CC BY
44
УДК 619:616.98:[578.832.91+579.842.11]:615.371
ПОДБОР ОПТИМАЛЬНЫХ АДЪЮВАНТОВ ПРИ КОНСТРУИРОВАНИИ АССОЦИИРОВАННОЙ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ И КОЛИБАКТЕРИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
П.А. КРАСОЧКО, Ю.В. ЛОМАКО РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» г. Минск, Республика Беларусь, 220003 Я.П. ЯРОМЧИК УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 05.01.2011)
Введение. Одними из наиболее распространенных причин отхода молодняка крупного рогатого скота и экономических потерь в результате снижения качества получаемой продукции являются инфекционные гастроэнтериты.
Значительное место в структуре желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота с инфекционной патологией занимают рота-вирусная инфекция и колибактериоз.
В результате лабораторных исследований патологического материала от больных диареей телят энтеропатогенные эшерихии были выявлены в 70,6 % проб, ротавирусные антигены - в 72,9 %. При этом колибактериоз как моноинфекция был зарегистрирован в 6,4 % проб [1, 2, 4, 6-9].
Вакцинация глубокостельных коров приводит к созданию у полученного от них молодняка стойкого коллострального иммунитета при выпойке новорожденным телятам иммунного молозива в первые часы жизни. Телята, полученные от иммунизированных матерей, устойчивы к колибактериозу и ротавирусной инфекции, так как молозивные антитела заполняют возможные места колонизации антигенов, блокируют способность патогенных штаммов прикрепляться и размножаться в тонком кишечнике [5, 6, 10].
В случаях ассоциированной инфекции наиболее перспективным в решении вопросов профилактики инфекционных энтеритов у новорожденных телят является разработка и применение комплексных средств специфической профилактики против указанных болезней.
При конструировании вакцин одним из важных этапов является подбор оптимальных иммунологических адъювантов. Постепенное освобождение антигенов в организме обеспечивает достаточно низкую концентрацию токсического начала в каждый данный момент, что и предотвращает проявление токсического эффекта, а также повышает специфический иммунный ответ на антигены.
244
Сорбция растворимых антигенов переводит эндотоксины из моле-кулярно-дисперсной в корпускулярно-дисперсную форму, что обеспечивает более активное включение в иммунный процесс всех звеньев макрофагально-лимфоцитарной системы. Корпускуляризация антигенов усиливает процесс поглощения комплекса антиген-сорбент макрофагами на первой стадии иммуногенеза. Постепенная, медленная резорбция антигенов способствует длительной суммации антигенных раздражений, повышающей эффективность иммунного ответа.
В последнее время значительное внимание уделяется использованию масляных адъювантов. Механизм их применения заключается в эмульгировании антигена в масляную оболочку путем образования «эмульсионного шарика». Для усиления иммунного ответа антиген должен находиться внутри капель воды, диспергированных в липид-ной фазе. Эмульсии освобождают антиген в течение более длительного времени, чем сорбированные вакцины, что может объяснить более напряженный и длительный иммунный ответ организма на вводимый антигенный компонент [5, 6, 10].
Цель работы - провести подбор оптимальных адъювантов при конструировании ассоциированной инактивированной вакцины против ротавирусной инфекции и колибактериоза крупного рогатого скота.
Материал и методика исследований. Для изучения иммунного ответа у животных после введения им инактивированных монокомпонентов с различными адъювантами использовали лабораторных животных - белых крыс. Опыт с использованием хитозан глутамата, мар-кола, хитозан сукцината, хитозан 2, хитозан 1, эмульсигена, ИЗА-70 Монтаниде, ИЗА-206 Монтаниде, алюмокалиевых квасцов, геля гидроокиси алюминия был проведен на 55 белых крысах, по 5 гол. в группе.
При конструировании вакцины использовали инактивированные 0,2%-ным раствором теотропина ротавирусы крупного рогатого скота с инфекционным титром 6,5 lg ТЦД50/мл и эшерихии с адгезивными антигенами А20, К88 и К99. Концентрация бактериальных клеток при изготовлении биопрепарата составляла 5 млрд/мл.
Антигены смешивали в соотношении 2:1:1:1 - две части вирусного компонента и по одной части бактериальных компонентов E. coli А20, E. соН К99 и E. соН К88.
Крысам вводили вакцину с различными адъювантами внутримышечно, во внутреннюю поверхность бедра, двукратно с интервалом в 14 дней, в объеме 0,2 см3. Животных контрольной группы иммунизировали вакциной без добавления депонирующих препаратов. Была сформирована группа интактных животных.
Через 21 день после иммунизации у крыс были отобраны сыворотки крови. В сыворотках определяли уровень противовирусных антител в РНГА, для определения уровня противоэшерихиозных антител использовали РА на полистироловых планшетах. Постановку серологических реакций проводили по общепринятым методикам.
245
Результаты исследований и их обсуждение. При применении вакцины с разными адъювантами на крысах во всех опытных группах установлен прирост специфических антител к используемым антигенам.
Результаты опыта по подбору оптимальных адъювантов, проведенного на крысах, которым вводили экспериментальные образцы вакцины с адъювантами группы хитозана, отображены на рис. 1.
9 -8 -7 -
т 6 -Ьояг
5 -4 -3 -2 -1 -0 -
Группы животных
Рис. 1. Уровень специфических антител в сыворотках крови крыс, иммунизированных образцами вакцины с применением хитозана.
При введении монокомпонентов с применением адъюванта хитозан глутамата уровень противовирусных антител достиг значения 4 log2, уровень противоэшерихиозных антител достиг значения к E. coli К88 5 log2, к E. coli А20 - 6 log2. При применении хитозан сукцината уровень специфических противоротавирусных антител достиг значения 3 log2, к E. coli К88 данный показатель достиг 5 log2, а к E. coli А20 -7 log2. При использовании адъюванта хитозан 2 уровень антивирусных антител в сыворотках крови крыс был установлен в значении 3 log2, к E. coli К88 - 5 log2, к E. coli А20 - 5 log2. Введение антигенов с добавлением депонирующего вещества хитозан 1 позволило повысить уровень противовирусных антител до значения 4 log2, уровень противо-эшерихиозных антител в сыворотках крови крыс к E. coli К88 достиг показателя 7 log2, а к E. coli А20 - 8 log2.
Результаты опыта по подбору оптимальных адъювантов при конструировании вакцины на крысах, которым вводили экспериментальные образцы вакцины с масляными адъювантами, отображены на рис. 2.
Соответственно при применении масляного адъюванта Маркол получено повышение уровня антител в сыворотках крови крыс к ротави-русу до значения 4 log2, к E.coli К88 - 3 log2, к E. coli А20 - 8 log2. При применении эмульсигена титр антител к ротавирусу установлен в значении 4 log2, к E. coli К88 - 7 log2, к E. coli А20 - 7 log2. При использовании масляного адъюванта ИЗА-70 получен результат в значении
246
Хитозан глутамат
ротавирус
Контроль
адъюванта
2 log2, к E. coli К88 - 7 log2, к E. coli А20 - 8 log2, при применении адъ-юванта ИЗА-206 уровень специфических антител к ротавирусу достиг значения 3 log2, к E. coli К88 - 4 log2, к E. coli А20 - 6 log2.
8 _ 7 _ 6
5 _ 4
log2 3
Маркол Эмульсиген
ИЗА-70
Без
ИЗА-206 адъюванта Контроль
Группы животных
Рис. 2. Уровень специфических антител в сыворотках крови крыс, иммунизированных образцами вакцины с применением масляных адъювантов.
Результаты опыта по подбору оптимальных адъювантов при конструировании вакцины на крысах, которым вводили экспериментальные образцы вакцины с сорбирующими веществами, отображены на рис. 3.
Алюмокалиевые Гель гидроокиси Без адъюванта Контроль квасцы алюминия
Группы животных
Рис. 3. Уровень специфических антител в сыворотках крови крыс, иммунизированных образцами вакцины с применением сорбентов.
При применении сорбентов алюмокалиевых квасцов установлен прирост антивирусных антител до значения 2 log2, прирост антибактериальных антител в сыворотках крови к E. coli К88 - 6 log2, к E. coli А20 - 7 log2. При использовании геля гидроокиси алюминия показа-
247
тель уровня противоротавирусных антител достиг значения 3 log2, противоэшерихиозных антител к E. coli К88 - 4 log2, к E. coli А20 -7 log2.
При введении антигена группе контроля без добавления депонирующих веществ достигнут показатель прироста противовирусных антител до значения 2 log2, уровень антиэшерихиозных антител достиг значения к E. coli К88 - 3 log2 и к E. coli А20 - 3 log2.
В сыворотках крови крыс группы контроля, которым не вводили антигены, специфических антител к ротавирусу и эшерихиям с адгезивным антигеном А20 не выявлено. Установлено наличие антибактериальных антител к эшерихиям с адгезивным антигеном К88 в титрах в соотношении 1:2, или в значении 1 log2.
Заключение. На основании проведенных исследований определения гуморального иммунного ответа после иммунизации лабораторных животных инактивированными монокомпонентами вакцины против ротавирусной инфекции и колибактериоза крупного рогатого скота установлено, что все испытуемые депонирующие вещества позволяют повысить уровень образования специфических антител в сыворотках крови крыс.
При подборе оптимального адъюванта при изготовлении вакцины против ротавирусной инфекции и колибактериоза крупного рогатого скота нами выбран масляный адъювант эмульсиген и сорбент гель гидроокиси алюминия, при применении которых получены одни из наиболее высоких результатов биосинтеза специфических антител. Так, в сыворотках крови крыс при применении геля гидроокиси алюминия биосинтез антител к вводимым компонентам к E. coli К88 достиг значения 7 log2, к E. coli К99 - 5 log2, к E. coli А20 - 5 log2, к ротавирусу - 5 log2.
При использовании эмульсигена уровень специфических антител в сыворотках крови крыс к вводимым компонентам вакцины определен к ротавирусу до значения 5 log2, к E. coli К99 - 5 log2, E. coli К 88 -7-8 log2, к E. coli А20 - 7 log2.
ЛИТЕРАТУРА
1. Guinee, P.A.M. Detection of enterotoxigenicity and attachment factors in E. coli strains of human, porcine and bovine origin: a comparative study / P.A.M. Guinee, W.H. Jansen // Zent. Bacteriol. Parasit. Infect. Hyg. Abt. Orig. Reiche A. 1979. Vol. 243. P. 245-257.
2. Hacker, J. Role of fimbria! adhesins in the pathogenesis of E. coli infections / J. Hacker // Can. J. Microbiol. 1992. Vol. 38. № 7. P. 720-727.
3. Lizon, I. New safe and efficient oil adjuvants for veterinary vaccines / I. Lizon // 12th I.P.V.S. Congress, The Hagye, Nederlands, August 17-20, 1992.
4. Lorrot, M. How do the rotavirus NSP4 and bacterial enterotoxins lead differently to diarrhea / M. Lorrot, M. Vasseur // Virol. J. 2007. Vol. 4. P. 31.
5. Prevalence of antibodies to four bovine rotavirus strains in different age groups of cattle / H. Brussow [et al.] // Veterinary Microbiology. 1992. Vol. 25. № 2/3. P. 143-151.
6. Короваева, 1.В. Специфiчна профшактика колiбактерiозу та рота-, корона-вiрусних шфекцш новонароджених телят 2002 года: автореф. дис. ... канд. вет. наук: 16.00.03 / 1.В. Короваева; 1н-т експерим. i кшшч. вет. медицини УААН. Харгав, 2002. 20 с.
7. Ломако, Ю.В. Биологические свойства адгезивных штаммов эшерихий / Ю.В. Ломако // Исследования молодых ученых в решении проблем животноводства: материалы II Междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых и преподавателей с.-х. учеб. заведений и науч.-исслед. учреждений (г. Витебск, 22 мая 2002 г.). Витебск, 2002. С.158-159.
8. Скибщький, В.Г. Эппзоотолопчш аспекти ротавiрусноí шфекци велико! рогато! худоби / В.Г. Скибщький // Общая эпизоотология: иммунологические, экологические и методологические проблемы: материалы Междунар. науч. конф., Харьков, 20-22 сентября 1995 г. Харьков, 1995. С. 653-654.
9. Становление иммунобиологического статуса у телят в постнатальный период в условиях биогеохимической зоны / Т.Е. Григорьева [и др.] // Ветеринарная патология.
2003. № 3. С. 66-69.
10. Субботин, В. В. Основные элементы профилактики желудочно-кишечной патологии новорожденных животных / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария.
2004. № 1. С. 3-6.
УДК 619:616.981.48-08
ВЛИЯНИЕ ПЕНИЦИЛЛИНА И ОКСИТЕТРАЦИКЛИНА НА ФИЗИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ СУПОРОСНЫХ СВИНОМАТОК
И.А. МАЛЕНЬКИЙ Подольский государственный аграрно-технический университет г. Каменец-Подольский, Хмельницкая обл., Украина, 32300
(Поступила в редакцию 05.01.2011)
Введение. Антибактериальные вещества широко применяются в животноводстве с лечебной и профилактической целью [1, 2]. Основными причинами эффективного использования антибиотиков в качестве химиотерапевтических и химиопрофилактических средств являются специфический механизм противомикробного действия; широкий и четко выраженный спектр противомикробного действия, высокая терапевтическая эффективность в малых дозах, сохранение противомик-робной активности в условиях макроорганизма; ярко выраженное и быстро проявляющееся лечебное и профилактическое действие и малая токсичность для животных [3, 4]. Антибиотики действуют на микроорганизмы бактериостатически и бактериолитически и в то же время могут активизировать или ингибировать отдельные биохимические процессы в макроорганизме. Исходя из вышесказанного применение антибиотиков в ветеринарной практике остается актуальным, несмотря на наличие большого арсенала различных химиотерапевтических веществ [5-8].
Цель работы - изучить влияние бензилпенициллина и тетрациклина на морфофункциональное состояние внутренних органов свиней.
Материал и методика исследований. Для проведения опыта было отобрано 45 свиноматок крупной белой породы с хорошей конституцией и экстерьером. Из этого поголовья было сформировано 5 групп.
249
