CC BY
55
УДК 619:616.993.192.1:636.5
Ключевые слова: эймериоз, ооцисты, цыплята, аттенуированные простейшие, иммунопрофилактика
Key words: eimeriosis, oocystis, chickens, attenuated protozoa, immunization
Маршалкина Т. В.
ПОЛуЧЕНИЕ ИЗОЛЯТА эйМЕРИй ВИДА EIMERIA TENELLA с ускоренным циклом РАЗВИТИЯ
GETTING THE ISoLATE of EIMERIA TENELLA WITH ACCELERATED DEVELOPMENT CYCLE
Государственное учреждение «Институт сельского хозяйства степной зоны Украины» Национальной академии аграрных наук Украины Адрес: 49600, Украина, г. Днепропетровск, ул. Дзержинского, 14
State Institute of Agriculture of the Steppe Zone of Ukraine of the Ukrainian Academy of Agrarian Sciences Address: 49600, Ukraine, Dnipropetrovsk, Dzerzhinsky street, 14
Маршалкина Татьяна Викторовна, к. в. н., ст. научн. сотрудник лаборатории ветеринарной медицины
Marshalkina Tatyana V., Ph.D. in Veterinary Science, Senior Research Scientist of the Laboratory of Veterinary Medicine
Аннотация. Селекционным отбором первых выделенных ооцист в патентный период развития после предварительного восьмикратного пассажирования эймерий через организм цыплят были получены возбудители E. tenella с ускоренным циклом развития, которые будут использованы при разработке специфической профилактики эй-мериоза.
Summary. Preliminary octuple chicken passage of eimeria with further selection of the first oocysts in patent period allowed to get causative agents (E. tenella) with accelerated development cycle which will be used in the development of specific prophylaxis of eimeriosis.
Введение
Одним из наиболее распространенных инвазионных болезней птиц, наносящих значительные экономические убытки, является эймериоз. Очень высокая репродуктивная способность эймерий, устойчивость их к воздействию различных факторов внешней среды, продолжительное сохранение жизнеспособности и вирулентности экзогенных стадий, а также быстрая адаптация к химическим антиэймериозным средствам весьма затрудняют борьбу с этим заболеванием.
Основным средством профилактики эй-мериозов долгое время были синтетические химиопрепараты, но адаптация возбудителей к эймериостатикам стала проблемой для всех стран с промышленным птицеводством [6].
Возникновение резистентности к химическим веществам требует постоянной разработки новых эймериостатиков, требующей вложения значительных средств. К тому же такие препараты не безопасны в экологическом отношении - продукты распада хи-миопрепаратов, которые традиционно применяются в птицеводстве, накапливаются
в тканях и органах птицы, что препятствует получению экологически чистой продукции. На современном этапе развития птицеводства производители и потребители птицеводческой продукции заинтересованы в разработке программ интегрированного контроля с внедрением нехимических методов борьбы с эймериозами [9].
Вакцинопрофилактика - единственная альтернатива эймериостатикам при выращивании ремонтного молодняка. Ранее считалось, что иммунитет у мясной птицы необязателен. Сегодня мнение на этот счет изменилось, и признана необходимость вакцинации цыплят-бройлеров [5].
Для борьбы с эймериозом разработан ряд вакцин с использованием живых возбудителей, основой которых служат эймерии с исходной вирулентностью [4] и аттенуированные штаммы [8]. Применение вакцин из эймерий с исходной вирулентностью сопровождается кратковременным использованием эймериостатиков для избежания вспышки клинического эймериоза, что не только невыгодно экономически, но и не снимает
проблем применения химических средств для предупреждения или прерывания развития патогенных стадий возбудителей [7].
В последние годы на рынке Украины появились импортные вакцины для иммунизации птицы против эймериоза, содержащие аттенуированные возбудители, путем их селекции на ускоренное развитие. Такие вакцины обладают большим порогом безопасного применения, индуцируя у цыплят протек-тивный иммунный ответ [1, 3]. Но при этом для создания вакцины применялись штаммы разных видов эймерий, распространенных на птицепредприятиях различных географических зон тех стран, где происходила разработка биологических препаратов.
Целью наших исследований являлось получение изолята эймерий Е. tenella с ускоренным периодом эндогенного развития, который станет основой в разработке вакцины для специфической профилактики эй-мериоза цыплят. Это наиболее патогенный вид возбудителя, и, как показали результаты эпизоотологического обследования, самый распространенный в птицехозяйствах всех направлений продуктивности Днепропетровской области.
Материалы и методы
Получение изолята эймерий Е. tenella с ускоренным циклом развития осуществляли согласно способу изготовления антигена из аттенуированных возбудителей Е. tenella (декларационный патент на полезную модель № 18387 А Украина, МПК А 61К 39/00) [2].
С этой целью были проведены опыты, в которых использовали 100 мясных гибридных цыплят-бройлеров «Кобб-500» 28- и 30-суточного возраста. Из них были сформированы: одна подопытная группа (п = 20) и восемь подопытных групп по десять цыплят в каждой, свободных от эймерий, подобранных методом аналогов. Птиц заражали инвазионными ооцистами Е. tenella в дозе 150,0±5,0 тысяч на 1 кг массы тела. Заражение подопытного поголовья цыплят проводили путем энтерального введения инвазионного материала (спорулиро-ванные ооцисты) шприцом объемом 2,0 см3. Для заражения опытного поголовья птицы
готовили суспензию простейших, рассчитывая необходимые дозы для заражения в зависимости от массы тела цыплят. Количество ооцист в 1,0 см3 суспензии устанавливали с помощью камеры Горяева. С началом латентного периода в течение пяти часов из помета подопытных птиц отбирали первые выделенные ооцисты. Для закрепления указанного признака (ускоренный цикл развития) на генетическом уровне, провели восемь пассажей полученных паразитов через организм молодняка кур по описанной выше схеме с отбором после каждого пассажа первых выделенных из организма цыплят ооцист.
Результаты исследований
После заражения за птицей вели наблюдение, отмечая изменения общего состояния. Начало патентного периода (120 часов после заражения) регистрировали по появлению в помете возбудителей эймериоза. С этого момента на протяжении пяти часов отбирали первые выделенные ооцисты.
Таким образом, были собраны эймерии, у которых препатентный период составлял 120-125 часов и был менее продолжителен, чем у основной массы возбудителей, которые выделялись из организма позднее (140-170 часов после заражения).
Подобное явление объяснялось завершением агамной стадии эндогенного развития паразита на шизогонии второй генерации и формирования ооцист после слияния гамон-тов, наряду с этим уменьшалось количество пораженных эпителиальных клеток кишечника, то есть снижалась патогенность возбудителей.
Для закрепления указанного признака (ускоренный цикл развития) провели восемь пассажей паразитов путем перезаражения полученной культурой простейших 30-су-точного молодняка кур (по 10 голов в каждом пассаже) по описанной выше схеме с отбором после каждого пассажа первых выделенных из организма цыплят ооцист (120-125 часов после заражения).
После последнего, восьмого, заражения птицы из помета изолировали ооцисты в течение всего патентного периода.
Рис. 1. Ооцисты эймерий E. tenella с ускоренным циклом развития. Увел. 400*.
Репродуктивная способность эймерий с ускоренным (120-125 часов) циклом развития была значительно ниже (до 80 %), чем у обычных патогенных паразитов, из которых получали аттенуированных, что сопровождалось резким снижением интенсивности эймериозной инвазии. Поэтому количество накопленных возбудителей с ускоренным препатентным периодом (рис. 1) было намного меньше, чем можно было бы получить после заражения патогенными простейшими.
Обсуждение результатов
В основе принципа создания аттенуированных эймерий E. tenella положен генетически закрепленный, укороченный на 25-29 часов цикл развития (за счет препатентного периода) по сравнению с исходными «родительскими» эймериями.
С целью получения такого изолята нами проводилось заражение восприимчивого молодняка кур патогенными возбудителями E. tenella. С началом патентного периода (120 часов после заражения), который регистрировали путем микроскопии, из помета опытной птицы отбирали выделенные оо-цисты в течение первых пяти часов. Таким образом были отобраны простейшие, у которых препатентный период был менее продолжителен, чем у основной массы возбудителей, которые выделяются из организма позднее. Ускорение препатентного периода, по нашему мнению, объясняется тем, что на эндогенной стадии жизненного цикла разви-
тия паразита образуется меньшее количество генераций шизонтов, чем у большинства представителей исходных «родительских» возбудителей.
Для получения возбудителей, у которых ускоренный цикл развития был бы закреплен генетически, мы применили селекционный метод. С этой целью провели восемь пассажей полученных паразитов через организм молодняка кур 28-30-суточного возраста с отбором после каждого пассажа первых выделенных из организма цыплят ооцист.
После последнего заражения опытного поголовья из помета изолировали выделенные ооцисты в течение всего патентного периода, так как после проведенных пассажей у «скороспелых» ооцист отсутствует эффект реверсии патогенности.
Заключение
Таким образом, путем пассажей эйме-рий через организм цыплят получен изолят E. tenella с ускоренным (120-125 часов) циклом развития не проявляющий патоген-ность и сохраняющий иммуногенность, с целью использования эймерий с данной биологической особенностью для специфической профилактики заболевания.
Список литературы
1. Изучение изменчивости вирулентных свойств возбудителей кокцидиозов (E. tenella) и их реверсию при культивировании на укороченный препатент-ный период развития : отчет о НИР (промежуточ.) / Всерос. науч.-иссл. ветер. инст. птицеводства ; рук. В. С. Мишин. - СПб., 2000. - 6 с.
2. Декларацшний патент № 18387 А Украша, МПК А 61 К 39/00. Споаб виготовлення антигену з атенуй-ованих збуднишв Eimeria tenella / Ю. О. Приходько, Б. Т. Стегнш, В. В. Сентюрш, Т. В. Маршалкша; 1ЕКВМ УААН. - № 200603874. - Заявл. 07.04.06; опубл. 15.11.06. Бюл. № 11 - 2 с.
3. Сентюрш, В. В. Деяш питання мехашзму поствакцинального протиеймерюзного iмунiтету курчат / В. В. Сентюрин, Т. В. Маршалкша // Актуальш проблеми ветеринарно1 медицини в умовах сучасно-го ведення тваринництва: ]шжнар. наук.-практ. конф., 26 травня - 2 червня 2003 г., м. Феодоая, АР Крим : мaтерiaли. - Феодоая, 2003. - Вип. 82. - С. 513-516.
4. Bhat, G. A. Factors affecting vaccination in poultry / G. A. Bhat // Poultry Adviser. - 1990. - Vol. 23, № 2. -P. 41-42.
5. Jeffers, T. K. Coccidiosis control in the year 2000 / T. K. Jeffers // Poultry Adviser. - 1987. - Vol. 20, № 7. - P. 57-62.
6. Juares Estrada, V. F. Guzman Anticoccidial vaccine effect on physiological and immunological parameters in broiler chickens / V. F. Juares Estrada, G. M. Nava Morales, R. Merino // Veterinaria Mexico. - 2007. -Vol. 38, № 3. - P. 303-318.
7. Nassif, A. Prophylaxemassnahmen in der Aufzucht von Junghennen / A. Nassif // Osterr. Geflugelwirtsch. -1988. - Bd. 27, № 3. - S. 68-70.
8. Shirley, M. W. A live attenuated vaccine for the control of avian coccidiosis: trials in broiler breeders and replacement layer flocks in the United Kingdom / M. W. Shirley // Veterinary Record. - 1995. - Vol. 137, № 18. -P. 453-457.
9. Volk, M. Comparison of results of fattening broilers by using anticoccidial drugs and live attenuated vaccine against coccidiosis / M. Volk, S. Cajavec, M. Brus, A. Vergles-Rataj, O. Z. Rojs // Praxis veter. - 2006. -Vol. 54, № 1-2. - P. 61-69.
АППАРАТ ДЛЯ ИМПУЛЬСНОЙ БИОСИНХРОНИЗИРОВАННОЙ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОЙ ТЕРАПИИ «УМИ-05»
На протяжении многих лет клиника БНПЦ ЧИН и Институт Ветеринарной Биологии (Санкт-Петербург) использует в своей практике уникальный прибор - генератор низкочастотного магнитного импульсного излучения большой мощности «УМИ-05» (ранее «УИМТ-2», «УИМТ-3»). Данный прибор применяется для моно- или комплексной терапии целого ряда заболеваний, которые ранее считались неизлечимыми или очень тяжело поддавались лечению.
Основные направления применения «УМИ-05»
• Заболевания мочевой системы: мочекаменная болезнь, пиелонефрит, поликистоз, цистит.
• Желчекаменная болезнь.
• Заболевания опорно-двигательного аппарата: остеохондроз позвоночника, дископатия, артрозо-артриты, бурсит, растяжение связок, ушибы, контрактуры суставов, миозит.
• Купирование эпилептических приступов и эпилептического статуса.
• Гипертензия.
• Отит гнойный.
• Отит аллергический.
Стандартный курс лечения
• 10 сеансов по 30-50 импульсов на одну патологическую область. Мощность 50-80 %. Курс можно повторить с перерывом в 10 дней.
• Профилактический курс для животных группы риска (остеохондроз, МКБ и пр.) -7-10 сеансов с интервалом 6 месяцев.
• Применение прибора не вступает в противоречие с использованием фармакологических и хирургических методов лечения.
• Магнитотерапию не следует проводить на области тела, содержащей металлоконструкции (например, штифты или пластины для остеосинтеза).
Экономика
• Быстрая окупаемость прибора.
• Минимальная затрата рабочего времени: длительность одного сеанса на одну патологическую зону - 2-3 минуты.
• Высокая эффективность лечения, полное излечение или введение животного в стойкую ремиссию по всем перечисленным заболеваниям гарантируют значительное увеличение рейтинга клиники в целом и приток новых клиентов.
Стоимость прибора 19 500 руб.
Заказать УМИ-05 можно по тел./факсу: (812) 927-55-92; по e-mail: virclin@mail.ru. Подробности на сайте: www.invetbio.spb.ru
