CC BY
4DOI: 10.25690/VETPAT.2020.51.32.005 УДК: 619:616.98:618.32:636.52/.58:615.33
Пяткина А. А., Мороз Н. В., Зыбима Т. Н., Кулаков В. Ю., Долгова М. А.
ПРЕДЕЛЬНЫЕ ДОЗЫ ПЕНИЦИЛЛИНА, СТРЕПТОМИЦИНА И АМФОТЕРИЦИНА-В ДЛЯ SPF-ЭМБРИОНОВ КУР, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ РАБОТ
Ключевые слова: антибиотики, антимикотики, токсическое действие, SPF-эмбрионы кур, предельные дозы, вирусологические работы
Резюме: Исследовали токсическое действие различных доз бензилпенициллина натриевой соли (Pen), стрептомицина сульфата (Str), и амфотерицина-В (Amf) на SPF-эмбрионы. Для каждой дозы определяли коэффициенты токсичности вида C = ef / n, где: ef - число пораженных эмбрионов; n - количество эмбрионов, использованных для испытания данной дозы. Исследовали связь значений С и испытанных величин d. Для приближения моделей связи к линейному виду, величины d представляли в логарифмической размерности (log d), а для коэффициентов С вычисляли линейные эквиваленты, используя логит-преобразование по Берксону вида f(C) = log (C / (1 - C)). Параметр lg d условно считали зависимым. Строили регрессионные модели вида lg>d = (k) х f(C) + lg d0, где <d - ожидаемая концентрация препарата для заданного f(C); k - регрессионный коэффициент; d0 - ордината линии регрессии. Определили прогнозируемые дозы соединений («Н), токсический эффект которых был ожидаем у 5 % эмбрионов, а также дозы, соответствующие нижним границам доверительных интервалов (р = 0,05) установленных величин («Н ). Соответственно препаратам, в порядке представления («Н - «Н), полученные значения составили: Pen - (2600-3900) ED, Str (1300-2000) мкг и Amf - (юЛб) ED. Изучили токсичность двух вариантов смеси, в которые исследуемые соединения вошли в указанных дозах. Токсический эффект смеси, содержащей Нр-дозы, составил 3,8 %, аналогичная оценка для смеси, содержащей H-дозы, составила 6,3 %. Для практического применения рекомендована смесь, содержащая Нр-дозы.
Введение
Развивающиеся эмбрионы кур вошли в вирусологическую практику в качестве модельных объектов в начале XX века. Считается, что оплодотворенные куриные эмбрионы впервые были применены Френсисом Роусом (Francis Peyton Rous) для выявления этиологического агента опухолей. Использование эмбрионов для детекции и культивирования различных форм вирусов многократно расширило возможности теоретической и прикладной вирусологии. При этом наиболее востребованными стали эмбрионы категории Specific Pathogen Free (SPF), в которых исключено присутствие большинства известных патогенов и антител к ним [1].
В работах по выделению полевых изо-лятов вируса всегда присутствует вероятность контаминации биоматериала бактериальной и грибковой микрофлорой. Очистка вируссодержащих образцов центрифугированием или фильтрованием не всегда может быть приемлема. Во-первых, потому что далеко не все вирусы присут-
ствуют во внеклеточном состоянии, а агрегаты инфицированных клеток имеют высокие коэффициенты седиментации и значительные размеры. Во-вторых, такие возбудители, как вирусы оспы или ларин-готрахеита птиц, по величине и массе сопоставимы с бактериями [2]. Кроме этого, концентрация вируса в полевых пробах, как правило, невелика, и агент может быть полностью утрачен при очистке биоматериала.
Одним из вариантов решения описанной проблемы является использование антибиотиков и противогрибковых средств (антимикотиков) [3-5]. При этом, учитывая динамику распада указанных соединений в процессе культивирования эмбрионов, их дозы должны быть достаточно высокими, что, очевидно, предполагает возможность проявления токсического эффекта. Однако собственно токсическое действие различных доз антибиотиков и антимикоидных соединений для СПФ-эмбрионов кур в доступной литературе не описано. Данное обстоятельство и опреде-
лило цель исследований.
Настоящая работа посвящена изучению токсического действия пенициллина, стрептомицина и амфотерицина-B для развивающихся SPF-эмбрионов кур, а также -определению допустимых доз данных соединений при использовании их в виде смеси.
Материалы и методы исследований
Эмбрионы кур. Развивающиеся эмбрионы кур категории SPF (Specific Patogen Free соответственно статье 1 Регламента ЕС No 2001/393/EG), производства компании «Valo Biomedia» (Германия). Инкубация при температуре (37,5 ± 0,5) °С и относительной влажности 50-70 %. Средний вес яйца с эмбрионом (n = 15) составил (50,6 ± 0,9) г.
Пенициллин. Бензилпенициллина натриевая соль (Benzylpenicillin sodium) -коммерческий препарат (фасовка: 1000000 ЕД во флаконе) в виде порошка для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения.
Стрептомицин. Стрептомицина сульфат (Streptomycini sulfas) - коммерческий препарат (фасовка: 1 г во флаконе) в виде порошка для приготовления раствора для внутримышечного введения.
Амфотерицин В. Амфотерицин В (Amphotericin B) - коммерческий препарат (фасовка: 50000 ЕД во флаконе). Порошок для приготовления раствора для ин-фузий.
Буферный раствор. Использовали буферный раствор следующего состава: натрия гидрофосфат (Na2HPO4, безводный) - 1,59 г, натрия дигидрофосфат (NaH2PO4, безводный) - 0,96 г, вода для инъекций - до 100 мл. Раствор стерилизовали при избыточном давлении 1 атм. Показатель рН составлял 6,6-7,0.
Приготовление растворов препаратов. Заданные дозы растворов антибиотиков и антимикотика готовили путем последовательных разведений (d) на буферном растворе (ex tempore).
Введение препаратов в эмбрионы. Использовали эмбрионы категории SPF 10-суточного срока инкубации. Каждое разведение препарата испытывали на группе соответственно промаркированных эмбрионов (n=10). Раствор вводили через перфорированное в скорлупе эмбриона отверстие на хориоаллантоисную оболочку в искусственно созданной боковой воздушной камере (эмбрионы, с присутствием трещин на скорлупе из опыта исключа-
ли). Температура вводимого раствора составляла (22-24) °С. Операцию выполняли асептически. Отверстие в скорлупе герметизировали стерильной воск-парафиновой смесью. Дополнительно, в каждом опыте, из 50-ти эмбрионов создавали контрольную группу. Контрольным эмбрионам описанным способом вводили буферный раствор.
Обработка экспериментальных данных. Использовали стандартную процедуру корреляционно-регрессионного анализа [6]. Некоторые специальные статистические приемы описаны в тексте. Вычислительные операции и графические построения выполняли с помощью приложения Microsoft Office Excel.
Результаты и обсуждение
Подопытные и контрольные эмбрионы после инокуляции растворов содержали в инкубаторе. Продолжительность опыта составляла 7 суток. Каждые сутки двукратно производили овоскопию эмбрионов. Оценивали состояние кровеносного русла и подвижность плода. Токсическим (поражающим) эффектом препарата считали гибель эмбриона или существенные нарушения развития по отношению к контролю, зафиксированные в конце опыта при вскрытии.
Подготовленные дозы препаратов испытывали параллельно. В подопытных группах эмбрионов определяли коэффициенты токсичности вида C = ef/n, где: ef - число пораженных эмбрионов; n - количество эмбрионов в группе. Провели три повторных опыта. Полученные результаты представлены в табл. 1.
Приведенные в табл. 1 данные показывают, что тестируемые препараты обладали дозозависимым токсическим эффектом. Коэффициенты токсичности эмбрионов снижались по мере уменьшения введенных доз. Для каждого препарата анализ С-коэффициентов проводили в диапазоне разведений, где, полученные в повтор-ностях, средние значения (<С) соответствовали условию 0<>C<1. Находящиеся в границах указанного диапазона «предельные» величины С = 0 или С = 1 принимали как С = 1 - 1/5n или как С = 1/5n, соответственно [6].
Далее исследовали связь значений С и испытанных величин d. Для приближения моделей связи к линейному виду, величины d представляли в логарифмической размерности (log d), а для коэффициентов С вычисляли линейные эквиваленты, ис-
Таблица 1. Оценки токсического действия испытанных доз пенициллина (Pen), стрептомицина (Str) и амфотерицина-B (Amf) для развивающихся __ SPF-эмбрионов кур_
Препарат (исходная концентрация) Номер опыта Коэффициенты т установленные соответс препа оксичности (С)*, твенно разведениям (d) ратов
(
2 4 8 16 32 64
Pen (105ED/0,2cm3) 1 10/10 8/10 3/9 2/9 0/9 0/10
2 10/10 9/10 5/10 3/10 1/10 0/6
3 10/10 6/10 4/10 3/10 0/10 0/6
Str (105мкг/0,2см3) 1 10/10 10/10 8/10 5/10 3/10 1/10
2 10/10 9/10 8/10 3/10 5/10 0/9
3 н.о. 9/10 4/10 5/10 1/10 0/10
Amf (103ED/0,2cm3) 1 9/10 7/10 7/10 4/10 2/8 0/10
2 9/10 8/10 5/8 5/9 4/10 1/10
3 10/10 8/10 7/10 6/10 2/8 0/10
Примечание: * - С = еГп, где: еГ - число поврежденных эмбрионов; п - количество эмбрионов, которым была введена заданная доза препарата в виде разведения ё.
пользуя логит-преобразование по Берксо-ну [7]: f(C) = log (C/(1 - C)).
Параметр lg d условно считали зависимым. Строили регрессионные модели вида lg>d = (k) х f(C) + lgd0, где <d - ожидаемая концентрация препарата для заданного f(C); k - регрессионный коэффициент; d0 - ордината линии регрессии. Соотношение полученных в трех повторностях показателей log d и f(C), а также построенные соответственно препаратам регрессионные модели представлены на рис. 1.
Данные, приведенные на диаграмме, иллюстрируют тесную связь показателей lgd и f(C), установленные у всех тестируемых препаратов. Коэффициенты корреляции указанных величин составили: RPen = (0,920 ± 0,079); R.tr = (- 0,919 ± 0,081); RAmf = (- 0,931 ± 0,066). Построенные регрессионные модели имели вид:
lg "dpen = (- 0,424 ± 0,050) х f(C) + (0,869 ± 0,046);еП
lg"dStr = (- 0,421 ± 0,050) х f(C) + (1,161 ± 0,047);
lg»dAmf = (- 0,562 ± 0,055) х f(C) + (1,077 ± 0,047) m
Все модели показали достаточно высокие оценки адекватности (R2>0,84). Это означало, что не менее 84 % экспериментально полученных значений f(C) соответствуют условиям построенных моделей.
Используя построенные уравнения, для каждого препарата определили концентрацию («H), при которой ожидаемый коэффициент токсичности составит прогно-
зируемую величину «С = 0,05. Кроме этого, учитывали обусловленный моделью доверительный интервал (р = 0,05), и вычисляли наименьшую вероятную оценку («Нр). Полученные величины приведены в табл. 2.
На основании представленных в табл. 2 величин были приготовлены два варианта смеси, включающие исследуемые препараты в концентрациях «Н и «Нр. Смеси (маркированные как «Н и «Нр) были испытаны на эмбрионах по аналогии с составляющими их препаратами. Всего было проведено 3 опыта. Полученные результаты представлены в таблице 3.
Из данных табл. 3 следует, что токсический эффект испытанных вариантов смеси пенициллина, стрептомицина и амфотерицина-В был близок к ожидаемому. Вариант смеси «Н обусловил средний коэффициент токсичности С = 5/80, т. е. ю 6,3 %, вариант «Нр продемонстрировал величину С = 3/80, т. е. ю 3,8 %.
Смесь равных пропорций пенициллина и стрептомицина как эффективного антибактериального средства широко известна и выпускается в виде зарегистрированных коммерческих препаратов [8, 9]. Эффективное действие смеси указанных веществ объясняется их взаимодополняющими свойствами [10]. Пенициллин нарушает процесс построения клеточной стенки бактерий. Стрептомицин подавляет синтез белка в бактериальных рибосомах [11]. При этом смешанный препарат сум-
Pen (105ED/0,2cm3)
2,5
Str (105мкг/0,2см3)
2,5 lg d 2 lg"d = (-0,420)*f(C) + 1,161; R2 = 0,844
- _ ♦
2 -i ° 0 2
0 ■
Amf (103ЕБ/0,2см3)
2,5
Рядом с обозначением препарата, в скобках, дана его исходная концентрация. Приведены величины ^ d (▲), для которых были установлена: эквиваленты f(C) = lg (C/(1 - С), где: C - коэффициент токсичности вида С = ef/n, где: ef - число пораженных эмбрионов; п -количество эмбрионов, использованных для испытания данного разведения препарата. Показаны линии регрессии, построенные по соответствующим моделям вида = (к) х f(C) + dо, где: - ожидаемая величина разведения для заданного А(С); к -
регрессионный коэффициент; dо - ордината регрессии при А(С) = 0. Пунктиром отмечены границы доверительных интервалов (р = 0,05) регрессий. Указаны коэффициенты адекватности моделей (Я2). Ось ординат пересекает ось абсцисс в точке, соответствующей
5 % эффекту, т. е. f (С = 0,05) = (- 1,279).
Рис. 1. Концентрации (разведения, lg d) пенициллина (Pen), стрептомицина (Str) и амфотерицина В (Amf) соответственно эквивалентам коэффициентов токсичности (ОД) для SPF-эмбрионов кур
марно расширяет спектр видов чувствительных бактерий. Амфотерицин-В является активным фунгицидом из группы по-леиновых соединений. Препарат взаимодействует со стеролами цитоплазматиче-
ской мембраны грибов и необратимо нарушает ее структуру [10].
Наиболее важный этап проведенной работы состоял в оценке параметров в системах «доза-эффект», построенных для
Таблица 2. Прогнозируемые дозы пенициллина (Pen), стрептомицина (Str) и амфотерицина-В (Amf), при которых ожидаемый коэффициент токсичности для развивающихся SPF-эмбрионов кур составит величину _С = 0,05_
Расчетные величины Препарат
Pen Str Amf
Логарифмическая величина разведения
препарата по регрессионному уравнению, ¡я "а = (к) х (- 1,279) + 1,411 1,698 1,798
Доверительный интервал (р = 0,05) регрессии, ± Ир, ¡я 0,170 0,168 0,184
Доза на эмбрион, в единицах действия ~ 3900 ~ 2000 ~ 16 ED
препарата, "Н = апШя (¡я Б - ¡я "а) ED мкг
Наименьшая вероятная доза на эмбрион, в
единицах действия препарата по границе ~ 2600 ~1 300 ~ 10 ED
доверительного интервала регрессии "Нр = алШя (1я Б - (¡я "а + Ир) ED мкг
Примечание: * - расчет выполнен для линейного эквивалента f (C = 0,05) = lg (0,05 / (1 - 0,05)) = (- 1,279).
Таблица 3. Токсичность двух вариантов смеси пенициллина (Реп), стрептомицина ^г) и амфотерицина-В (Лш1) для развивающихся SPF-__эмбрионов кур_
Номер опыта Коэффициенты токсичности (С) соответственно вариантов смесей ("Н и "Нр)*, содержащих заданные дозы тестируемых препаратов
"Н "Hp
Pen Str Amf Pen Str Amf
3900 ED 2000 мкг 16 ED 2600 ED 1300 мкг 10 ED
1 2/30 2/30
2 1/30 0/30
3 2/20 1/20
Примечание: * - обозначения даны в таблицах 1 и 2
изучаемых соединений, что является основным методом токсикологических исследований [12, 13].
На основании данных табл. 1 приняли, что положение С-коэффициентов соответственно положение С-коэффициентов соответственно ^ d имеет вид близкий к S-образной симметричной кривой, т. е. распределение показателей токсического эффекта по параметру логарифма дозы, может быть рассмотрено как нормальное. На этом основании при проведении дальнейшего анализа С-коэффициенты преобразовывали в логит-эквиваленты (^С)). Это преобразование позволило получить линейные регрессионные модели и вычислить прогнозируемые дозы препаратов «Н и «Нр, токсический эффект которых должен составить приближенно 5 %.
Следующим этапом работы было создание смеси, сочетающей в себе антибак-
териальные и антимикоидное действие. Токсическое действие двух вариантов смеси, в которых препараты были соединены в дозах «Нр и «Н, составило от 3,8 %, до 6,3 %, считали удовлетворительным. В перерасчете на грамм массы яйца с эмбрионом, концентрации соединений, в указанных смесях приближенно составили: пенициллина - 50-80 ЕД/г; стрептомицина - 2540 мкг/г; амфотерицина-В - 0,2-0,3 ЕД/г.
В опубликованных описаниях процедуры расплодок на SPF-эмбрионах полевых образцов различных видов вирусов, рекомендуемые дозы антибиотиков составляют (в пересчете на эмбрион весом 50 г): пенициллин - в аллантоисную полость 20-40 ЕД/г [3] или 40 ЕД/г [5], на хориоалланто-исную оболочку 4 мкг/г [4], что соответствует 6,7 ЕД/г [13]; стрептомицин - в ал-лантоисную полость 20-40 мкг/г [3] или 40 мкг/г [5], на хориоаллантоисную оболоч-
ку 4 мкг/г [4]. В случае высокой бактериальной осемененности биологических образцов, авторы рекомендуют пятикратно увеличить дозы антибиотиков [5]. Однако обоснования величин рекомендуемых доз препаратов и данных об их токсическом действии на эмбрионы в рассмотренных публикациях не приведено.
Из антимикоидных препаратов упомянут только нистатин в дозе до 4 ЕД/г [5]. Результатов воздействия амфотерицина-В на СПФ-эмбрионы в доступных источниках не встречено.
В качестве аналогии из медицинских источников добавим, что при пересчете на грамм массы тела, разовые инъекционные дозы для детей составляют: пенициллина -до 66,7 ЕД/г; стрептомицина - до 10 мкг/г; амфотерицина-В (внутривенное введение) - до 0,4 ЕД/г [10].
Полученные в ходе настоящих исследований результаты в основном не противоречат опубликованным данным, за исключением рекомендации о пятикратном увеличении доз антибиотиков [5].
Заключение
В заключение остановимся на некоторых практических предложениях:
- модели связи между испытанными дозами и коэффициентами токсичности, построенные для бензилпенициллина натриевой соли, стрептомицина сульфата и амфотерицина-В, могут быть использованы при работе с данными соединениями на SPF-эмбрионах кур;
- при выполнении работ, связанных с расплодками полевых образцов вируса, дозы изученных препаратов, соответствующие порогу «Нр, могут быть условно отнесены к категории «NOAEL» - no-observed-adverse-effect level, т. е. к наибольшим дозам, при воздействии которых токсический эффект рассматривается как незначимый (допустимый) [15, 16].
- указанные соединения, введенные в эмбрион в виде смеси в дозах, соответствующих «Нр, не обладают значимым отрицательным синергизмом. Токсический эффект смеси не превышает 5 %. На практике данный показатель может быть принят как контролируемая величина.
Библиографический список:
1. Правовое регулирование производства СПФ
- яйца в Германии [Электронный ресурс]: «Deutsch-Russischer agrarpolitischer Dialog» Kooperationsprojekt des Bundesministeriums fr Ern hrung und Landwirtschaft der Bundesrepublik Deutschland, Август 2015 -Режим доступа: https:// agrardialog.ru/files/prints/pravovoe_regulirovanie_ proizvodstva_spf_yaytsa_v_germanii.pdf
2. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц /
под ред. Б. У Кэлнека; пер. с англ. И. Григорьева, С. Дорош, Н. Хрущева [и др.]. - М.: АКВАРИУМ БУК, 2003. - 1232 с.
3. OIE. Terrestrial Manual 2018. Chapter 3.3.2. Avian
infectious bronchitis (NB: Version adopted in May 2018), s. 796-809.
4. OIE. Terrestrial Manual 2018. Chapter 3.3.12. Infectious bursal disease (Gumboro disease) (NB: Version adopted in May 2016), s. 931-951.
5. OIE. Terrestrial Manual 2018. Chapter 3.3.14. Newcastle disease (infection with Newcastle disease virus) (NB: Version adopted in May 2012), s. 964-983.
6. Урбах В. Ю. Статистический анализ в биологиче-
ских и медицинских исследованиях / В. Ю. Урбах.
- М.: Медицина, 1975. - 297 с.
7. Ван дер Варден В. Л. Математическая статистика /
В. Л. Ван дер Варден. - М.: Иностранная литература, 1960. - 435 с.
8. paneco-ltd [Электронный ресурс]: - Режим доступа:
http://www.paneco-ltd.ru/ru/0/pitatelnyie-sredyi-i-reagentyi-dlya-kultur-kletok/antibiotiki.html
9. biolot [электронный ресурс]: - Режим доступа:
http://www.biolot.ru/catalogue/Antibiotics/
10. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / ред. Л. С. Страчунский, Ю. Б. Белоусов, С. Н. Козлов. - НИИАХ СИГМА, 2000-2007. - 420 с.
11. Каркищенко В. Н. Фармакологические основы терапии / В. Н. Каркищенко, Н. Н. Каркищенко, Е. Б. Шустов // Тезаурус: Руководство для врачей и студентов. 3-е изд., нов. ред. - М., СПб: Айсинг, 2018. - 288 с.
12. Куценко С. А. Основы токсикологии / С. А. Ку-ценко. - СПб., 2002. - 295 с.
13. Руководство по доклиническим исследованиям безопасности в целях проведения клинических исследований и регистрации лекарственных препаратов [Электронный ресурс]: Утверждено Решением Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26 ноября 2019 г. №202 - Режим доступа: https://www.alta.ru/tamdoc/19kr0202/
14. Методы определения активности антибиотиков [Электронный ресурс] - Режим доступа: https://vuzlit.ru/880390/farmatsevticheskiy_analiz_ nekotoryh_grupp_antibiotikov
15. Engelhardt J. A. The no-observed-adverse-effect-level in drug safety evaluations: Use, issues, and definition(s) / J. A. Engelhardt, M. A. // Dorato Regul Toxicol Pharmacol. - August 2005. - 42 (3). - рр. 265-274.
16. No-observed-adverse-effect level [Электронный журнал]: - Режим доступа: https://wiki2.org/en/No-observed-adverse-effect_level
1. Pravovoe regulirovanie proizvodstva SPF - yaytsa v Germanii [Legal regulation of the production of SPF - eggs in Germany] [Elektronnyiy resurs]: «Deutsch-Russischer agrarpolitischer Dialog» Kooperationsprojekt des Bundesministeriums für Ern hrung und Landwirtschaft der Bundesrepublik
Deutschland, Август 2015 -Режим доступа: https:// agrardialog.ru/files/prints/pravovoe_regulirovanie_ proizvodstva_spf_yaytsa_v_germanii.pdf 2. Bolezni domashnih i selskohozyaystvennyih ptits [Diseases of domestic and farm birds] / pod red. B. U. Kelneka; per. s angl. I. Grigoreva, S. Dorosh, N.
Hruscheva [i dr.]. - M.: AKVARIUM BUK, 2003. -1232 s. 3-5. Vide supra.
6. Urbah V Yu. Statisticheskiy analiz v biologicheskih i
meditsinskih issledovaniyah [Statistical analysis in biological and medical research] / V Yu. Urbah. - M.: Meditsina, 1975. - 297 s.
7. Van der Varden V L. Matematicheskaya statistika
[Mathematical statistics] / V. L. Van der Varden. - M.: Inostrannaya literatura, 1960. - 435 s.
8. paneco-ltd [Elektronnyiy resurs]: - Rezhim dostupa:
http://www.paneco-ltd.ru/raZ0/pitatelnyie-sredyi-i-reagentyi-dlya-kultur-kletok/antibiotiki.html
9. biolot [elektronnyiy resurs]: - Rezhim dostupa: http://
www.biolot.ru/catalogue/Antibiotics/
10. Prakticheskoe rukovodstvo po antiinfektsionnoy himioterapii [A practical guide to anti-infective chemotherapy] / red. L. S. Strachunskiy, Yu. B. Belousov, S. N. Kozlov. - NIIAH SIGMA, 2000-2007. - 420 s.
11. Karkischenko V N. Farmakologicheskie osnovyi terapii [Pharmacological bases of therapy] / V. N.
Karkischenko, N. N. Karkischenko, E. B. Shustov // Tezaurus: Rukovodstvo dlya vrachey i studentov. 3-e izd., nov. red. - M., SPb: Aysing, 2018. - 288 s.
12. Kutsenko S. A. Osnovyi toksikologii [Fundamentals of toxicology] / S. A. Kutsenko. - SPb., 2002. - 295 s.
13. Rukovodstvo po doklinicheskim issledovaniyam bezopasnosti v tselyah provedeniya klinicheskih issledovaniy i registratsii lekarstvennyih preparatov [Guidelines for preclinical safety studies for the purpose of conducting clinical trials and registration of medicinal products] [Elektronnyiy resurs]: Utverzhdeno Resheniem Kollegii Evraziyskoy ekonomicheskoy komissii ot 26 noyabrya 2019 g. #202 - Rezhim dostupa: https://www.alta.ru/ tamdoc/19kr0202/
14. Metodyi opredeleniya aktivnosti antibiotikov [Methods for determining the activity of antibiotics] [Elektronnyiy resurs] - Rezhim dostupa: https:// vuzlit.ru/880390/farmatsevticheskiy_analiz_ nekotoryh_grupp_antibiotikov
15-16. Vide supra.
DOI: 10.25690/VETPAT.2020.51.32.005
Pyatkina A. A., Moroz N. V., Zybina T. N., Kulakov V. Yu., Dolgova M. A. LIMITING DOSES OF PENICILLIN, STREPTOMYCIN AND AMPHOTHERICIN-B FOR SPF-CHICKEN EMBRYOS RECOMMENDED FOR VIRUSOLOGICAL WORKS
Key words: antibiotics, antimycotics, toxic effect, SPF-chicken embryos, maximum doses, virological works.
Abstract: The toxic effect of various doses of benzylpenicillin sodium salt (Pen), streptomycin sulfate (Str), and amphotericin-B (Amf) on SPF embryos was studied. For each dose, the toxicity coefficients of the form C=ef/n were determined, where: ef is the number of affected embryos; n is the number of embryos used to test a given dose. The relationship between the C values and the tested d values was investigated. To approximate the relationship models to a linear form, the d values were presented in logarithmic dimensions (log d), and linear equivalents were calculated for the C coefficients using the Berkson logit transform of the form f(C) = log (C / (1-C)). The lg d parameter was conditionally considered dependent. Regression models of the form lg'd=(k)xf(C)+lgd0 were built, where 'd -expected concentration of the drug for a given f (C); k - regression coefficient; d0 - ordinate of the regression line. The predicted doses of the compounds ("H), the toxic effect of which was expected in 5% of the embryos, and the doses corresponding to the lower limits of the confidence intervals (p = 0.05) of the established values ("Нр) were determined. According to the preparations, in the order ("Нр -" н), the obtained values were: Pen - (2600-3900) ED, Str (1300-2000) |ig and Amf - (10-16) ED. We studied the toxicity of two variants of the mixture, in which the test compounds were included in the indicated doses. The toxic effect of the mixture containing the Нр-dose was 3.8%, a similar estimate for the mixture containing the H-dose was 6.3%. For practical use, a mixture containing Нр-doses is recommended.
Сведения об авторах:
Пяткина Алла Александровна, канд. биол. наук, старший научный сотрудник лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (919) 01082-29; e-mail: pyatkina@arriah.ru
Мороз Наталья Владимировна, канд. вет. наук, заведующая лабораторией профилактики болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (900) 480-77-96; e-mail: moroz@arriah.ru
Зыбина Татьяна Николаевна, ведущий биолог лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (904) 593-77-08; e-mail: zybina@arriah.ru
Кулаков Владимир Юрьевич, канд. вет. наук, ведущий научный сотрудник лаборато-
рии профилактики болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (915) 79302-62; e-mail: kulakov@arriah.ru
Долгова Мария Алексеевна, канд. биол. наук, младший научный сотрудник лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (905) 14215-61; e-mail: dolgova@arriah.ru
Author Affiliation:
Pyatkina Alla Anatol'evna, Ph. D. in Biology, Senior Researcher of the Laboratory for Prevention of Bird Diseases of the Federal State Budgetary Institution (FSBSI) «All-Russian Research Institute for the Protection of Animals»; microdistrict Yuryevets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (919) 010-82-29; e-mail: pyatkina@arriah.ru
Moroz Natal'ya Vladimirovna, Ph. D. in Veterinary Medicine, Head of the Laboratory for the Prevention of Bird Diseases of the Federal State Budgetary Institution (FSBSI) «All-Russian Research Institute for the Protection of Animals»; microdistrict Yuryevets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (900) 480-77-96; e-mail: moroz@arriah.ru
Zybina Tat'yana Nikolaevna, Leading Biologist of the Laboratory for Prevention of Bird Diseases of the Federal State Budgetary Institution (FSBSI) «All-Russian Research Institute for the Protection of Animals»; microdistrict Yuryevets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (904) 593-77-08; e-mail: zybina@arriah.ru
Kulakov Vladimir Yur'evich, Ph. D. in Veterinary Medicine, Leading Researcher of the Laboratory for Prevention of Bird Diseases of the Federal State Budgetary Institution (FSBSI) «All-Russian Research Institute for the Protection of Animals»; microdistrict Yuryevets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (915) 793-02-62; e-mail: kulakov@arriah.ru
Dolgova Maria Alekseevna, Ph. D. in Biology, Junior Researcher of the Laboratory for Prevention of Bird Diseases of the Federal State Budgetary Institution (FSBSI) «All-Russian Research Institute for Animal Protection»; microdistrict Yuryevets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (905) 142-15-61; e-mail: dolgova@arriah.ru
DOI: 10.25690ZVETPAT.2020.34.74.004 УДК: 619:616 Никанорова А. М.
АНАЛИТИЧЕСКОЕ МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ЧИСЛЕННОСТИ ПОПУЛЯЦИИ КОМАРОВ КАЛУЖСКОЙ ОБЛАСТИ
Ключевые слова: комары, аналитическое математическое моделирование, трансмиссивные зо-онозы, Калужская область.
Резюме: Комары являются кровососущими временными паразитам, участвующими в циркуляции возбудителей многих опасных трансмиссивных инфекций и инвазий. Распространение болезней и их передача зависит от климата местности, скорости передачи возбудителей, динамики численности популяций. Существует много методов построения моделей как биологических объектов, так и непосредственно инфекций и инвазий. В настоящей статье рассмотрен вопрос построения аналитической математической модели численности популяции комаров в зависимости от влияния трех факторов: среднемесячной годовой температуры, среднемесячного количества осадков за год и среднего атмосферного давления за год. Полученная аналитическая мо-
