнее время внимание исследователей всего мира занимает антиген CD95(Fas/ АРО-1), опосредующий апоптоз. Показано, что способность клетки подвергаться апоптозу играет роль в развитии B-клеточных лимфом, а частота спонтанного апоптоза коррелируете прогрессией опухолевого процесса.
Целыо работы явилось изучение прогностической значимости экспрессии антигена CD95(Fas/APO-l) на бластных клетках костног о мозга детей, больных OJIJI.
Материалы и методы: В исследование включена группа детей с ОЛЛ, получавших лечение в отделении лейкозов НИИ ДОиГ РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН в периоды с 1987 по 1989 г. (п=22) и с 1994 по 1997г. (п= 16). Экспрессию антигена CD95 исследовали с помощью моноююнальных антител (МКА) IPO-4 и ICO-160 в реакции непрямой иммуно-флуоресценции, учитываемой на проточном цитофлуо-риметре FACScan и флуоресцентном микроскопе Opton.
