CC BY
47
УДК 619:616.981.42:576.807.7
ПРИЖИВАЕМОСТЬ, КОНТАГИОЗНОСТЬ И СТАБИЛЬНОСТЬ СВОЙСТВ КУЛЬТУРЫ БРУЦЕЛЛ ВАКЦИННОГО ШТАММА B. ABORTUS 82-Sr ПРИ ПАССАЖАХ ЧЕРЕЗ ОРГАНИЗМ МОРСКИХ
СВИНОК
Хабибуллин Р.Р., Фомин А.М.
ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных», г.Казань
Ключевые слова: приживаемость, контагиозность, стабильность, бруцеллы, пассаж, морские свинки.
Key words: persistence, contagiosity, stability, brucella, passage, guinea
pigs.
Известно, что возбудители бруцеллеза рассматриваются одним из агентов биотерроризма (J. Pappas et al., 2006). Авторы отмечают, что имеются 3 важных аспекта, из-за чего можно использовать возбудителей бруцеллеза при террористических актах. Во-первых, бруцеллы могут быть легко получены практически в любой точке мира. Во-вторых, определенные эндемические области совпадают с областями, где велись активные военные операции. Третий важный аспект - аспект знания: бруцеллез является редкой болезнью в развитом мире, поэтому многие врачи и специалисты по инфекционным болезням не знакомы с ее особенностями.
Кроме того, в обыденной жизни в последнее время в РФ появляются неблагополучные пункты по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота там, где заболевание не регистрировалось уже десятилетиями. Обычно такой скот находится в личной собственности граждан.
В таких случаях перед ветеринарной службой возникает необходимость экстренного проведения оздоровительных и профилактических мероприятий. Вакцина из штамма B. abortus 19 высокоагглютиногенна, из штамма 82 абортогенна при первичном применении ее на беременных животных.
При бруцеллезной инфекции в экстренных случаях, особенно в личных подворьях, на наш взгляд, наиболее эффективной будет схема экстренной антибиотикотерапии с одновременной специфической профилактикой.
Б.А.Шабалин и др. (2007) в опытах на мышах изучали эффективность вакцины бруцеллезной лечебной при монотерапии и комплексном применении с высокоэффективными при бруцеллезе
антибиотиками. В результате они установили повышение защитного эффекта комплекса более, чем на 20%.
Однако известно, что одновременность осуществления этих мероприятий невозможна из-за губительного действия антибиотиков не только на вирулентную, но и на вакцинную культуру бруцелл. А разрозненные во времени эти два мероприятия не только технически трудно выполнимы в хозяйствах, но и не соответствуют требованиям экстренности.
В этой связи возникает необходимость получения вакцинного штамма бруцелл, который был бы резистентен к антибиотику, применяемому для лечения болезни, но при этом он должен сохранить иммуногенные свойства.
Нами были проведены исследования по получению такого штамма.
ТЛ с с
В итоге получили стрептомицинустойчивый вариант вакцинного штамма B. abortus 82 -82-Sr.
В задачу данной работы входило изучить приживаемость, контагиозность и стабильность свойств культуры бруцелл вакцинного штамма B. abortus 82-Sr при пассажах через организм морских свинок.
Материалы и методы. С целью изучения длительности приживаемости (персистенции) бруцелл вакцинного штамма 82-Sr в организме морских свинок, его контагиозности использовали 26 животных. Из них 13 голов привили культурой бруцелл штамма 82-Sr подкожно в области паха в дозе 1,5 млрд. м.к. по стандарту мутности в объеме 1 мл. В клетку с вакцинированными животными подсаживали 13 голов не привитых (изучение возможности миграции штамма от привитых животных на непривитых). Исследования проводили в течение 4-х месяцев. Через каждый месяц после вакцинации по 3 головы из каждой группы морских свинок подвергали убою с проведением серологического и бактериологического исследований.
Для изучения стабильности свойств штамма 82-Sr проводили его пассаж на искусственных питательных средах и через организм морских свинок.
Провели 92 пассажа на печеночном агаре, не содержащем стрептомицин. Для контроля антибиотикорезистентности культуру после пассажа пересевали на среду, содержащую 5 мг стрептомицина на 1 мл. агара и учитывали наличие или отсутствие роста бруцелл. После проведенных пассажей изучали культурально-морфологические свойства исходной культуры и культуры 92 пассажа.
Для пассажа культур через организм морских свинок использовали 20 животных. С целью очередного пассажа использовали 2 морские свинки. Им подкожно в области паха вводили взвесь культуры штамма 82-Sr в дозе 1,5 млрд. м.к. в объеме 1 мл. Спустя 21 сутки после вакцинации животных убивали с проведением серологического и бактериологического
исследований. Ставили РБП, РА, РСК с единым бруцеллезным (S-) антигеном и РСК с R-антигеном ВНИВИ. Высевы из 10 объектов, лимфатических узлов и органов проводили на печеночный агар и эритрит агар. Выделенные культуры бруцелл проверяли в РА на стекле с бруцеллезными S- и R-антисыворотками. Кроме того определяли индекс веса селезенки (ИВС) и индекс инфицированности (ИИ) органов и лимфатических узлов по общепринятым в бактериологии методам.
Выделенную от морских свинок культуру бруцелл вводили вновь 2-м другим животным и.т.д. Всего провели 10 пассажей.
После проведенных пассажей изучали в сравнительном аспекте культурально-морфологические свойства исходной культуры бруцелл и культуры 10-го пассажа по общепринятой схеме ФАО/ВОЗ. Проводили микроскопию, изучали скорость и характер роста на печеночных средах, потребность в повышенном содержании углекислого газа, способность образовывать сероводород, лизис фагом "Тб", рост на питательных средах с красками (тионин 1:25, 50 и 100 тыс., фуксин 1:50 и 100 тыс.), окраску колоний по Уайт-Вилсону, чувствительность к стрептомицину, антигенные свойства культур с использованием специфических бруцеллезных S- и R-антисывороток и монорецепторных "А" и "М" сывороток, ставили пробы термоагглютинации, с акрифлавином и эритритолом.
Результаты исследований. В опыте по изучению длительности приживаемости и контагиозности штамма B. abortus 82-Sr установили, что во все сроки серологического исследования (1-2-3-4 месяца) РБП, РА и РСК с S-антигенами показывали отрицательный результат. В это же время РСК с R-антигеном всегда была положительной в титрах: через 1 месяц -53,3±13,3, через 2 месяца - 6,7±2,2, через 3 месяца 15,0±5,6. Через 4 месяца морские свинки реагировали в титре 1:5.
При бактериологическом исследовании через 1, 2 и 3 месяца после вакцинации выделяли культуру бруцелл с ИИ, равным через 1 месяц -10,0±3,8, через 2 месяца - 3,3±1,1. Через 3 месяца выделили только 2 культуры от 3-х животных. Спустя 4 месяца результаты бактериологического исследования были отрицательными.
У подсаженных интактных животных результаты серологического и бактериологического исследований во все сроки были отрицательными.
В процессе изучения стабильности свойств культуры бруцелл вакцинного штамма B. abortus 82-Sr было показано, что как исходная культура, так и культуры всех пассажей (от 1-го до 10-го) не вызывали в организме привитых животных синтеза антител, улавливаемых в РБП, РА и РСК с S-антигенами. Все морские свинки в эти же сроки реагировали положительно в РСК с R-антигеном.
При бактериологическом исследовании привитых морских свинок ИИ практически не изменился от введения исходной культуры до культуры 10-го пассажа. Однако отмечались незначительные его
колебания в зависимости от количества пассажей, времени года и др. Практически неизменным остался и ИВС.
Культуры всех пассажей сохранили положительные показатели РА на стекле с S-и R-бруцеллезными антисыворотками.
Результаты исследований культурально-морфологических свойств культур штамма 82-Sr исходной и 10-го пассажа показали их идентичность. Все они представляли собой коккобактерии, красились по Грамму отрицательно, по Козловскому - в красный цвет, не вызывали образование сероводорода, не нуждались в повышенном содержании углекислого газа, давали отрицательную пробу термоагглютинации, положительную с акрифлавином, росли на средах со стрептомицином в концентрации 5 мг./мл., обильно росли на средах с тионином и фуксином.
При окраске колоний бруцелл по Уайт-Вилсону культуры вели себя идентично. Приобретали фиолетовый цвет с радиально отходящими от центра желтыми полосами.
В процессе 92-кратных пассажей на искусственных питательных средах штамм также сохранил стрептомицинрезистентность, антигенные и культурально-морфологические свойства.
Выводы. 1. Культура вакцинного штамма B. abortus 82-Sr приживается в организме морских свинок в течение 3-х месяцев со дня вакцинации. Изучаемый штамм не контагиозен, миграции его от привитых животных на непривитых не установлено. 2. Установлена стабильность свойств штамма при 92-х кратном пассировании его на искусственных питательных средах и 10-и кратном пассировании через организм морских свинок.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Pappas, J. Brucella as a biological weapon/J. Pappas, P. Panagopoulou, L. Christon, N. Akritidis//Cellular and Molecular life sciences.-2006.-№ 63.-P.2229-2236. 2. Шабалин, Б.А. Сочетанная терапия бруцеллеза антибактериальными препаратами и бруцеллезной лечебной вакциной/Б.А. Шабалин, В.Ю. Охапкина, Л.Б. Гаврилова//Химическая и биологическая безопасность.-2007.-№ 2-3.-С. 42-48
ПРИЖИВАЕМОСТЬ, КОНТАГИОЗНОСТЬ И СТАБИЛЬНОСТЬ СВОЙСТВ КУЛЬТУРЫ БРУЦЕЛЛ ВАКЦИННОГО ШТАММА B. ABORTUS 82-Sr ПРИ ПАССАЖАХ ЧЕРЕЗ ОРГАНИЗМ МОРСКИХ СВИНОК
Хабибуллин Р.Р., Фомин А.М.
Резюме
Установили, что штамм B. abortus 82-Sr приживается в организме морских свинок в течение 3-х месяцев. Не контагиозен, его миграции от привитых животных на непривитых отмечено не было. Стабилен, сохранил свои исходные свойства при 92-кратном пассировании на искусственных питательных средах и 10-ти кратном через организм морских свинок.
SURVIVAL, CONTAGIOUS AND STABILITY CHARACTERISTICS OF THE CULTURE OF BRUCELLA VACCINE STRAIN OF B. ABORTUS 82-Sr TO THE PASSAGE THROUGH THE ORGANISM OF GUINEA PIGS
Khabibullin R.R., Fomin A.M. Summary
Found that a strain of B. abortus 82-Sr survives in the body of guinea pigs for 3 months. Not contagious, its migration from vaccinated animals to unvaccinated were observed. Stable, retained their original properties under 92fold passages on artificial nutrient media and a 10-fold over the body of guinea
pigs.
УДК 633.55.633.111/311
ОСОБЕННОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СОВМЕСТНЫХ ПОСЕВОВ МНОГОЛЕТНИХ БОБОВЫХ ТРАВ И ЗЕРНОФУРАЖНЫХ КУЛЬТУР В УСЛОВИЯХ ЗАСУХИ
Хабибуллин Ф.Х., Тагиров М.Ш.
ГНУ «Татарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Российской академии сельскохозяйственных наук», г.Казань
Ключевые слова: совместные посевы, засуха, овес, фаза цветения, питательные вещества.
Key words: joint sowings, drought, oats, flowering phase, nutrients.
Основным лимитирующим фактором формирования урожая зерновых и кормовых культур в условиях республики Татарстан является недостаток влаги.
В связи с потеплением климата положение влагообеспеченности возделываемых культур усугубляется еще больше, так как неизбежны повторения в той или иной степени засухи. Поэтому разработка влагонакопительной, влагосберегающей технологии приобретает в настоящее время особую актуальность.
Концепция влагонакопительной и влагосберегающей технологии обработки почвы, разработанная нашими учеными [3,4], предусматривает снижение испарения влаги из почвы путем разрушения капилляров почвы. При этом увеличивается диаметр капилляров, что согласно теории Жюрьена приостанавливает поднятие влаги по капиллярам. Влага
