CC BY
18V^'jjJIPVI
ФТИЗИАТРИЯ
Применение автоматизированных систем в молекулярно-генетической диагностике туберкулеза
Л. Н. Черноусова, Е. Е. Ларионова, С. Н. Андреевская, А. В. Воробьева, Т. Г. Смирнова, С. В. Степанов, Д. А. Варламов; Центральный НИИ туберкулеза РАМН, г. Москва
За последние годы метод полиме-разной цепной реакции (ПЦР) прочно вошел в практику фтизиатрических лабораторий как точный, быстрый и дешевый метод исследования. Внедрение ПЦР в режиме реального времени позволяет выявлять ДНК МЛиЬвгоЫоз'я непосредственно из любого диагностического материала, идентифицировать мико-бактерии вплоть до вида, а также определять лекарственную чувствительность к противотуберкулезным препаратам 1 и 2 рядов. Время, которое требуется для получения результатов по выявлению возбудителя и определения его лекарственной чувствительности, составляет 1 —2 дня, в то время как микробиологические методы требуют от одного до трех месяцев для полного тестирования возбудителя.
Исследования, проведенные в Центральном НИИ туберкулеза РАМН, показали, что диагностическая эффективность метода ПЦР превышает эффективность бактериоскопии и посева на жидкие среды: при распространенных формах туберкулеза — на 31,6% и 18,9%, а при ограниченных — на 33,5% и 17,5% соответственно. При назначении лечения на основании данных определения лекарственной чувствительности, полученных молекулярно-генетическими методами, в интенсивную фазу химиотерапии прекращение бактериовыде-ления наблюдалось у 98,6% впервые выявленных больных туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью уже через 6 месяцев после начала лечения. При
существенном сокращении сроков получения результатов лекарственной чувствительности (до 2—3 дней) повышается эффективность лечения, предотвращается распространение инфекции, сокращаются сроки пребывания больного в стационаре. Все это содействует скорейшей реабилитации больного.
В настоящее время метод ПЦР включен в алгоритм исследований многих крупных фтизиатрических лабораторий. Однако у данного метода есть и свои ограничения: особенности строения клеточной стенки возбудителя и тип исследуемого материала, содержащего М.ШЬегси^э, являются основной причиной для применения длительных многостадийных способов выделения ДНК. В результате ручное выделение ДНК требует времени, постоянной концентрации внимания оператора для предотвращения контаминации диагностических образцов, что, в свою очередь, снижает значимость метода. В результате именно человеческий фактор становится основной причиной, препятствующей переводу микробиологических лабораторий фтизиатрической службы на широкое применение молекулярных методов. Поэтому особенно важно внедрять автоматизированные системы для выделения ДНК возбудителя из диагностического материала в лабораториях с большим потоком ПЦР-исследований.
В настоящее время на базе ЦНИИТ РАМН проводится работа по адаптации во фтизиатрии таких систем для нужд молекулярно-генети-ческих лабораторий. В качестве
автоматизированной системы нами был выбран автоматический модульный анализатор производства ТЕОДЫ (Швейцария). Основным критерием для выбора именно этой системы послужила «открытость» платформы ТЕОДЫ. Данная система допускает использование любого типа пластика и возможность работы с любым набором для выделения ДНК, адаптированным для автоматического выделения, поэтому внедрение автоматической системы не увеличивает стоимость анализа. Прибор позволяет проводить преаналитическую подготовку образцов, выделение нуклеиновых кислот (ДНК или РНК), соединение амплификационной смеси. Совместно с российской фирмой «Синтол» в ЦНИИТ РАМН проводится разработка и апробация тест-системы для выделения нуклеиновых кислот из диагностического материала, полученного от больных туберкулезом. В качестве референс-метода используется тест-система для ручного выделения ДНК «Рибо-преп» («ИнтерЛабСервис», г. Москва).
Проводимые исследования позволят сделать простым и быстрым выделение ДНК из диагностических образцов. Автоматизация работы с образцами и компьютерная поддержка позволят оптимизировать производительность труда, обеспечат безопасность при работе с био-логическимиобъектами, содержащими МЛиЬвгси1оз'13 и нетуберкулезные микобактерии. Диагностика туберкулеза станет качественно иной в плане безопасности работы, точности, скорости и глубины анализа.
ООО «Текан» 123308, г. Москва, ■ НПК «Синтол» 127550,
Хорошевское шоссе, 43Г I г. Москва, ул. Тимирязевская, 42
тел. +7 (495) 380-36-64 I тел. +7 (499) 977-74-55
e-mail: Tecan@tecan.ru, www.tecan.ru I www.syntol.ru
¡Cg) №5 (36) • 2013 www.akvarel2002.ru ^^
