CC BY
6УДК 575.174.015.3:633.16:577.21
Н.В. Луханина1, М.Г. Синявская1, И.М. Голоенко1, А. А. Поморцев2 , О.Г. Давыденко1
ПОЛИМОРФИЗМ ХЛОРОПЛАСТНЫХ ЛОКУСОВ ЯЧМЕНЯ ИЗ ЦЕНТРОВ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ
1 ГНУ «Институт генетики и цитологии НАН Беларуси» Республика Беларусь, 220027, г. Минск, ул. Академическая, 27 2 Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН Российская Федерация, 119991, г. Москва, ул. Губкина, 3
Введение
Ячмень (Hordeum vulgare L.) - одна из важнейших зерновых культур c длительной историей культивирования. Одомашнивание, а также современная селекция привели к постепенному сужению генетического разнообразия используемых представителей рода Hordeum. Даже за последние 100 лет многие исследователи отмечают существенное снижение генетического разнообразия у культурного ячменя [1]. Современные сорта в значительной степени генетически сходны и, следовательно, все они могут быть подвержены влиянию определенных патогенов и неблагоприятных условий окружающей среды [2].
Процессы окультуривания и селекционная деятельность человека сопровождаются снижением генетического разнообразия не только ядерных, но еще в большей степени цито-плазматических геномов, которое некоторые исследователи называют драматичным [6]. В настоящее время широко изучается изменчивость хлоропластных (хп) геномов различных растений, в том числе и ячменя [3, 4, 5]. Снижение цитоплазматического генетического разнообразия в процессе окультуривания и дальнейшей строгой селекции агрономически важных признаков предполагает введение в культуру новых или редких плазматипов. Вполне вероятно, что уникальные по хпДНК формы могут быть использованы как дополнительные источники изменчивости.
Наряду с селекционными сортами и диким Hordeum vulgare ssp. spontaneum (H. v. ssp. spontaneum), стародавние сорта (сорта народной селекции) ячменя входят в так называемый первичный генпул культурного ячменя
Hordeum vulgare ssp. vulgare (H. v. ssp. vulgare) и являются потенциальной базой увеличения генетического разнообразия для селекции [7]. Стародавние сорта ячменя из центров происхождения обладают значительно большим генетическим разнообразием, чем культурные сорта, часто не несут нежелательных для селекционеров «диких» генов и напротив являются незаменимыми источниками полезных генов для селекции ячменя.
Помимо поиска редких и ценных генов, изучение изменчивости ячменя из предполагаемых центров происхождения представляет интерес в связи с теорией происхождения культурного ячменя. В настоящее время в литературе преимущественно обсуждаются гипотезы происхождения культурного ячменя в «Дуге Плодородия», проходящей через территории Израиля, Палестины, Ливана, Западной Сирии, юго-востоку Турции и горам Загроса в Иране и Ираке [8, 9, 10], Северной Африки (Марокко) [1l, 12], Тибета [13]. Дискутируется вопрос о происхождении ячменя из Эфиопии [14, 5], однако данное предположение подвергается сомнению вследствие отсутствия там диких предков Hordeum vulgure. Возможно, корни эфиопских ячменей могут лежать в Междуречье («Плодородный Полумесяц») [15, 16].
Существуют предположения, что ячмень был введен в культуру в различных местах независимо. Molina-Cano J.L. et al. [3], исследуя полиморфизм микросателлитных локусов хлоропластной ДНК ячменя, выделили два независимых центра происхождения в Эфиопии и Западном Средиземноморье. Работы Saisho
D. and Purugganan M. D. [17], Morrell P. L. и Clegg M. T [18] подтверждают предположение о том, что ячмень был окультурен как минимум дважды. Таким образом, общепринятой теории о происхождение культурного ячменя в настоящее время не существует.
В связи с этим, исследование изменчивости хлоропластных геномов стародавних сортов ячменя из предполагаемых центров происхождения - Северной Африки, Ближнего Востока, Эфиопии, Йемена - будет способствовать
не только поиску новых и редких плазматипов, но и прояснению вопроса о происхождении культурного ячменя.
Данное исследование проведено с использованием микросателлитных маркеров к хлоропластному геному, которые широко используются в популяционной генетике, эффективны для выявления гибридизации и интрогрессии [19], анализа генетического разнообразия [20] и филогеографии растительных популяций [21].
Материалы и методы
Материалом для исследования являлись 565 образцов ячменя из предполагаемых центров происхождения (представляющие собой более 80 популяций местных стародавних сортов культурного ячменя H. v. ssp. vulgare (landrases) из различных точек сбора в местах исторического земледелия). Образцы, использованные в данной работе, были
получены из Международного центра сельскохозяйственных исследований в засушливых регионах (ГСАКОА-ИКАРДА) (г. Алеппо, Сирия), а также из Всероссийского научно-исследовательского института растениеводства им. Н.И. Вавилова (ВИР, Санкт-Петербург). Распределение образцов ячменя по странам и регионам представлено в таблице 1.
Таблица 1
Образцы ячменя из предполагаемых центров происхождения
Регион Страна происхождения Количество образцов Общее количество образцов
Северная Африка Алжир 24 84
Египет 60
Ближний Восток Израиль 31 291
Иордания 36
Ирак 82
Палестина 47
Сирия 95
Эфиопия (Абиссиния) Эфиопия 128 128
Южная Аравия Йемен 62 62
Итого 565
Тотальную ДНК выделяли из индивидуальных 6-7 дневных проростков по стандартной методике [22].
Для изучения изменчивости микроса-теллитных последовательностей использовали ББК-маркеры к хлоропластной
ДНК ячменя, демонстрирующие высокий уровень полиморфизма у данной культуры [6]: hvcptrnS2 (3" район ^^ гена), hvcptrnS1 (3" район trnS гена), ЬуергроА (3"район rpoA гена), hvcptrnLF (межгенная область trnL/trnF) (табл. 2).
Таблица 2
Характеристика праймеров, использованных для изучения органельных геномов
Название Область хпДНК Праймер (5'^ 3') Тип повтора Индекс полиморфизма Н
hvcptrnS1 3' trnS район F CTTTAGCGGGCATTTCCATA R ATGGTGGATTTGATAAGAACCC (A^CGC (T),3 0,44
hvcptrnS2 3' trnS район F CAACTCCTTTGCGCTACACA R ACCCCTTTTTTCCCATTCC m,0 0,5
hvcprpoA 5' rpoA район FCTCTCGTTTTAAATCCATTGCA R TGATCCATTTCGCGAAAATA (T)8 (CTT)3 0
hvcptrnLF Межгенный район trnL- trnF F GAGTATCGGCAAGAAATCTTGG R TCAAAATTTGAAAGGGGGG (C)9 0,49
Все маркеры были мечены флуоресцентной меткой Cy-5.
Специфическую ПЦР проводили в объеме 10цЬ, содержащем 1х ПЦР буфер (60 mM Tris - HCl, 25 mM KCl, 10mM 2-меркаптоэтанол, 0,1% Тритон Х-100) (СибЭнзим), 1.5 mM Mg-Cl2 200 ^M dNTPs, 4 pmol прямого праймера,
4 pmol обратного праймера, 0.5U Taq полиме-разы (СибЭнзим), 50-100 ng геномной ДНК. Амплификацию проводили в амплификаторе Gene Amp PCR System 2700 (Applied Biosystems) согласно Provan et al. [6].
Продукты реакции амплификации с Cy-
5 мечеными маркерами разделяли в 6-8% по-лиакриламидном денатурирующем геле в 1х трис - боратном буфере (0,09 М Трис - борат, 0,01 М ЭДТА) в секвенаторе ALF Express. Размеры полученных фрагментов вычислены с
использованием программы ALFwin Fragment Analyser версии 1.02 сравнением внутренних стандартов размеров, которые были добавлены в каждую лунку геля.
Расчеты и построения графиков проводили с использованием возможностей Microsoft Office Excel 2003, Microsoft Office Access 2003, Statistica версия 6, Arlequin версия 3.1. Для оценки информативности комбинаций праймеров был использован коэффициент: H = (n/(n-1))(1-Xpi2), где pi - частота i-го аллельного варианта, n - число образцов в анализируемой выборке. Для оценки несходства между популяциями из различных регионов использовали Евклидово расстояние, кластерный анализ проводили по методу наиболее удаленных соседей (алгоритм Complete-link).
Результаты и обсуждение
Сравнительный анализ размеров микро-сателлитных локусов хлоропластной ДНК анализируемых образцов обнаружил высокий уровень полиморфизма для 3 локусов из 4 исследованных, в то время как для маркера hvcprpoA полиморфизм выявлен не был. Индекс полиморфизма для маркеров hvcptrnS1, hvcptrnS2 и hvcptrnLF равен 0,44; 0,5 и 0,49 соответственно (таблица 2).
Для маркеров hvcptrnLF, hvcptrnS2 наблюдалось по 2 аллеля на локус, для hvcptrnS1 - 3
аллеля. Аллели достаточно хорошо различались между собой по электрофоретической подвижности фрагментов. Амплифицирован-ные фрагменты ДНК имели размеры от 100 п.н. до 130 п.н., в зависимости от праймера (таблица 3). Различия по размеру между фрагментами амплифицированной ДНК для hvcptrnLF и hvcptrnS2 составили 1 п.н., для hvcprpoA 2 п.н., для hvcptrnS1 - до 5 п.н. Пример электрофореграммы с маркером hvcptrnLF представлен на рисунке 1.
___________ __--11... 121 7/12 2
__-—Юв-.^ —- 441. 7/12 3
________ _____ Т^ 8/2 4
__-"Т*!^ 42,,. 8/2 5
__ 10/1 6
^___ 10/1 7
п100 10/6 8
, 100 —— Its-. __ 10/6 9
---- 10/7 10
—---- 10/7 11
13/1 12
-------- И- . 13/1 13
13/2 15
_____________ 13/3 16
13/3 17
13/5 18
-- "»I. 13/5 19
______ ____■*■ >Ц.__ 13/14 20
____11Ц_ TU... 13/14 21
_____""Um«..,.., ________ 14/1 22
, —"" H.- -- «HL 14/1 23
42L. 14/2 24
___________ 14/2 25
15/1 26
DtK^ . 421.. 15/1 27
17/8 28
____4Щ_ ИЦ.. 17/8 29
H2L. 6n-1 30
КЦ. 6n-1 31
___"■""Юч,,^ ——^ 7n-1 32
—- -на. —-til.. 7n-1 33
--"Tn... 7n-2 34
_.------- ПН.. 7n-2 35
___-»— 21 n-1 36
—IH.... 21 n-1 37
^-чв!.. 16n-1 38
---IW... 16n-1 39
««^ . ___12^ 38/5 40
94 96 98 100 102 104 106 108 110 112 114 116 118 120 122 124 126 128 130 132 134 Bases
Рис. 1. Пример электрофореграммы в 6%-ном полиакриламидном геле для маркера hvcptrnLF.
Комбинация полученных размеров фрагментов позволила выделить 10 плазматипов, представленных в таблице 3, а их частоты в исследованной выборке представлены на рисунке 2.
Таблица 3
Плазматипы, выявленные среди стародавних сортов ячменя
Название гаплотипа Размер фрагмента по hvcptrnSl, п.н. Размер фрагмента по hvcptrnS2 п.н. Размер фрагмента по hvcptrnLF п.н. Размер фрагмента по hvcprpoA п.н.
А 126 112 100 122
B 130 113 101 122
C 125 112 100 122
D 126 112 101 122
E 126 113 101 122
F 130 113 100 122
G 130 112 101 122
I 125 112 101 122
J 130 112 100 122
K 126 113 100 122
Распределение всех гаплотипов по регионам представлено в таблице 4.
Таблица 4
Распределение исследованных образцов из различных регионов по гаплотипам
Гаплотип
Всего Всего
Регион Страна А В С Б Е Г О I J К исследовано образцов в стране исследовано образцов в регионе
Северная Алжир - 24 24 84
Африка Египет - 39 - - - 15 1 - 5 - 60
Израиль - 31 31
Ближний Восток Иордания - 7 - - - 7 17 - 5 - 36
Ирак 31 14 - 10 1 9 14 - 3 - 82 291
Палестина - 19 3 - - 24 - 1 - - 47
Сирия - 46 - - 1 6 27 15 95
Южная Аравия Йемен 25 25 3 6 - 1 - 1 1 - 62 62
Эфиопия Эфиопия 17 33 54 1 - 4 12 1 2 2 128 128
Всего каждого гаплотипа в 74 232 60 17 2 63 77 3 32 2 565 565
коллекции
Рис. 2. Частоты гаплотипов, выявленные в стародавних сортах ячменя.
Таким образом, использование микросател-литных маркеров позволило выделить основные (А B, С, ^ G) и редкие (Б, I, Ю) гаплотипы. Как видно из рисунка 2, наиболее часто встречающимся оказался тип В, его доля в целом составила 41%, варьируя от 17% в Ираке до 100% в Алжире и Израиле.
Как видно из таблицы 4, уровень генетического разнообразия в Северной Африке наименьший по сравнению с другими регионами. Так, в образцах из Египта выявлено только 4 гаплотипа с явным преобладанием гаплотипа
В, а в Алжире только этот гаплотип присутствовал у всех исследованных образцов. По сравнению с Северной Африкой, в Южной Аравии и на Ближнем Востоке уровень генетического разнообразия хлоропластных геномов выше: в Йемене (Южная Аравия) выявлено 7 гаплотипов, в Ираке, Сирии, Иордании и Палестине (Ближний Восток) - 7, 5, 4 и 4 гаплотипа соответственно, за исключением Израиля, где был обнаружен только один гаплотип. Наибольший уровень разнообразия наблюдался в Эфиопии, где выявлено 9 гаплотипов.
Результаты нашего исследования указывают на значительно более широкий спектр изменчивости хлоропластных геномов стародавних сортов ячменя по сравнению с современными. Так, ранее нами были исследованы по семи микросателлитным локусам 67 образцов культурного ячменя из 19 стран, из которых 24 сорта ячменя, возделываемых в Беларуси, 43 образца H. v. ssp. vulgare из коллекции ВИР. В результате были выделены только три гапло-типа. Редкие типы хлоропластной ДНК представлены пятью образцами, причем большинство культурных сортов относятся к одному общему гаплотипу B, сорта Роланд (Швеция) и Оболонь (Украина) - к типу F, сорта Brock (Канада), Ранний 1 (Россия), Wollamo Sadado (Эфиопия) - к типу С [23].
Такой низкий уровень генетического разнообразия хлоропластных геномов показан также для ряда культурных растений [6, 24, 25].
Provan J., et al. [6], исследуя полиморфизм хлоропластных геномов у диких и культурных ячменей, представленных 31 образцами диких
H. v. ssp. spontaneum и 226 культурными H. v. ssp. vulgare, выделили 11 гаплотипов с помощью микросателлитных маркеров hvcptrnS2, hvcptrnS1, hvcprpoA, hvcptrnLF. Все эти гапло-типы найдены у диких H. v. ssp. spontaneum, у стародавних сортов выделено два гаплотипа G и C, соответствующие нашим типам B и F. Два данных гаплотипа также найдены у культурных сортов, исследованных Molina-Cano J.L. et al. [3]. Все современные сорта по Provan J., et al. [6], относились к типу G (тип B согласно нашей номенклатуре).
Выявленный нами спектр изменчивости хло-ропластных геномов у стародавних сортов шире, чем указывает Provan J., et al. [6]. Помимо гаплотипов B и F, нами выявлены еще типы A и G , встречающиеся только у диких ячменей (соответствуют F и H типам по Provan J. et al. [6]., а гаплотипы D, E, I, J и K обнаружены нами впервые.
На основе полученных результатов и ранее опубликованных данных [23] был проведен кластерный анализ (рис. 4).
Tree Diagram for Variables Complete Linkage Euclidean distances
-------1---1---1---1---
Sort -
Alg ■ Izrael ■
Egipt -
lordan -
Siria -
Pal -
Iraq -
lemen •-j--j__
Ehp -
0,0 0,2 0.4 0,6 0,8 1,0 1,2
Linkage Distance
Рис. 4. Кластерный анализ частот гаплотипов в популяциях стародавних и селекционных сортов ячменя. Обозначения: Sort - современные сорта, Alg - Алжир, Izrael - Израиль, Egipt - Египет, Iordan - Иордания, Siria - Сирия, Pal - Палестина, Iraq - Ирак, Iemen - Йемен,
Eph - Эфиопия.
Из полученной дендрограммы видно, что популяции из различных стран распределились на три кластера. Первый кластер составили популяции из Алжира, Израиля и Египта, сюда же попадают все культурные сорта. Образцы из Иордании, Сирии и Палестины (Ближний Восток) объединились во вторую группу. В третий кластер вошли популяции из Ирака, Йемена и Эфиопии.
Сходные результаты были получены Помор-цевым А. А. и др. [26], изучавшими распределение аллелей трех локусов ядерного генома, кодирующих запасные белки ячменя - горде-ины - у стародавних сортов ячменя из Ближнего Востока, Северной Африки, Эфиопии и Южной Аравии. В цитируемой работе в один кластер попали образцы из Ирака, Йемена, Эфиопии, а также Сирии, Иордании. Второй кластер составили популяции из североафри-
канских стран - Марокко, Туниса, Алжира, Египта, а также Ближнего Востока - Израиля и Палестины. В нашей работе образцы из Израиля также кластеризуются с образцами из стран Северной Африки. Эта группа характеризуется наименьшим уровнем разнообразия хлоропластных геномов, что характерно также для современных сортов.
Попадание в один кластер образцов из Эфиопии, Йемена и Ирака говорит о том, что возможно, в Эфиопию ячмень попал из Плодородного полумесяца через Йемен. Такое предположение согласуется с исследованием полиморфизма ядерных локусов стародавних сортов ячменя из центров генетического разнообразия и историческими данными [26] и подтверждает теорию Н.И. Вавилова о связи ячменей Эфиопии, Йемена и Юго-Западной Азии [15].
Заключение
Исследование полиморфизма локусов хлоропластного генома стародавних сортов ячменя из Ближнего Востока, Северной Африки, Эфиопии и Южной Аравии дополняет исследование ядерных гордеин-кодирующих локусов ячменей из тех же регионов. В целом, исследования ядерных и хлоропласт-ных геномов показали значительное сходство по результатам кластерного анализа. Объединение в одном кластере образцов из Эфиопии, Йемена и Ирака говорит о генетической связи ячменей Эфиопии, Южной Аравии и Юго-Западной Азии и подтверждает теорию Н.И. Вавилова о происхождении ячменя.
Проведенное исследование показало при-
менимость и информативность хлоропласт-ных микросателлитных маркеров для анализа генетического разнообразия и установления филогенетических связей культурного ячменя.
Показан значительно более высокий уровень изменчивости хлоропластных геномов стародавних сортов ячменя по сравнению с современными. Выделены редкие гаплотипы, описанные в литературе лишь у диких H. v. ssp. spontaneum, шесть типов хлоропластного генома описаны нами впервые.
Таким образом, стародавние сорта ячменя из предполагаемых центров происхождения представляют интерес в качестве источника генетического разнообразия, потенциально полезного для практической селекции.
Список использованных источников
1. Kolodinska, B.A, Inter simple sequence repeat analysis of genetic diversity and relationships in cultivated barley of Nordic and Baltic origin / B.A Kolodinska [et al.] // Hereditas/. -2004. - Vol. 141. - P. 186-192.
2. Asins, M.J, Carbonell, EA. Distribution of genetic variability in a durum wheat world collection / M.J Asins, EA.Carbonell // Theor. Appl. Genet. - 1989. - Vol. . - P. 77: 287-294.
3. Molina-Cano, J.L.Chloroplast DNA mic-
rosatellite analysis supports a polyphyletic origin for barley / J.L. Molina-Cano [et al] // Theor. Appl. Genet. - 2005. - Vol. 110. - P. 613-619.
4. Russell, J.R. Patterns of polymorphism detected in the chloroplast and nuclear genomes of barley landraces sampled from Syria and Iordan / J.R. Russell [et al.] // Theor. Appl. Genetics. -2003. - Vol. 107. - N 3. - P. 413-421.
5. Orabi, J. The Horn of Africa as a centre of barley diversification and a potential domestica-
tion site / J. Orabi [et al.] // Theor. Appl. Genet.
- 2007. - Vol. 114. - P. 1117-1127.
6. Provan, J. Polymorphic chloroplast simple-sequence repeat primers for systematic and population studies in the genus Hordeum / J. Provan [et al.] // Mol. Ecol. - 1999 a. -Vol. 8. - P. 505-511.
7. Harlan, J. R. and de Wet. Towards a rational classification of cultivated plants / J. R. Harlan and de Wet // Taxon . - 1971. - Vol. 20 . - P. 509-517.
8. Harlan, J.R. , Zohary, D. Distribution of wild wheats and barley/ J.R. Harlan, D. Zohary // Sciences. - 1966. - V. 153. - N. 3741. -P. 1074-1080.
9. Zohary, D. Monophyletic vs. polyphylet-ic origin of the crops on which agriculture was founded in the Near East / D.Zohary // Genet. Res. Crop Evol. - 1999. - V. 46. - P. 133-142.
10. Badr, A. On the origin and domestication history of barley (Hordeum vulgare) / A. Badr [et al.] // Mol. Biol. Evol. - 2000. - Vol. 17 . - P. 499-510.
11. Molina-Cano, J. L. Morocco as a possible domestication center for barley: biochemical and agromorphological evidence / J. L. Molina-Cano [et al.] // Theor. Appl. Genet. - 1987. -Vol. 73. - P. 531-536.
12. Molina-Cano, J. L. Further evidence supporting Morocco as a centre of origin of barley / Molina-Cano, J. L. [et al.] // Theor. Appl. Genet.
- 1999 - Vol. 98 . - P. 913-918.
13. Takahashi, R. The origin and evolution of cultivated barley // R. Takahashi // Adv. Genet. -1955. - Vol. 7. - P. 227-266.
14. Bekele, E. A differential rate of regional distribution of barley flavoniod patterns in Ethiopia, and a view on the centre of origin of barley / E. Bekele // Heriditas. - 1983. - Vol. 98. -P. 269-280.
15. Вавилов, Н.И. Центры происхождения культурных растений // В кн. Происхождение и география культурных растений. Л.: Наука,
- 1987. - С. 33-126.
16. Поморцев, А.А. Исследование полиморфизма гордеинов у ячменей Эфиопии / А.А. Поморцев // Генетика. - 2001. - Т. 37.
- № 10. - С. 1371-1382.
17. Saisho, D. and Purugganan M. D. Molecular Phylogeography of Domesticated Barley Traces Expansion of Agriculture in the Old
World / D. Saisho and M. D. Purugganan // Genetics. - 2007. - Vol. 177. - P. 1765-1776.
18. Morrell, P. L. and Clegg, M. T. Genetic evidence for a second domestication of barley (Hordeum vulgare) east of the Fertile Crescent / P. L. Morrell, and M. T. Clegg // PNAS - 2007. - Vol. 104. - N 9. - P. 3289-3294.
19. Bucci, G. Detection of haplotypic variation and natural hybridization in halepensis-complex pine species using chloroplast simple sequence repeat (SSR) markers / Bucci, G. [et al.] // Mol. Ecol. -1998. - Vol. 7. -P. 1633-1643.
20. Genetic discontinuity revealed by chloroplast microsatellites in eastern North American Abies (Pinaceae) / C.M. Clark, T.M. Wentworth, D.M.O. Malley // Am. J. Bot.- 2000 -Vol. 87. - P. 774-778.
21. Parducci, L. Genetic variation at chloroplast microsatellites (cpSSRs) in Abies ne-brodensis (Lojac.) Mattei and three neighboring Abies species / L. Parducci [et al.] // Theor. Appl. Genet. - 2001. - Vol. 102. - P. 733-740.
22. Edwards, K. A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis / K.Edwards, C. Johnstone, C. Thompson // Nucleic Acids Res. - 1991. -Vol. 19. - P. 1349.
23. Луханина, Н.В. Микросателлитные последовательности хпДНК ячменя: снижение спектра изменчивости у культурных форм / Н.В. Луханина [и др.] // Экологическая генетика. - 2006. - Т. IV. - № 1. - C. 17-21.
24. Provan, J. An extreme cytoplasmic bottleneck in the modern European cultivated potato (Solanum tuberosum) is not reflected in decreased levels of nuclear diversity / J. Provan [et al.] // Genetics. - 1999 b.- V. 266.- P. 633-639.
25. Ishii T., Mori N., Ogihara Y. Evaluation of allelic diversity at chloroplast microsatellite loci among common wheat and its ancestral species / T. Ishii, N. Mori, Y. Ogihara // Theor. Appl. Genet. - 2001. - Vol. 103 . - P. 896-904.
26. Поморцев, А. А. Полиморфизм гордеин-кодирующих локусов в местных популяциях культурного ячменя (Hordeum vulgare L. ) стран Ближнего Востока / А. А. Поморцев, С. П. Мартынов, Е. В. Лялина // Генетика. -2008. - Т. 44. - N 6. - C. 815-828.
Дата поступления статьи 11 ноября 2010 г.
