CC BY
356
МИКРОНУТРИЕНТЫ В ПИТАНИИ
Для корреспонденции
Стефанова Изабелла Львовна - доктор технических наук, главный научный сотрудник лаборатории технологии детских и специальных продуктов Всероссийского научно-исследовательского института птицеперерабатывающей промышленности - филиала ФГБНУ «Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства"» РАН Адрес: 141552, Московская область, Солнечногорский район, п/о Ржавки
Телефон: (495) 944-53-30 E-mail: dp.vniipp@mail.ru
Стефанова И.Л., Мазо В.К., Мокшанцева И.В.
Получение и физико-химическая характеристика функционального пищевого ингредиента - комплекса цинка с ферментолизатом белка куриного яйца
Всероссийский научно-исследовательский институт птицеперерабатывающей промышленности - филиал ФГБНУ «Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства"» РАН, Московская область, Солнечногорский район,р/п Ржавки
All-Russian Scientific Research Institute of Poultry Processing Industry - Branch of the Federal Scientific Center «All-Russian Research and Technological Poultry Institute» of Russian Academy of Sciences Moscow Region, Solnechnogorsk District, Rzhavki
Использование биотехнологического подхода, включающего ферментативный гидролиз пищевых белков и последующее комплексирование с эссенциальными микроэлементами (ЭМ), позволяет получать новые пищевые источники этих ЭМ - облигатных антиоксидантов (цинка, меди, марганца) в органической высокобиодоступной форме. Получен и физико-химически охарактеризован новый пищевой источник органической формы цинка в виде комплекса этого ЭМ с пептидными фракциями ферментолизата коагулированного яичного белка. Ингибиторная активность нативного яичного белка была снижена в 2 раза его коагуляцией - одностадийной термической обработкой до +88 °С. Протеолиз коагулированного яичного белка проведен в течение 2 временных интервалов (2 и 5 ч) ферментными препаратами - протеазами бактериального происхождения (нейтральная протеаза В 2256, щелочная протеаза С 1986 и щелочная протеаза протозим В). В составе гидролизатов охарактеризовано молекуляр-но-массовое распределение пептидных фракций методом эксклюзионной хроматографии и определено содержание азота по методу Къельдаля. 5-часовой протеолиз при использовании ферментного препарата протозим В позволил перевести в водорастворимую фазу 85% общего азота относительно исходного коагулированного яичного белка. В этом гидролизате содержание пептидных фракций с молекулярной массой в интервале от 1,1 до 6,9 кДа составило 58%,
Для цитирования: Стефанова И.Л., Мазо В.К., Мокшанцева И.В. Получение и физико-химическая характеристика функционального пищевого ингредиента - комплекса цинка с ферментолизатом белка куриного яйца // Вопр. питания. 2017. Т. 86. № 2. С. 70-75. Статья поступила в редакцию 10.11.2016. Принята в печать 27.02.2017.
For citation: Stefanova I.L., Mazo V.K., Mokshantseva I.V. Preparation and physical-chemical characteristics of functional food ingredient - zinc complex with egg protein fermentolisate. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2017; 86 (2): 70-5. (in Russian) Received 10.11.2016. Accepted for publication 27.02.2017.
Preparation and physical-chemical characteristics of functional food ingredient -zinc complex with egg protein fermentolisate
Stefanova I.L., Mazo V.K., Mokshantseva I.V.
менее 1,1кДа - 21%, содержание цинка в составе комплекса с гидролизатом -19 мг/г. Обсуждается перспективность масштабирования использованного в работе биотехнологического подхода для получения в промышленных условиях высококонцентрированного пищевого источника цинка в органической форме, предназначенного для использования в качестве микроингредиента специализированных продуктов для профилактики микроэлементной недостаточности. Ключевые слова: белок куриного яйца, цинк, ферментативные гидролизаты, комплексы, функциональные пищевые ингредиенты, функциональные пищевые продукты
The use of biotechnological approach, including obtaining of food protein fermentative hydrolysates, following their combination with essential microelements (EM), allows to obtain new nutritional sources of these EM-obligate antioxidants (zinc, copper, manganese) in organic high-bioavailable form. In this research new nutritional source of zinc organic form as a complex with peptide fractions of fermentolysate of coagulated egg protein was obtained and was characterized by physical-chemical methods. Inhibitory activity of native egg protein lowered by 2 fold under coagulation with one-stage thermal processing (t = +88 °C). The proteolysis of coagulated egg protein was performed within two time intervals (2 and 5 hours) by enzymatic preparations, proteases of bacterium origin (neutral Protease B 2256, alkaline protease C 1986 and alkaline protease Protozim B). A molecular weight distribution of peptide fractions in obtained fermentolysates was characterized by the method of exclusion chromatography and nitrogen concentration was determined by Kjehldal method. Water-soluble phase, obtained by means of 5 hours fermentolysis using enzymatic preparation Protozim B, contained 85% of general nitrogen against original coagulated egg protein. The concentration of peptide fraction with the molecular weight 1.1-6.9 kD was 58% and less than 1.1 kD - 21%. This fermentolisate was used to obtain a complex with zinc. Zinc concentration in complex was 19 mg/g. Technological approach used in this work allowed to obtain a new high concentrated food source of zinc in organic form as an ingredient of specialized foods for microelement deficiency prevention is prospective. Keywords: egg protein, zinc, enzymatic hydrolysates, complexes, functional food ingredients, functional foods
При дефиците или недостаточности в рационе человека эссенциальных микроэлементов (ЭМ) - обли-гатных пищевых антиоксидантов, в том числе цинка, повышается риск свободнорадикальной патологии, проявляющейся многочисленными болезнями и клиническими синдромами [1, 2].
Выявление и количественная оценка недостаточной обеспеченности цинком довольно трудоемки, поскольку определение цинка в плазме крови позволяет обнаружить лишь тяжелую степень его дефицита [3]. Тем не менее имеющиеся данные свидетельствуют о том, что неадекватная обеспеченность этим ЭМ (в основном вследствие его недостаточного поступления с пищей и/или низкой усвояемости в составе пищевых продуктов растительного происхождения) распространена в странах Юго-Восточной Азии, Африки, в ряде регионов Европы, а также в России [4-6].
Практическая реализация программ, направленных на диетическую профилактику и коррекцию микроэлементной недостаточности, предполагает, во-первых, обогащение эссенциальными микроэлементами пищевых продуктов массового потребления, доступных для всех групп детского и взрослого населения, регулярно используемых в повседневном питании, и, во-вторых, широкое производство специ-
ализированной продукции, включающей диетические профилактические и лечебные продукты, биологически активные добавки (БАД) к пище, продукты для питания спортсменов, детей раннего возраста, функциональные пищевые продукты [7]. Отнесение пищевого продукта к категории «функциональный» определяется наличием в его составе (в определенных количественных соотношениях) функциональных пищевых ингредиентов (ФПИ), потребление которых с позиций доказательной медицины способствует снижению риска развития алиментарно-зависимых заболеваний, сохранению и улучшению здоровья [8]. Качество ФПИ, как дополнительных концентрированных источников ЭМ, прежде всего должно обеспечиваться их высокой усвояемостью и одновременно безопасностью, а эффективность в полной мере должна отвечать требованиям доказательной медицины. Использование биотехнологического подхода, включающего ферментативный гидролиз пищевых белков и последующее комплексирование с эссециальными микроэлементами (ЭМ) с незаполненной с1-электрон-ной оболочкой, позволяет получать новые пищевые источники этих ЭМ - облигатных антиоксидантов (цинка, меди, марганца) в органической высокобио-доступной форме [1].
Перспективным исходным пищевым белком - объектом ферментолиза для последующего получения органической формы цинка в качестве ФПИ является белок куриного яйца, обеспечивающий, как известно, питание эмбриона и обладающий биологической ценностью, превышающей этот показатель для большинства других пищевых белков [9]. Данные сравнительной оценки содержания незаменимых аминокислот в белковой части яйца и в составе «идеального белка» по шкале ФАО/ ВОЗ свидетельствуют об отсутствии лимитирующих аминокислот в составе яичного белка. Переваривание сырого яичного белка в желудочно-кишечном тракте существенно снижается, поскольку в его составе содержатся ингибитор сериновых протеиназ овомукоид (около 10%) и в существенно меньших количествах некоторые другие ингибиторы ферментов (овоингибитор, овостатин, цистатин). Соответственно сырой яичный белок не только плохо усваивается, но и может снижать усвояемость других белков пищи. Тепловая обработка снижает ингибиторную активность овомукоида, облегчая его протеолиз in vitro [10].
Цель работы - представить результаты исследования, направленного на получение и физико-химическую характеристику нового пищевого источника органической формы цинка в виде комплекса этого ЭМ с пептидными фракциями ферментолизата коагулированного яичного белка.
Материал и методы
Образец коагулированного яичного белка был получен его отделением от желтка, перемешиванием жидкой белковой массы, подкислением лимонной кислотой с добавлением хлористого натрия (0,13 и 0,8% соответственно), выдерживанием при комнатной температуре (24 °С) в течение 15 мин и последующей одностадийной тепловой обработкой смеси (нагревание до +88 °С при постоянном перемешивании). После этого была отделена жидкая фаза, а полученный коагулят охлажден и лиофильно высушен. Образец нативного яичного белка был получен его отделением от желтка и лио-фильно высушен.
При проведении ферментативного гидролиза использовали протеазы бактериального происхождения: нейтральная протеаза В 2256 (продуцент - Bacillus licheniformis, активность 57775 ед/г, Ладыженский завод ферментных препаратов, Украина), щелочная протеаза С 1986 (продуцент - Acremonium, 77850 ед/г, Ладыженский завод ферментных препаратов, Украина) и щелочная протеаза протозим В (активность 100 000 ед/г, «Микробиопром», Украина). Ферментативные активности определены согласно [11].
Определение ингибиторной активности нативного и коагулированного яичного белка по отношению к трипсину из поджелудочной железы крупного рогатого скота («Sigma», США) проведено согласно методике [12] c некоторыми модификациями. Навески 4,00 г на-
тивного или коагулированного яичного белка диспергировали в объеме 36,0 см3 0,01 М фосфатно-солевого буфера (рН 7,4) в течение 1 ч при постоянном перемешивании при комнатной температуре (24 °С) с последующим центрифугированием (3000 об/мин, 15 мин, центрифуга 6В, Beckman, Германия) Для проведения реакции в пробирки вносили по 0,2 см3 супернатанта (в различных разведениях: 10-3200 раз), по 1,7 см3 0,1 М трис-HCl, рН 7,8 с 0,001 М Са2+ и 0,1 см3 0,01% раствора трипсина в 0,001 н. HCl. В пробу «бланк» вносили 0,2 см3 фосфатно-солевого буфера, 1,7 см3 трис-HCl буфера и 0,1 см3 раствора трипсина. Растворы термостатировали 10 мин при 37 °С, после чего вносили по 0,5 см3 1,09% раствора Ы-альфа-бензоил^1_-аргинин-р-нитроанилид гидрохлорид (БАПНА) в диметилформамиде. Через 30 мин реакцию останавливали добавлением 0,5 см3 0,5 н H2SO4. Определяли экстинкцию растворов при Х=405 нм против пробы «бланк».
Протеолиз коагулированного яичного белка проводили следующим образом: 2% водную взвесь коагулированного белка выдерживали в течение 2 ч на водяной бане при температуре +53-55 °С (в случае протеазы В и С) или при +57-59 °С в (случае протозима В). Затем вносили фермент в количестве 5,0% (по массе от навески белка) и при постоянном перемешивании проводили ферментативный гидролиз в течение 5 ч, поддерживая рН в диапазоне 7,1-7,3 (для протеазы В и протеазы С) или 7,4-7,6 (для протозима В) 5,0-процентным раствором KOH:NaOH (2:1). Аликвоты реакционной смеси отбирали через 2 ч от начала реакции и через 5 ч (окончание ферментолиза) Реакцию останавливали нагреванием смеси до 75 °С и выдерживанием при этой температуре в течение 30 мин. Затем ферментолизаты центрифугировали (3000 об/мин, 15 мин, центрифуга «Beckman J-6B», «Beckman», США), декантировали над-осадок, промывали осадок дистиллированной водой и объединяли супернатанты. Количественно отбирали осадок. Осадок и супернатант лиофильно высушивали (лиофильная сушилка ЛС 500, «ПРОИНТЕХ-био», РФ) и по окончании процесса лиофилизации взвешивали сухие продукты.
В аликвотах гидролизатов оценивали молекулярно-массовое распределение методом эксклюзионной хроматографии согласно [13] [колонка Супероза 12, 1,0x30 см, («Serva», Германия), элюент 0,2 М NaCl, скорость элюирования 0,4 см3/мин, длина волны проточного УФ-детектора УФ132 - 280 нм, программа для обработки данных «Мультихром 3.1»]. Хроматограммы интегрировались весовым методом в диапазоне молекулярных масс от свободного до полного объема хроматографи-ческой колонки.
Комплекс цинка с ферментативным гидролизатом коагулированного белка, полученного с использованием протеазы В, получали по методике [14] с незначительными модификациями. К осветленному фер-ментолизату при комнатной температуре добавляли 10% водный раствор ZnCl2 в соотношении по сухим веществам 20:1. Реакцию при постоянном перемеши-
Молекулярно-массовое распределение гидролизатов белков куриного яйца через 2 и 5 ч реакции
№ фракции Диапазон молекулярных масс, кДа Содержание фракции (по оптической плотности при 280 нм), %
протеаза В (гидролизат № 1) протеаза С (гидролизат № 2) протозим В (гидролизат № 3)
2 ч ферментолиза
1 >72,9 0,7 13,4 1,0
2 >72,9-21,2 13,9 25,7 9,5
3 21,2-6,9 7,8 13,7 13,3
4 6,9-2,6 38,5 23,5 36,3
5 2,6-1,1 22,3 10,6 21,6
6 <1,1 16,8 13,0 18,3
5 ч ферментолиза
1 >72,9 0,6 15,9 0,3
2 72,9-21,2 9,2 20,3 8,0
3 21,2-6,9 8,5 12,1 12,5
4 6,9-2,6 36,6 27,6 36,3
5 2,6-1,1 25,6 10,9 21,7
6 <1,1 19,5 13,2 21,2
вании проводили в течение 60 мин при рН 7,0-7,1 при комнатной температуре (24 °С). По окончании инкубации полученную смесь осветляли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин, супернатант лиофильно высу-шивали.
Содержание азота в образцах яичного белка и его ферментолизатов определяли по методу Къельдаля [15] и содержание белка рассчитывали, используя коэффициент 6,25. Содержание цинка в составе комплекса с ферментолизатом определяли атомно-абсорбцион-ным методом [16].
Авторы выражают благодарность старшему научному сотруднику лаборатории пищевых биотехнологий и специализированных продуктов ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» С.Н. Зорину за помощь в работе.
Результаты и обсуждение
Вследствие мягких условий коагуляции ингибирую-щая активность яичного белка по отношению к панкреатическому трипсину снизилась в 2 раза. Однако даже такое относительно незначительное снижение ингиби-торных свойств яичного белка способствовало достаточно эффективному одностадийному проведению про-теолиза in vitro, о чем свидетельствуют представленные в таблице результаты сравнительной количественной оценки молекулярно-массового распределения пептидных фракций ферментолизатов коагулированного яичного белка, полученных с использованием трех различных ферментативных препаратов.
Увеличение времени протеолиза с использованием протеазы С от 2 ч до 5 ч практически не влияло на увеличение содержания фракций пептидов с молекулярной массой ниже 2,6 кДа, а при использовании протеазы В и протозима В этот показатель возрастал соответс-
твенно на 6% и 3%. Ферментолиз в течение 5 ч (в зависимости от выбранного ферментного препарата) позволял перевести в водорастворимую фазу 52% (при использовании протеазы С), 69% (при использовании протеазы В) и 85% (при использовании протозима В) общего азота относительно исходного коагулированного яичного белка. Для получения комплекса с цинком был выбран полученный в результате 5-часового расщепления коагулированного яичного белка протозимом В ферментолизат № 3, содержащий в своем составе 58% пептидных фракций в интервале молекулярных масс 6,9-1,1 кДа и 21% фракций с молекулярной массой менее 1,1 кДа. Высокая степень расщепления пептидных связей в ферментолизате определила эффективность связывания цинка, содержание которого в комплексе составило 19 мг/г.
Добавление цинка в составе ФПИ в 100 г пищевого продукта в количестве, обеспечивающем не менее 30% от его суточной потребности, является отличительным признаком функционального пищевого продукта с высоким содержанием цинка [8]. Ожидаемый благоприятный эффект при систематическом приеме функциональных пищевых продуктов с высоким содержанием цинка связан с тем, что этот ЭМ способствует нормализации кислотно-щелочного баланса. В соответствии с вышеизложенным содержание полученного комплекса цинка с гидролизатом № 3 в качестве ФПИ может составлять всего 0,2% и не влиять на органолептические свойства продукта.
Ферментолизаты яичного белка находят все более широкое применения при создании новых видов специализированных пищевых продуктов [17, 18]. Использование одностадийного гидролитического расщепления яичного белка с помощью ферментного препарата Flavopro 7861МЮР позволило получить высокоусвояемый ферментолизат, лишенный горького вкуса [19]. Тем не менее в доступной литературе нам не встречались
публикации, свидетельствующие об использовании комплексов ферментолизатов яичного белка с ЭМ в качестве ФПИ.
Таким образом, очевидна перспективность масштабирования использованного в работе технологического подхода для получения в промышленных условиях высококонцентрированного пищевого источника цинка
в органической форме, в качестве микроингредиента специализированных пищевых продуктов для профилактики микроэлементной недостаточности.
Исследование выполнено при финансовой поддержке гранта Российского научного фонда (проект № 16-16-04047).
Сведения об авторах
Стефанова Изабелла Львовна - доктор технических наук, главный научный сотрудник лаборатории технологии детских и специальных продуктов Всероссийского научно-исследовательского института птицеперерабатывающей промышленности - филиала ФГБНУ «Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства"» РАН (Московская область, Солнечногорский район, р/п Ржавки) E-mail: dp.vniipp@mail.ru
Мазо Владимир Кимович - доктор биологических наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории технологии детских и специальных продуктов Всероссийского научно-исследовательского института птицеперерабатывающей промышленности - филиала ФГБНУ «Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства"» РАН (Московская область, Солнечногорский район, р/п Ржавки), ведущий научный сотрудник лаборатории пищевых биотехнологий и специализированных продуктов ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва) E-mail: mazo@ion.ru
Мокшанцева Ирина Вадимовна - кандидат технических наук, директор Всероссийского научно-исследовательского института птицеперерабатывающей промышленности - филиала ФГБНУ «Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства"» РАН (Московская область, Солнечногорский район, р/п Ржавки) E-mail: arina.vniipp@gmail.com
Литература
1. Мазо В.К., Гмошинский И.В., Ширина Л.И. Новые пищевые 11. источники эссенциальных микроэлементов-антиоксидантов.
М. : Миклош, 2009. 208 с.
2. Мазо В.К., Гмошинский И.В., Скальный А.В., Сысоев Ю.А. Цинк
в питании человека: физиологические потребности и био- 12. доступность // Вопр. питания. 2002. Т. 71, № 3. С. 46-51.
3. Hotz С., Brown K. Assessment of the risk of zinc deficiency 13. in populations and options for its control // Food Nutr. Bull. 2004.
Vol. 25. P. S99-S199.
4. Epstein M.M., Kasperzyk J.L., Andmn O., Giovannucci E.L. et al. Dietary zinc and prostate cancer survival in a Swedish cohort //
Am. J. Clin. Nutr. 2011. Vol. 93, N 3. P. 586-593. 14.
5. Rubio C., Gutrnrrez A.J., Revert C., Reguera J.I. et al. Daily dietary intake of iron, copper, zinc and manganese in a Spanish population // Int. J. Food Sci. Nutr. 2009. Vol. 60, N 7. P. 590-600. 15.
6. Вильмс Е.А., Турчанинов Д.В., Турчанинова М.С. Микроэлемен-тозы у детского населения мегаполиса: эпидемиологическая 16. характеристика и возможности профилактики // Педиатрия. 2011. Т. 90, № 1. С. 96-101.
7. Пищевые ингредиенты в создании современных продуктов 17. питания / под ред. В.А. Тутельяна, А.П. Нечаева. М. : ДеЛи плюс, 2014. 520 с.
8. ГОСТ Р 55577-2013. Продукты пищевые функциональные; информация об отличительных признаках и эффективности. 18. М. : Стандартинформ, 2014. 16 с.
9. Пищевая и биологическая ценность яиц и яичных продуктов : справочник / под. общ. ред. В.И. Фисинина. Сергиев Посад : ВНИТИП, 2013. 28 с.
10. Баяржаргал М., Розанцев Э.Г., Зорин С.Н., Бурдза Е.А. и др. Двух- 19. стадийный ферментативный гидролиз белков куриного яйца // Хранение и переработка сельхозсырья. 2005. № 4. С. 34-36.
ГОСТ 20264.2-88. Препараты ферментные. Методы определения протеолитической активности (с изменением N 1). М. Государственный комитет СССР по стандартам, 1988. 11 с.
Биохимические методы исследования в клинике/ под ред. А.А. Покровского. М. : Медицина, 1969. С. 206-208. Зорин С.Н., Баяржаргал М. Получение ферментативных гид-ролизатов пищевых белков с использованием некоторых коммерческих ферментных препаратов и различных схем проведения гидролиза // Биомед. химия. 2009. Т. 55, вып. 1. С. 73-80.
Сидорова Ю.С., Зорин С.Н., Мазо В.К., Арнаутов М.В. и др. Новый источник органических форм цинка // Вопр. питания. 2011. Т. 80, № 6. С. 72-75.
ГОСТ 10846-91. Зерно и продукты его переработки. Метод определения белка. М. : Стандартинформ, 2009. 7 с. ГОСТ 30178-96 Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбци-онный метод определения токсичных элементов. М. : Стандар-тинформ, 2010. 7 с.
Ruiz B. Debut of cutting edge and healthy egg products in Spain [Электронный ресурс]. Электрон. текстовые дан. Испания, 2015. URL: http://www.wattagnet.com/articles/24567-debut-of-cutting-edge-and-healthy-egg-products-in-spain. Zambrowicz A., Eckert E., Bobak L., Dabrowska A. et al. Biological activity of peptides derived from de-fatted egg yolk granules hydrolysed with serine protease from Y. lipolytica yeast // Worlds Poultry Sci. J. 2015. Vol. 71, suppl. 1. Egg Meat Simposia. Book of Abstracts. P. 135.
Garces-Rimona M., Sandovalb M., Molinaa E., Lоpez-Fandiсoa R. Egg protein hydrolysates: New culinary textures // Int. J. Gastronomy Food Sci. 2016. Vol. 3. P. 17-22.
CTetyaHOBa MA, Ma30 B.K., Мокmанцева M.B.
References
1. Mazo V.K., Gmoshinskiy I.V., Shirina L.I. New food sources of essen- 11. tial microelements-antioxidants. Moscow: Miklosh, 2009: 208 p.
(in Russian)
2. Mazo V.K., Gmoshinskiy I.V., Skal'ny A.V., Sysoev Yu.A. Zinc 12. in human nutrition: physiological needs and bioavailability. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2002; 71 (3): 46-51. (in Russian) 13.
3. Hotz C., Brown K. Assessment of the risk of zinc deficiency in populations and options for its control. Food Nutr Bull. 2004; 25: S99-199.
4. Epstein M.M., Kasperzyk J.L., Andrnn O., Giovannucci E.L., et al. Dietary zinc and prostate cancer survival in a Swedish cohort. Am 14. J Clin Nutr. 2011; 93 (3): 586-93.
5. Rubio C., Gutierrez A.J., Revert C., Reguera J.I., et al. Daily dietary intake of iron, copper, zinc and manganese in a Spanish population. 15. Int J Food Sci Nutr. 2009; 60 (7): 590-600.
6. Vilms E.A., Turchaninov D.V., Turchaninova M.C. Microelementoses
of children in megapolis: epidemiological characteristics and pre- 16. vention possibilities. Pediatriya [Pediatrics]. 2011; 90 (1): 96-101. (in Russian)
7. Nutritional ingredients in development of modern nutrition products. 17. In: V.A. Tutelyan, A.P. Nechaev (eds). Moscow: DeLi plus, 2014:
520 p. (in Russian)
8. GOST R 55577-2013. Functional food products; information about features and effectivity. Moscow: Standartinform, 2014: 16 p. 18. (in Russian)
9. Fisinin V.I. (ed.) Nutritional and biological value of eggs and egg products: Guide. Sergiev Posad: VNITIP, 2013: 28 p. (in Russian)
10. Bayarzhargal M., Rozantsev E.G., Zorin S.N., Burdza E.A., et al. Two-stage fermentative hydrolysis of chicken egg proteins. Chranenie 19. i pererabotka selkhozsyrya [Storage and processing of farm products]. 2005; (4): 34-6. (in Russian)
GOST 20264.2-88. Enzymatic preparations. Methods of determination of proteolic activity (with changing N 1). Moscow: Gosudarst-venniy komitet SSSR po standartam, 1988: 11 p. (in Russian) Biochemical clinical methods of research. In: A.A. Pokrovskogo (ed.). Moscow: Meditsina, 1969: 206-8. (in Russian) Zorin S.N., Bayarzhargal M. Acquiring fermentative hydrolysates of nutritional proteins with the usage of commercial enzymatic preparations and different schemes of hydrolysis conduct. Biomed-itsinskaya khimiya [Biomedical Chemistry]. 2009; 55 (1): 73-80. (in Russian)
Sidorova Yu.S., Zorin S.N., Mazo V.K., Arnautov M.V., et al. New sources of zinc organic forms. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2011; 80 (6): 72-5. (in Russian)
GOST 10846-91. Grain and its processing products. The method of protein determination. Moscow: Standartinform, 2009: 7 p. (in Russian)
GOST 30178-96 Raw materials and food products. Atomic absorption method for determination of toxic elements. Moscow: Stand-artinform, 2010: 7 p. (in Russian)
Ruiz B. Debut of cutting edge and healthy egg products in Spain [Electronic Resource]. 2015. URL: http://www.wattagnet.com/arti-cles/24567-debut-of-cutting-edge-and-healthy-egg-products-in-spain.
Zambrowicz A., Eckert E., Bobak L., Dabrowska A., et al. Biological activity of peptides derived from de-fatted egg yolk granules hydro-lysed with serine protease from Y. lipolytica yeast. Worlds Poultry Sci J. 2015; 71 (suppl. 1. Egg Meat Simposia. Book of Abstracts): 135.
Garces-Rimona M., Sandovalb M., Molinaa E., Lopez-Fandicoa R. Egg protein hydrolysates: New culinary textures. Int J Gastronomy Food Sci. 2016; 3: 17-22.
