Применение иммобилизованных микроорганизмов и ферментов Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

БИОХИМИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯ

УДК 663.15

Е. В. Крикунова, А. В. Канарский ПРИМЕНЕНИЕ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ И ФЕРМЕНТОВ

Ключевые слова: микроорганизм, фермент, иммобилизация.

Приведен обзор областей применения иммобилизованных микроорганизмов и ферментов.

Keywords: microorganism, enzyme, immobilization.

An overview of immobilized microorganisms and enzymes application.

Введение

Под иммобилизацией клеток и ферментов понимают любое ограничение свободы их физического движения в пространстве [1], материальный посредник, ограничивающий подвижность, считается носителем, а полученная система клетка-носитель называется иммобилизованным биокатализатором. Биотехнологические процессы, реализуемые при использовании биокатализаторов в виде иммобилизованных микроорганизмов и ферментных препаратов, позволяют получать целевые продукты в результате сложных многостадийных биохимических превращений исходных субстратов [2]. Иммобилизованные биокатализаторы должны быть применимы в достаточно широких диапазонах температур, значений pH, давлений, должны обеспечивать необходимую воспроизводимость в промышленных условиях [3]. Еще одним немаловажным для промышленных целей критерием выбора носителя является его стоимость, которая, в совокупности с ценой и возможностью повторного использования сопродуктов, приводит к все расширяющемуся поиску дешевых и потенциально доступных носителей [4].

Результативность работы биокатализатора во многом определяется эффективностью снабжения иммобилизованной популяции клеток или ферментов питательными веществами или субстратами, а также легкостью отвода метаболитов. Эти факторы зависят главным образом от диффузионных барьеров, создаваемых материалом носителя [5].

Применение иммобилизованных микроорганизмов

Человечество уже достаточно давно использует в ряде биотехнологических процессов способность многих природных штаммов микроорганизмов прикрепляться к твердым поверхностям. Например, для детекции и разложения фосфорорганических пестицидов и нейротоксинов используют иммобилизованные штаммы Escherichia coli, Pseudomonas putida и Pseudomonas fluorescence; для разложения метилфософоновой кислоты и ее эфиров - Pseudomonas sp.; для деградации тиодигликоля - продукта разложения горчичного газа (иприта) - Alcaligenes xytosoxidans; для получения водорода - Rhodobacter capsulatus; для получения

метанола посредством биохимического окисления метана - Methilosynus sporium и Methilosynus trichosporium; для получения молочной кислоты -Rhizopus oryzae и Lactobacillus casei; для получения высокосортного шампанского - Saccharomyces cerevisiae; для очистки стоков предприятий пищевой промышленности - Rhizopus oryzae; для получения красного и белого вина - Saccharomyces vinii; для устранения винных недобродов - Saccharomyces cerevisiae boyanus; для получения этанола из молочной сыворотки, отходов сельского хозяйства и промышленности - Saccharomyces cerevisiae, Mucor circinelloides, Rhizopus oryzae, Fusarium oxysporium, Zymomonas mobilis; для получения гидролитических ферментов - Aspergillus awamory, Aspergillus niger, Rhizopus oryzae, Aspergillus foetidus, Heleococcum alkalinum; для получения пробиотической композиции - Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus; для получения антибиотика аурантина - Streptomyces anulatus; для получения глюкозо-фруктозных сиропов -Streptomyces albogriseolus; для определения присутствия экотоксикантов - Photobacter phosphoreum, Chlorella sp., Thallassiosira weisflogii [2, 6].

Неорганические носители, такие как пористое стекло, керамические носители и размолотая пемза, используются для иммобилизации бактериальных клеток,

синтезирующих р-1,3-глюканазу - фермент, гидролизующий глюкановые полимеры посредством гидролиза Р-1,3-связи [7]. Этот фермент играет ключевую роль при изготовлении сухофруктов и при механических поврежденияъх плодов [1].

Начиная с 1980-х использование технологии иммобилизованных клеток в производстве алкогольных напитков приобрело промышленные масштабы. Кальциево-альгинатный гель - наиболее широко используемая матрица для иммобилизации дрожжей Saccharomyces cerevisae для получения такого алкогольного напитка, как сидр, на завершающем этапе ферментации яблочного сока. В японской корпорации Ozeki Corporation при производстве сакэ осветленные растворы сахаров, полученные на этапе сахарообразования, помещают в биореактор с иммобилизованными в альгинатный гель клетками дрожжей для получения полностью

ферментированного сакэ. В отличие от обычного сакэ, в таком сакэ содержится 10% этанола вместо 1520% и имеется приятный фруктовый привкус [8].

В промышленном пивоварении непрерывный иммобилизационный процесс используется совместно с традиционным осветлением, развивается

непосредственный процесс ферментации пива с использованием биореакторов с иммобилизованными клетками дрожжей [9]. Целлюлозные носители эффективно применяются в виноделии при иммобилизации клеток дрожжей на

делигнифицированных целлюлозных материалах (БСМ) [10], в пивоварении широко применяются дрожжи, адсорбированные на БЕЛЕ-целлюлозе (диэтиламиноэтил-целлюлозе) или на БСМ [8, 11]. Иммобилизованные дрожжи также применяются в кефирном брожении сырых материалов для получения алкогольных напитков. Еще один целлюлозный носитель получают из использованного зерна ячменя -побочного продукта пивоваренной промышленности [4]. Согласно известным публикациям, применение иммобилизованных клеток дрожжей во многих отраслях виноделия может обеспечить повышение рентабельности производства и улучшение качества готовой продукции [12, 13]. В отечественном

виноделии для интенсификации процесса брожения используются дрожжи, иммобилизованные на

алюмосиликатных минералах, буковой стружке, полиэтилене, полиакриламидном геле [14].

Использование иммобилизованных дрожжей рода

Saccharomyces cerevisiae на модифицированной

подсолнечной шелухе в процессе брожения спирта возможно без снижения бродильной активности в течение 8-10 суток. Отработанный экологичный носитель - подсолнечная лузга с остатками дрожжей после брожения - может быть использован в качестве кормовой добавки в животноводстве [15]. Поскольку иммобилизованные дрожжи значительно устойчивее к воздействию различных ингибирующих веществ, чем свободные клетки, их используют для устранения винных недобродов. Было показано, что в результате дображивания виноматериалов с использованием иммобилизованного биокатализатора концентрация этанола может быть увеличена на 6-28% от исходного уровня [16].

Иммобилизация клеток широко применяется для укорочения процесса производства соевого соуса. Клетки Pediococcus helophilus, Saccharomyces rouxii, Torulopsis versaШis, иммобилизованные в альгинатный гель, используются в процессе ферментации, в результате весь процесс получения соевого соуса, включая ферментативный гидролиз и перегонку, сокращается до 2 недель вместо 6 месяцев. Полученный продукт обладает схожим составом с соевым соусом, получаемым обычным способом, однако отличается ароматом. Для получения аромата, схожего с ароматом обычного продукта, используют газоотводный биореактор и иммобилизованные в альгинатный гель клетки Zygosaccharomyces rouxii, оптимизировав аэрацию, рН и температуру во время ферментации. Из-за нестабильности альгинатного геля в долгосрочном производстве в качестве носителя для иммобилизации используются керамические шарики и

проводится непрерывная ферментация в двухсерийном биореакторе с иммобилизованными клетками Zygosaccharomyces rouxii в первом и Candida versatilis во втором. Общее время ферментации в таком биореакторе сокращается до 6 дней без потери свойств продукта [8].

Альгинатный гель в качестве матрицы для иммобилизации клеток используется в следующих промышленных процессах:

- для иммобилизации клеток Saccharomyces cerevisiae при ферментации меда для получения медовухи;

- для снижения концентрации яблочной кислоты до 20% и ниже в зеленых кофейных бобах перед обжигом используют иммобилизованные клетки Lactobacillus spp. или Leuconostoc spp. в биореакторе со спиральным ребристым пористым силиконовым носителем;

- для удаления горечи цитрусовых соков

используют иммобилизованные клетки Rhodococcus fascians и Corynebacterium;

- для получения L-сорбозы (промежуточное

соединение при синтезе витамина С) из D-сорбита используют иммобилизованные клетки

Gluconobacter suboxydans, а совместная

иммобилизация носителя кислорода n-додекана и клеток в альгинатном геле позволяет повысить проницаемость геля для кислорода [17];

- для получения рибофлавина используют

иммобилизованные клетки Candida tropicalis, а единственным источником углеводов служит концентрированное ректифицированное

виноградное вино [8];

- для очистки от простых сахаров (глюкозы,

фруктозы и сахарозы) при производстве продуктов для диабетиков используют иммобилизованные клетки Zymomonas mobilis с узким субстратопредпочтением, которые ферментируют только сахарозу, глюкозу и фруктозу и не синтезируют карбогидролазы для гидролиза других олигосахаридов. Эти бактерии быстро

ферментируют глюкозу и фруктозу до этанола и углекислого газа с незначительным образованием сопродуктов (минорные количества сорбита и фрукто-олигосахаридов) [18].

Мицелий иммобилизованного в клейковину Aspergillus japonicus используется при производстве фруктоолигосахаридов из сахарозы. Эти олигомеры фруктозы используются в качестве неусвояемых, но физиологически полезных подсластителей пищи, поскольку они увеличивают популяцию бифидобактерий в кишечнике [19].

Для гидролиза жира молока и оливкового масла используется биокатализатор на основе иммобилизованных в полиуретановую пену клеток Rhizopus delemar, поскольку его липазная активность в 3,3 раза выше, чем у свободных клеток.

Оптически чистый L-аланин из N-ацетил-DL-аланина получают при использовании иммобилизованных на к-каррагенане клеток Pseudomonas sp. BA2 с L-аминоацилазной

активностью (штамм не имеет D-аминоацилазной активности) [8].

Некоторые аминокислоты могут

использоваться в качестве предшественников в синтезе

других аминокислот. Например, L-аспарагиновая

кислота является субстратом при производстве L-

аланина. Иммобилизованные в к-каррагенановом геле

штаммы E. coli и P. dacunhae культивируются в одном

реакторе при высоком давлении для получения L-

аланина из фумарата аммония по следующей схеме

[20]: ' '

Е. co/i P. dacunhae

, . . , ^I.-aspartic acid _________^ L-alaninc + СО,

Fumanc acid + NIL ^ “ £

J aspartase L-aspartate fi-aecarboxytase

Имобилизованные клетки также используются при производстве ряда органических кислот для пищевой промышленности, включая уксусную, лимонную, фумаровую, молочную, яблочную, глюконовую, койевую и пропионовую кислоты [21].

Показано, что при использовании спор штамма мицелиального гриба Rhizopus oryzae F-814, включенных в криогель ПВС, и сред определенного состава может быть сформирован высокоактивный иммобилизованный мицелий, продуцирующий:

- L^-молочную кислоту - при формировании мицелия в среде, содержащей глюкозу в качестве основного источника углерода;

- амилолитические ферменты - при его формировании в среде, содержащей крахмал;

- липолитические ферменты - при его формировании в среде, содержащей триацилглицериды [2].

В молочной промышленности для иммобилизации лактобактерий используют смешанный гель из деионизированного к-каррагенана и смолы бобов рожкового дерева. Гель обладает высокой механической прочностью при непрерывной ферментации в молоке и сыворотке в течение более чем 7 недель [8].

Для получения пробиотических желированных мясных продуктов также используют

иммобилизованные клетки пробиотиков.

Молочнокислые бактерии вводятся в мясные продукты с использованием природного полимера (желатин, агар), образующего термотропный гель, который, с одной стороны, служит желирующей основой для функциональных мясных продуктов, а с другой стороны - выполняет функцию носителя для клеток, совместная иммобилизация которых осуществляется включением клеток смешанных культур (Lactobacillus acidophilus и Streptococcus thermophilus) в гелевую матрицу [2, 21, 22].

Такие ферменты как глюкоамилаза, а-амилаза, Р-амилаза, пуллуланаза (конвертирует крахмал в глюкозу и мальтозу) получают с помощью иммобилизованных клеток [23, 24]. Эти ферменты используются в пивоварении при разложении крахмала до сахаров, которые ассимилируются дрожжами. Также иммобилизованные микрорганизмы используются при производстве каталазы, целлюлазы, инвертазы, лактазы, липаз, протеаз и

хитинолитических ферментов (используются в биоконверсии богатых хитином материалов, таких как панцири ракообразных при производстве

хитиноолигосахаридов и ^ацетил-Р^-глюкозамина

для пищевой промышленности, в производстве кормов и для фармацевтических и химических нужд). Для получения хитинолитических ферментов используются иммобилизованные на

макропористом целлюлозном носителе клетки гриба PenicШmm janthinellum Р9 [8].

Изомальтозу из сахарозы получают в больших количествах с помощью микробной трансформации при использовании стабильных постоянных колонок иммобилизованных клеток [2426].

Для очистки сточных вод часто используются микроорганизмы, иммобилизованные на магнитные носители [27]. Показана возможность многократного использования (около 25 циклов) биокатализатора на основе иммобилизованных клеток E.coli БН5а с органфосфатгидролазной активностью (ОРН-активностью) для прямой детекции ФОС (фосфорогранические соединения) в водных средах на примере пестицида Параоксона.

Биокатализаторы на основе клеток бактерии Alcaligenes xylosoxidans БиЬБр. xylosoxidans (8Н91), иммобилизованных в криогель ПВС, способны утилизировать в качестве единственного источника углерода тиодигликоль (ТДГ), являющийся продуктом разложения иприта (отравляющего вещества кожно-нарывного действия). Было установлено, что применение биокатализатора на основе иммобилизованных клеток позволяет увеличить скорость разложения ТДГ в 5,5 раз и в концентрации в 1,5 раза выше по сравнению со свободными клетками [2].

Иммобилизация - это ключевой момент в получении стабильного распознающего элемента биосенсора, от которого зависит сама возможность измерения сигнала, операционные характеристики сенсора, чувствительность и селективность определения биологических компонентов в смесях сложного состава [3]. Применяют клеточные биосенсоры для селективного определения фенолов, пролина, глутамина, тирозина, молочной и аскорбиновой кислот, глюкозы, для анализа сульфат-иона, аммония, монометилсульфата, для экспресс-анализа качества воды и сточных вод. Существует метод определения биологического потребления кислорода, позволяющий получать результат в течение нескольких минут - анализ на определение совокупности органических соединений, которые могут быть использованы

микроорганизмами. Появляются биосенсоры,

позволяющие получать и перерабатывать информацию о химическом составе объектов [28].

Существует, по крайней мере, три

безусловно работоспособных процесса, в которых используется явление биоэлектрокатализа, - это процесс биофотолиза воды микроорганизмами, процесс конверсии метанола и других спиртов в водород дегидрогеназами, а также гидролиз целлюлозосодержащего сырья с помощью ферментов до низкомолекулярных веществ. Очень важным аспектом направления, называемого

биоконверсией, является открывшаяся возможность разработки систем, работающих на принципах

замкнутых биологических циклов, в которых

технологические процессы используют вещества

биологического происхождения. На этой основе можно получить источник энергии, например, для долговременной работы искусственного органа [29].

Латексные пленки используются в строго бескислородных условиях в качестве носителей для анаэробных микроорганизмов. Латексные пленки также применяются для иммобилизации клеток в слое латекса непосредственно на электроде в

биоэлектрохимических системах [30].

Применение иммобилизованных ферментов

Как известно, выделенные из клетки и помещенные в раствор внутриклеточные ферменты могут использоваться только в одном реакционном цикле. Подобный недостаток может быть устранен при помощи иммобилизации ферментов. Однако, такие препараты часто недостаточно стабильны, а их продуктивность обычно недостаточна для применения в промышленных масштабах. Эта проблема может быть решена посредством иммобилизации целых

клеток, что приводит к развитию более дешевой и менее трудоемкой биотехнологии [31].

Однако иммобилизованные ферменты также находят свое применение. Криогели ПВС используются в качестве носителей для ковалентного связывания белков и ферментов при получении макропористых иммуносорбентов и ряда иммобилизованных биокатализаторов,

предназначенных для ферментолиза

сверхвысокомолекулярных субстратов или для работы в маловодных средах. В этом случае емкость криогеля ПВС как носителя, то есть содержание фермента в расчете на единицу массы или объема, составляет порядка 1-10 мг/г(мл), что характерно для крупнопористых матриц, существенная часть объема которых приходится на поры, а количество реакционноспособных группировок полимера, расположенных в стенках этих макропор, относительно невелико [6].

В настоящее время полимерные адсорбенты успешно используются в биотехнологии для разработки аналитических и препаративных методов анализа, выделения, очистки и иммобилизации БАВ, а также в процессах водоподготовки [5, 32].

Стоит упомянуть возможность использования иммобилизованных ферментов в процессах переработки лигноцеллюлозного сырья [33, 34].

Иммобилизованные ферменты используются и как усилители слабых сигналов. На активный центр иммобилизованного фермента воздействуют через носитель, подвергая последний ультразвуковой обработке, механическим нагрузкам или фотохимическим превращениям. Это позволяет регулировать каталитическую активность системы фермент-носитель под действием механических, ультразвуковых и световых сигналов. На этой основе были созданы механо- и звукочувствительные датчики и открыт путь к бессеребряной фотографии [35].

Промышленные процессы с применением иммобилизованных ферментов внедрены, прежде всего, в пищевую и фармацевтическую

промышленность. В пищевой промышленности с участием иммобилизованных ферментов идут процессы получения глюкозо-фруктовых сиропов, глюкозы, яблочной и аспарагиновой кислоты, оптически активных Ь-аминокислот, диетического безлактозного молока, сахаров из молочной сыворотки и др. На сегодняшний день в промышленности реализованы некоторые крупномасштабные технологии на основе иммобилизованных ферментов (глюкозоизомеразы, аминоацилазы, пенициллинацилазы и лактазы). Последняя иммобилизуется на частицах кремнезема и применяется для конверсии лактозы сыворотки в глюкозу и галактозу [21, 22, 36].

Иммобилизованные ферменты

используются для определения содержания токсических веществ. Так, например, холинэстеразу применяют для определения содержания пестицидов (степень ингибирования этого фермента в присутствии пестицидов оценивают электрохимическими или колориметрическими методами), карбоангидраза очень чувствительна даже к малым концентрациям хлорпроизводных углеводородов, гексокиназа - к хлордану, линдану и токсафену. Установлено, что иммобилизованная диизопропилфторфосфатаза нервных клеток кальмара может применяться для обезвреживания фосфоорганических нервных газов (зомана, зарина) [2].

В медицине иммобилизованные ферменты используются и в качестве лекарственных препаратов, особенно в тех случаях, когда

необходимо локальное воздействие. Кроме того, биокатализаторы широко используются в различных аппаратах для перфузионной очистки различных биологических жидкостей. Применение

иммобилизованных ферментов микробного

происхождения перспективно для лечения

воспалительных заболеваний. КСИ-сефароза -иммобилизованный на сефарозе кислотостабильный ингибитор протеиназ сорбирует эластазу, трипсин, химотрипсин и активатор плазминогена у больных с острыми послеоперационными паротитами. Иммобилизованная гепариназа, в свою очередь,

может применяться для предотвращения тромбообразования в аппаратах искусственного кровообращения, а иммобилизованная

билирубиноксидаза может использоваться для удаления билирубина из крови новорожденных, страдающих желтухой.

Предложен новый способ применения иммобилизованного гемоглобина. Суть его состоит в том, что включенный в полиуретановую матрицу белок образует «гемогубку», способную поглощать кислород прямо из воды с эффективностью 80 %. Далее кислород высвобождается из полимера под действием слабого электрического разряда или в вакууме. Предполагается, что такая система может снабжать кислородом водолазов либо работающие под водой двигатели [35].

Таким образом, как следует из вышесказанного, иммобилизованные клетки и ферменты наиболее широко применяются в тонком

органическом синтезе, в анализе, в медицине, в процессах конверсии энергии, в пищевой и

фармацевтической промышленностях.

Литература

1. U. Beshay, H. El-Enshasy, I.M.K. Ismail, H. Moawad, S. ABD-El-Ghany, Pol. J. Microbiol, 60, 2, 133-138 (2011).

2. Е.Н. Ефременко. Автореф. дисс. докт. биол. наук, Инст. биохим. физики им. Н.М. Эмануэля РАН, Москва, 2009. 53 с.

3. О.В. Коптилова, Н.М. Филатова, Л.Д. Асулян, Успехи современного естествознания, 2011. №8. С. 44-45.

4. C. Almeida, T. Branyik, P. Moradas-Ferreira, J. Teixeira, J. Biosci. Bioeng., 96, б, 513-518 (2003).

5. О.А. Писарев, Н.М. Ежова, Сорбционные и

хроматографические процессы, 8, 4, 535-552 (2008).

6. Б.Л. Шаскольский. Автореф. дисс. канд. хим. наук, РХТУ им. Д. И. Менделеева, Москва, 2009. 22 с.

7. Y. Kourkoutas, A. Bekatorou, I.M. Banat, R. Marchant, A.A. Koutinas, Food Microbiol., 21, 377-397 (2004).

8. V. Nedovic, R. Willaert, Applications of Cell

Immobilisation Biotechnology. Springer, 2005. 573 p.

9. T. Nakari-Setala, J. Azeredo, M. Henriques, R. Oliveira, J.

Teixeira, M. Linder, M. Penttila, Appl. Environm. Microbiol., 68, 7, 3385-3391 (2002).

10. M. Ikonomopoulou, M. Kanellaki, M. Soupioni, A.A. Koutinas, Appl. Biochem. Biotechnol., 104, 1, 2З-Зб (2003).

11. A. Bekatorou, M.J. Soupioni, A.A. Koutinas, M.E.

Kanellaki, Appl. Biochem. Biotechnol., 97, 2, 105-121 (2002).

12. H.A. Silva, L.M. Alvares-Ribeiro, Talanta, 58, б, 13111318 (2002).

13. A. Tsakiris, V. Sipsas, A. Bekatorou, A. Mallouchos, A.A. Koutinas, J. Agric. Food Chem., 52, 5, 1З57-1ЗбЗ (2004).

14. А.Л. Панасюк, Л.И. Розина, Л.А. Пелих, И.М. Шур, Всероссийский научно-исследовательский институт пивоваренной, безалкогольной и винодельческой промышленности. 2012 (http://eurowine.com.ua/).

15. А.В. Бабченко, Н.Б. Мітіна, Г.І. Науменко, О.П. Кулик, IV Міжнародна науково-практична конференція «Біотехнологія. Наука. Освіта. Практика»

(Дніпропетровськ, 11-13 листопада, 2008).

Дніпропетровськ, 2008. С. 7.

16. Н.А. Степанов. Автореф. дисс. канд. техн. наук, Моск. гос. унив. нищ. произв., Москва, 2007. 27 с.

17. H.J. Kim, J.H. Kim, C.S. Shin, Process Biochem., 35, 243-248 (1999).

18. R.G. Crittenden, M.J. Playne, Appl. Microbiol. Biotechnol., 58, 3, 297-302 (2002).

19. C.-S. Chien, W.-C. Lee, T.-J. Lin, Enzyme Microb. Technol, 29, 252-257 (2001).

20. S. Takamatsu, T. Tosa, Bioprocess Technol, 16, 25-35, (1993).

21. Р.Э. Хабибуллин, Х.Р. Хусаинова, Э.И. Минивалеева, О.А. Решетник, Вестн. Каз. Техн. Ун-та, 16, 187-194 (2011).

22. В.Я. Пономарев, Вестн. Каз. Техн. Ун-та, 9, 616-620 (2010).

23. S. Norton, J.-C. Vuillemard, Crit. Rev. Biotechnol., 14,

2, 193-224 (1994).

24. И.А. Хусаинов, А.В. Канарский, З.А. Канарская, М.А. Поливанов, Вестн. Каз. Техн. Ун-та, 3, 174-179 (2011).

25. H.Y. Kawaguti, P.H. Carvalho, J.A. Figueira, H.H. Sato, SAGE-Hindawi Access to Research, Enzyme Research, Article ID 791269, 8 p. (2011).

26. L. Wu, R.G. Birch, Appl. Environ. Microbiol, 71, 3, 1581-1590 (2005).

27. Л.В. Потапова, И.В. Владимцева, О.В. Колотова, Современные наукоемкие технологии, 2005. № 9. С 6970.

28. С.Д. Варфоломеев, Соровский образовательный журнал. Химия, 1, 45-49 (1997).

29. Н.Ф. Казанская, Вестн. Моск. Ун-та, сер. 2, Химия,

29, 3. 1988.

(http://www.inbi.ras.ru/history/berezin/kazanskaya/ kazanskaya_berezin_1 .html).

30. R.C. Wagner, S. Porter-Gill, B.E. Logan, AMB Express., 2, 2, 1-6 (2012).

31. G. Szymanska, B. Sobierajski, A. Chmiel, Pol. J. Microbiol, 60, 2, 105-112 (2011).

32. V.A. Davankov., M.P. Tsyurupa, Reactive Polymers, 53, 1, 193-203 (2002).

33. М.В. Харина, Р.Т. Валеева, С.Г. Мухачев, В.М. Емельянов, Вестн. Каз. Техн. Ун-та, 13, 210-212 (2012).

34. Р.М. Нуртдинов, Р.Т. Валеева, В.М. Емельянов, С.Г. Мухачев, М. В. Харина, Вестн. Каз. Техн. Ун-та, 14, 211-214 (2011).

35. Н.А. Кузьмина, Основы биотехнологии. Мир, Москва, 2006. 436 с.

36. Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухина, Основы биотехнологии. Академия, Москва, 2006. 208 с.

© Е. В. Крякунова - канд. биол. наук, асс. каф. пищевой инженерии малых предприятий КНИТУ, [email protected]; А. В. Канарский - д-р техн. наук, проф. той же кафедры, [email protected].