CC BY-ND
23
ноябрь №11 (204) ЗНиСО
41
УДК 616-093/-098
ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ФЕКАЛИЙ ЖИТЕЛЕЙ Г. ХАНОЙ СРВ НА НОСИТЕЛЬСТВО ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ПАРАЗИТАРНЫХ, ВИРУСНЫХ И БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Т.Ф. Степанова1, Л.В. Катаева1, А.Н. Кузнецов2, Тран Тхи Най2, И.В. Бакштановская1, М.И. Беляева1, Е.А. Брагина1, О.В. Посоюзных1, О.А. Андреева1
1ФБУН «Тюменский научно-исследовательский институт краевой инфекционной патологии»
Роспотребнадзора, г. Тюмень, Россия
2Совместный Российско-Вьетнамский тропический научно-исследовательский и технологический центр (Тропический центр), г. Ханой, Вьетнам
В рамках реализации программы сотрудничества Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и Министерства здравоохранения Социалистической Республики Вьетнам (СРВ) по оказанию помощи в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия населения в 2015-2017 гг. проведено обследование жителей г. Ханой СРВ на паразитологические, вирусологические и бактериальные инфекции. Показано, что жители города Ханой имеют нарушения микроэкологии толстого кишечника, проявляющиеся в дефиците бактерий Bifidobacterium и Lactobacillus. Почти десятая часть населения являются вирусоносителями кишечных вирусных инфекций, преимущественно аденовирусов, ротавирусов и энтеровирусов. Применение комплекса методов позволяет обнаруживать носительство более широкого спектра этиологических факторов кишечных инфекций, что способствует увеличению эффективности лечебных и реабилитационных мероприятий. Ключевые слова: носительство, кишечные инфекции, жители г. Ханой СРВ.
T.F. Stepanova, L.V. Kataeva, A.N. Kuznetsov, Tran Thi Nhai, I.V. Bakshtanovskaуa, M.I. Belyaeva, E.A. Bragina, O.V. Posoyuznyh, O.A. Andreyeva □ RELIMINARY RESULTS OF THE STUDY FECES RESIDENTS OF HANOI VIETNAM CARRIER AGENTS OF PARASITIC, VIRAL AND BACTERIAL INFECTIONS □ Tyumen Region Infection Pathology Research Institute, Tyumen, Russia; Russian-Vietnamese Research and Technology Center in Vietnam (Tropical Centre), Hanoi, Vietnam.
As part of the cooperation program of the Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare and the Ministry of Health of the Socialist Republic of Vietnam to assist Vietnam in ensuring sanitary and epidemiological welfare of the population in the 2015-2017 biennium mnducted a survey of inhabitants of Hanoi Vietnam on parasitology, virology and bacterial infections. It is shown that the Hanoi city residents have violations microecology colon, manifested in the shortage of bacteria Bifidobacterium and Lactobacillus. Almost a tenth of the population carry the virus intestinal viral infections, especially adenoviruses, rotaviruses and enteroviruses. The use of complex techniques can detect carriers of a wide range of etiological factors of intestinal infections, which increases the effectiveness of treatment and rehabilitation.
Key words: carriage, intestinal infection, residents of Hanoi Vietnam.
Исследование проведено на базе Тропического центра г. Ханой, в рамках договора о научном сотрудничестве по теме «Эпизоотолого-эпидемиологические исследования паразитарных и инфекционных болезней, разработка планов крупномасштабных оздоровительных мероприятий и внедрение систем биологической безопасности медицинской помощи».
Тропический центр Российской академии наук и Министерства национальной обороны СРВ (участники Межправительственного соглашения) создан и эксплуатируется на основании Межправительственного соглашения между Россией и Вьетнамом от 7 марта 1987 года и «Положения о тропическом центре» от 5 марта 2008 года.
Тропический центр осуществляет научно-техническое сотрудничество в интересах РФ и СРВ во всех регионах Вьетнама и рассматривается Правительствами обеих сторон как новая, перспективная форма научно-технического сотрудничества.
В рамках реализации программы сотрудничества Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия
человека и Министерства здравоохранения Социалистической Республики Вьетнам по оказанию помощи СРВ в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия населения в 2015-2017 гг. Тюменский научно-исследовательский институт проводил обследование жителей г. Ханой СРВ на паразитологические, вирусологические и бактериальные инфекции.
Среди всего многообразия микрофлоры желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) наиболее важными ее представителями как по количественному содержанию, так и по функциональной нагрузке являются бактерии семейства Lactobacillus и Bifidobacteria. По современным представлениям они играют основную роль в поддержании нормального физиологического состояния микрофлоры ЖКТ и не обладают патогенными свойствами [3]. Важной характеристикой этих микроорганизмов служит саха-ролитический тип метаболизма. В процессе сбраживания углеводов под действием ферментов лактобацилл и бифидобактерий образуются короткоцепочечные жирные кислоты, обладающие антибактериальной активностью. В
42
ЗНиСО ноябрь №11 (204)
присутствии этих кислот тормозится развитие условно патогенных штаммов [6].
Благодаря выработке веществ с антибактериальной активностью (бактериоцинов, корот-коцепочечных жирных кислот, лактоферрина, лизоцима) нормальная микрофлора обеспечивает местную защиту от избыточного размножения условно патогенных и внедрения патогенных микроорганизмов [1], в том числе вирусов. Нормальная микрофлора также выполняет защитные функции за счет прямого и опосредованного антагонизма по отношению к патогенным и условно патогенным микроорганизмам, предотвращая колонизацию ими слизистых оболочек и препятствуя проникновению микробов.
Тропический климат (высокая температура и влажность), а также высокая плотность населения, качество питьевой воды, характер питания являются важными факторами в развитии инфекционной заболеваемости населения.
Цель исследования - обследование на первом этапе относительно здоровой группы жителей г. Ханой СРВ на носительство паразитарных, вирусных и бактериальных инфекций.
Материалы и методы. Исследовано 59 проб фекалий группы относительно здоровых, не предъявляющих никаких жалоб жителей г. Ханой на носительство возбудителей паразитарных, вирусных и бактериальных инфекций. Средний возраст обследованных составил 30 лет, в том числе 16 детей в возрасте от 2 до 15 лет. Были использованы паразитологические, бактериологические методы исследования, метод иммуноферментного анализа (ИФА) и по-лимеразно-цепной реакции (ПЦР).
На носительство возбудителей паразитарных инвазий всего проведено 177 исследований: определяли яйца гельминтов, цисты лямблий (Lamblia intestinalis), бластоцисты (Blastocysts hominis), ооцисты криптоспорий (Cryptosporidium parvum). Использовали следующие паразитологические методы: эфир-формалиновой седиментации с применением одноразовых концентраторов «PARASEP», скрининга и анализа препаратов кала с применением программно-аппаратного комплекса «МЕКОС-Ц2», исследование фекалий модифицированным методом окрашивания по Цилю-Нильсену.
Исследования на вирусные инфекции проводили методом ИФА, использовали набор реагентов для выявления антигена ротавируса человека, набор для выявления антигена аденовируса человека, а также набор для выявления норовирусов геногрупп I и II.
Для обнаружения ДНК/РНК возбудителей острых кишечных инфекций в фекалиях обследуемых жителей г. Ханой применяли метод ПЦР. Для постановки реакции использовали коммерческие тест-системы для выявления РНК энтеровирусов с гибридизационно-флуо-ресцентной детекцией по «конечной точке», а также для выявления и дифференциации в одном образце биоматериала ДНК/РНК микроорганизмов родов Shigella, Salmonella и энтеро-инвазивных E. coli, термофильных Campylo-
bacter, аденовирусов группы F (Adenovirus F) и ротавирусов группы А (Rotavirus A), норови-русов 2 генотипа (Norovirus 2 генотип) и аст-ровирусов (Astrovirus) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Бактериологическое исследование кала проводили по стандартной методике МЗ РФ [2]. Количественную оценку содержания КОЕ/1 г фекалий и характеристику степени микробиологических нарушений при дисбактериозе кишечника давали в соответствии с ОСТ «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» [5]. Видовую идентификацию бактерий осуществляли по прямому белковому профилированию с помощью времяпролетной масс-спектрометрии с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией с использованием масс-спектрометра MALDI TOF MS серии Microflex LT. Идентификацию микроорганизмов и расчет коэффициента достоверности (Score) проводили с использованием программного обеспечения Maldi BioTyper 3,0. Уровень достоверности идентификации выше 2,0 свидетельствовал о точной видовой идентификации, уровень достоверности от 1,7 до 2,0 - о точной идентификации до рода. Для каждого результата идентификации приводилась ссылка на NCBI (National Center for Biotechnology Information).
Статистическую обработку материала осуществляли в программе Excel с вычислением показателей: средней арифметической, ошибки и достоверности полученных результатов с использованием критерия Стьюдента.
Результаты исследования. Результат проведенных паразитологических исследований фекалий на яйца гельминтов, цисты лямблий, бластоцисты, ооцисты криптоспоридий показал, что все пробы были отрицательными.
Методом ИФА в фекалиях обследованных пациентов были обнаружены антигены ротави-русов и аденовирусов: 3 и 7 положительных результатов соответственно, что составило (6,25 ± 3,49) и (14,58 ± 5,09) %. У двух пациентов были определены антигены как ротавиру-сов, так и аденовирусов. Антигены норовиру-сов в представленных пробах не выявлены.
В исследованных образцах кала жителей г. Ханой методом ПЦР не были обнаружены ДНК патогенных бактерий рода Shigella, Salmonella, энтероинвазивных Escherichia coli и термофильных кампилобактерий, а также РНК ротавирусов группы А. В одном образце биоматериала (1,72 %) обнаружена РНК аденовирусов группы F, также в одном случае (1,72 %) выявлено наличие РНК норовирусов 2 генотипа. У двоих обследованных пациентов — (3,45 ± 2,38) % выявлено наличие РНК астровирусов, у четверых — (6,9 ± 3,3) % — энтеровирусов.
Примененный метод исследования позволяет обнаруживать ДНК/РНК как жизнеспособных, так и мертвых возбудителей, поэтому в комплексе с данными клинического обследования полученные материалы могут свидетельствовать только о вирусоносительстве.
ноябрь Hill (284) ЗНиСО
43
Исследование фекалий пациентов на носи-тельство возбудителей ротавирусов, аденовирусов и норовирусов производилось двумя методами - ИФА и ПЦР. Совпадение положительных результатов при этом отмечено у одного пациента при исследовании на аденовирусы группы F. В данном исследовании метод ИФА оказался более чувствительным при выявлении возбудителей вирусных кишечных инфекций, таких как ротавирусы и аденовирусы.
Говоря о микроэкологии кишечного содержимого относительно здоровых жителей г. Ханой СРВ, важно подчеркнуть, что содержание главных представителей нормофлоры толстого кишечника Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. значительно снижено у более чем (80 ± 5,21) % обследованных. Дефицит бактерий рода En-terococcus выявлен у (30 ± 5,97) % пациентов, а дефицит Escherichia coli с нормальной ферментативной активностью - у (27 ± 5,98) % обследованного контингента.
Что касается характеристики условно-патогенной микрофлоры, идентифицированной в содержимом толстого кишечника жителей г. Ханой, важно отметить, что у 43 пациентов (72,88 ± 5,79 %) выделены бактерии семейства Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus и грибы рода Candida. Среди бактерий семейства Enterobacteriaceae определялись представители родов Klebsiella (K. pneumoniae и K. oxytoca), Enterobacter (E. cloaceae, E. aerogenes, E. Asbu-riae, E. kobei), Citrobacter (C. koseri, С. freundii, С. youngae, C. sedlakii), Proteus (P. mirabilis), Raoultella (R. ornithinolytica). Характеризуя бактерии рода Escherichia важно подчеркнуть, что наряду с незначительно выраженным дефицитом кишечной палочки с нормальными ферментативными свойствами у обследованных пациентов, почти у половины из них определяется E. coli лактозонегативная. Также встречается кишечная палочка, обладающая гемолизином - (6,78 ± 3,27) %. У двоих пациентов выделены бактерии Escherichia fergusonii. Некоторые штаммы этого вида являются патогенными. Известно, что они способны контаминиро-вать открытые раны. Кроме того, могут быть причиной бактериемии и инфекций мочевых путей. Штаммы, вызывающие эти инфекции обладали высокой устойчивостью к антибиотикам: ампициллину, гентамицину и хлорамфе-николу [7, 8].
Среди грамотрицательных неферментирую-щих бактерий у троих пациентов были идентифицированы: Pseudomonas aeruginosa (1 штамм), Comamonas kerstersii (2 штамма) и Acinetobac-ter johnsonii (1 штамм).
Выводы. Результаты проведенных бактериологических исследований свидетельствуют о том, что у жителей города Ханой СРВ выявлен дефицит бифидумбактерий и лактобакте-рий. Снижение содержания бифидумбактерий
ниже нормы в большей степени оказывает влия-
- +
ние на развитие микробиологических нарушений при дисбактериозе кишечника по сравнению с лактобактериями [4]. Микробиологические нарушения III степени чаще встречаются в детской возрастной группе, отмечается выраженная взаимосвязь дефицита нормофлоры с условно патогенной флорой. Данные факты объясняются тем, что микрофлора толстого кишечника представляет собой отдельную экосистему, которая очень чувствительна к гормональным, иммунологическим и другим воздействиям, происходящим в органах и системах макроорганизма. Вместе с тем функция данной экосистемы зависит и от внешних факторов: образа питания, условий проживания, экологии и др.
Проведенное комплексное исследование фекалий группы здоровых жителей г. Ханой показало сочетание нарушений микроэкологии содержимого толстого кишечника с носитель-ством возбудителей вирусных инфекций. Также выявлена большая информативность комплексного применения методов ИФА и ПЦР по сравнению с их использованием в отдельности. Применение комплекса методов позволяет обнаруживать носительство более широкого спектра этиологических факторов кишечных инфекций, что способствует увеличению эффективности лечебных и реабилитационных мероприятий.
ЛИТЕРАТУРА
1. Воробьев А.А. и др. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции / А.А. Воробьев, Е.А. Лыкова // Журн. микробиол. 1999. № 6. С. 102-105.
2. Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника. Методические рекомендации МЗ СССР № 10-11/4. М. 1991.
3. Ильенко Л.И. и др. Дисбактериоз кишечника у детей / Л.И. Ильенко, И.Н. Холодова // Лечебное дело. 2008. № 2. С. 3-13.
4. Катаева Л.В. и др. Возрастные особенности дисбиоза толстой кишки / Л.В. Катаева, К.Б. Степанова, Т.Ф. Степанова [и др.] // Журн. микробиол. 2010. № 1. С. 76-80.
5. Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника»: Приказ № 231 от 09.06.2003. С. 65.
6. Шульпекова Ю.О. Кишечные бактерии, пробиотики и перспективы их применения для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта // Фарматека. 2008. № 2. С. 46-51.
7. Savini V. et al. First enteric Escherichia fergusonii from Italy / V. Savini, C. Catavitello, A. Bianco [et al.] // Le In-fezioni in Medicina. 2009. n. 4. P.259-260.
8. Savini V. et al. Multidrug-Resistant Escherichia fergusonii: a Case of Acute Cystitis / V. Savini, C. Catavitello, M. Talia [et al.] // J. Clin. Microbiol. April 2008 vol. 46. no. 4. P. 1551-1552.
Контактная информация:
Катаева Любовь Владимировна, тел.: +7 (3452) 28-99-92,
e-mail: KataevaLV@tniikip.rospotrebnadzor.ru Contact information: Kataeva Lyubov, phone: +7 (3452) 28-99-92,
e-mail: KataevaLV@tniikip.rospotrebnadzor.ru + -
