CC BY
28
УДК 619.614
В. В. Светличкин, Е. А. Денисова, В. С. Бабунова,
Л. В. Арсеньева, Г. М. Горяинова, З. А. Канарская, А. В. Канарский
ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОМИКРОЧИПОВОЙ ТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
В ОБЪЕКТАХ ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОГО НАДЗОРА
Ключевые слова: иммуномикрочиповая технология, остаточные количества лекарственных средств, продукция животного
происхождения.
Безопасность пищевой продукции определяется отсутствием в ее составе различных по происхождению токсичных веществ, оказывающих негативное влияние на здоровье человека. Поэтому одним из основных показателей критериев качества продукции животного происхождения является контроль за содержанием в их составе токсичных веществ. Проведенные исследования показали возможность применения иммуномикрочиповой технологии для определения остаточных количеств лекарственных средств при мониторинге продукции ветеринарно-санитарного надзора.
Keywords: immunomicrochip technology, residual amounts of drugs, products of animal origin.
he safety of food products is determined by the absence of toxic substances in its composition, which have a negative impact on human health. Therefore, one of the main indicators of the criteria for the quality of products of animal origin is the control over the content of toxic substances in their composition. The conducted studies have shown the possibility of using immunomicrochip technology for the determination of residual amounts of medicines in the monitoring ofproducts of veterinary and sanitary supervision.
Актуальность
Актуальной остается проблема улучшения качества продукции животного происхождения, которая в первую очередь зависит от добросовестности производителей.
Безопасность продукции ветеринарно-санитарного надзора в первую очередь зависит от биотических факторов, которые включают в себя биохимические и микробиологические процессы. Также одними из основных показателей качества сырья и продукции животного происхождение является питательная ценность, безопасность и сохранение потребительских свойств [1].
В настоящее время довольно широкое и не контролируемое распространение получило применение в ветеринарной практике лекарственных препаратов, таких как антимикробные и антигельминтные средства.
Безопасность продукции определяется отсутствием в ее составе бактерий, токсичных, канцерогенных веществ, оказывающих негативное влияние на здоровье человека.
В соответствии с директивами Евросоюза в странах Европы проводится постоянный мониторинг остаточного содержания токсичных веществ в кормах и животноводческой продукции, к которым относятся и антигельминтные препараты.
На основании литературных данных можно сделать вывод, что воздействие на организм антимикробных и антигельминтных веществ зависит от вида животного, возраста, физиологического состояния, эколого-
эпизоотогогической ситуации и других факторов.
Для определения остаточных количеств лекарственных средств достаточно широко применяется метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Метод ВЭЖХ обладает высокой точностью и простотой получения данных и применяется во многих странах как стандартный
метод определения. Несмотря на все достоинства метода высокоэффективной жидкостной
хроматографии, он имеет некоторые недостатки, такие как высокая стоимость оборудования, сложная и многоступенчатая постановка анализа, относительно длительное время получения результатов.
Исходя из анализа литературных данных, можно заключить о необходимости контроля продукции животного происхождения на содержание в них остаточных количеств как антибактериальных, так и антигельминтных препаратов. При этом при мониторировании большого числа проб целесообразно использовать ускоренные и чувствительные методы, такие, например, как иммуномикрочиповая технология.
Иммуномикрочиповая технология Randox® Biochip, представляет собой носитель, на котором размещены тестовые зоны с фиксированными на них антителами, специфичные к различным антигенам, бактериального и токсичного характера. [1, 5].
Материалы и методы
В основе метода иммуномикрочиповой технологии лежит принцип микрочипа, который основывается на реакции антиген-антитело с хемилюминесцентной меткой, при этом используются моноклональные антитела, специфичные к различным агентам. Микрочип, разделен на несколько тестовых зон, с которых при считывании определяется цифровое изображение. С помощь калибровочного графика проводится количественное определение агента. Нами в работе использовались тест-системs Anti Microbial Array I и II. С помощью хемилюминометра проводится регистрация конечного результата. Время постановки реакции составляет от 1 до 2 часов.
Результаты исследований
Проведенные исследования по адаптации тест-систем иммуномикрочипового анализа для определения опасных факторов, таких как
остаточные количества антимикробных и антигельминтных веществ, в мясной и рыбной продукции показали высокую возможность их определения. В опытах искусственно контаминировались объекты исследований для имитации различных видов токсичного воздействия.
В таблице 1 представлены данные по определению антимикробных и антигельминтных препаратов в продукции животного происхождения.
Таблица 1 - Определение лекарственными средствами в образцах продукции (искусственная контаминация)
Таблица 2 - Предел антибактериальных веществ Anti Microbial Array I и II
обнаружения тест-системами
Искусствен но контамини-рованные образцы Контаминирующие лекарственные средства
Группа веществ
Антибиотики Антигельминтики
Предел обнаружения (мкг/кг) лекарственных средств:
Тетрациклин Фуразолидон Тиабендазол Левамизол
Говядина 2,15 1,95 0,5 1,98
Свинина 2,05 2,00 0,7 2,00
Индейка 2,20 1,90 0,6 1,97
Карп 2,15 1,95 0,4 1,95
Полуфабри каты из говядины 2,10 2,05 0,5 1,98
Полуфабри каты из карпа 2,05 2,00 0,6 2,00
На следующем этапе были определены оптимальные параметры обнаружения остаточных количеств антибиотиков и сульфаниламидов в мясе методом иммуномикрочиповой технологии и на основании полученных данных разработана методика.
С этой целью была отработана схема пробоподговки и последующего анализа мясного сырья (говядины, свинины и курицы), определены чувствительность и специфичность данного метода и сравнены с ускоренным микробиологическим методом.
Проведенные исследования дают возможность утверждать, что иммуномикрочиповую технологию можно использовать для мониторинга продукции ветеринарно-санитарного надзора при определении остаточных количеств лекарственных средств.
Аналиты Предел обнаружения, заявленный производителем, мкг/л Предел обнаружения, экспериментально установленный, мкг/л
сульфадиметоксин 6,5 6,47±0,03
сульфадиазин 3,0 3,00±0,02
сульфадоксин 3,2 3,13±0,05
сульфаметоксазол 1,6 1,55±0,06
сульфаметизол 3,2 3,17±0,03
сульфамеразин 2,0 1,99±0,02
сульфизаксазол 2,0 2,01±0,02
сульфатиазол 2,0 1,97±0,04
сульфаметазин 3,2 3,14±0,05
сульфапиридин 3,2 3,09±0,12
триметоприм 3,0 2,89±0,10
дапсон 3,5 3,43±0,04
хинолоны 5,0 4,89±0,03
стрептомицин 14,0 14,07±0,03
тетрациклины 4,8 4,79±0,02
тилозин 0,9 0,88±0,03
тиамфеникол 1,3 1,25±0,06
цефтиофур 4,6 4,54±0,04
Литература
1. Кальницкая О.И. Влияние остаточных количеств антибиотиков на результаты ветсанэкспертизы продуктов животноводства. Оптимальное питание - здоровье нации: 8 Всероссийский Конгресс. М.: ГУ НИИ питания РАМН. С. 110. (2005).
2. Морозова Е.Н. Анализ современного состояния международных и отечественных критериев и методов оценки безопасности и качества продукции животного происхождения. Сб. науч. тр. ВНИИВСГЭ «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». Т. 112. С. 21 - 27. (2003).
3. Светличкин В.В. Совершенствование контроля качества и безопасности продуктов животного происхождения в соответствии с требованиями Федерального закона «О техническом регулировании». Сб. науч. тр. ВНИИВСГЭ. М. Т. 117. С.134 - 139. (2005).
4. Смирнов А.М., Уша Б.В., Светличкин В.В., Ярков С.П., Концевова А.А., Артемов А.В., Ярова О.А. Применение средств и методов на основе нанобиотехнологии в ветеринарии. Ветеринария. № 2. С. 53 - 54. (2012).
5. Huang CC, Pan TM. Event-specific real-time detection and quantification of genetically modified Roundup Ready soybean. J Agric Food Chem. May. V. 53. N 10. Р. 3833 - 3839. (2005).
© В. В. Светличкин - д.б.н., проф., зав. лаб. технического регулирования и стандартизации ФГБНУ «ВНИИВСГЭ», ospvnii@mail.ru; Е. А. Денисова - д.б.н., вед. науч. сотр. той же лаборатории; В. С. Бабунова - к.в.н., ст. науч. сотр. той же лаборатории; Л. В. Арсеньева -к.б.н., ст. науч. сотр. той же лаборатории; Г. М. Горяинова - к.б.н., ст. науч. сотр. той же лаборатории; З. А. Канарская- к.т.н, доц. каф. пищевой биотехнологии КНИТУ, zosya_kanarskaya@mail.ru; А. В. Канарский, д.т.н., проф. той же кафедры, alb46@mail.ru.
© V. V. Svetlichkin - Doctor of Biological Sciences, Professor, Head of the Laboratory of Technical Regulation and Standardization of the VNIIVSGE FBBNU, ospvnii@mail.ru; E. A. Denisova - Doctor of Biological Sciences, Ved. sci. Comp. the same laboratory; V. S. Babunova - candidate of veterinary sciences, art. sci. Comp. the same laboratory; L. V. Arsenyeva - Candidate of Biological Sciences, art. sci. Comp. the same laboratory; G. M. Goryainova - Candidate of Biological Sciences, art. sci. Comp. by the same laboratory; Z. A. Kanarskaya - Ph.D. tech. sci., docent dep. Food biotechnology KNRTU, zosya_kanarskaya@mail.ru; A. V. Kanarskiy, Dr. Tech. Sci., professor, Department of Food Biotechnology, KNRTU, alb46@mail.ru.
