CC BY
19
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ
УДК 636.618:013.2/12
ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТА «ИММУНОСЕЙВ®»
ПРИ ГЕСТОЗЕ СУЯГНЫХ ОВЕЦ
PROPHYLACTICAL EFFECTIVENESS OF MEDICATION «IMMUNOSAFE®» IN
PREGNANT EWES GESTOSIS
Г.С. Чижова1, кандидат ветеринарных наук, доцент Р.Н. Булатов2, аспирант
В.Д. Кочарян1, кандидат биологических наук, доцент В.С. Авдеенко2, доктор ветеринарных наук, профессор
G.S. Chizhova1, R.N. Bulatov2, V.D. Kocharyan1, V.S. Avdeenko2
1 Волгоградский государственный аграрный университет 2ФГБОУ ВО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»
1 Volgograd State Agricultural University
2Saratov State Agrarian University named after N.I. Vavilov
Диагностировано у суягных овцематок заболевание гестозом, которое характеризуется явлениями угнетения, бледности видимых слизистых оболочек и внезапными расстройствами центральной нервной системы. Клинические симптомы наблюдались обычно с появления признаков желтухи, повышенному содержанию в моче белка, гипертензией и отеками в области подгрудка и вымени. Установлено, что у 26,7 % суягных овцематок присутствуют классические симптомы ге-стоза. При этом у 23,3 % данных овец в период окота наблюдаются осложнения, а у 46,0 % - послеродовые осложнения. В эксперименте изучено влияние на состояние фетоплацентарной системы у овец нового селеноорганического препарата «Иммуносейв®», созданного на кафедре «Болезни животных и ВСЭ» ФГБОУ ВО Саратовский ГАУ, в состав которого входит наноселен и лактоферин в качестве активнодействующих веществ. Назначение препарата «Иммуносейв®» больным суягным овцематкам снижает частоту возникновения осложнения беременности в 2,01... 3,08 раза, окота - в 1,66.. .2,5 раза, а в послеродовой период - в 1,98.2,5 раза, что служит поводом для апробации данного препарата в овцеводстве. Кроме того, доказано, что применение препарата «Иммуносейв®» показано для профилактики гестоза у суягных овец, восстановление репродуктивного здоровья у овцематок и защиту здоровья у новорожденных. В опытах установлено, что назначение препарата «Иммуносейв®» внутримышечно, трехкратно на 100, 115 и 130 дни суягности, в дозе 0,01 мл на 1 кг массы тела, приводит к коррекции морфометрических показателей материнской и детской плаценты на статистически достоверную разницу. Так, у овцематок, которым применяли, селенорга-нический препарат в течение суягности, наблюдаются позитивные изменения в длине пупочного канатика и массы фетальной части плаценты, толщины и объема, в сравнении с животными, которым не назначали препараты селена. Следовательно, для создания благоприятных условий роста и развития плода/плодов и рождения нормотрофного приплода у овцематок следует применять новый инъекционный селеноорганический препарат «Иммуносейв®».
Diagnosed in pregnant ewes disorder preeclampsia, which is characterized by oppression phenomena pale visible mucous membranes and sudden disorders of the central nervous system. Clinical symptoms were usually signs of jaundice, increased content of the protein in the urine, hypertension and edema in the dewlap and the udder. It was found that 26.7 % of pregnant ewes present classic symptoms of preeclampsia. At the same time 23.3 % of the data of sheep during lambing observed complications in 46.0 % and post-natal complications. In an experiment to study the effect on the state of fetoplacental system in sheep organo-selenium new drug "Immunosafe®", created at the Department of «Animal diseases and ICE» in Saratov State Agrarian University, which includes nano-selen and lactoferrin as active substances. Appointment of the drug «Immunosafe®» sick of pregnant ewes,
reduces the incidence of pregnancy complications in 2.01 ... 3.08 times lambing 1.66 ... 2.5 times, and the postpartum period - 1.98 ... 2 5 times, which serves as a pretext for testing this drug in sheep. Also it proved that the use of the drug «Immunosafe®» is indicated for the prevention of preeclampsia in pregnant ewes, reproductive health recovery in ewes and protection of health in newborns. Experiments revealed that use of the drug «Immunosafe®» intramuscularly three times at 100, 115 and 130 days of preburth at a dose of 0.01 ml per 1 kg of body weight, leading to correction of morphometric parameters of infant and maternal placenta statistically significant difference. So ewes, which were used, seleno-organic preparation for eves to be born, there are positive changes in the length of the umbilical cord and placenta of the fetal weight, thickness and volume compared to animals that are not administered selenium preparations. Therefore, to create favorable conditions for the growth and development of the fetus / fetuses and offspring at birth normo-trophic ewes should apply a new injectable drug organo-selenium «Immunosafe®».
Ключевые слова: препараты «Иммуносейв®», «Селенолин®», гестоз суягных овец, морфо-биохимические параметры крови.
Key words: drugs «Immunoseyv®», «Selenolin®» preeclampsia pregnant ewes, morpho - biochemical blood parameters.
Введение. В современных условиях развитие овцеводства сдерживается болезнями с неясной этиологией, которые наносят значительный ущерб овцеводству и являются потенциально опасными для репродуктивного здоровья суягных овцематок [1, 5]. Гестоз суягных овец - это не заболевание, а осложнение беременных, обусловленное нарушением технологии кормления и содержания в период суягности, которое приводит к нарушению микроциркулярному маточно-плацентарному и плодово-плацентарному кровотоку, что приводит к уменьшению снабжения жизненно важных органов плода/плодов питательными веществами и кислородом [7]. Причины развития гестозов у суягных овец в этологическом плане носят как внутреннюю, так внешнюю природу, достаточно сложны в раскрытии механизма познания и до настоящего времени до конца не выяснены [4]. Исследования ряда авторов [3] показали, что в основе патогенеза осложнения течения суягности является нарушение функции почек и развитие кетонурии, наиболее часто это происходит в результате неполноценного и несбалансированного кормления [6]. В последние годы установлено, что основную роль в развитии гестоза у суягных овец отводится нарушению баланса между простаноидами материнского и плодового происхождения [2]. Кроме того, исследованиями последних лет установлено, что селен обладает антиоксидантными свойствами и, таким образом, защищает здоровье животных от болезней в различные периоды репродуктивного цикла.
Данное обстоятельство вызывает повышенный интерес у исследователей потому, что существовала гипотеза о полном удовлетворении животных в потребности ми-коэлемента селена, поскольку животные получали необходимое количество витамина Е. Однако результаты поздних работ [8] показали необходимость введения в организм животных, кроме витамина Е, и микроэлемента селена [9]. Полезность применения селеновых препаратов в рационах сельскохозяйственных животных и птицы оказалась физиологически и экономически эффективной, вследствие их высокой биологической активности и доказана исследованиями Traber G., Maret S., Jan F. [10].
В настоящее время созданы инъекционные препаративные композиционные формы селеноорганических препаратов. Так, на кафедре «Болезни животных и ВСЭ» Саратовского ГАУ препарат «Иммуносейв®», который состоит из наноселена и лактоферина, в ООО «Биоамид» (г. Саратов) - «Селенолин®», который состоит из «ДАФС-25» и растворителя, ООО «Нита-фарм» - «Е-селен®», который состоит из витамина Е и «ДАФС-25», а в ООО
«Агрофарм» (г. Воронеж) - «Деполен®». Кроме того применение инъекционных форм препаратов существенно расширяет возможности дозированного применения микроэлемента селена для восстановления репродуктивного здоровья животных. В то же время проблема поведения инъекционной формы селеноорганических препаратов в организме суягных овец изучены недостаточно и остается открытой для изучения.
Целью настоящей работы является установление диагностических маркеров ге-стоза суягных овец и изучение профилактической эффективности селеноорганических препаратов при данном нозологическом заболевании.
Материалы и методика. Опыты были выполнены в ФГБОУ ВО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова», ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный аграрный университет», а также в овцеводческих хозяйствах различных организационно-правовых форм собственности Саратовской и Волгоградской областей в период 2009-2016 гг. В эксперименте участвовали 1800 суягных овцематок. Овцематкам на 100, 115 и 130 дни суягности инъецировали селеноорганиче-ские препараты, внутримышечно, в дозе 0,01 мл на 1 кг массы тела. Первой подопытной группе - препарат «Иммуносейв®». Второй подопытной группе препарат «Селено®
лин », в контрольной группе овец препараты не применяли.
Для гематологических исследований кровь брали из подхвостовой вены перед утренним кормлением. Биохимические исследования крови проводили на оборудовании фирмы «Анализатор крови CIBA - CORING 288 BLOOD GAS SYSCEM (производство США)».
Статистическая обработка полученных данных проводилась при помощи стандартных программ Microsoft Excel 2000 SPSS 10.0.5 for Windows.
Результаты. Всего за период наблюдения и исследования зарегистрировано 640 случаев или у 20,00 % овцематок. Клинические симптомы гестоза характеризовались повышенной чувствительностью аногенитальной области, носовой полости, щупающей походкой, лордозной постановкой туловища. Частота, сердечного ритма возрастала и достигала 120 и выше пульсовых ударов в минуту.
В ходе исследований установлено, что основные патогенетические звенья гесто-за суягных овец обусловлены нарушением проницаемости плаценты для антигенов плода/плодов и развитием иммунологической агрессии, что приводит к нарушению микроцикуляторного русла в зоне контакта карункулов и котиледонов. При повышенной проницаемости материнской и детской плаценты для антигенов плода/плодов образуются иммунные комплексы (антиген - антитело - активированный комплимент), которые выстилают эндотелий артериальной системы, фиксируются в субэндотелиальном слое и приводят к снижению синтеза простациклинов и ПГБ2а.
Вторым патогенетическим признаком гестоза суягных овец является нарушение функции почек. При этом артериальное снабжение почек снижается, в результате продуцируется ренин, который способствует развитию артериальной гипертензии. Высокая проницаемость сосудистой стенки способствует выходу плазмы из сосудистого циркулирующего русла в межтканевое пространство, что приводит к отекам. В результате снижается клубочковая фильтрация и увеличивается проницаемость клубочков для белка, что способствует появлению белка в моче (протеинурия).
В эксперименте была изучена профилактическая эффективность селеноорга-нического препарата «Иммуносейв®» при данном нозологическом заболевании овцематок. В контрольной группе (отаре) животных антиоксидантные препараты не применяли.
Результаты статистической обработки биохимических параметров сыворотки крови суягных овец после применения препарата «Иммуносейв®» представлены в данных таблицы 1.
Таблица 1 - Биохимические показатели крови суягных овец до и после применения препарата «Иммуносейв®»
Показатель Препарат «Иммуносейв®»
до применения после применения
Общий белок, г/л 83,58+2,14 84,02+2,72
Холестерин, ммоль/л 4,54+0,13 4,12+0,11*
Глюкоза, ммоль/л 3,22+0,14 3,38+0,26
Альбумины, мкмоль/л 332+9,48 447+9,6*
^ G, мг/мл 23,3+1,12 42,4+2,1**
^ М, мг/мл 1,4+0,09 1,9+0,11*
Примечание: * р < 0,05; ** р < 0,01, здесь и далее
Изменения данных показателей у суягных овец после применения препарата «Иммуносейв®» указывают на то, что происходит достоверное снижение в сыворотке крови холестерина с 4,54+0,13 ммоль/л до 4,12+0,11 ммоль/л, (р < 0,05) и достоверное снижение расхода альбуминов с 332+9,48 мкмоль/л до 447+9,6 мкмоль/л. В тоже время происходит статистически достоверное восстановление Jg G, с 23,3+1,12 мг/мл до введения препарата до 42,4+2,1мг/мл, после введения препарата (р < 0,01), а JgМ - с 1,4+0,09 мг/мл до 1,9+0,11 мг/мл или в 1,31 раза.
0,025 т-щ-1
0,02
0,015 -0,01
0,005 -0
мкг/мл контроль 12 3 4
группа группа группа группа
Рисунок 1 - Изменение содержания селена в сыворотке крови суягных овец до и после инъекций препарата «Иммуносейв®»
Концентрация Sе в сыворотке крови (рисунок 1), после применения препарата «Иммуносейв®» соответствует показателю в 0,011 мкг/мл, исследование сыворотки крови через 15 дней - 0,019 мкг/мл, через 30 дней - 0,025 мкг/мл, а через 45 дней -0,022 мкг/мл.
ИЗВЕСТИЯ*
№ 1 (45), 2017
Результаты исследований по изучению влияния препарата «Иммуносейв®» на функциональное состояние антиоксидантной системы защиты организма животных представлены в данных рисунка 2.
Рисунок 2 - Содержание диеновых коньюгатов в сыворотке крови суягных овец при применении препарата «Иммуносейв®»
Материалы, представленные в данных рисунка 2, свидетельствуют о том, что в организме суягных овец при заболевании гестозом в большом количестве накапливаются недоокисленные продукты перекисного окисления липидов. Так, содержание диеновых коньюгатов в сыворотке крови подопытных животных составило 1,98...1,65 мкМ/мл (р < 0,05), в то время как у суягных овец контрольной группы (которым не применяли препараты селена) - 2,15.2,38 мкМ/мл, (р < 0,05).
Гистоморфологические исследования карункулов показали, что средняя толщина покровного эпителия матки составляет у овцематок контрольной группы (которым не применяли препараты селена) от 13,13±1,45 мкм до 22,34±1,38 мкм. У суягных овцематок, которым применяли в период суягности препарат «Иммуносейв®», - от 15,98±1,32 мкм до 34,64±2,02 мкм, (р<0,01), в сравнении с показателями контрольных животных. Состояние водной, мочевой и сосудистой оболочек свидетельствует о том, что масса детской плаценты у овцематок при применении препарата «Иммуносейв®», была существенной, по сравнению с массой детской плаценты овцематок контрольной группы ^<0,01). При этом следует отметить, что длина пупочного канатика у овцематок опытной группы составляла в среднем 16,6±0,54 см, тогда как у овцематок контрольной группы, длина пупочного канатика статистически достоверно больше и достигала 24,5±0,71 см, что в 1,48 раза больше ^<0,05).
Данные, полученные в ходе проведения эксперимента (таблица 2), показали, что препарат «Иммуносейв®» снижает риск возникновения осложнения суягности гесто-зом на статистически достоверную разницу ф<0,01) и не превышает 9,45±0,09 %, в сравнении с овцематками контрольной отары (26,54±0,76 %).
Таблица 2 - Влияние селеноорганических препаратов на течение суягности, окота и послеродового периода у овцематок
Группы Осложнение, %
суягности родов окота послеродового периода
***** ИЗВЕСТИЯ ***** № 1 (45) 2017
НИЖНЕВОЛЖСКОГО АГРОУНИВЕРСИТЕТСКОГО КОМПЛЕКСА: НАУКА И ВЫСШЕЕ ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАНИЕ
Контроль 26,54±0,76 23,31± 0,76 46,0 ± 2,45
«Иммуносейв®» 9,45±0,09 ** 9,46±1,34** 20,2 ± 2,53**
«Селенолин®» 11,5±0,10** 13,33±1,63** 34,5 ± 2,34*
Осложнение окота зарегистрировано у 23,31±0,76 % овцематок. В то же время при применении препарата «Иммуносейв®» данное осложнение родов снизилось до 9,46±1,34 0,01), или в 2,35 раза, а до применения препарата «Селенолин®» - до 13,33±1,63 ^<0,01) или в 1,63 раза.
Полученные данные свидетельствуют о том, что плодовитость овцематок при осложненной суягности гестозом (контроль) была снижена на 0,7±0,07 ягненка, по сравнению со среднестатистическими данными (таблица 3).
Таблица 3 - Влияние селеноорганических препаратов на плодовитость овец
Группа Аборты,% Многоплодие Мертворожденных, % Выход ягнят на 100
овцематок
Контрольная отара 12,72±1,24 0,95 ± 0,03 1,3 ± 0,04 82,7 ± 0,32
«Иммуносейв®» 5,26±0,34** 1,13±0,04** 0,4±0,04** 103,4 ± 0,18*
«Селенолин®» 6,47±0,87** 1,03 ± 0,04* 0,9 ±0,03* 101,8 ± 0,29*
Анализ материалов, представленных в данных таблицы 3 свидетельствует, о том, что трехкратные инъекции суягным овцематкам повышают плодовитость на
39,4 %, по сравнению с контрольными животными. В то же время снижается количе-
®
ство мертворожденных с 1,3 до 0,4 при введении препарата «Иммуносейв » и до 0,9 при применении препарата «Селенолин®». Показательно снижение количества абортов у суягных овцематок с 12,72 % до 5,26 % или в 2,42 раза при введении препарата «Иммуносейв®», а при применении препарата «Селенолин®» до 6,47 % или в 1,95 раза.
Таким образом, приведенные результаты эксперимента свидетельствуют о высокой профилактической эффективности селеноорганических препаратов «Иммуносейв®» и «Селенолин®», которые оказывают восстанавливающее действие на метаболические процессы при гестозе суягных овец.
Обсуждение. Проведенными исследованиями установлено, что у 26,7 % овцематок отмечается гестоз, который характеризуется наличием гипертензии, протеинурией и отеками, а также коматозным состоянием. У 23,3 % наблюдаются осложнения окота и у 46,0 % - послеродовые осложнения. Экспериментально установлено, что применение препаратов «Иммуносейв®» и «Селенолин®» приводит к восстановлению морфометрических параметров материнской и детской плаценты на статистически достоверную разницу, наблюдается уменьшение длины пупочного канатика, а также увеличение массы феталь-ной части плаценты, толщины и объема, в сравнении с животными контрольной группы. После применения новых инъекционных форм селеноорганических препаратов суягным овцематкам создаются благоприятные условия для развития плода/плодов. При этом повышается плодовитость овцематок на 20,2 %, а их жизнеспособность - на 11,4 %.
Заключение. Исследованиями доказано, что именно повреждение эндотелиаль-ных клеток сосудов плаценты и почек играют важнейшую роль в возникновении гесто-за. В связи с этим, для практического ветеринарного врача важным является своевременная диагностика начальных форм гестоза, аргументированная оценка истинной его тяжести, раннее выявление исходных заболеваний и правильная ориентация в опасности рождения мертворожденных ягнят или функционально незрелых, которые погибают впервые дни жизни.
Внутримышечное применение суягным овцематкам новых форм селенооргани-ческих препаратов «Иммуносейв®» и «Селенолин®» снижает частоту осложнений су-ягности, окота и послеродового периода гестозом, что служит основанием для широкого его применения в овцеводстве.
Библиографический список
1. Авдеенко, В.С. Применение препарата «Селенолин®» для коррекции репродуктивного здоровья овцематок [Текст]/ В.С. Авдеенко, С.А. Мигаенко // Вестник Саратовского госагро-университета. - № 7. - Саратов, 2011. - С. 23-24.
2. Алехин, Ю.Н. Перинатальная патология и разработка селеновых препаратов для терапии и профилактики [Текст]: автореф. дис...д-ра вет. наук. - Воронеж, 2013. - 40 с.
3. Беляев, В.А. Фармако-токсикологические свойства новых препаратов селена и их применение в регионе Северного Кавказа [Текст]: автореф. дис.д-ра вет. наук / В.А. Беляев. -Краснодар, 2011. - 40 с.
4. Киреев, И.В. Дефицит селена и его фармакологическая коррекция [Текст]/ И.В. Кире-ев, В.А. Оробец// Труды Кубанского госагроуниверситета: серия Ветеринарные науки. - 2009. -№1 (ч.1). - С. 279-281.
5. Колчина, А.Ф. Перинатальная патология у животных [Текст]: монография / А.Ф. Колчина. - Екатеринбург, 2009. - 198 с.
6. Мигаенко, С.А. Профилактика гипоселеновых элементозов у суягных овцематок [Текст]/ С.А. Мигаенко, В.С. Авдеенко // Материалы Международного научно-практического симпозиума «Ветеринарная медицина». - Саратов, 2011. - С. 183-184.
7. Ретроспективный анализ патологии репродуктивной системы домашних животных [Текст]/ И.И. Летов, Е.В. Мишенина, В.А. Беляев, Л.Н. Комарова, Б.М. Багамаев// Актуальные проблемы повышения продуктивности и охраны здоровья животных: сборник научных статьей по Материалам Международной научно-практической конференции (г. Ставрополь 19-21 октября 2006 г.). - Ставрополь, 2006. - С. 387-389.
8. Chandan. K. Sen. Tocotrienols: Vitamin E beyond tocopherols / K. Sen Chandan, K. Savita, R. Sashwati // Life sciences. - 2006. - V. 78, No 18. - С. 2088 - 2098.
9. Effect of vitamin E supplementation of sheep and goats fed diets supplemented with polyunsaturated fatty acids and low in Se /A. Liesegang, T. Staub, B. Wichert, M. Wanner, M. Kreuzer // Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition.- 2008.-No 92(3).- Р. 292-302.
10. Fouda,T.A. Serum Copper Concentration and Immune Status of Sheep: Clinical and Laboratory Study / T.A. Fouda, M.A. Youssef, W.M.El - Deeb // Veterinary Research.- 2012. - No5.-P.16-21
11. Vitamins C and E: Beneficial effects from a mechanistic perspective/ Traber, G. Maret, Stevens, F. Jan// Free Radical Biology and Medicine.-2011.-V.51. No5. - С. 1000-1013.
Reference
1. Avdeenko, V. S. Primenenie preparata "Selenolin®" dlya korrekcii reproduktivnogo zdo-rov'ya ovcematok [Tekst]/ V. S. Avdeenko, S. A. Migaenko // Vestnik Saratovskogo gosagrouniversi-teta. - № 7. - Saratov, 2011. - S. 23-24.
2. Alehin, Yu. N. Perinatal'naya patologiya i razrabotka selenovyh preparatov dlya terapii i profilaktiki [Tekst]: avtoref. dis...d-ra vet. nauk. - Voronezh, 2013. - 40 s.
3. Belyaev, V. A. Farmako-toksikologicheskie svojstva novyh preparatov selena i ih primenenie v regione Severnogo Kavkaza [Tekst]: avtoref. dis.d-ra vet. nauk / V. A. Belyaev. - Krasnodar, 2011. - 40 s.
4. Kireev, I. V. Deficit selena i ego farmakologicheskaya korrekciya [Tekst]/ I. V. Kireev, V. A. Orobec// Trudy Kubanskogo gosagrouniversiteta: seriya Veterinarnye nauki. - 2009. - №1 (ch.1). -S. 279-281.
5. Kolchina, A. F. Perinatal'naya patologiya u zhivotnyh [Tekst]: monografiya / A. F. Kolchina. - Ekaterinburg, 2009. - 198 s.
6. Migaenko, S. A. Profilaktika giposelenovyh ]lementozov u suyagnyh ovcematok [Tekst]/ S. A. Migaenko, V. S. Avdeenko // Materialy Mezhdunarodnogo nauchno-prakticheskogo simpoziuma "Veterinarnaya medicina". - Saratov, 2011. - S. 183-184.
7. Retrospektivnyj analiz patologii reproduktivnoj sistemy domashnih zhivotnyh [Tekst]/ I. I. Letov, E. V. Mishenina, V. A. Belyaev, L. N. Komarova, B. M. Bagamaev// Aktual'nye problemy povysheniya produktivnosti i ohrany zdorov'ya zhivotnyh: sbornik nauchnyh stat'ej po Materialam Mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii (g. Stavropol' 19-21 oktyabrya 2006 g.). - Stavropol', 2006. - S. 387-389.
8. Chandan. K. Sen. Tocotrienols: Vitamin E beyond tocopherols / K. Sen Chandan, K. Savita, R. Sashwati // Life sciences. - 2006. - V. 78, No 18. - S. 2088 - 2098.
9. Effect of vitamin E supplementation of sheep and goats fed diets supplemented with polyunsaturated fatty acids and low in Se /A. Liesegang, T. Staub, B. Wichert, M. Wanner, M. Kreuzer // Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition. -- 2008. -- No 92(3). -- R. 292-302.
10. Fouda,T.A. Serum Copper Concentration and Immune Status of Sheep: Clinical and Laboratory Study / T A. Fouda, M.A. Youssef, W.M.El - Deeb // Veterinary Research. -- 2012. - No5. -- R.16-21.
11. Vitamins C and E: Beneficial effects from a mechanistic perspective/ Traber, G. Maret, Stevens, F. Jan// Free Radical Biology and Medicine. -- 2011. -- V.51. No5. -- S.1000-1013.
E-mail: [email protected].
