CC BY
8
46
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
животным вводили суспензию МСК или физраствор по периметру раны.
Подкожная инъекция МСК-гипоксия способствовала ускорению деквамации струпа в 2,3 и 1,4 раза, а также способствовала уменьшению площади раны в 1,2 и 2,3 раза по сравнению с группами МСК-нормоксия и контроль соответственно. Таким образом, суспензия МСК, выращенных в гипоксии, является перспективным способом лечения ожогов, в том числе полученных в экстремальных для организма условиях гипотермии и гипоксии. Работа выполнена при поддержке гранта по соглашению от 28 ноября 2018 года № 14.575.21.0179 (идентификатор проекта RFMEFI57518X0179), заключенному между Минобрнауки РФ и МФТИ.
Литература:
1. Han Y. et al. Cells. 2019. V. 8 (8). P. 886.
2. Fan X.L. et al. Cellular and molecular life sciences. 2020. V. 77 (14). P. 2771-2794.
3. Samal J.R. K. et al. Advanced Healthcare Materials. 2021. V. 10 (6). P. 2002058.
ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ИПСК
ИЗ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА С МУТАЦИЕЙ
В ГЕНЕ GNAO1 ДЛЯ МОДЕЛИРОВАНИЯ
НАСЛЕДСТВЕННОЙ ЭПИЛЕПСИИ
Е.А. Воловиков1, 2, Д.М. Спирин1, 2,
А.Н. Богомазова1
1 ФНКЦ физико-химической медицины ФМБА России, Москва, Россия
2 Биологический факультет, МГУ
им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: ИПСК, GNAO1, нейроны, эпилепсия
Ген GNAO1 кодирует альфа-субъединицу гетеротри-мерного комплекса G-белков. Мутации в этом гене являются причиной ранней эпилептической энцефалопатии 17-го типа (РЭЭ17) [1]. Известно две белковых изофор-мы GNAO1 [2], но их функциональная значимость изучена недостаточно. Существующие животные модели РЭЭ17 не полностью воспроизводят молекулярную патологию заболевания [3]. Ввиду того, что РЭЭ17 является наследственным заболеванием с ранним появлением первых симптомов, особый интерес представляют молекулярные механизмы патогенеза на ранних стадиях развития организма. Таким образом, целью нашей работы стала разработка клеточной модели РЭЭ 17-го типа и изучение функций GNAO1 в эмбриогенезе.
Нами были получены фибробласты кожи от пациента с диагностированной РЭЭ17, которые затем репрограммировали до плюрипотентного состояния неинтегративным методом. Полученные ИПСК были охарактеризованы и обладают нормальным кариотипом. Направленной дифференцировкой из ИПСК с мутацией в гене GNAO1 и из ИПСК здоровых доноров были получены культуры нейронов и органоиды мозга. Экспрессию обеих белок-кодирующих изоформ GNAO1 в ИПСК, нейрональных предшественниках и органоидах показали на уровне РНК. Методом ИЦХ было показано, что в ИПСК GNAO1 локализован преимущественно в ядре, в то время как в зрелых нейронах он локализован преимущественно в цитоплазме.
Полученные данные позволяют предположить, что роль GNAO1 в раннем эмбриональном развитии
отличается от таковой в зрелом мозге и могут послужить базой для дальнейших исследований.
Литература:
1. Feng H. et al. Neurobiol Dis. 2018. 116:131-141
2. Murtagh J.J. Jr et al. Mol Cell Biol. 1991. 11(2):1146-1155
3. Feng H. et al. PLOS ONE. 2019. 14(1):e0211066
РЕГУЛЯЦИЯ АДИПОГЕННОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ГЛЮКАГОНОПОДОБНЫМ ПЕПТИДОМ-1
Н.С. Волошин1, К.Ю. Кулебякин1, 2
1 Кафедра биохимии и молекулярной медицины, Факультет Фундаментальной Медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Лаборатория молекулярной эндокринологии, Институт регенеративной медицины МНОЦ МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: мезенхимные стволовые/стромальные клетки, адипогенная дифференцировка, адипогенез, ГПП-1, лираглутид, ДПП-4, алоглиптин.
В современном мире заболеваемость ожирением и сахарным диабетом неуклонно растет. В то же время фармакологическая индустрия предлагает все больше методов борьбы с этими заболеваниями, в частности, становятся популярнее препараты, относящиеся к сигнальной системе глюкагоноподобного пептида-1 (ГПП-1) — агонисты рецептора ГПП-1 и ингибиторы ДПП-4. Однако в современной литературе данные о влиянии глюкагоноподобного пептида-1 на адипогенез, нарушение которого является ключевым звеном патогенеза метаболического синдрома, противоречивы: в исследованиях на клетках мыши продемонстрировано положительное влияние ГПП-1 на адипогенез [1], в то время как на клетках человека показано обратное [2]. Но работы, проведенные на клетках человека, обладают рядом недостатков, например, нет работ, проведенных на клетках, полученных от здоровых доноров.
Целью нашей работы является исследование влияния ГПП-1, его комбинации с ингибитором ДПП-4 алоглипти-ном, а также агониста ГПП-1 лираглутида на адипоген-ную дифференцировку мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (ММСК) из подкожной жировой клетчатки живота, полученных от здоровых доноров.
Оценка адипогенной дифференцировки ММСК производилась при помощи флуоресцентной микроскопии с окраской Nile Red на 14-й день, ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией на гены-маркеры адипо-генной дифференцировки — PPARy и адипонектин. Также оценка динамики адипогенной дифференцировки производилась при помощи фазово-контрастной микроскопии клеток на протяжении нескольких дней с последующим автоматическим подсчетом клеток с жировыми каплями при помощи свёрточных нейронных сетей из модуля NIS. ai в ПО NIS Elements AR.
Полученные данные свидетельствуют в пользу того, что ни лираглутид, ни комбинация ГПП-1 с ингибитором ДПП-4 алоглиптином не влияют на накопление клетками жировых капель, однако лираглутид значимо изменяет экспрессию адипонектина и PpARy, что наблюдается в гораздо меньшей степени для комбинации ГПП-1 и ало-глиптина и совсем не наблюдается для только ГПП-1.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
