Поствакцинальный иммунитет у песцов, вакцинированных против сальмонеллеза

Окулова Ираида Ивановна; Домский Игорь Александрович; Березина Юлия Анатольевна; Бельтюкова Зинаида Николаевна; Кошурникова Мария Александровна

Труды Карельского научного центра РАН № 3. 2020. С. 95-105

Опубликована в онлайн-версии в январе 2020 г. DOI: 10.17076^1126

УДК619.615: 371/075.5/

ПОСТВАКЦИНАЛЬНЫЙ ИММУНИТЕТ У ПЕСЦОВ, ВАКЦИНИРОВАННЫХ ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА

И. И. Окулова, И. А. Домский, Ю. А. Березина, З. Н. Бельтюкова, М. А. Кошурникова

Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства им. проф. Б. М. Житкова, Киров, Россия

Борьба с сальмонеллезом всегда была важной и актуальной задачей, а в последнее время сальмонеллезная инфекция среди сельскохозяйственных животных, птицы и пушных зверей широко распространена и имеет тенденцию к дальнейшему росту. Помимо этого переболевшие сальмонеллезом звери в 85 % случаев остаются бактерионосителями. Вспышки сальмонеллеза у пушных зверей регистрируют с начала апреля до конца сентября, на некоторых фермах смертность животных достигает 30 %. Указанные обстоятельства обеспечивают длительное существование эпизоотического очага сальмонеллезной инфекции. В связи с этим большое значение имеют мероприятия, направленные на своевременную специфическую профилактику, снижение и ликвидацию потерь животных от сальмонеллеза. Используемые до последнего времени инактивированные вакцины против сальмонеллеза по результатам многолетнего их применения оказались недостаточно эффективными. При вакцинации происходят сложные структурные и функциональные изменения в органах иммунной системы животных. Многократное введение препарата согласно соответствующим наставлениям по применению делает процесс иммунизации длительным и трудоемким. В работе использованы песцы клеточного разведения, привитые инактивированной вакциной. Животных опытной группы вакцинировали ассоциированной инактивированной вакциной против колибакте-риоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза и протейных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных и пушных зверей, изготовленной ФГУП «Покровский завод биопрепаратов» и ООО «Агровет» (вакцина ОКЗ ТУ 9384-047-00008064-99). Песцы были привиты подкожно двукратно с интервалом 14 дней согласно наставлению по применению препарата. Животных контрольной группы не вакцинировали. После планового убоя песцов клеточного разведения из каждой группы брали по пять зверей на 7, 14, 21 и 28-й день после вакцинации. Для гистологического исследования брали следующие органы: подчелюстные лимфатические узлы, селезенку, которые фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина. Оценку клеточного иммунитета проводили с помощью реакций Е- и ЕАС-розеткообразования, опсоно-фагоцитарной реакции, реакции агглютинации. При гистологическом исследовании селезенки песцов после вакцинации на срезе хорошо различимы красная и белая пульпа. При гистологическом изучении нижнечелюстных лимфатических узлов у песцов в корковом слое хорошо просматривались первичные и вторичные лим-фоидные узелки. Мякотные шнуры за счет скопления лимфоцитов утолщены. В результате иммунизации песцов против сальмонеллеза инактивированной вакциной в периферических органах иммунитета происходит пролиферация и дифференци-ровка иммунокомпетентных клеток, характеризующаяся увеличением иммунобла-

стов и зрелых плазмоцитов, характерных как для клеточного, так и для гуморального иммунного ответа.

Ключевые слова: инактивированная вакцина; ОФР; Е- и ЕАС-розетко-образование; подчелюстные лимфатические узлы; селезенка; иммунобласты; про-плазмоциты; плазмоциты.

I. I. Okulova, I. A. Domsky, Yu. A. Berezina, Z. N. Bel'tyukova, M. A. Koshurnikova. POST-VACCINATION IMMUNITY IN ARCTIC FOXES VACCINATED AGAINST SALMONELLA

Combating salmonellosis has always been an important task. This infection has been widespread among farm and fur animals, as well as poultry, and tends to be on a rise lately. Furthermore, 85 % of animals continue to carry the bacteria after recovery. Salmonellosis outbreaks are registered among fur animals from early April to late September. In some farms, mortality is up to 30 %. As a result, epizootic hotbeds of salmonella infection are persistent. It is therefore important to take timely and specific actions to prevent, reduce and eliminate animal losses to salmonellosis. The inactivated salmonellosis vaccines used until lately proved to be not very effective. Vaccination of animals induces complex structural and functional changes in the immune system organs. Repeated administration of the drug, as instructed, turns immunization into a lengthy and laborious process. This study was carried out with cage-reared Arctic foxes treated with inactivated vaccine. Animals in the experimental group were vaccinated with an associated inactivated vaccine against colibacillosis, salmonella, klebsiella and protozoa infections manufactured by the Pokrovsky Biologics Plant and LLC AgroVet (vaccine OKZ TU-9384-047-00008064-99). The animals were vaccinated subcutaneously twice with an interval of 14 days according to the instruction for the drug. Animals in the control group were not vaccinated. After the scheduled slaughter of cage-reared Arctic foxes, 5 animals from each group in their 7th, 14th, 21st, and 28th days after vaccination were taken. Their spleens and submandibular lymph nodes were extracted for histological examination and fixed in 10% aqueous solution of neutral formalin. Cellular immunity was assessed using opsonophagocytic assay (OPA), E- and EAC-rosette formation, and agglutination test. Morphological and morphometric measurements of the peripheral immune organs were taken. Spleen tissue sections from vaccinated Arctic foxes had red and white pulp clearly visible during histological examination. Histological examination of mandibular lymph nodes of the Arctic foxes revealed primary and secondary lymphoid nodules in the cortical layer. Medullary cords are thickened due to the accumulation of lymphocytes. Immunization of Arctic foxes with inactivated vaccine against salmonellosis results in the proliferation and differentiation of immunocompetent cells in peripheral immune organs, which involves an increase in the number of immunoblasts and mature plasmo-cytes. This change is characteristic of both cellular and humoral immune response.

Keywords: inactivated vaccine; OPA; E- and EAC-rosette formation; submandibular lymph nodes; spleen; immunoblasts; proplasmocytes; plasmocytes.

Введение

В настоящее время в звероводческих хозяйствах ежегодно проводятся плановые профилактические мероприятия по формированию у животных специфического иммунитета к актуальным для данной местности инфекционным заболеваниям. При вакцинации животных в организме происходят сложные структурные и функциональные изменения в органах иммунной системы [Домский, Кульминский,1997; Домский, 2002]. Используемые до последнего времени инактивированные вакцины против сальмонеллеза по результатам многолетнего их

применения оказались недостаточно эффективными [Макаров и др., 1994] из-за деградации антигенных свойств под влиянием физико-химических воздействий на микробную клетку в процессе инактивации, ограниченной циркуляции антигена в организме и, как следствие, слабого и недостаточного стимулирования иммунной системы в процессе иммуногенеза [Матвиенко, 1986]. Периферические органы обеспечивают процессы антигензависимой пролиферации и дифференцировки клеток, мигрирующих из центральных органов, где они ранее приобрели специфические рецепторы к данному антигену. Для обеспечения контакта с антигенами

эти органы расположены на пути их поступления через лимфу или кровь [Носсел, 1973; Бородин, 1987]. После иммунизации в организме происходит поэтапное включение всех фаз иммунного ответа. Возникает ряд иммунных процессов, начиная с опсоно-фагоцитарной реакции (ОФР), как показателя естественной резистентности, активации Т-, а затем и В-лимфоцитов и нарастания титра антител, с которыми связывают поствакцинальный иммунитет [Fioretti, 1961; Ба-туев, 1979; Першин, 1980].

Таким образом, оценка состояния органов иммунной системы после иммунизации заключается в выявлении специфических иммунных процессов, происходящих в организме животного после введения антигенов. При этом важно оценить качество вакцин и способов их применения с точки зрения иммунологической эффективности.

Основная цель исследования - морфологические особенности органов иммунной системы у песцов, вакцинированных против сальмо-неллеза.

Материалы и методы

Исследование проведено в лаборатории ветеринарии ФГБНУ ВНИИОЗ им проф. Б. М. Житкова, ООО Племзверохозяйство «Вятка». В работе использовали молодняк песцов (Aloplex lagopus) в возрасте 60 дней. Было сформировано две группы: контрольная (n=100) и опытная (n=100).

Животных опытной группы вакцинировали ассоциированной инактивированной вакциной против колибактериоза, сальмонел-леза, клебсиеллеза и протейных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных и пушных зверей клеточного содержания, изготовленной ФГУП «Покровский завод биопрепаратов» и ООО «Агровет» (вакцина ОКЗ ТУ-9384-047-00008064-99). Вакцину применяли на молодняке песцов согласно наставлению по применению. Песцы в возрасте шестидесяти дней были иммунизированы двукратно с интервалом 14 дней подкожно в дозе 0,3 мл. Как правило, болезненности, воспаления, повышения температуры на месте введения препарата не отмечалось. За привитыми животными наблюдали в течение месяца, за весь этот период у них не было отмечено отказа от корма, угнетения, заболевания и падежа.

Формирование поствакцинального иммунитета у песцов оценивали с помощью ряда методик.

Клеточный иммунитет. Оценку клеточного иммунитета проводили с помощью ОФР, реак-

ций Е- и ЕАС-розеткообразования [Bianco et al., 1970; Jondall et al., 1972].

Опсоно-фагоцитарная реакция. ОФР

ставили по А. С. Лабинской [1978]. Параллельно проводили подсчет общего количества лейкоцитов и лимфоцитов. Оценка поствакцинального иммунитета при помощи реакций розеткообразования имеет большое научное и практическое значение. Эти реакции способны в достаточно короткие сроки и без больших затрат дать возможность представить картину формирования иммунитета и его напряженности у вакцинированных животных. При постановке ОФР использовали вирулентный полевой штамм Sal. typhimurium, что выгодно охарактеризовало специфичность и направленность выявленных изменений. Клеточная иммунная реакция представляет собой образование ретикулоэндотелиальной системой в ответ на введение антигена мелких долго-живущих лейкоцитов - сенсибилизированных лимфоцитов, которые принимают активное участие в нейтрализации болезнетворного антигена. Приобретение специфического активного иммунитета сопровождается повышением фагоцитарной активности лейкоцитов. Явление фагоцитоза филогенетически является одним из защитных механизмов животных и человека и характеризующим его иммунную реакцию. Реакцию ставили по общепринятой методике, для оценки реакции использовали числовой показатель Штритера, представляющий собой сумму произведений, полученных в результате перемножения количества лейкоцитов на число соответствующих их оценок фагоцитоза, характеризующих его интенсивность. Поэтому полученные результаты можно рассматривать как специфические показатели, характеризующие состояние вакцинированных зверей.

Реакция агглютинации (РА). Исследования гуморального иммунитета проводили с помощью РА к возбудителям сальмонеллеза [по: Антонов, Блинова, 1971]. В качестве антигена для постановки РА использовали живые гомологические штаммы сальмонелл, выращенные на мясо-пептонном агаре в течение 20 часов и смытые физраствором. Антитела играют основную роль в иммунитете потому, что являются молекулами-эффекторами гуморального иммунитета. Также они участвуют в распознавании чужеродных молекул, локализуясь на внешней стороне мембраны лимфоид-ных и фагоцитирующих клеток. Результаты РА представлены в виде среднегеометрических титров специфических антител по Лярски [Сю-рин и др., 1984].

0

Морфологические методы исследования. После планового убоя песцов из каждой группы брали по пять животных на 7, 14, 21 и 28-й день после вакцинации. Для гистологического исследования брали следующие органы: подчелюстные лимфатические узлы, селезенку, которые фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина. Материал обрабатывали по общепринятым методикам [Меркулов, 1969]. Окрашивание проводили гематоксилином и эозином. Морфометрические показатели и фотографии были сделаны с использованием системы Vision Bio (Epi 2014 г.) с автоматической обработкой сигнала и выведением на дисплей. Для подсчета иммуно-компетентных клеток использовали сетку случайного шага с 110 равноудаленными точками (перекрестками линий), встроенную в окуляр-микрометр Л. Б. Левинсона, по Автандилову [1990]. Сетка накладывалась на срез органа при увеличении микроскопа МБИ-3У42 (окуляр WF-10х; объектив х4/0.10; х10/0.25). Срез органа при таком увеличении целиком находился в поле зрения и был целиком закрыт сеткой. При учете структурных компонентов подсчи-тывалось количество пересечений сетки, приходящихся на весь срез целиком и раздельно на каждый структурный компонент органа. Положение сетки на препарате произвольно менялось 5-10 раз с повторением подсчета.

Проведены иммуногистохимические исследования с использованием маркеров CD3 Polyclonal Rabbit Anti-Human Т-клеток [Руководство..., 2012]. Работа выполнена в Кировском НИИ гематологии и переливания крови. Наиболее специфичным и основным маркером Т-лимфоцитов является CD3. Зрелые Т-клетки покидают тимус через сосуды кортико-медул-лярной зоны, поступают в кровоток, Т-лим-фоциты становятся частью единого пула ре-циркулирующих Т-клеток. В периферических лимфоидных органах (лимфоузлы, селезенка, лимфатические фолликулы) Т-лимфоциты занимают преимущественно тимусзависимые зоны: паракортикальные зоны лимфатических узлов, периартериальные муфты селезенки и групповых лимфатических фолликулов. Эксперименты на животных проводили в соответствии с основами опытного дела в животноводстве [Овсянников, 1976]. Работа выполнена с соблюдением международных принципов Хельсинкской декларации о гуманном отношении к животным, принципов гуманности, изложенных в Директиве Европейского Сообщества (86/609/ЕС), Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных [1977]. Полученные цифровые материалы об-

работаны с использованием пакета статистических программ Statgraphics и Ив.

Результаты и обсуждение

Показатели титра специфических антител-агглютининов в сыворотке крови вакцинированных животных также дали возможность оценить активность иммунного ответа. Антитела играют основную роль в иммунитете потому, что являются молекулами-эффекторами гуморального иммунитета. Свою защитную функцию иммуноглобулины зачастую осуществляют в синергизме с комплементом и лизоцимом. Антитела синтезируются в организме в ответ на внедрение инфекционного возбудителя или антигенного раздражения.

Серологические и иммунологические показатели. Во все сроки исследований у вакцинированных песцов отмечалось увеличение специфических антител-агглютининов в сыворотке крови. Максимальное значение титра специфических антител в сыворотке крови у песцов наблюдали через 14 дней после иммунизации, что в 4 раза выше (105,7), чем в контроле (11,89) (табл. 1). Через 28 дней после иммунизации песцов активность антителообразования снижается, оставаясь в 3,4 раза выше показателей контрольной группы. По данным Международного эпизоотического бюро, реакция агглютинации является методом оценки поствакцинального сальмонеллезного иммунитета и должным образом характеризует его напряженность.

Показатель Штритера в опсоно-фагоци-тарной реакции (активность нейтрофилов) на 14-й день после вакцинации достиг максимальных значений по сравнению с контролем (16,8 ± 7,56) и составил 39,2 ± 3,23 (р < 0,001). К 28-му дню после иммунизации животных активность фагоцитоза снижается до уровня физиологической нормы, соответствующей уровню показателей у контрольных песцов (табл. 1).

Из данных табл. 1 видно, что показатели ОФР незначительно повышаются к 7-му дню, достигая максимальных значений к 14-му дню после вакцинации, затем происходит снижение значений. Иммунизация песцов инактивированной вакциной против сальмонеллеза вызывает в организме животного ответные иммунобиологические перестройки.

После применения инактивированной вакцины для профилактики сальмонеллеза у песцов наблюдается выраженный лейкоцитоз и лимфоцитоз (табл. 2). Повышение общего количества лейкоцитов у вакцинированных зверей особенно выражено на 7-14-й дни после вакцинации (р < 0,05). Достоверное (р < 0,001)

0

Таблица 1. Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов в ОФР и показатели титра антител в РА у песцов, вакцинированных против сальмонеллеза инактивированной вакциной

Table 1. Indicators of phagocytic activity of neutrophils b OFR and antibody titer b RA in Arctic foxes vaccinated against salmonellosis with inactivated vaccines

Группы животных (п=5) Показатели Group of animals (n=5) Indicators Результаты исследований Results of the research, M ± m

Опыт / Experiment: Титр антител в РА Antibody titer in RA 7 дней 7 days 14 дней 14 days 21 день 21 days 28 дней 28 days

76,5 349,26 299,23 117,5

Показатель Штритера в ОФР Schtroeter Index in OFR 23,0 ± 3,44 30,2 ± 3,23 26,6 ± 4,75 24,4 ± 3,45*

Контрольная группа/ Control group: Титр антител в РА Antibody titer in RA 10 20 20 10

Показатель Штритера в ОФР Schtroeter Index in OFR 22,0 ± 4,53 16,8 ± 7,56 16,0 ± 4,16 12,8 ± 1,64

Примечание. *Р < 0,001 по сравнению с контролем. Note. *Р < 0.001 compared to control.

Таблица 2. Изменение показателей лейкоцитарных клеток у песцов в норме и после иммунизации инактиви-рованной вакциной против сальмонеллеза

Table 2. Changes in leukocyte cell counts in Arctic foxes in normal condition and after immunization with inactivated salmonellosis vaccine

Группы животных Показатели Результаты исследований

(n=5) Indicators Results of the research, М ± m

Group of animals 7 дней 14 дней 21 день 28 дней

(n=5) 7 days 14 days 21 days 28 days

Опыт, вакциниро- Лейкоциты (тыс./мкл) 10,14 ± 1,02* 9,46 ± 0,61* 6,66 ± 0,36 8 ,7 7, ± 0,37**

ванные White blood cells (ths/ц!)

Experiment, Лимфоциты

vaccinated Lymphocytes

(%%) 70,2 ± 3,72* 75,4 ± 2,87** 62,4 ± 5,93 72,0 ± 2,25**

(109/л) 7,11 ± 0,472** 7,08 ± 0,35**8 4,15 ± 0,26* 5,95 ± 0,42**

Е-РОК (T-лимф-ты /

T-Lymph) (%%) 56,4 ± 1,86* 53,6 ± 2,11** 53,4 ± 1,12* 50,4 ± 3,6

(109/л) 4,01 ± 0,346** 3,77 ± 0,16*** 2,21 ± 0,22 2,99 ± 0,29**

ЕАС-РОК (B-лимф-ты /

B-Lymph) (%%) 32,2 ± 3,12* 36,4 ± 0,81*** 35,8 ± 1,15*** 30,6 ± 1,36**

(109/л) 2,28 ± 0,236** 2,57 ± 0,18*** 1,48 ± 0,14* 1,83 ± 0,17***

Контроль, Лейкоциты (тыс./мкл) 7,4 ± 0,17 7,4 ± 0,17 7,4 ± 0,17 7,4 ± 0,17

невакциниро- White blood cells (ths/ц!)

ванные Лимфоциты

Control, Lymphocytes

unvaccinated (%%) 61,0 ± 0,85 61,0 ± 0,85 61,0 ± 0,85 61,0 ± 0,85

(109/л) 4,48 ± 0,169 4,75 ± 0,12 4,72 ± 0,04 4,1 ± 0,16

Е-РОК (T-лимф-ты /

T-Lymph) (%%) 48,83 ± 1,22 49,8 ± 0,79 49,3 ± 1,14 50,1 ± 0,83

(109/л) 2,19 ± 0,113 2,36 ± 0,07 2,32 ± 0,06 2,05 ± 0,07

ЕАС-РОК (B-лимф-ты /

B-Lymph) (%%) 21,5 ± 1,08 22,1 ± 1,22 22,6 ± 0,95 23,5 ± 1,25

(109/л) 0,95 ± 0,041 1,05 ± 0,06 1,06 ± 0,04 0,95 ± 0,06

Примечание. Здесь и далее различия с контрольной группой достоверны: *р < 0,05; **р < 0,01; *** р < 0,001. Note. Hereinafter the differences with control group are significant at: *p < 0.05; ** p < 0.01; *** p < 0,001.

увеличение количества лимфоцитов происходит к 7-му дню исследований, максимальных значений они достигают к 14-му дню. Затем к 28-му дню происходит достоверное (р < 0,01) снижение их количества у всех вакцинированных животных. В последующие сроки наблю-

дений показатели выравниваются с показателями в контрольной группе, которые характеризуют физиологическую норму. Через 7 дней после иммунизации песцов инактивированной вакциной против сальмонеллеза наблюдается достоверное (р < 0,05) увеличение количест-

ва Т-лимфоцитов по сравнению с контрольной группой, достигая при этом максимальных значений. Количество Т-лимфоцитов увеличивается к 7-му дню на 7,57 %. Далее происходит постепенное снижение показателей. К моменту последнего исследования (через 28 дней) их количество снижается на 4,3 %. Увеличение количества В-лимфоцитов происходит также к 7-му дню после иммунизации, достигая максимальных значений у зверей опытной группы к 14-му дню (р < 0,001). Их количество к этому сроку увеличивается на 14,3 %. В следующие сроки исследований наблюдается достоверное (р < 0,01) снижение этих показателей. К концу опыта количество ЕАС-РОК снижается на 7,1 %. В контрольной группе животных существенных изменений количества лимфоцитов не произошло, выявленные различия оказались недостоверными (табл. 2).

Морфологические методы. Селезенка -важный орган лимфоцитообразования и иммунитета, в котором под влиянием антигенов, присутствующих в крови, происходит образование клеток либо продуцирующих гуморальные антитела, либо участвующих в реакциях клеточного иммунитета. Антигены фагоцитируются и разрушаются в красной пульпе, а их оставшаяся часть прикрепляется к клеткам краевого синуса белой пульпы. Затем они постепенно переходят в лимфоидные узелки, в которых позднее появляются плазматические клетки, содержащие антитела к антигену [Миллер, Дукор, 1967; Герберт, 1974].

При гистологическом исследовании селезенки песцов после вакцинации на срезе хорошо различимы красная и белая пульпа. Белая пульпа представлена лимфоидными узелками, как с герминативным центром, так и без него. При иммуноморфологическом исследовании через 14 дней после иммунизации песцов в селезенке наблюдали формирование вторичных лимфоидных узелков, диаметр которых по сравнению с контролем достоверно увеличился в 1,3 раза (р < 0,001). Через 21 день после иммунизации диаметр вторичных лимфоид-ных узелков увеличился в 1,5 раза (р < 0,001), а их количество возросло в 1,2 раза (р < 0,001) по сравнению с контрольной группой (табл. 3).

Как видно из табл. 4, в центре лимфоидных узелков и в периартериальной зоне отмечалось скапливание иммунобластов, плазмобластов, количество которых по сравнению с контролем увеличилось в 1,2-2,3 раза (р < 0,001).

В красной пульпе селезенки отмечали выраженную плазмоцитарную реакцию с увеличением количества зрелых плазмоцитов через 21 день в 1,2 раза по сравнению с контролем (рис. 1) и на 28-й день отмечали снижение показателей.

Результаты исследований показывают, что вакцина существенно стимулирует гиперплазию лимфоидных узелков в селезенке и пролиферацию иммунокомпетентных клеток. Лимфо-идная ткань селезенки участвует преимущественно в иммунных реакциях гуморального типа, обеспечивая накопление больших плазматиче-

Таблица 3. Морфометрические показатели в селезенке у песцов после иммунизации инактивированной вакциной

Table 3. Morphometric parameters in the spleen of polar foxes after immunization with inactivated vaccine

Группы животных (n=5) Показатели Результаты исследований Results of the research, M ± m

Group of animals (n=5) Indicators 7 дней 7 days 14 дней 14 days 21 день 21 days 28 дней 28 days

Опыт / Experiment: Количество лимфоидных узелков / Number of lymphoid nodules: - первичных / primary - вторичных / secondary 14,8 ± 0,37 10,0 ± 0,44 14,1 ± 0,37 12,6 ± 0,40** 14,6 ± 0,42 19,2 ± 0,35*** 14,4 ± 0,51 11,4 ± 0,24**

Диаметр лимфоидных узелков (мкм) / Diameter of lymphoid nodules (|m): - первичных / primary - вторичных / secondary 365,10 ± 9,20** 138,96 ± 7,88 298,12 ± 8,66** 141,6 ± 3,40** 279,6 ± 9,27 148,0 ± 9,31** 275,48 ± 8,23 137,24 ± 5,33

Контрольная группа / Control group: Количество лимфоидных узелков / Number of lymphoid nodules: - первичных / primary - вторичных / secondary 13,6 ± 0,24 7,8 ± 0,37 - - -

Диаметр лимфоидных узелков (мкм) / Diameter of lymphoid nodules (|m): - первичных / primary - вторичных / secondary 271,28 ± 12,3 134,64 ± 6,93 - - -

Таблица 4. Динамика иммунокомпетентных клеток в селезенке у песцов после иммунизации против сальмо-неллеза инактивированной вакциной

Table 4. Dynamics of immunocompetent cells in the spleen of Arctic foxes after immunization against salmonellosis with inactivated vaccine

Группы животных (n=5) Показатели Group of animals (n=5) Indicators Результаты исследований Results of the research, M ± m

7 дней 7 days 14 дней 14 days 21 день 21 days 28 дней 28 days

Опыт / Experiment количество клеток / number of cells: иммунобластов / immunoblasts плазмобластов / plasmoblasts незрелых плазматических клеток / immature plasma cells зрелых плазматических клеток / mature plasma cells 19,5 ± 0,5** 21,3 ± 0,43 27,2 ± 0,23 17,9 ± 0,22 17,9 ± 0,32 23,3 ± 0,11*** 29,7 ± 0,32*** 29,5 ± 0,92 17.3 ± 0,22 19,5 ± 0,33 27.4 ± 0,6 27,3 ± 0,41*** 16,9 ± 0,40 18,9 ± 0,25 27,3 ± 0,20 27,0 ± 0,18***

Контрольная группа / Control group количество клеток / number of cells: иммунобластов / immunoblasts плазмобластов / plasmoblasts незрелых плазматических клеток / immature plasma cells зрелых плазматических клеток / mature plasma cells 16,2 ± 0,33 18,4 ± 0,31 25,8 ± 0,42 17,4 ± 0,24 - - -

ских клеток, синтезируя антитела [Сапин, 1983; Кириллов, 1994].

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

При гистологическом изучении нижнечелюстных лимфатических узлов у песцов в корковом слое хорошо просматривались первичные и вторичные лимфоидные узелки. Мя-котные шнуры за счет скопления лимфоцитов утолщены. В корковом слое наблюдали формирование лимфоидных узелков. В нижнечелюст-

Рис. 1. Плазмоциты в красной пульпе селезенки через 14 дней после вакцинации.

Здесь и на рис. 2: увеличение микроскопа - окуляр GF-Pw 10x, объектив HI 40x/1,25. Окраска гематоксилином Майе-ра и эозином

Fig. 1. Plasmocytes in the red pulp of the spleen, 14 days after vaccination.

Here and in Fig. 2: microscope magnification: eyepiece - GF-Pw 10x; lens HI 40x/1.25. Staining with Mayer hematoxilin and eosin

ных лимфатических узлах количество вторичных лимфоидных узелков и их диаметр на 7-й день после вакцинации увеличились в 1,4 раза (р < 0,001) по сравнению с контролем (табл. 5).

Клеточная реакция в нижнечелюстных лимфатических узлах характеризовалась увеличением иммунобластов (рис. 2), количество которых достигло максимума по сравнению с контролем на 14-й день после вакцинации (табл. 6).

На 14-й день после вакцинации клеточная реакция характеризовалась увеличением количества плазмобластов и зрелых

Рис. 2. Иммунобласты и плазмоциты в мозговом слое нижнечелюстных л/узлов под капсулой в корковом слое через 14 дней после вакцинации Fig. 2. Immunoblasts and plasmocytes in the brain layer of the mandibular l/nodes under the capsule in the cortical layer, 14 days after vaccination

Таблица 5. Морфометрические показатели в нижнечелюстных лимфатических узлах у песцов после иммунизации инактивированной вакциной

Table 5. Morphometric parameters in mandibular lymph nodes of Arctic foxes after immunization with inactivated vaccine

Группы животных (п=5) Показатели Результаты исследований Results of the research, M ± m

Group of animals (n=5) Indicators 7 дней 7 days 14 дней 14 days 21 день 21 days 28 дней 28 days

Опыт / Experiment Количество лимфоидных узелков / Number of lymphoid nodules: - первичных / primary - вторичных / secondary 6,8 ± 0,200*** 6,9 ± 0,316 7,4 ± 0,678*** 7,6 ± 0,748 8,2 ± 0,374*** 6,8 ± 0,583 7,4 ± 0,678*** 4,22 ± 0,437

Диаметр лимфоидных узелков (мкм) / Diameter of lymphoid nodules (|m): - первичных / primary - вторичных / secondary 305,0 ± 5,375 170,68 ± 5,244 330,88 ± 7,72*** 180,6 ± 6,361 321,48 ± 8,75 164,0 ± 4,72 300,88 ± 9,25 14076 ± 5,196

Контрольная группа / Control group Количество лимфоидных узелков / Number of lymphoid nodules: - первичных / primary - вторичных / secondary 4,8 ± 0,56 6,2 ± 0,31 - - -

Диаметр лимфоидных узелков (мкм) / Diameter of lymphoid nodules (|m): - первичных / primary - вторичных / secondary 291,7 ± 7,79 116,4 ± 2,18 - - -

Таблица 6. Динамика иммунокомпетентных клеток в нижнечелюстных лимфатических узлах у песцов после иммунизации против сальмонеллеза инактивированной вакциной

Table 6. Dynamics of immunocompetent cells in mandibular lymph nodes in Arctic foxes after immunization against salmonellosis with inactivated vaccine

Группы животных (n=5) Показатели Group of animals (n=5) Indicators Результаты исследований Results of the research, M ± m

7 дней 7 days 14 дней 14 days 21 день 21 days 28 дней 28 days

Опыт / Experiment количество клеток / number of cells: иммунобластов / immunoblasts плазмобластов / plasmoblasts незрелых плазматических клеток / immature plasma cells зрелых плазматических клеток / mature plasma cells 13,6 ± 0,32** 28,4 ± 0,45** 18,6 ± 0,54** 17,6 ± 0,34** 14,6 ± 0,32*** 27,6 ± 0,25* 19.4 ± 0,43** 18.5 ± 0,45** 13,4 ± 0,32* 26,8 ± 0,37* 18,4 ± 0,35** 20,4 ± 0,52* 12,9 ± 0,34* 25,4 ± 0,32* 17,6 ± 0,35* 18,6 ± 0,36*

Контрольная группа / Control group количество клеток / number of cells: иммунобластов / immunoblasts плазмобластов / plasmoblasts незрелых плазматических клеток / immature plasma cells зрелых плазматических клеток / mature plasma cells 12.2 ± 0,24 10.3 ± 0,21 17,2 ± 0,21 16,7 ± 0,24 - - -

плазмоцитов, число которых по сравнению с контролем увеличилось в 1,5 раза (р < 0,01) (табл. 6).

При иммуногистохимическом исследовании с использованием маркеров к ОйЭ Т-клеткам реакция положительная. Т-лимфоциты скапливались в периартериальной зоне узелка селезенки (рис. 3), в паракортикальной зоне лимфатических узлов (рис. 4).

Изучение механизмов формирования иммунитета и роли иммунных реакций в органах иммунитета позволяет выявить общие закономерности, происходящие в селезенке и лимфатических узлах после вакцинации. Последовательность события начала антителообразова-ния в лимфоидном узелке, которая происходит после введения антигена в лимфатический узел, стала известна благодаря исследованиям

®

Рис. 3. Скопление CD3 Т-клеток в периартериальной зоне селезенки

Fig. 3. Accumulation of CD3 T cells, the reaction is positive. T cells accumulated in the periarterial zone of the spleen

Рис. 4. Скопление CD3 Т-клеток в паракортикальной зоне лимфоидного узелка

Fig. 4. Accumulation of CD3 T-cells, in the paracortical zone of a lymphatic nodule

Носсела и Айда из Мельбурна [Герберт, 1974]. В работе [Nossal, Mäkelä, 1962] представлены данные о структуре лимфатических узлов, играющих важную роль в иммуногенезе, развивающемся в результате иммунизации. К 28-му дню после вакцинации показатели сравнялись с контрольной группой.

Заключение

Таким образом, в ходе исследований отмечали увеличение в динамике Т- и В-лим-фоцитов, изменения титра антител, а также фагоцитарной активности нейтрофилов. Представлены данные о структуре селезенки и лимфатических узлов, играющих важную роль в иммуногенезе. В результате иммунизации песцов против сальмонеллеза инактивиро-

ванной вакциной в периферических органах иммунитета происходит пролиферация и диф-ференцировка иммунокомпетентных клеток, характеризующаяся увеличением иммунобла-стов и зрелых плазмоцитов, характерных как для клеточного, так и для гуморального иммунного ответа.

Литература

Автандилов Г. Г. Медицинская морфометрия: руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.

Антонов В. Я., Блинова П. Н. Лабораторные исследования в ветеринарии. 1971. М.: Колос, 1971. 640 с.

Батуев К. М. Морфология лимфоидных фолликулов тонкой кишки человека // Тр. Пермского медицинского института. 1979. Т. 106. С. 53-57.

Бородин Ю. И. Функциональная морфология иммунной системы. М.: Наука, 1987. 229 с.

Герберт У. Д. Ветеринарная иммунология. М.: Колос, 1974. 303 с.

Домский И. А., Кульминский А. Н. Сальмонеллез пушных зверей // Кролиководство и звероводство. 1997. № 4. С. 24-25.

Домский И. А. Оральная вакцинация пушных зверей против сальмонеллеза // Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 80-летию ВНИИОЗ. (28-31 мая 2002 г.) / ВНИИОЗ, РАСХН. Киров, 2002. С. 548-551.

Кириллов А. К. Иммунопрофилактика инфекционных болезней // Кролиководство и звероводство. 1994. № 3. 22 с.

Лабинская А. С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина, 1978. 392 с.

Макаров В. В., Бакулов И. А., Филиппов В. В. Внутриклеточный паразитизм и протективный иммунитет // Вестник РАСХН. 1994. № 3. С. 45-49.

Матвиенко Б. А. Сальмонеллезы животных // Болезни сельскохозяйственных животных. Алма-Ата, 1986. С. 53-66.

Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники. Л.: Медицина, 1969. 402 с.

Миллер Д., Дукор П. Биология тимуса / пер. с нем. М.: Мир, 1967. 93 с.

НосселГ. Антитела и иммунитет. М.: Медицина, 1973. 176 с.

Овсянников А. И. Основы опытного дела в животноводстве. М.: Колос, 1976. 304 с.

Першин Б. Б. Вакцинация и местный иммунитет. Л.: Медицина, 1980. 210 с.

Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных: Приложение к Приказу Минздрава СССР от 12 авг. 1977 г. № 755.

Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / Ред. С. В. Петров, Н. Г. Райхлин. Казань: Титул, 2012. 624 с.

Сапин М. Р. О закономерностях строения и развития органов иммунной системы // Функциональная морфология лимфатических узлов и других органов иммунной системы и их роль в иммунных

@

процессах: тез. докл. всесоюз. науч. конф. М., 1983. С. 148-149.

Сюрин В. Н., Фомина Н. В., Белоусова Р. В. Частная ветеринарная вирусология. М.: Колос, 1984. 427 с.

Bianco C., Prilrick R., Nussenzweig V. Population of lymphocytes bearing a membrane receptor for antigen-antibody complex // J. Exp. Med. 1970. Vol. 134, no. 4. P. 702-720.

FiorettiA. Die Gaumenmandel Darstellung der Biologie und Physiopathologie. Stuttgart, 1961. 234 p.

References

Antonov V. Ya., Blinova P. N. Laboratornye issledo-vaniya v veterinarii [Laboratory studies in veterinary science]. 1971. Moscow: Kolos, 1971. 640 p.

AvtandilovG. G. Meditsinskaya morfometriya: ru-kovodstvo [Medical morphometry: guidelines]. Moscow: Meditsina, 1990. 384 p.

BatuevK. M. Morfologiya limfoidnykh follikulov tonkoi kishki cheloveka [Morphology of lymphoid follicles of the human small intestine]. Tr. Permskogo me-ditsinskogo inst. [Proceed. Perm Medical Inst.]. 1979. Vol. 106. P. 53-57.

Borodin Yu. I. Funktsional'naya morfologiya immun-noi sistemy [Functional morphology of the immune system]. Moscow: Nauka, 1987. 229 p.

DomskiiI. A., Kul'minskiiA. N. Sal'monellez push-nykh zverei [Salmonellosis of fur animals]. Krolikovodst-vo izverovodstvo [Rabbit and Fur Farming]. 1997. No. 4. P. 24-25.

Domskii I. A. Oral'naya vaktsinatsiya pushnykh zverei protiv sal'monelleza [Oral vaccination of fur-bearing animals against salmonellosis]. Sovr. probl. Prirodopol'zo-vaniya, oxotovedeniya i zverovodstva: mat. Mezhdunar. nauch.-prakt. konf., posvyashh. 80-letiyu VNIIOZ(28-31 maya 2002 g.) [Modern problems of nature management, hunting and animal breeding: Proceed. Int. scien-tific-pract. conf. 80th anniv. of All-Russ. Research Inst. for Hunting Husbandry and Livestock Breeding (VNIIOZ) (May 28-31, 2002)]. Kirov, 2002. P. 548-551.

Gerbert U. D. Veterinarnaya immunologiya [Veterinary immunology]. Moscow: Kolos, 1974. 303 p.

KirillovA. K. Immunoprofilaktika infektsionnykh bo-leznei [Immunological prophylaxis of infectious diseases]. Krolikovodstvo i zverovodstvo [Rabbit and Fur Farming]. 1994. No. 3. 22 p.

Labinskaya A. S. Mikrobiologiya s tekhnikoi mikro-biologicheskikh issledovanii [Microbiology with a method of microbiological research]. Moscow: Meditsina, 1978. 392 p.

Makarov V. V., BakulovI. A., Filippov V. V. Vnutrikle-tochnyi parazitizm i protektivnyi immunitet [Intracellular parasitism and protective immunity]. Vestnik RASKhN [Bull. Russ. Acad. Agricultural Sci.]. 1994. No. 3. P. 45-49.

Matvienko B. A. Sal'monellezy zhivotnykh [Salmonel-losis in animals]. Boleznisel'skokh. zhivotnykh [Diseases of agricultural animals]. Alma-Ata, 1986. P. 53-66.

MerkulovG. A. Kurs patologogistologicheskoi tekh-niki [A Course in pathohistological methods]. Leningrad: Meditsina, 1969. 402 p.

JondallM., Holm J., Wogzell H. Surface markers of human B- and T-lymphocytes. I. A large population of lymphocytes forming nonimmunerosettes with sheep red blood cells // J. Exp. Med. 1972. Vol. 136, no. 2. P. 207-215.

NossalG. J., Mäkelä O. J. Autoradiographic studies on the immune response: I. The kinetics of plasma cell proliferation // J. Exp. Med. 1962. No. 115(1). P. 209-230. doi: 10.1084/jem.115.1.209

Поступила в редакцию 12.09.2019

Miller D., Dukor P. Biologiya timusa [Biology of thymus]. tr. from German. Moscow: Mir, 1967. 93 p.

Nossal, G. Antitela i immunitet [Antibodies and immunity]. Moscow: Meditsina, 1973. 176 p.

OvsyannikovA. I. Osnovy opytnogo dela v zhivotno-vodstve [Fundamentals of experiments in animal husbandry]. Moscow: Kolos, 1976. 304 p.

Pershin B. B. Vaktsinatsiya i mestnyi immunitet [Vaccination and local immunity]. Leningrad: Meditsina, 1980. 210 p.

PetrovS. V., Raikhlin N. G. (eds). Rukovodstvo po immunogistokhimicheskoi diagnostike opukholei cheloveka [Guidelines for the immunohistochemical diagnosis of human tumors]. Kazan: Titul, 2012. 624 p.

Pravila provedeniya rabot s ispol'zovaniem eksperi-mental'nykh zhivotnykh: Prilozhenie k Prikazu Minzdra-va SSSR ot 12 avg. 1977 g. № 755 [Rules for conducting experiments on animals: Annex to Order of the USSR Ministry of Health Care, Aug. 12, 1977. No. 755].

Sapin M. R. O zakonomernostyakh stroeniya i raz-vitiya organov immunnoi sistemy [On the patterns in the structure and development of the organs of the immune system]. Funktsional'naya morfologiya limfa-ticheskikh uzlov i drugikh organov immunnoi sistemy i ikh rol' v immunnykh protsessakh: tez. dokl. Vsesoyuz. nauch. konf. [Functional morphology of the lymph nodes and other organs of the immune system and their role in immune processes: Abs. All-Union. sci. conf.]. Moscow, 1983. P. 148-149.

Syurin V. N., Fomina N. V., Belousova R. V. Chast-naya veterinarnaya virusologiya [Special veterinary virology]. Moscow: Kolos, 1984. 427 p.

Bianco C., PrilrickR., Nussenzweig V. Population of lymphocytes bearing a membrane receptor for antigen-antibody complex. J. Exp. Med. 1970. Vol. 134, no. 4. P. 702-720.

Fioretti A. Die Gaumenmandel Darstellung der Biologie und Physiopathologie. Stuttgart, 1961. 234 p.

JondallM., Holm J., Wogzell H. Surface markers of human B- and T-lymphocytes. I. A large population of lymphocytes forming nonimmunerosettes with sheep red blood cells. J. Exp. Med. 1972. Vol. 136, no. 2. P. 207-215.

NossalG. J., Mäkelä O. J. Autoradiographic studies on the immune response: I. The kinetics of plasma cell proliferation. J. Exp. Med. 1962. No. 115(1). P. 209-230. doi: 10.1084/jem.115.1.209

Received September 12, 2019

<Э

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:

CONTRIBUTORS:

Окулова Ираида Ивановна

старший научный сотрудник, к. вет. н. Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства им. проф. Б. М. Житкова