CC BY
54
DOI: 10.21055/0370-1069-2020-4-86-91
УДК 616.91:615.37
о.А. Полежаева, А.В. Зыбкина, А.В. Зайковская, о.В. Пьянков, с.А. Пьянков, А.В. семенова,
Г.В. кочнева, д.н. Щербаков
получение иммуноглобулинов класса y, нейтрализующих вирус марбург
ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», р.п. Кольцово, Российская Федерация
цель - изучение возможности индукции куриных антител, нейтрализующих вирус Марбург (MARV), с использованием различных иммуногенов. материалы и методы. В качестве иммуногенов использовали рекомби-нантный вирус осповакцины, экспрессирующий трансген поверхностного гликопротеина (GP) MARV штамма Musoke, и псевдовирусные частицы, экспонирующие GP трех штаммов MARV: Popp, Musoke и DRC2000, - на основе лентивируса и рекомбинантного штамма вируса везикулярного стоматита (VSV). В иммунизации участвовало две группы птиц. Кур иммунизировали девять раз: в первый раз вводили рекомбинантный вирус осповакцины, а затем 8 раз - псевдовирусные частицы (на основе лентивируса и рекомбинантного штамма вируса везикулярного стоматита). Первую группу иммунизировали очищенным и концентрированным иммуногеном, а вторую группу им же, но в комплексе с неполным адъювантом Фрейнда. Накопление специфических антител оценивали методом иммуноферментного анализа (ИФА). Для анализа накопления нейтрализующих антител использовали рекомбинантный VSV, экспонирующий GP MARV, и натуральный MARV штамма Popp. результаты и обсуждение. Разработана эффективная схема иммунизации кур тремя рекомбинантными конструктами, пре-зентирующими GP MARV, в результате которой происходит индукция куриных антител класса IgY против вируса Марбург с титром в ИФА от 1:100 до 1:1 млн. Полученные IgY нейтрализуют псевдовирусы MARV (штаммы Popp, DRC2000, Musoke) в разведении от 1/256 до 1/1024 и натуральный вирус MARV штамма Popp в разведении 1/8. Более стабильные результаты продемонстрировала схема иммунизации с использованием неполного адъю-ванта Фрейнда.
Ключевые слова: вирус Марбург, антитела, IgY, вирусоподобные частицы.
Корреспондирующий автор: Щербаков Дмитрий Николаевич, e-mail: vector@vector.nsc.ru.
Для цитирования: Полежаева О.А., Зыбкина А.В., Зайковская А.В., Пьянков О.В., Пьянков С.А., Семенова А.В., Кочнева Г.В., Щербаков Д.Н. Получение иммуноглобулинов класса Y, нейтрализующих вирус Марбург. Проблемы особо опасных инфекций. 2020; 4:86-91. DOI: 10.21055/0370-1069-2020-4-86-91
Поступила 27.04.20. Принята к публ. 28.05.20.
O.A. Polezhaeva, A.V. Zybkina, A.V. Zaikovskaya, O.V. P'yankov, S.A. P'yankov, A.V. Semenova, G.V. Kochneva, D.N. Shcherbakov
Preparation of Class Y Immunoglobulins that Neutralize the Marburg Virus
State Scientific Center of Virology and Biotechnology "Vector", Kol 'tsovo, Russian Federation
Abstract. The aim was to study the possibility of inducing Marburg-neutralizing chicken antibodies (MARV) using various immunogens. Materials and methods. Recombinant vaccinia virus expressing the surface glycoprotein (GP) transgene MARV of Musoke strain and pseudovirus particles exhibiting GP of three strains of MARV - Popp, Musoke and DRC2000 based on lentivirus and recombinant strain of vesicular stomatitis virus (VSV) were used as immunogens. Two groups of birds were involved in the study. Chickens were immunized 9 times: first time they were injected with the recombinant vaccinia virus, and then 8 times - with pseudovirus particles (based on lentivirus and a recombinant strain of the vesicular stomatitis virus). The accumulation of specific antibodies was evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). We used recombinant VSV exhibiting GP MARV, and natural MARV strain Popp for the analysis of accumulation of neutralizing antibodies. Results and discussion. We have developed an effective immunization schedule for chickens with three recombinant constructs presenting GP MARV, which results in the induction of chicken IgY antibodies against Marburg virus with a titer in ELISA from 1:100 to 1:1 million. The obtained IgY neutralize MARV pseudoviruses (Popp, DRC2000, Musoke) at a dilution of 1/256 to 1/1024 and the natural MARV virus of the Popp strain at a dilution of 1/8. More stable results were demonstrated by immunization using Freund's incomplete adjuvant.
Key words: Marburg virus, antibodies, IgY, virus-like particles.
Conflict of interest: The authors declare no conflict of interest.
Funding: The study was conducted with the financial support of the Russian Foundation of Fundamental Research within the framework of the scientific project No. 18-34-00512 mol-a.
Corresponding author: Dmitry N. Shcherbakov, e-mail: vector@vector.nsc.ru.
Citation: Polezhaeva O.A., Zybkina A.V., Zaikovskaya A.V., P'yankov O.V., P'yankov S.A., Semenova A.V., Kochneva G.V., Shcherbakov D.N. Preparation of Class Y Immunoglobulins that Neutralize the Marburg Virus. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2020; 4:86-91. (In Russian). DOI: 10.21055/0370-1069-2020-4-86-91
Received 27.04.20. Accepted 28.05.20.
Polezhaeva O.A., ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4256-5064
Zaykovskaya A.V., ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0450-5212
Shcherbakov D.N., ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8023-4453
Согласно международной классификации, вирус Марбург (MARV) является представителем рода МагЬиг^гш семейства Filoviridаe порядка Mononegavirales. MARV способен передаваться от рукокрылых к людям с последующей передачей от человека к человеку, при этом у людей он способен вызывать тяжелую геморрагическую лихорадку. Уровень смертности в очагах лихорадки Марбург варьирует от 24 до 88 %. Развитие международной торговли и туризма в последнее время, активный импорт животных для проведения биомедицинских исследований и в зоопарки создают реальную угрозу инфицирования людей, проживающих за пределами Экваториальной Африки.
Наиболее эффективным способом противодействия любой вирусной инфекции является использование профилактических вакцин, однако для MARV лицензированные вакцины отсутствуют. Другим способом борьбы с инфекцией могут быть антивирусные препараты. эффективность на модели морских свинок показали препараты на основе антисмысловых РНК и малые интерферирующие РНК [1-3]. Ведутся работы по поиску низкомолекулярных веществ - блокаторов проникновения вируса в клетку [4]. Одной из групп перспективных антивирусных препаратов, обладающих высокой избирательностью действия, являются моноклональные антитела. Все существующие методы получения моноклональных антител базируются на отборе отдельных вариантов антител из разнообразия, представленного иммунной системой либо переболевшего человека, либо иммунизированных лабораторных животных. Так как лихорадка Марбург является редким заболеванием, наиболее доступным источником может служить иммунная система лабораторных животных.
стимуляция выработки антител, нейтрализующих MARV в организме лабораторных животных, является нетривиальной задачей [5-8]. Так, иммунизация морских свинок инактивированным вирусом стимулировала выработку специфических антител, однако они не проявляли активность в тесте ингиби-рования бляшкообразования [6, 8]. Использование инактивированного вируса для иммунизации приматов привело к активации их гуморального иммунитета, но, несмотря на появление специфических антител в титре 1/2500, нейтрализующие антитела отсутствовали [9]. Иммунизация морских свинок вирусоподобными частицами на основе белков VP40 и GP или VP40, № и GP обеспечивала полную защиту животных от заражения гомологичными и гетерологичными штаммами MARV, однако так же, как в случае с инактивированным вирусом, нейтрализующие антитела не обнаружены [6, 8]. Сходные результаты наблюдались при иммунизации вирусоподобными частицами приматов: животные выжили, однако нейтрализующие антитела отсутствовали [10]. Обнадеживающие результаты показывают иммуногены на основе рекомбинантных вирусных векторов, при вакцинации которыми обнаружены
нейтрализующие антитела, что отражено в ряде работ [11, 12].
Целью настоящего исследования явилось изучение индукции нейтрализующих MARV антител у кур. Куры в качестве источника разнообразия анти-генраспознающих доменов антител имеют ряд преимуществ. Все разнообразие нуклеотидных последовательностей, кодирующих вариабельные фрагменты тяжелой (VH) и легкой (VL) цепей антител, у птиц фланкировано тремя консенсусными последовательностями [13], что облегчает в дальнейшем получение моноклональных антител с использованием технологии фагового дисплея. кроме того, динамику накопления специфических антител можно регистрировать для каждой курицы индивидуально, анализируя желток снесенных ею яиц, не прибегая к травматичным инвазивным процедурам.
Материалы и методы
в качестве иммуногена выбраны рекомбинант-ный вирус осповакцины, содержащий GP вируса Марбург штамма Musoke (GPmus), и псевдовирусные частицы, экспонирующие GP MARV, на основе VSV и ВИЧ-1. Для псевдотипирования использовали нуклеотидные последовательности, кодирующие поверхностный гликопротеин трех штаммов MARV: Popp (GenBank: Z29337.1), Musoke (GenBank: DQ217792.1) и DRC 2000 (GenBank: JX458848.1), при этом также использовали варианты GP без муци-ноподобного домена (AMLD). Синтез нуклеотидных последовательностей осуществлен коммерческой фирмой («ДНК-синтез», Москва).
Рекомбинантный вирус осповакцины (штамм Л-ИВП, GenBank: KP233807) со встройкой трансгена GPmus (VACV-GPmus) получали методом временной доминантной селекции с использованием векторной плазмиды pGEM-Puro-UN-DS, которая является универсальной конструкцией для встройки любых трансгенов в геном штамма л-Ивп в район делеции фрагмента гена C11R и экспрессии этих трансгенов под контролем ранне-позднего синтетического промотора рЕ/L [14]. Лентивирусные псевдовирусы MARV получали котрансфекцией эукарио-тических клеток HEK293T двумя плазмидами, одна из которых экспрессирует ген, кодирующий белок GP MARV, а вторая является пакующей плазмидой pSG3AEnv, как описано ранее [15]. Спустя двое суток после котрансфекции проводили сбор урожая псевдовирусов Lenti-GPAMLD-DRC.
Для получения псевдовирусов на основе VSV нами использован подход на основе рекомбинант-ного VSV (rVSVAG-G) с делецией гена поверхност-ностного гликопротеина (G), описанный ранее [16]. Клетки HEK293FT трансфицировали плазмидой, кодирующей GP MARV, через 24 ч проводили смену ростовой среды и добавляли rVSVAG-G. Спустя двое суток после трансфекции производили сбор урожая псевдовирусов VSV-GPAMLDpopp.
Функциональную активность лентивирусных псевдовирусов определяли на клетках TZM-bl - генетически модифицированной клеточной линии HeLa, презентирующей на своей поверхности большое число рецепторов для GP MARV и содержащей ре-портерный ген люциферазы светлячка под контролем Tat-индуцируемого промотора. Функциональную активность псевдовирусов на основе VSV определяли на культуре клеток HEK293T. В обоих случаях уровень вирусной инфекции оценивали по величине сигнала люминесценции, регистрируемого планшетным люминометром Stat Fax 4400. Величину сигнала люминесценции, которая прямо пропорциональна количеству зараженных клеток, выражали в относительных люциферазных единицах (RLU).
После наработки псевдовирусных частиц в эу-кариотических клетках HEK293FT (рабдовирусные псевдовирусы) и НЕК293Т (лентивирусные псевдовирусы) культуральную жидкость фильтровали через фильтр с диаметром пор 22 мкм и концентрировали центрифугированием через слой 20%-й сахарозы при 70000 g в течение 3-4 часов. Осадок растворяли в фосфатно-солевом буфере и хранили при температуре -80 °С.
Для иммунизации использовали 6 кур породы Лекгорн. На первом этапе всем курам однократно вводили рекомбинантный вирус осповакцины VACV-GPmus в дозе 1108 БОЕ на курицу (праймирование). Затем кур разделили на 2 равные группы и иммунизировали еще 8 раз псевдовирусами MARV. для первых пяти иммунизаций использовали псевдовирусы на основе рабдовирусной системы, экспонирующие AMLD GP штамма Popp, в дозе 1,4 107 RLU на птицу. Во время следующих трех иммунизаций куриц прививали смесью лентивирусных псевдовирусов, экспонирующих AMLD GP штамма DRC 2000, и раб-довирусных псевдовирусов, экспонирующих AMLD GP штамма Рорр MARV, в соотношении 1:1. Все иммунизации проводили внутримышечно, объем ино-кулята составил 500 мкл. Первой группе птиц псевдовирусы вводили в фосфатно-солевом буфере, второй - в комплексе с неполным адъювантом Фрейнда (НАФ). Все стадии исследования соответствовали законодательству рФ, международным этическим нормам и нормативным документам учреждения, а также одобрены соответствующими комитетами.
Выделение из яиц иммунизированных птиц желточных антител класса IgY проводили методом изо-электрического осаждения, описанным ранее [17]. с этой целью из яиц извлекали желточный мешок и растворяли его содержимое в дистиллированной воде, доводили водородный показатель смеси до рН 5 и помещали в морозильную камеру с температурой -20 °С не менее чем на 12 часов. Далее раствор пропускали через бумажный фильтр, добавляли хлорид натрия до конечной концентрации 8,8 % и доводили рН раствора до 4. Выпавший осадок центрифугировали. Для очистки препарата антител от примесей хлорида натрия проводили диализ.
Анализ специфических антител проводили при помощи ИФА. В качестве специфического иммуно-сорбента использовали очищенный концентрированный инактивированный препарат вируса Марбург штамма Рорр (номер V 626 в коллекции микроорганизмов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»). Для его получения на 7-е сутки инкубации собирали с монослоя зараженных клеток Vero 100 мл культуральной ви-руссодержащей жидкости. Осаждали вирусные частицы центрифугированием с 8 % полиэтиленглико-ля ПЭГ-8000, полученный осадок ресуспендировали в растворе Хенкса и осаждали ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы, собирая опалесцирующую фракцию. Вирус инактивировали инкубацией раствора антигена с добавлением 0,2 % пропиолактона при 37 °С. Контроль отсутствия остаточной инфекционности проводили методом пассажа на инъецированных препаратом антигена восприимчивых к вирусу Марбург морских свинках, параллельно с пассажами контаминированного этим препаратом монослоя клеточной культуры Vero. полученный препарат разводили в 100 раз в растворе 0,05 М натрия углекислого и вносили по 100 мкл в лунки полистиролового планшета. сорбцию антигена проводили в течение 18 часов, после чего проводили ИФА.
Для оценки нейтрализующей активности IgY использовали псевдовирусы MARV на основе rVSVAG. В иммунологическом 96-луночном планшете готовили 4-кратные разведения препарата антител, затем во все лунки добавляли одинаковое количество псевдовирусов (40000 RLU). После получасовой инкубации смеси антител и псевдовирусов переносили в соответствующие лунки 96-луночного планшета с клетками НЕК293Т. Через 48 ч проверяли уровень люминесценции на планшетном люминометре Stat Fax 4400.
Анализ нейтрализующей активности также проводили при помощи реакции ингибирования бляш-кообразования MARV штамма Рорр на монослое клеток Vero. Реакция проводилась на суточной культуре клеток Vero под полужидким агаровым покрытием, как описано ранее [18]. Полученные результаты учитывали на 7-е сутки.
результаты и обсуждение
В нашей работе для индукции нейтрализующих MARV антител в качестве иммуногенов использовали рекомбинантный вирус осповакцины и псевдовирусы (рекомбинантные вирусы одного цикла). Выбор продиктован простотой и относительной безопасностью работы с такими иммуногенами при сохранении иммунологических особенностей, характерных для натурального вируса.
Для индукции кросс-нейтрализующих антител использовали прайм-бустерную стратегию, заключающуюся в использовании гетерологичных псевдовирусных частиц (лентивирусные и на осно-
Рис. 1 Схема иммунизации кур. В первой иммунизации в качестве иммуногена использовался рекомбинантый вирус осповакцины, экспрессирующий трансген GP MARV штамма Musoke. Первая группа птиц далее иммунизирована очищенными псевдовирусами VSV-GPAMLDpopp в концентрации 1,4107 RLU. Вторая группа птиц получала тот же антиген в комплексе с БАФ. Последние три иммунизации выступали в роли буста и птицам вводили смесь VSV-GPAMLDpopp и Lenti-GPAMLD-DRC
Fig. 1. Chicken immunization schedule. During the first immunization, a recombinant vaccinia virus expressing the GP MARV transgene of the Musoke strain was used as an immunogen. The first group of birds was further immunized with purified VSV-GPAMLDpopp pseudoviruses at a concentration of 1.4107 RLU. The second group of birds received the same antigen in combination with Freund's incomplete adjuvant. The last 3 immunizations served as boost ones and the birds were injected with a mixture of VSV-GPAMLDpopp and Lenti-GPAMLD-DRC
ве рабдовирусной системы), а также гетерологичных GP MARV (Popp и DRC 2000). Известно, что присутствующий в составе GP муциноподобный домен филовирусов способен негативно влиять на гуморальный иммунный ответ, направленный против MARV [19]. Поэтому для разработки иммуногена использовали варианты плазмид, в которых участок, кодирующий этот домен гликопротеина, удален. во время иммунизации выбрано девять контрольных точек для оценки эффективности гуморального ответа: каждая через 19-20 дней после инъекции. Схема иммунизации представлена на рис. 1.
ИФА препаратов антител класса IgY, выделенных из желтков иммунизированных птиц, показал нарастание титров специфических антител. В первой группе титры специфических антител после последней иммунизации достигли значений от 1:100 до 1:100000. В образцах, полученных от птиц второй группы, титр антител оказался существенно выше и составил от 1:100000 до 1:1 млн (рис. 2, 3), что можно объяснить использованием адъюванта. Как следует из рис. 2 и 3, после четвертой иммунизации повышение титра специфических антител существенно затормозилось, поэтому решено провести
Недели Weeks
Рис. 2. Динамика накопления специфических антител против природного очищенного концентрированного инактивированно-го антигена вируса Марбург штамма Рорр. Первая группа птиц:
Пунктирными линиями отмечены иммунизации. Синей линией обозначена курица М3, красной - М4, желтой - М5, зеленой - контрольная группа, иммунизированная физраствором. Титр ИФА выражен величиной, обратной разведению
Недели Weeks
Рис. 3. Динамика накопления специфических антител против природного очищенного концентрированного инактивированно-го антигена вируса Марбург штамма Рорр. Вторая группа птиц:
Пунктирными линиями отмечены даты иммунизации. Фиолетовой линией обозначена курица М6, зеленой - М7, черной - М8, светло-зеленой -контрольная неиммунизированная группа. Титр ИФА выражен величиной, обратной разведению
Fig. 2. Dynamics of accumulation of specific antibodies against the natural purified concentrated inactivated antigen of the MARV Popp. The first group of birds:
Dotted lines indicate immunizations. The blue line indicates chicken M3, red - M4, yellow - M5, green - control group immunized with NaCl. The titer of ELISA is expressed as the reciprocal of the dilution
Fig. 3. Dynamics of accumulation of specific antibodies against the natural purified concentrated inactivated antigen of MARV Popp strain. The second group of birds:
Dotted lines indicate immunization dates. The violet line indicates chicken M6, green - M7, black - M8, light-green - control non-immunized group. The titer of ELISA is expressed as the reciprocal of the dilution
Рис. 4. Динамика накопления нейтрализующих антител. Первая группа птиц:
Пунктирными линиями отмечены даты иммунизации. Синей линией обозначена курица М3, красной - М4 и желтой - М5
Fig. 4. Dynamics of accumulation of neutralizing antibodies. The first group of birds:
Dotted lines indicate immunization dates. The blue line indicates the chicken
M3, red - M4, and yellow - M5
Недели Weeks
Рис. 5. Динамика накопления нейтрализующих антител. Вторая группа птиц:
Пунктирными линиями отмечены даты иммунизации. Черной линией обозначена курица М6, зеленой - М7 и фиолетовой - М8
Fig. 5. Dynamics of accumulation of neutralizing antibodies. The second group of birds:
Dotted lines indicate immunization dates. The black line indicates the chicken
M6, green - M7 and purple - M8
M6 M7 M8
бустирование при помощи гетерологичного иммуно-гена, представляющего собой смесь рабдовирусных и лентивирусных частиц. Это позволило добиться дополнительного увеличения титра специфических антител, за исключением одной птицы (М5) из первой группы, для которой наблюдался обратный эффект (рис. 2).
Анализ нейтрализующих антител при помощи rVSVAG, экспонирующих GP MARV, выявил сходную картину (рис. 4-5). Пик нейтрализующих антител в обеих группах наблюдался после четвертой иммунизации, затем происходило снижение титров специфических антител. Введение гетерологиче-ского иммуногена стимулировало наработку нейтрализующих антител, однако этот эффект оказался нестабильным. Более стабильная наработка нейтрализующих антител наблюдается во второй группе птиц, иммунизированной по схеме с добавлением НАФ (рис. 5).
Интересно отметить, что рекомбинантный вирус осповакцины VACV-GPmus, продуцирующий GP MARV в процессе вирусной репликации в виде неструктурного белка, не экспонированного на поверхности вирионов, не индуцировал образование ви-руснейтрализующих антител. Однако VACV-GPmus эффективно «праймировал» синтез не нейтрализующих анти-MARV антител, выявляемых в ИФА. нейтрализующие антитела детектировались уже после первой иммунизации рекомбинантным раб-довирусом VSV-GPAMLDpopp, экспонирующим на поверхности вирионов GPpopp MARV. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости презентации GP MARV в виде мембранного поверхностного гликопротеина для повышения протективности вакцинации.
Анализ нейтрализующей активности в реакции ингибирования бляшкообразования с использованием натурального вируса Марбург штамма Popp показал наличие нейтрализующей активности антител в титрах от 1/8 до 1/16.
Таким образом, в ходе работы проведен сравнительный анализ иммуногенной активности анти-
генов на основе рекомбинантного вируса осповакци-ны, а также лентивирусной и рабдовирусной систем, представляющих собой псевдовирусные частицы, несущие на своей поверхности GP MARV (штаммы Popp, DRC2000, Musoke). Определена наиболее эффективная схема иммунизации кур, стимулирующая наработку специфических антител класса IgY с титром в ИФА от 1:100 до 1:1 млн. Полученные IgY нейтрализуют псевдовирусы MARV (штаммы Popp, DRC2000, Musoke) в разведении от 1/256 до 1/1024 и натуральный вирус MARV штамма Popp в разведении 1/8.
конфликт интересов. Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
финансирование. Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта №18-34-00512 мол_а.
список литературы
1. Geisbert T.W., Hensley L.E., Kagan E., Yu E.Z., Geisbert J.B., Daddario-DiCaprio K., Fritz E.A., Jahrling P.B., McClintock K., Phelps J.R., Lee A.C.H., Judge A., Jeffs L.B., MacLachlan I. Postexposure protection of guinea pigs against a lethal Ebola virus challenge is conferred by RNA interference. J. Infect. Dis. 2006; 193(12):1650-7. DOI: 10.1086/504267.
2. Enterlein S., Warfield K.L., Swenson D.L., Stein D.A., Smith J.L., Gamble C.S., Kroeker A.D., Iversen P.L., Bavari S., Mühlberger E. VP35 knockdown inhibits Ebola virus amplification and protects against lethal infection in mice. Antimicrob. Agents Chemother. 2006; 50(3):984-93. DOI: 10.1128/AAC.50.3.984-993.2006.
3. Warfield K.L., Swenson D.L., Olinger G.G., Nichols D.K., Pratt W.D., Blouch R., Stein D.A., Aman M.J., Iversen P.L., Bavari S. Gene-specific countermeasures against Ebola virus based on antisense phosphorodiamidate morpholino oligomers. PLoS Pathog. 2006; 2(1):e1. DOI: 10.1371/journal.ppat.0020001.
4. Sokolova A.S., Baranova D.V., Yarovaya O.I., Baev D.S., Tolstikova T.G., Salakhutdinov N.F., Polezhaeva O.A., Zybkina A.V., Shcherbakov D.N/ Synthesis of (1S)-(+)-camphor-10-sulfonic acid derivatives and investigations in vitro and in silico of their antiviral activity as the inhibitors of filovirus infections. Russ. Chem. Bull. 2019; 68(5):1041-6. DOI: 10.1007/s11172-019-2517-0.
5. Flyak A.I., Ilinykh P.A., Murin C.D., Garron T., Shen X., Fusco M.L., Hashiguchi T., Bornholdt Z.A., Slaughter J.C., Sapparapu G., Klages C., Ksiazek T.G., Ward A.B., Saphire E.O., Bukreyev A., Crowe J.E. Jr. Mechanism of human antibody-mediated neutralization of Marburg virus. Cell. 2015; 160(5):893-903. DOI: 10.1016/j. cell.2015.01.031.
6. Hevey M., Negley D., Geisbert J., Jahrling P., Schmaljohn A. Antigenicity and vaccine potential of Marburg virus glycoprotein expressed by baculovirus recombinants. Virology. 1997; 239(1):206-
16. DOI: 10.1006/viro.1997.8883.
7. Hevey M., Negley D., Pushko P., Smith J., Schmaljohn A. Marburg virus vaccines based upon alphavirus replicons protect
Guinea pigs and nonhuman primates. Virology. 1998; 251(1):28—37.
)OI: 10.1006/viro.1998.9367.
8. Hevey M., Negley D., VanderZanden L., Tammariello R.F., Geisbert J., Schmaljohn C., Smith J.F., Jahrling P.B., Schmaljohn A.L. Marburg virus vaccines: comparing classical and new approaches. Vaccine. 2001; 20(3-4):586-93. DOI: 10.1016/s0264-410-x(01)00353-x.
9. Ignatyev G.M., Agafonov A.P., Streltsova M.A., Kashentseva E.A. Inactivated Marburg virus elicits a nonprotective immune response in Rhesus monkeys. J. Biotechnol. 1996; 44(1—3):111—8. DOI: 10.1016/0168-1656(95)00104-2.
10. Dye J.M., Warfield K.L., Wells J.B., Unfer R.C., Shulenin S., Vu H., Nichols D.K., Aman M.J., Bavari S. Virus-like particle vaccination protects nonhuman primates from lethal aerosol exposure with Marburgvirus (VLP vaccination protects macaques against aerosol challenges). Viruses. 2016; 8(4):94. DOI: 10.3390/v8040094.
11. Daddario-DiCaprio K.M., Geisbert T.W., Geisbert J.B., Ströher U., Hensley L.E., Grolla A., Fritz E.A., Feldmann F., Feldmann H., Jones S.M. Cross-protection against Marburg virus strains by using a live, attenuated recombinant vaccine. J. Virol. 2006; 80(19):9659-66. DOI: 10.1128/JVI.00959-06.
12. Mire C.E., Geisbert J.B., Agans K.N., Satterfield B.A., Versteeg K.M., Fritz E.A., Feldmann H., Hensley L.E Geisbert T.W. Durability of a vesicular stomatitis virus-based Marburg virus vaccine in nonhuman primates. PLoS One. 2014; 9(4):e94355 DOI: 10.1371/journal.pone.0094355.
13. Andris-Widhopf J., Rader C., Steinberger P., Fuller R Barbas C.F. 3rd. Methods for the generation of chicken monoclonal antibody fragments by phage display. J. Immunol. Methods. 2000; 242(1-2):159-81. DOI: 10.1016/s0022-1759(00)00221-0.
14. Кочнева Г.В., Бабкина И.Н., Лупан Т.А., Гражданцева A.A., Юдин П.В., Сиволобова Г.Ф., Швалов А.Н., Попов Е.Г., Бабкин И.В., Нетесов С.В., Чумаков П.М. Апоптин усиливает онколитическую активность вируса осповакцины in vitro. Молекулярная биология. 2013; 47(5):842-52. DOI: 10.7868/ S0026898413050078.
15. Полежаева O.A. Щербаков Д.Н. Разработка панели псевдовирусных частиц, экспонирующих гликопротеин вируса марбург. Ме ждународный научно-исследовательский журнал. 2017; 8-2:27-30. DOI: 10.23670/IRJ.2017.62.018.
16. Whitt M.A. Generation of VSV pseudotypes using recombinant AG-VSV for studies on virus entry, identification of entry inhibitors, and immune responses to vaccines. J. Virol. Methods. 2010; 169(2):365-74. DOI: 10.1016/j.jviromet.2010.08.006.
17. Hodek P., Trefil P., Simunek J., Hudecek J., Stiborova M. Optimized protocol of chicken antibody (IgY) purification providing electrophoretically homogenous preparations. Int. J. Electrochem. Sci. 2013; 8:113-24.
18. Устинова Е.Н., Шестопалов A.M., Бакулина Л.Ф. Чепурнов A.A. Титрование вирусов Эбола и Марбург по бляшкообразованию под полужидким агаровым покрытием. Вопросы вирусологии. 2003; 48(1):43-4.
19. Hashiguchi T., Fusco M.L., Bornholdt Z.A., Lee J.E., Flyak A.I., Matsuoka R., Kohda D., Yanagi Y., Hammel M., Crowe J.E. Jr., Saphire E.O. Structural basis for Marburg virus neutralization by a cross-reactive human antibody. Cell. 2015; 160(5):904-12. DOI: 10.1016/j.cell.2015.01.041.
References
1. Geisbert T.W., Hensley L.E., Kagan E., Yu E.Z., Geisbert J.B., Daddario-DiCaprio K., Fritz E.A., Jahrling P.B., McClintock K., Phelps J.R., Lee A.C.H., Judge A., Jeffs L.B., MacLachlan I. Postexposure protection of guinea pigs against a lethal Ebola virus challenge is conferred by RNA interference. J. Infect. Dis. 2006; 193(12):1650-7. DOI: 10.1086/504267.
2. Enterlein S., Warfield K.L., Swenson D.L., Stein D.A., Smith J.L., Gamble C.S., Kroeker A.D., Iversen P.L., Bavari S., Mühlberger E. VP35 knockdown inhibits Ebola virus amplification and protects against lethal infection in mice. Antimicrob. Agents Chemother. 2006; 50(3):984-93. DOI: 10.1128/AAC.50.3.984-993.2006.
3. Warfield K.L., Swenson D.L., Olinger G.G., Nichols D.K., Pratt W.D., Blouch R., Stein D.A., Aman M.J., Iversen P.L., Bavari S. Gene-specific countermeasures against Ebola virus based on antisense phosphorodiamidate morpholino oligomers. PLoS Pathog. 2006; 2(1):e1. DOI: 10.1371/journal.ppat.0020001.
4. Sokolova A.S., Baranova D.V., Yarovaya O.I., Baev D.S., Tolstikova T.G., Salakhutdinov N.F., Polezhaeva O.A., Zybkina A.V., Shcherbakov D.N. Synthesis of (lS)-(+)-camphor-10-sulfonic acid derivatives and investigations in vitro and in silico of their antiviral activity as the inhibitors of filovirus infections. Russ. Chem. Bull. 2019; 68(5):1041-6. DOI: 10.1007/s11172-019-2517-0.
5. Flyak A.I., Ilinykh P.A., Murin C.D., Garron T., Shen X., Fusco M.L., Hashiguchi T., Bornholdt Z.A., Slaughter J.C., Sapparapu G., Klages C., Ksiazek T.G., Ward A.B., Saphire E.O., Bukreyev A., Crowe J.E. Jr. Mechanism of human antibody-mediated neutralization of Marburg virus. Cell. 2015; 160(5):893-903. DOI: 10.1016/j. cell.2015.01.031.
6. Hevey M., Negley D., Geisbert J., Jahrling P., Schmaljohn A. Antigenicity and vaccine potential of Marburg virus glycoprotein expressed by baculovirus recombinants. Virology. 1997; 239(1):206-16. DOI: 10.1006/viro.1997.8883.
7. Hevey M., Negley D., Pushko P., Smith J., Schmaljohn A. Marburg virus vaccines based upon alphavirus replicons protect guinea pigs and nonhuman primates. Virology. 1998; 251(1):28-37. DOI: 10.f006/viro.1998.9367.
8. Hevey M., Negley D., VanderZanden L., Tammariello R.F., Geisbert J., Schmaljohn C., Smith J.F., Jahrling P.B., Schmaljohn A.L. Marburg virus vaccines: comparing classical and new approaches. Vaccine. 2001; 20(3-4):586-93. DOI: 10.1016/s0264-410-x(01)00353-x.
9. Ignatyev G.M., Agafonov A.P., Streltsova M.A., Kashentseva E.A. Inactivated Marburg virus elicits a nonprotective immune response in Rhesus monkeys. J. Biotechnol. 1996; 44(1—3):111—8. DOI: 10.1016/0168-1656(95)00104-2.
10. Dye J.M., Warfield K.L., Wells J.B., Unfer R.C., Shulenin S., Vu H., Nichols D.K., Aman M.J., Bavari S. Virus-like particle vaccination protects nonhuman primates from lethal aerosol exposure with Marburgvirus (VLP vaccination protects macaques against aerosol challenges). Viruses. 2016; 8(4):94. DOI: 10.3390/v8040094.
11. Daddario-DiCaprio K.M., Geisbert T.W., Geisbert J.B., Ströher U., Hensley L.E., Grolla A., Fritz E.A., Feldmann F., Feldmann H., Jones S.M. Cross-protection against Marburg virus strains by using a live, attenuated recombinant vaccine. J. Virol. 2006; 80(19):9659-66. DOI: 10.1128/JVI.00959-06.
12. Mire C.E., Geisbert J.B., Agans K.N., Satterfield B.A., Versteeg K.M., Fritz E.A., Feldmann H., Hensley L.E., Geisbert T.W. Durability of a vesicular stomatitis virus-based Marburg virus vaccine in nonhuman primates. PLoS One. 2014; 9(4):e94355 DOI: 10.1371/journal.pone.0094355.
13. Andris-Widhopf J., Rader C., Steinberger P., Fuller R., Barbas C.F. 3rd. Methods for the generation of chicken monoclonal antibody fragments by phage display. J. Immunol. Methods. 2000; 242(1-2):159-81. DOI: 10.1016/s0022-1759(00)00221-0.
14. Kochneva G.V., Babkina I.N., Lupan T.A., Grazhdantseva A.A., Yudin P.V., Sivolobova G.F., Shvalov A.N., Popov E.G., Babkin I.V., Netesov S.V., Chumakov P.M. [Apoptin enhances the oncolytic activity of vaccinia virus in vitro]. Molekulyarnaya Biologiya [Molecular Biology]. 2013; 47(5):842-52. DOI: 10.7868/ S0026898413050078.
15. Polezhaeva O.A., Shcherbakov D.N. [Development of a panel of pseudoviral particles exhibiting the glycoprotein of the Marburg virus]. Mezhdunarodny Nauchno-Issledovatelsky Zhurnal [InternationalResearch Journal]. 2017; 8-2:27-30. DOI: 10.23670/ IRJ.2017.62.018.
16. Whitt M.A. Generation of VSV pseudotypes using recombinant AG-VSV for studies on virus entry, identification of entry inhibitors, and immune responses to vaccines. J. Virol. Methods. 2010; 169(2):365-74. DOI: 10.1016/j.jviromet.2010.08.006.
17. Hodek P Trefil P., Simunek J., Hudecek J., Stiborova M. Optimized protocol of chicken antibody (IgY) purification providing electrophoretically homogenous preparations. Int. J. Electrochem. Sci. 2013; 8:113-24.
18. Ustinova E.N., ShestopalovA.M., Bakulina L.F., Chepurnov A.A. [Titration of Ebola and Marburg viruses by plaque formation under semi-liquid agar coating]. Voprosy Virusologii [Problems of Virology]. 2003; 48(1Y43-4.
19. Hashiguchi T., Fusco M.L., Bornholdt Z.A., Lee J.E., Flyak A.I., Matsuoka R., Kohda D., Yanagi Y., Hammel M., Crowe J.E. Jr., Saphire E.O. Structural basis for Marburg virus neutralization by a cross-reactive human antibody. Cell. 2015; 160(5):904-12. DOI: 10.1016/j.cell.2015.01.041.
Authors:
Polezhaeva O.A., Zybkina A.V., Zaikovskaya A.V., P'yankov O.V., P'yankov S.A., Semenova A.V., Kochneva G.V., Shcherbakov D.N. State Scientific Centre of Virology and Biotechnology "Vector". Kol'tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation. E-mail: vector@vector.nsc.ru.
об авторах:
Полежаева О.А., Зыбкина А.В., Зайковская А.В., Пьянков О.В., Пьянков С.А., Семенова А.В., Кочнева Г.В., Щербаков Д.Н. Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор». Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., п. Кольцово. E-mail: vector@vector.nsc.ru.
