CC BY
0УДК 616.831-006.484
ПОТЕНЦИАЛ МЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ Е1И2 В КАЧЕСТВЕ ТАРГЕТНОГО ГЕНА ДЛЯ РАЗРАБОТКИ НОВЫХ ПОДХОДОВ
К ТЕРАПИИ ГЛИОБЛАСТОМЫ С ПОМОЩЬЮ РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ
00! 10.24412/01-37228-2024-157-159
А. В. Циммерман1, М. Ю. Кордюкова2, М. А. Сорокина3, Д. Ю. Травникова3, В. В. Белоусов2, Т. О. Абакумова3
'Факультет фундаментальной медицины МГУ им. М. В. Ломоносова 2ФГБУ «Федеральный центр мозга и нейротехнологий» ФМБА России 'Российский национальный исследовательский медицинский университет
имени Н. И. Пирогова, Москва, Россия E-mail-.anita2420910@icloud.com
Аннотация. В данной работе была подобрана мишень для таргетной терапии глиобластомы, проведен синтез и дизайн 81К.МА к выбранному гену (EZH2), осуществлен нокдаун гена-мишени путем РНК-интерференции.
Ключевые слова: глиобластома, таргетная терапия, РНК-интерференция, 81ЯМА, EZH2.
Глиобластома является одной из наиболее агрессивных опухолей головного мозга с высокой вероятностью рецидива. Первичной линией терапии глиобластомы является максимальная резекция с последующей радиотерапией и химиотерапией те-мозоломидом, однако опухоли часто развивают резистентность, чем и объясняется рецидив заболевания. Нами была поставлена цель поиска генов-мишеней, ингибирование которых поможет улучшить терапию глиом. Среди перспективных мишеней был выделен ген метилтрансферазы EZH2 [1], эпигенетического модулятора хроматина, экспрессия которого повышена в клетках глиобластомы [2].
В нашей работе для ингибирования мишеней мы используем трансфекцию малых интерферирующих РНК (миРНК). На сегодняшний момент миРНК зарекомендовали себя как эффективный метод ингибирования, и препараты на их основе уже используются
в клинике [2; 3], а также хорошо показали себя в доклинических исследованиях в терапии других опухолей [4].
Нами был проведён анализ данных транскриптома клеточных линий глиобластомы, полученных от пациентов. Для подтверждения результатов анализа был оценен уровень экспрессии EZH2 в первичных культурах от пациентов-доноров по сравнению с контролем (астроцитами, фибробластами) методом ПЦР в реальном времени (rt-PCR). Был проведён дизайн и синтез различных миР-НК к EZH2 для ингибирования гена путём РНК-интерференции, трансфекция клеток глиомы с помощью липофектамина. Эффективность ингибирования была оценена с помощью метода rt-PCR c отобранными праймерами к EZH2.
На основе данных транскриптома различных клеточных линии первичных культур были выбраны линии пациентов с повышенной экспрессией EZH2 для дальнейших исследований. Методом rt-PCR было показано, что уровень мРНК EZH2 повышается более чем в 7-20 раз относительно контроля (астроциты, фибробласты), что согласуется с данными, полученными при анализе транскриптома. На клеточной линии глиомы U87 было продемонстрировано, что инкубация клеток глиобластомы с выбранными миРНК в течение 72 часов позволяет эффективно снизить уровень мРНК EZH2 по сравнению с контролем. Была выбрана последовательность миР-НК с наиболее эффективными ингибирующими свойствами.
Полученные данные подтверждают перспективность использования EZH2 в качестве мишени для терапии. Суммируя, ингибирова-ние EZH2 может быть эффективным способом борьбы с глиобласто-мой, особенно в сочетании с другими лекарственными препаратами, что открывает новые возможности для комбинированной терапии.
Работа была выполнена при поддержке гранта РНФ 22-75-10151.
Список литературы
1. Stitzlein., et al. Current and future therapeutic strategies for highgrade gliomas leveraging the interplay between epigenetic regulators and kinase signaling networks // Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. — 2024. — No 43. — P. 12.
2. Crea F., Hurt E. M. & Farrar W. L. Clinical significance of Polycomb gene expression in brain tumors // Mol Cancern — 2010. — No 9. — P. 265.
3. Khaitov M., Nikonova A., Kofiadi I., et al. Treatment of COVID-19 patients with a SARS-CoV-2-specific siRNA-peptide dendrimer formulation //Allergy. — 2023. — No 78. — P. 1639-1653.
4. Hoy S. M. Patisiran: First Global Approval // Drugs. — 2018. — No 78. — P. 1625-1631.
5. Prikazchikova T. A., Abakumova T. O., Sergeeva O. V., et al. Design and Validation of siRNA Targeting Gankyrin in the Murine Liver // Russ J Bioorg Chem. — 2021. — No 47. — P. 441-446.
THE POTENTIAL OF EZH2 METHYLTRANSFERASE AS A TARGETED GENE FOR THE DEVELOPMENT OF NEW APPROACHES TO GLIOBLASTOMA THERAPY USING RNA INTERFERENCE
Abstract. In this work, a target was selected for targeted therapy of glioblastoma, the synthesis and design of siRNA to the selected gene (EZH2) was carried out, and the knockdown of the target gene was done by RNA interference.
Key words: glioblastoma, targeted therapy, RNA interference, siRNA, EZH2.
