CC BY
20
Так, в группе Мд L-acпapaгинaтa индекс агрегации снизился на 65,30% (^0,05), а в группах Мд L-аcпаpагината с витамином В6 и магне В6® -на 37,11% (^0,05) и 27,54% соответственно относительно группы магнийдефицитных животных. Статистически значимых различий по данным показателям между исследуемыми солями магния обнаружено не было.
Полученные данные соответствуют ранее проведенным исследованиям. Так, по имеющимся литературным данным [8, 10, 11], дефицит магния приводит к увеличению процессов АДФ- и кол-лаген-индуцированной агрегации тромбоцитов, а при введении солей магния магнийдефицитным животным отмечается восстановление данных показателей. На уровне пре-мРНК магний регулирует образование фибронектина (адгезивный экс-трацеллюлярный белок), который усиливает адгезию и требуется для активации тромбоцитов, нейтрофилов и эндотелиоцитов. При этом магний напрямую не влияет на связывание фибро-нектина с эндотелиоцитами, а действует как антагонист, препятствуя кальций-индуцированному связыванию [12]. Таким образом, магний опосредованно препятствует образованию агрегатов тромбоцитов, которые могут, с одной стороны, способствовать внутрисосудистому свертыванию с высвобождением большого количества тромбо-цитарных факторов свертывания и биологически активных веществ, а с другой стороны, закупоривая мелкие сосуды, вызывать стаз в системе микроциркуляции [3].
2-20071
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, на основании проведенного исследования можно сделать вывод о том, что Мд L-аcпаpагинат и его комбинация с пиридок-сином восстанавливают процессы агрегации тромбоцитов. При этом исследуемые соли по активности оказались сопоставимыми с препаратом ®
сравнения магне В6 , нормализуя нарушения у животных с дефицитом магния.
ЛИТЕРАТУРА
1. Баркаган 3. С., Балуда Б. П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. - Томск, 1980. - 71 с.
2. Гланц С. Медико-биологическая статистика: пер. с англ. - М.: Практика, 1998. - 459 с.
3. Иконникова Е. И., Черноусова Л. А., Мошки-на И. Р. // Клинич. лаб. диагностика. - 1999. - № 6. -С. 20-21.
4. Люсов Б. А., Савенков М. П. // Кардиология. -1998. - № 5. - С. 5-8.
5. Меньшиков Б. Б. Лабораторные методы исследования в клинике. - М.: Медицина, 1987.
6. Bieri J. G. // J. Nutr. - 1980. - Vol. 110. - Р. 1726.
7. Born G. V. // Nature (Lond). - № 194. - P. 927929.
8. Kh R., Khullar M, Kashyap M, et al. // J. Hyper-tens. - 2000. - Vol. 18, № 7. -Р. 919-926.
9. Sacha T, Skotnicki A. B. // Przegl. Lek. - 1997. -Vol. 54, № 2. - P. 122-125.
10. Scheibe F., Haupt H., Vlastos G. A. // Eur. Arch. Otorhinolaryngol. - 2000. - Vol. 257, № 7. -Р. 355-361.
11. Seelig M. S. // J. Am. college Nutrition. - 1993. -Vol. 12. - P. 442-458.
12. Serebruany V. L., Herzog W. R., Edenbaum L. R., et al. // Magnes Res. - 1996. - Vol. 9, № 3. - P. 155-163.
УДК 547.551.42
ПРЕПАРАТИВНЫЙ СИНТЕЗ ГИДРОХЛОРИДА №(2,6-ДИМЕТИЛФЕНИЛ)-2-(ЭТИЛАМИНО)АЦЕТАМИДА (MEGX)
А. А. Озеров, Н. В. Рогова, Л. А. Смирнова, К. А. Кузнецов, Е. Г. Глухова, А. И. Луганченко, С. С. Лемишко
Лаборатория медицинской химии ВНЦ РАМН и АВО, кафедра фармацевтической и токсикологической химии ВолГМУ
И-(2,6-Диметилфенил)-2-(этиламино)ацетамид (моноэтилглицин-ксилид - MEGX) является одним из наиболее широко применяющихся маркеров активности изофермента цитохорма Р450 -CYP3A4, ответственного за метаболизм около 60 % современных лекарственных средств [3]. MEGX-тест характеризуется высокой чувствительностью, специфичностью и значительной прогностической ценностью при диагностике хронической патологии печени [4] и оценке лекарственного взаимодействия за счет индукции или ингибиро-вания CYP3A4 [2]. Однако в отличие от готовых тест-систем, основанных на использовании MEGX, сама субстанция MEGX не поставляется ведущими производителями химических реактивов и реа-
гентов для биохимических анализов, что побудило нас к разработке простого и технологичного метода получения MEGX для нужд собственных клинических исследований.
Синтез гидрохлорида MEGX был осуществлен нами по адаптированной схеме, предложенной для получения ксикаина (лидокаина) [1]. На первой стадии синтеза 2,6-диметиланилин подвергали ацилированию хлорангидридом хлоруксусной кислоты в среде безводной уксусной кислоты. Полученный 2-хлор-Н-(2,6-диметилфенил)ацетамид аминировали избытком моноэтиламина в среде 95 %-го этанола при температуре 100 °С и после выделения MEGX-оcнования превращали его в конечный гидрохлорид обработкой метанольным
раствором хлористого водорода в среде хлороформа:
1. CC(O)CH2Cl
2. AcONa
Г"
YY
Данные ТСХ свидетельствуют о том, что при нагревании 2-хлор-№(2,6-диметилфенил)ацетами-да с 2-кратным молярным избытком моноэтила-мина в среде 95 %-го этанола в течение 2 ч наблюдается полная конверсия исходного продукта: в хлороформенном растворе, полученном после нейтрализации реакционной массы щелочью (см. экспериментальную часть), отсутствует его пятно с Rf = 0,76 и наблюдается интенсивное пятно с Rf = 0,24, соответствующее основанию MEGX. При этом в растворе отсутствуют другие продукты реакции, за исключением незначительной примеси с более высокой хроматографиче-ской подвижностью (Rf = 0,47), которая, возможно, соответствует продукту дизамещения в моно-этиламине.
Полученный гидрохлорид MEGX представляет собой белое кристаллическое вещество, легко растворимое в воде, умеренно растворимое в спирте, мало растворимое в хлороформе. Температурный диапазон плавления вещества зависит от скорости нагрева, что может свидетельствовать о частичном разложении вещества при высокой температуре. Анализ чистоты гидрохлорида MEGX методом ВЭЖХ в концентрации 10 мкг/мл свидетельствует об отсутствии в нем примесей (чувствительность метода 0,01 цг/мл), а по своим хроматографическим характеристикам синтезированное соединение полностью соответствует стандартному образцу MEGX, полученному из ЦХЁС-ВНИХФИ (г. Москва). Химическое строение целевого и промежуточного продуктов доказано методом ЯМР Н1-спектроскопии.
Таким образом, нами разработан простой лабораторный метод получения гидрохлорида MEGX, обладающего чистотой, требуемой для проведения современных биохимических и клинических исследований.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
В работе были использованы следующие импортные реактивы высокой чистоты: 2,6-димети-ланилин (99 %-й) ("Acros"), моноэтиламин (70 %-й водный раствор) ("Acros"), хлорацетилхлорид (99 %-й) ("Aldrich"), тионилхлорид (99,5 %-й) ("Aldrich"). Спектры ЯМР Н1 регистрировали на спектрометре "Bruker DRX-500" (500 МГц) в ДМСО-D^ внутренний стандарт ТМС. Интерпретацию спектров осуществляли с помощью лицензионной программы ACD/HNMR "Predictor Pro 3.0" фирмы "Advanced Chemistry Development" (Канада).
ТСХ выполняли на пластинах "Sorbfil" ("Сорбпо-лимер", Россия), элюент - этилацетат, проявление в парах йода. Температуры плавления измерены в стеклянных капиллярах на приборе "Mel-Temp 3.0" ("Laboratory Devices Inc.", США) при скорости нагрева 1 и 10 °С/мин.
Чистоту MEGX-основания методом ВЭЖХ определяли на хроматографе "Shimadzu HPLC-10Avp", колонка "SUPELCO SIL LC-8", элюент -фосфатный буфер (0,05 М KH2PO4, pH = 4,0): ацетонитрил = 87 : 13, скорость потока 1 мл/мин, температура колонки - 25 °С, детектирование при 205 нм. Предварительно проводилась трехкратная экстракция MEGX из щелочного раствора хлороформом, экстракт упаривался методом барботирования, и сухой остаток растворялся в 0,1 мл этанола.
2-Хлор-№(2,6-диметилфенил)ацетамид. В трехгорлый реактор, снабженный лопастной мешалкой, термометром и капельной воронкой, охлаждаемый на ледяной бане, помещают раствор 25,0 мл (0,203 моль) 2,6-диметиланилина в 200 мл безводной уксусной кислоты и при температуре не выше 10 °С в течение 20-25 мин добавляют по каплям сначала 18,5 мл (0,232 моль) хлораце-тилхлорида, а затем в течение 15-20 мин заранее приготовленный раствор 50 мл уксусной кислоты и 40 г гранулированного едкого калия в 300 мл воды. Перемешивают при охлаждении еще 30 мин, выделившийся осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 100 мл холодной воды, сушат на воздухе при комнатной температуре в течение суток и получают 30,8 г (77 %) белого кристаллического вещества, Т. пл. 146-149 °С (10 °С/мин) (147-148 0С [1]). 2-Хлор-Ж2,6-диметилфенил)-аце-тамид дополнительно очищают перекристаллизацией из 150 мл 95 %-го этанола, выход - 23,1 г, Т. пл.=147,5-150 0С (10 °С/мин), Rf = 0,76.
Спектр ЯМР Н1, 5, м.д.: 2,08 с (6 Н, СН3); 4,21 д (4 Гц, 2 Н, СН2); 7,00 с (3 Н, арил): 9,58 уш.с (1 Н, NH).
№(2,6-Диметилфенил)-2-(этиламино)аце-тамида гидрохлорид (MEGX). 20,0 г (0,101 моль) 2-хлор^-(2,6-диметилфенил)ацетамида, 25,0 мл (0,311 моль) 70%-го водного раствора моноэтила-мина и 200 мл 95 %-го этанола нагревают в герметичном толстостенном стеклянном сосуде объемом 0,5 л на кипящей водяной бане в течение 2 ч и оставляют на ночь при комнатной температуре. Полученный прозрачный раствор упаривают при атмосферном давлении на кипящей водяной бане, остаток охлаждают и распределяют при интенсивном перемешивании между 300 мл хлороформа и 200 мл 5 %-го раствора едкого натра. Органический слой отделяют, сушат в течение суток сульфатом натрия, фильтруют и упаривают до половины объема. Остаток охлаждают до комнатной температуры и в течение 5 мин порциями при перемешивании добавляют раствор хлористого водорода в метаноле, предварительно
CH
CH
NH
AcOH
O
CH
CH
CH
CH
HCl
CH
CH
O
HCl
CH
CH
полученный путем медленного (10-15 мин) и осторожного добавления 8 мл (0,110 моль) хлористого тионила к 25 мл безводного метанола. Реакционную массу с выделившимся обильным осадком выдерживают в течение ночи в холодильнике, осадок отфильтровывают, промывают 2 раза по 50 мл хлороформа, сушат на воздухе при комнатной температуре в течение суток и получают 20,4 г (83 %) белого кристаллического вещества, Т. пл.
293-298 °С (10 °С/мин). MEGX дополнительно очищают перекристаллизацией из 175 мл 95%-го этанола, выход - 15,1 г, Т. пл. 294,5-298,5 0С (10 °С/мин), 292-293 °С (1 °С/мин).
2-2007~|
Спектр ЯМР Н1, 5, м.д.: 1,18 т (7 Гц, 3 Н, СН3); 2,11 с (6 Н, СН3); 2,94 кв (7 Гц, 2 Н, СН2); 3,94 с (2 Н, СН2); 7,03 с (3 Н, арил); 9,20 уш.с (2 Н, NH2+); 10,18 с (1 Н, NH).
ЛИТЕРАТУРА
1. Рубцов М. В., Байчиков А. Г. Синтетические химико-фармацевтические препараты. - М.: Медицина, 1971. - 328 с.
2. Cox S., Hammer T. // J. Pharm. Biomed. Anal. -2005. - Vol. 37. - P. 801-804.
3. Nebert D. W, Russel D. W. // Lancet. - 2002. -Vol. 360. - P. 1155-1162.
4. Potter J. M., Hickman P. E. // Transplant. -1993. - Vol. 56. - P. 1385-1388.
УДК 615.451.16:615.24:615.322:616.379-008.64-085.24
ВЛИЯНИЕ АНТИДИАБЕТИЧЕСКОЙ КОМПОЗИЦИИ "ДИАБЕТТА" НА ВОСПОЛНЕНИЕ УРОВНЯ МАГНИЯ В ЭРИТРОЦИТАХ И ПЛАЗМЕ ПРИ АЛИМЕНТАРНОЙ
ГИПОМАГНИЕМИИ
А. А. Спасов, М. П. Самохина, Д. Ю. Агарков, А. Е. Буланов
Кафедра фармакологии, кафедра фармакогнозии и ботаники ВолГМУ, Российский НИИ здоровья, г. Москва
В ВолГМУ совместно с СКС "Альянс" была создана растительная противодиабетическая композиция "Диабетта" (композиция), предназначенная для применения в составе комплексной терапии лицами, страдающими II типом сахарного диабета (СД). Для обеспечения мультикомпонент-ного механизма действия в состав композиции было произведено включение компонентов: экстракты гимнемы лесной, девясила, корня солодки, гребней винограда; соли ванадия, цинка, хрома, магния и витамин В6. В ранее опубликованных работах были описаны результаты исследований антидиабетического действия композиции [3-6]. Выявлено, что полученная композиция обладает гипогликемическими, антиоксидантны-ми, иммуномодулирующими свойствами. Эффективность "Диабетты" была изучена при экспериментальной патологии, отражающей различные патогенетические звенья клинических типов: ин-сулинзависимом СД (стрептозотоцин и аллоксан-индуцированные формы, иммунозависимая и пан-креатэктомизированная формы), при СД II типа (интоксикация низкими дозами стрептозотоцина -преддиабет, латентная форма сахарного диабета, экспериментальный синдром инсулинрезистентно-сти). Кроме того, выявлена активность препарата на модели экспериментального ожирения.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучить влияние противодиабетической композиции "Диабетта", содержащей соль магния, на восполнение уровня магния в эритроцитах и
плазме на фоне алиментарной гипомагнеземии в организме животных.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперимент был выполнен на белых беспородных крысах-самцах исходной массой 180-200 г. Первая группа составляла контроль - интактные животные. У остальных крыс моделировали маг-нийдефицитное состояние.
Для моделирования гипомагнезиемии животные получали специальную магнийдефицитную диету фирмы "ICN Biomedicals Inc." (Aurora, Ohio, США) с 3,5%-м содержанием полиминеральной смеси AIN-76, из которой был полностью исключен магний. Контрольные (интактные) животные получали полноценную диету, содержащую 0,84 г MgO на 1 кг диеты, что соответствовало 0,5 г алиментарного магния на 1 кг диеты.
Скорость и глубину развития гипомагниемии контролировали, определяя концентрацию Mg в плазме и эритроцитах крови спектрофотометри-ческим методом по цветной реакции с титановым желтым [1]. При снижении концентрации Mg ниже 1,4 ммоль/л в эритроцитах и ниже 0,7 ммоль/л в плазме считалось, что у животных развилась ги-помагниемия средней тяжести. После этого животных с гипомагниемией разделили на две группы: первая группа продолжала находиться на диете; второй группе на фоне диеты начинали вводить композицию (перорально через зонд из расчета 50 мг алиментарного магния на 1 кг веса животного).
