CC BY
19
Саратовский государственный университет имени Н. Г. Чернышевского Саратовское отделение Русского энтомологического общества Саратовское отделение Российского паразитологического общества
ЭНТОМОЛОГИЧЕСКИЕ И ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПОВОЛЖЬЕ
Сборник научных трудов Выпуск 14
Под редакцией доктора биологических наук В. В. Аникина
Саратов 2017
УДК 595.7 + 576.89 ББК 28.083я43 + 28.691.89я43 Э67
Энтомологические и иаразитологические исследования в Повол-
Э67 жье : сб. науч. тр. / под ред. В. В. Аникина.- Саратов, 2017. - Вып. 14. - 100 с. : ил.
В сборнике представлены материалы по вопросам энтомологии и паразитологии исследователей из Волгограда, Саратова, Самары, Ульяновска, Пензы, Саранска, Борка, Санкт-Петербурга, Нижнего Новгорода, Уральска.
Для научных работников, аспирантов, студентов-биологов и экологов.
Главный редактор:
д-р биол. наук, проф. В. В. Аникин
Заместитель главного редактора:
д-р биол. наук, проф. Н. В. Попов
Ответственный секретарь:
канд. биол. наук, доц. О. В. Синичкина
Редакционная коллегия:
д-р биол. наук, проф. В. В. Золотухин (Ульяновск), канд. биол. наук А. С. Сажнев (Борок), канд. биол. наук Т. А. Трофимова (Самара), д-р биол. наук, проф. Г. В. Шляхтин (Саратов)
УДК 595.7 + 576.89 ББК 28.083я43 + 28.691.89я43
ISSN 1608-9073
© Саратовский государственный
университет, 2017 © Саратовское отделение РЭО, 2017
Реконструкция филогении семейства на основе анализа изменчивости митохондриально-го гена COI// Зоологический журнал. 2016. Т. 95, № 1. С. 54-66.
Сарщв I. Complement systematique a la famille des Coleophoridae (Lepidoptera) // Fragmenta entomologica. Roma. 1975. Vol. 11, №1. P. 5-7.
Hinton H. E. On the homology and nomenclature of the setae of lepidopterous larvae, with some notes on the phylogeny of the lepidoptera // Trans. of the Royal Ent. Soc. of London. 1946. Vol. 97. P. 2-35.
MORPHOLOGICAL DESCRIPTION OF CASEBEARER LARVA PARAVALVULIA SPIRAEELLA (REBEL, 1916) (LEPIDOPTERA, COLEOPHORIDAE)
O. V. Sinichkina
Saratov State Medical University
The article contains the results of casebearef s larva Paravalvulia spiraeella (Rebel, 1916) study. The morphological description of larva and its case as well as the chaetotaxy of the caterpillar head and body was done.
Key words: Lepidoptera, Gelechioidea, Coleophoridae, taxonomy, larvae, chaetotaxy, Paravalvulia spiraeella (Rebel, 1916).
УДК 595.771:57.063.6
ПОЛОЖЕНИЕ STENOCHIRONOMUS В СЕМЕЙСТВЕ CHIRONOMI-
DAE (NEMATOCERA, DIPTERA) НА ДЕНДРОГРАММАХ РОДСТВЕННЫХ СВЯЗЕЙ ПО ЯДЕРНЫМ (18S И CAD) И МИТОХОН-
ДРИАЛЬНЫМ ГЕНАМ (COI, COII)
12 1 Н. В. Полуконова , А. Г. Дёмин , Д. С. Островерхова
1 Саратовский государственный медицинский университет, 2Санкт-Петербургский
государственный университет
В статье проведен анализ филограммы, построенной на основе сиквенсов ДНК представителей рода Stenochironomus и подсемейств Chiromidae. Отмечается обособление ветви этого рода от Chironominae и Ortholcadiinae. Рассматривается возможность выделения Stenochironomus в самостоятельное подсемейство в семействе Chironomidae.
Ключевые слова: Diptera, Chironomidae, филогения, ядерные гены, 18S, CAD, митоходриальные гены, COI, COII
Введение
По морфологическим и кариотипическим признакам Stenochironomus gibbus (Fabricius, 1794) значительно отличается от всех других представителей и Chironomini, и Chironominae в целом (Черновский, 1949; Панкратова, 1983; Walker, Mathewes, 1987). Так, строение его вентроментальных пластинок более сходно с таковым у представителей подсемейства Orthocladiinae (Панкратова, 1983; Макарченко, 2006). Форма тела личинки Stenochironomus напоминает форму тела златок, минирующих древесину - клинообразная го-
лова, очень сильные и короткие мандибулы, сильно редуцированное вооружение верхней губы (Черновский, 1949). Последние признаки Черновский (1949) рассматривает как параллелизмы в связи со специфическим образом жизни в древесине. Помимо этого, одной из особенностей организации по-литенных хромосом S. gibbus является слабая степень политении (Дурнова, 2010), обычно характерная для примитивных подсемейств, таких, как Tany-podinae (Белянина, 1983). Возможно, что этот род сохранил ряд черт, свойственных общему предку, от которого могли произойти Chironominae.
Цель исследования: сравнить положение Stenochironomus в семействе Chironomidae (Nematocera, Diptera) на дендрограммах родственных связей, полученным по ядерным (18S и CAD) и митохондриальным генам (COI, COII).
Материалы и методы
В исследовании по анализу генов мтДНК первой и второй субъединиц цитохром С оксидаз - COI и COII использованы как собственные данные, полученные секвенированием ДНК личинок и имаго комаров-звонцов из Краснодарского края, республики Калмыкия, Воронежской, Саратовской, Самарской областей, Казахстана, так и информация о нуклеотидных последовательностях этих генов, депонированная в электронной базе данных GenBank (Полуконова и др., 2009; Дёмин, 2011; Дёмин, Полуконова, 2014; Дурнова и др., 2014, 2016). При построении дендрограмм родственных связей Chironomidae по ядерным генам 18S рРНК, CAD использована информация о нуклеотидных последовательностях этих генов, депонированная в электронной базе данных GenBank. В качестве внешней группы по гену COI использованы следующие таксоны: Ceratopogonidae (Nematocera) - Culi-coides circumscriptus (AF069248), Culicoides imicola (AF079975) и Acroceridae (Brachycera) Ogcodes basalis (DQ631991); по гену 18S (таблица) - Simuliidae sp. (HQ440698.1), Culicoides leechi (GU356730.1) и Brachypogon (Isohelea) sp. (GU356727.1); по гену CAD - Simuliidae sp. 1 (HQ440399.1) и Culicoides leechi (HQ440268.1). Выравнивание нуклеотидных последовательностей проводили с помощью программы ClustalW. Филогенетическое дерево было построено с использованием метода ближайшего соседа (Neighbor-Joining method). Дендрограммы строили как на основе частичных нуклеотидных последовательностей, так и аминокислотных. Для расчета филогенетических дистанций использовался метод максимального правдоподобия (Maximum Composite Likelihood method). Эволюционные анализы выполнялись в пакете программ MEGA6.
Результаты и обсуждение
Все дендрограммы, построенные разными способами с использованием данных о ядерном гене - CAD как по частичной нуклеотидной последовательности, так и аминокислотной, во-первых, имели низкие значения бутст-реп-поддержки, а, во-вторых, крайне неадекватно отражали положение
представителей разных родов, триб и подсемейств. Так, например, представители трибы Tanitarsini могли оказаться в подсемействе Orthocladiinae.
Была построена дендрограмма с использованием данных о частичной последовательности ядерного гена - 18S (таблица).
Кластеризация Chironomidae на дендрограмме, построенной но гену 18S
Кластеры, таксоны Подкластер, бутстреп Деление подкластеров, бутстреп -поддержка, таксоны ACCESSION н.п. в GenBank
Кластер I. Tanypodinae Podonomi-nae и Diamesinae Подкластер IA(75) п/сем Tanypodinae IAi (98) род Ablabesmyia Ablabesmyia sp. 1, Ablabesmyia sp.2 HQ440555.1, HQ440556.1
IA2 (98) рода: Alotanypus, Psectrotanypus, Procladius, Apsectrotanypus (85): Alotanypus HQ440561.1
(85): Psectrotanypus, Procladius, Apsectro-tanypus HQ440664.1, HQ440661.1, HQ440560.1,
Подкластер I1 (75) п/сем Po-donominae и п/сем Diamesinae I1i (59): Po-donominae (98): Podonomus FJ570796.1, FJ570795.1
(98): Podonomopsis FJ570791.1, FJ570789.1
I12 (59): Diamesinae Diamesa sp. GU356731.1
Кластер II. Chironomi-nae Подкластер IIA (100) п/сем Orthocladiinae и IIA1 Cricotopus, Orthocladius, Psectrocladius (97) Cricotopus, Orthocladius, Psectrocladius HQ440580.1, HQ440631.1, | HQ440662.1 и др.
п/сем Prodiamesinae IIA2 Prodiamesa Prodiamesa olivacea HG322476.1
IIA3 Brillia Brillia sp. 1, Brillia sp. 2, Brillia cf. parva, Brillia modesta HQ440568.1, GU356728.1, HG322473.1 и др.
Подкластер II1 (100) п/сем Chironominae II1i (64) триба Tanytarsini (71): Micropsectra, Paratanytarsus, Rheo-tanytarsus, Tanytarsus, Clado-tanytarsus, Stempellina HQ440621.1, HQ440646.1, HQ440667.1, HQ440686.1, HQ440573.1, HQ440674.1 и др.
II12 (64) триба Chironomini Riethia, Pseudochi-ronomus, Microten-dipes, Dicrotendipes, Polypedilum, Glypto-tendipes, Chironomus, Lipiniella, Baeoten-dipes, Einfeldia, Kief-ferulus, Benthalia, Xenochironomus, Axa-rus, Cryptochironomus, Dicrotendipes, Para- chironomus, Goeldichironomus, Stictochironomus, Stenochironomus, Endochironomus, Endotribelos, Polypedilum GU356737.1, DQ657945.1, HQ440622.1, DQ657928.1, DQ657944.1, DQ657930.1, DQ657924.1, DQ657943.1, DQ657909.1, DQ657929.1, DQ657935.1, DQ657908.1, DQ657907.1 , DQ657947.1, DQ657927.1, HQ440585.1, HQ440635.1, DQ657931.1, HQ440680.1, HQ440676.1, HQ440592.1, HQ440593.1, HQ440656.1
Расположение таксонов показали результаты, достаточно согласованные с современным систематическим положением подавляющего большинства систематических единиц. При этом Stenochironomus образовывал единый кластер вместе с другими видами трибы Chironomini.
На дендрограмме подсемейства, основанной на аминокислотной последовательности COI (рисунок) и ряде ДНК-дендрограмм, S. gibbus формирует самостоятельную как от представителей обоих триб подсемейства Chi-ronominae, так и от видов другого подсемейства - Orthcladiinae эволюционную ветвь (Дёмин, Полуконова, 2008, 2011; Дёмин и др., 2011; Полуконова и
др., 2013, 2016).
Общий вид филограммы подсемейства Chironominae, основанной на аминокислотной последовательности COI. Квадратными скобками обозначены кластеры. В узлах указаны значения поддержки ML/Bayes/ME
Расположение этого вида относительно кластеров подсемейств могло быть различным - так, на филограмме подсемейства и ДНК-дендрограмме S. gibbus, представители Chironominae и Orthocladiinae формируют три независимо расходящиеся друг от друга ветви (поддержка 86-100%). На ряде ДНК-дендрограмм и аминокислотной МЕ-дендрограмме S. gibbus образует ветвь, внешнюю по отношению к представителям обоих подсемейств (поддержка 62-99%). На аминокислотной Bayes-дендрограмме, а также на ДНК-дендрограммах он располагается между представителями Chironominae и Ortholcadiinae совместно с несколькими представителями Tanytarsini (поддержка 67-92%). На ДНК-дендрограмме, построенной с использованием второго положения кодона, S. gibbus кластеризуется вместе с видами трибы Chironomini, что входит в разрез с данными всех остальных построений и далее нами не рассматривается.
С точки зрения существующей систематики (Панкратова, 1983; Макар-ченко, Макарченко, 2006) наиболее адекватным казалось бы филогенетическое положение S. gibbus внутри подсемейства Chironominae. Одним из возможных объяснений того, что S. gibbus на большинстве дендрограмм фор-
мирует независимую ветвь от других представителей Chironominae, мог бы служить «эффект притяжения длинных ветвей», при котором в результате включения в анализ слишком удаленной внешней группы быстро эволюционирующие таксоны "притягиваются" длинной ветвью этой группы, что приводит к их более раннему ответвлению на филогенетическом дереве (Hillis, 1996; Swofford et al., 1996; Банникова, 2004). Учитывая неоднозначность полученных нами данных, для их проверки были построены дендрограммы подсемейства Chironominae, основанные на использовании другого гена мтДНК - COII. В состав анализируемых видов Chironominae, наряду с представителями обеих триб, был включен другой вид - S. hilaris (№AF547670).
Как на аминокислотных, так и нуклеотидых дендрограммах, S. hilaris не образует совместного с Chironominae кластера. На дендрограммах он формирует ветвь, внешнюю по отношению как к Chironominae, так и к Orthocladiinae. Такая топология опровергает вероятность артефактного расположения S. gibbus на филограмме и подтверждает положение Stenochironomus вне подсемейства Chironominae.
Рассматривая вероятность проявления эффекта притяжения длинных ветвей, стоит отметить, что в нуклеотидной последовательности быстро эволюционирующих видов быстрее всего накапливаются транзиции и трансверсии в третьем положении, а также транзиции в первом положении кодона. Однако использование именно этих положений кодона при реконструкции родственных связей позволяло получать топологию, при которой S. gibbus образовывал совместный с Chironominae кластер вместо того, чтобы группироваться с представителями внешней группы.
Использование трансверсий в первом и втором положениях, несинонимических замен и аминокислот, эволюционирующих намного медленнее, напротив, приводит к удалению S. gibbus от Chironominae. Причиной обособления видов Stenochironomus не могло стать и изменение в соотношении AT- и GC- пар. Так, сдвиг нуклеотидного состава у Stenochironomus от установленного нами ранее по Chironominae среднего отношения составляет 20%, что не является весомой величиной.
Другим доказательством отсутствия влияния филогенетически удаленных представителей внешней группы (Ogcodes basalis и видов Culicoides) послужили дендрограммы, построенные с исключением видов Ogcodes и Culicoides и использованием в качестве внешней группы только представителей подсемейства Orthocladiinae. Практически во всех случаях в качестве внешней группы автоматически выбирался S. gibbus и S. hilaris. В результате чего можно сделать вывод об отсутствии влияния эффекта притяжения длинных ветвей на положение видов Stenochironomus.
На особое положение Stenochironomus указывает также высокий уровень его аминокислотной дивергенции. Так, от представителей трибы Chi-ronomini белковая последовательность COI S. gibbus отличается на 9,6 - 12% (11.2%), последовательность COII S. hilaris - на 25-27% (26.2%) аминокислот, что превышает уровень различий между представителями разных под-
семейств. Среднее количество аминокислотных замен между попарно сравниваемыми последовательностями представителей подсемейств Ortocladiinae и Chironominae по COI составляет - 6.7-9.7% (8.2%), по COII - 15.6-18.5% (17.3%).
Обсуждение
Нормой современных работ по молекулярной филогении уже стало привлечение внушительного массива данных, что обусловлено стремлением поставить выдвигаемые гипотезы на прочный статистический базис. Принято считать, что анализом множества генов можно усилить филогенетический сигнал до его превышения над шумом и добиться правильного разрешения конфликтов между различными генами (Алешин и др., 2007; Полуконова, 2016). Однако простое увеличение числа генов совсем не гарантирует получение истинного филогенетического дерева. Так, даже современные методы реконструкции филогении по большому числу генов не избавляют от артефактов, известных для единичных генов, здесь так же могут сказываться допущения моделей эволюции, разница в скорости эволюции видов, ошибки выравнивания и выбора ортологов, недостаточная репрезентативность таксономической выборки (Алешин и др., 2007). Между тем, установленные «по одному гену» филогенетические группы могут сохраняться при условии значимой статистической поддержки, достаточной таксономической выборки, бесспорной ортологичности сравниваемых генов и отсутствия признаков притяжения длинных ветвей при построении дерева (Алешин и др., 2007).
На основе проведенной нами реконструкции родственных связей по генам мтДНК, можно с высокой долей вероятности говорить, что Stenochi-ronomus образует ветвь, уклоняющуюся как от ветви подсемейства Chi-ronominae, так и от Ortholcadiinae, что в итоге позволяет поставить вопрос о возможности выделения Stenochironomus в самостоятельное подсемейство. По данным ядерного гена (18S) Stenochironomus образует единый кластер вместе с другими представителями трибы Chironomini подсемейства Chi-ronomidae, что не согласуется с результатам полученными по генам мтДНК (COI и COII). Возникшее противоречие вполне объясняется тем, что ядерные гены более консервативны по сравнению с генами мтДНК, и в процессе эволюции изменения их нуклеотидных последовательностей происходят значительно медленнее изменений в мтДНК. В любом случае, остается актуальным расширение спектра используемых для филогенетического анализа Chironomidae генов, как ядерных, так и митохондриальных.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Алешин В. В., Константинова А. В., Михайлов К. В., Никитин М. А., Петров Н. Б. Нужно ли много генов для филогенетического дерева? // Биохимия. 2007. Т. 72, вып. 12. С.1610-1623.
Банникова А. А. Молекулярные маркеры и современная филогенетика млекопитю-щих // Журнал общей биологии. 2004. Т. 65, № 4. С. 278-305.
Белянина С. И. Кариотипический анализ хирономид (Chironomidae, Diptera) фауны СССР: Автореф. дис... докт. биол. наук. М., 1983. 39 с.
Дёмин А. Г. Анализ эволюционной изменчивости гена coi и его использование для филогении и систематики таксонов с высоким видовым разнообразием на примере комаров-звонцов подсемейства Chironominae (Chironomidae, Diptera) // Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук / Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук. Москва, 2011. 150 с.
Дёмин А. Г., Полуконова Н. В. Оценка времени дивергенции комаров-звонцов рода Chironomus (Diptera) на основе гипотезы «молекулярных часов» // Энтомологические и паразитологические исследования в Поволжье. Саратов, 2008. Вып. 7. С. 8-14.
Дёмин А. Г., Полуконова Н. В., Мюге Н. С. Молекулярная филогения и время дивергенции комаров-звонцов (Chironomidae, Nematocera, Diptera) на основе частичной последовательности гена первой субъединицы цитохром С оксидазы (COI) // Генетика. 2011. Т. 47, №10. С. 1315-1327.
Дёмин А. Г., Полуконова Н. В. Современное представление о систематике комаров-звонцов подсемейства Chironominae (Chironomidae, Diptera) // Энтомологические и пара-зитологические исследования в Поволжье. 2011. Вып. 9. С. 8-11.
Дёмин А. Г., Полуконова Н. В. Молекулярно-генетические маркеры эволюционных линий Chironominae и Orthocladiinae (Chironomidae: Diptera) в несинонимичных сайтах гена мтДНК COI // Труды Русского энтомологического общества. С.-Петербург, 2014. Т. 85, вып. 2. С. 8-18.
Дурнова Н. А. Цитогенетические особенности Stenochironomus gibbus (Fabricius, 1794) (Diptera, Chironomidae) облигатного минера разлагающейся древесины // Цитология. 2010. Т. 52. № 10. С. 883-886.
Дурнова Н. А., Дёмин А. Г., Полуконова Н. В., Мюге Н. С. Оценка времени возникновения способности к обрастанию и минированию погруженных субстратов у хирономид подсемейств Chironominae Macquart, 1838 и Orthocladiinae Lenz, 1921 (Diptera, Chironomidae) на основании анализа митохондриальных генов COI и COII // Энтомологическое обозрение. 2014. Т. 93. № 2. С. 367-380.
Дурнова Н. А., Полуконова Н. В., Дёмин А. Г., Мюге Н. С. Время возникновения способности к обрастанию и минированию погруженных субстратов у хирономид (Diptera): анализ генов мтднк - COI, COII // Бюллетень медицинских интернет-конференций. 2016. Т. 6. № 9. С. 1489.
Макарченко Е. А., Макарченко М. А. Хирономиды // Определитель насекомых Дальнего Востока России. Т. 6. Двукрылые и блохи. Ч. 4 / Под общ. ред. П. А. Лера. Владивосток: Дальнаука, 2006. 936 с.
Панкратова В. Я. Личинки и куколки подсемейства Chironominae фауны СССР (Diptera, Chironomidae). Л.: Наука, 1983. 296 с.
Полуконова Н. В. Цитогенетические и молекулярно-генетические методы в реализации комплексного подхода к решению проблем систематики и эволюции комаров-звонцов подсемейства Chironominae // Бюллетень медицинских интернет-конференций. 2016. Т. 6. № 9. С. 1515-1524.
Полуконова Н. В., Дёмин А. Г., Мюге Н. С. Молекулярные критерии в систематике насекомых: диапазон изменчивости штрихкодового гена COI как таксономический критерий рода, трибы и подсемейства, на примере комаров-звонцов Chironominae и Orthocladiinae (Chironomidae, Diptera) // Журнал общей биологии. 2013. Т. 74. № 1. С. 6676.
Полуконова Н. В., Дёмин А. Г., Мюге Н. С. Диапазон изменчивости гена мтДНК COI у Chironominae и Orthocladiinae (Chironomidae, Diptera) как таксономический критерий рода, трибы и подсемейства // Бюллетень медицинских интернет-конференций. 2016. Т. 6. № 9. С. 1502.
Полуконова Н. В., Дёмин А. Г., Шайкевич Е. В., Мюге Н. С. Сравнение Chironomus usenicus и Ch. curabilis с видами группы plumosus (Diptera) по гену митохондриальной днк COI и рисунку дисков политеннык хромосом // Генетика. 2009. Т. 45, №8. С. 1-7.
Черновский А. А. Определитель личинок комаров семейства Tendipetidae. М., Л.: АН СССР, 1949. 182 с.
HillisD. M. Inferring complex phylogenies // Nature. 1996. Vol. 383. P. 130-131.
Swofford D. L., Olsen G. J., Waddell P. J., Hillis D. M. Phylogenetic Inference / In Molecular Systematics. Sunderland: Sinauer Associates, 1996. P. 407- 514.
Walker I. R., Mathewes R W. Chironomidae Diptera and postglacial climate change at Marion Lake, British Colombia, Canada // Quaternary Research. 1987. Vol. 27. P. 89-102.
THE STENOCHIRONOMUS POSITION IN THE CHIRONOMIDAE (NEMATOCERA, DIPTERA) FAMILY ON DENDROGRAMMS OF RELATED RELATIONSHIPS
ON NUCLEAR (18S AND CAD) AND MITOCHONDRIAL GENES (COI, COII)
12 1 N. V. Polukonova , A. G. Demin , D. S. Ostroverkhova
1 Saratov State Medical University, 2St. Petersburg State University
In the article analised the phylogramm built on the basis of DNA sequences of the genus Stenochironomus and subfamilies Chiromidae. It is noted the separation of the branches of this genus from Chironominae and Ortholcadiinae. The possibility of allocation of Stenochironomus in a separate subfamily in the family Chironomidae are discussed.
Key words: Diptera, Chironomidae, phylogeny, nuclear genes, 18S, CAD, mitochondrial genes, COI, COII
УДК 576.316.352.2
ПОЛИТЕННЫЕ ХРОМОСОМЫ ХИРОНОМИД (Б1РТЕКЛ, СИШОМГОЛЕ) КАК МОДЕЛЬ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ВЛИЯНИЯ НА ДИСКОВУЮ СТРУКТУРУ ИНТЕРФАЗНЫХ ХРОМОСОМ ПРЕДОБРАБОТОК, ПРИМЕНЯЕМЫХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ С- И С-ОКРАСКИ МЕТАФАЗНЫХ ХРОМОСОМ
Л. Е. Сигарева, Н. А. Дурнова, А. А. Оглезнева
Саратовский государственный медицинский университет
Проанализировано влияние на дисковую структуру политенных хромосом хирономид предобработок, необходимые для получения О- и С-дифференциальной окраски метафазныгх хромосом растений и животныгх. Результаты анализа полученныгх данныгх позволили заключить, что политенные хромосомы двукрышыгх насекомых (Б1р1ега, Chironomidae) могут служить удобной моделью, как для выяснения механизмов дифференциальной окраски, так и для вымс-нения роли гетерохроматина в эволюционном процессе генома.
Ключевые слова: хирономиды, политенные хромосомы, О- и С-окраска, гете-рохроматин.
