ПЕРСПЕКТИВЫ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ У ДИКИХ ЖВАЧНЫХ, НАХОДЯЩИХСЯ ПОД УГРОЗОЙ ИСЧЕЗНОВЕНИЯ Текст научной статьи по специальности «Агробиотехнологии»

DOI: 10.25690/VETPAT.2021.35.40.010 УДК: 57.089.38 Аксенова П. В.

ПЕРСПЕКТИВЫ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ У ДИКИХ ЖВАЧНЫХ, НАХОДЯЩИХСЯ ПОД УГРОЗОЙ ИСЧЕЗНОВЕНИЯ

Ключевые слова: трансплантация эмбрионов, синхронизация охоты, эструс, овуляция, желтое тело, фолликул, ооцит, эмбрион, полиовуляция, половой цикл, культивирование in vitro, оплодотворение, имплантация, бластоциста, донор, реципиент, редкие и исчезающие животные, дикие животные, межвидовое клонирование, iSCNT.

Резюме: Трансплантация эмбрионов редких и исчезающих животных может являться одним из путей, с помощью которого возможно восстановить исчезающие виды животных. Получение потомства путем переноса ядра соматических клеток диких животных в ооциты домашних и трансплантация гибридных эмбрионов реципиентам дает возможность включения новых генов в инбредные популяции редких видов, восстановления и сохранения находящихся под угрозой исчезновения животных. Исследования в этих направлениях достигли серьезных результатов, которые свидетельствуют о значительном потенциале данной технологии. Настоящая работа является обзором мировых исследований в данной области

Введение

На 2020 год в Красный список угрожаемых видов МСОП внесено около 3395 видов животных, находящихся на грани полного исчезновения (категория СЯ) [1]. Это огромная цифра и множество ученых государственных и общественных организаций предпринимают огромные усилия для того, чтобы восстановить исчезающие популяции, сохранить биоразнообразие планеты. Однако по отношению к каждому виду или подвиду животных это очень долгий и сложный процесс, который не всегда заканчивается удачей. Но даже в случае удачных примеров восстановленных и ре-интродуцированных в природу видов (такие, как зубры, олени Давида, саблерогие ориксы), их популяции все равно уязвимы из-за высокой степени инбредности [2-5]. Трансплантация эмбрионов редких и исчезающих животных может быть одним из путей, с помощью которого возможно восстановить исчезающие виды животных и увеличить их генетическое разнообразие. Настоящая работа является обзором мировых исследований в данной области.

История развития технологии трансплантации эмбрионов

Впервые об успешной трансплантации эмбрионов еще в 1890 году доложил англичанин "" Неаре. Эксперименты были проведены на кроликах. Через семь лет (в 1897 г.) российский ученый В. С. Груздев также добился положительных резуль-

татов в опытах по пересадке зигот. Сообщения об успешных экспериментах были опубликованы О. В. Красовской (1936), В. Warwick^ (1949), J. Ршсш'ом (1949), М. Chang, D. Doling (1949) [6-8] Однако исследования на лабораторных животных изначально являлись ступенью для достижения практических задач. Целью ученых было создание новых, более продуктивных пород сельскохозяйственных животных в максимально короткие сроки и ускорение самого цикла воспроизводства для интенсификации животноводства [9]. Для этого требовалась рабочая и эффективная технология трансплантации эмбрионов.

Современная технология трансплантации эмбрионов состоит из ряда последовательных самостоятельных циклов, которые включают в себя подготовку доноров и реципиентов (индукция полиовуляции у доноров, синхронизация половых циклов у доноров и реципиентов); оплодотворение доноров (если требуются готовые эмбрионы), извлечение ооцитов или эмбрионов из донора, их оценку, осеменение ооцитов in vitro (если извлекают ооциты) и дора-щивание зигот до нужной стадии, технику подсадки эмбрионов и ведение беременности реципиентов. Успех приживляемости эмбрионов зависит от стадии их развития и места пересадки, физиологичности промывной среды и условий культивирования in vitro, синхронности охоты у реципиентов с эстральным циклом донора, числа пересаженных эмбрионов и способности реци-

пиента поддерживать беременность и прочих факторов. Часто прибегают к пересадке криоконсервированных эмбрионов или к осеменению криоконсервированной спермой, что позволяет воспроизводить необходимые генотипы через значительный период времени после смерти доноров [10-11].

Целью методики индукции полиовуляции является получение как можно большего количества созревших качественных ооцитов или эмбрионов от животного-донора. Первые эксперименты по индукции множественной овуляции у овец были проведены в Советском Союзе под руководством вначале М. М. Завадовского [12-16], затем А. И. Лопырина [17, 18]. В качестве стимуляторов для созревания фолликулов в предовуляторную фазу полового цикла применяли инъекции хорионгонадотропи-на (пролана), получаемого из мочи беременных женщин. Дозировку и схему введения хорионгонадотропина регулировали с помощью лапаротомии и прямого осмотра яичников. В этих экспериментах была впервые доказана возможность индукции полиовуляции и увеличения многоплодия. Однако в своих дальнейших исследованиях Лопырин отказался от хорионгонадотро-пина в пользу сыворотки жерёбых кобыл (СЖК), так как применение этого препарата вызывало преждевременную лютеи-низацию фолликулов и повышенную секрецию прогестерона яичниками, что приводило к торможению охоты у части доноров [19, 20].

Сыворотка жерёбых кобыл обладает фолликулостимулирующим и лютеонизи-рующим действиями, в связи с достаточно длительным периодом полураспада её вводят однократно, а не дробными дозами. По сообщению L. Rowson^ введение 750 ИЕ вызывало в среднем 6,8 овуляций на донора, введение 1200-2000 ИЕ - до 25 овуляций на донора соответственно. Это были очень хорошие результаты полиовуляции, однако процент животных, отвечающих на обработку был недостаточен (36,656,7 %) [21]. Схемы с применением СЖК использовали также R. L. W. Averill [22], N. W. Moore, L. E. A. Rowson, и R. V. Short [23], W. D. Booth [24], K. J. Betteridge [25], Л. А. Падучева [26], В. И. Донская [27], Ю. Д. Клинский [28], G. Evans и T. J. Robinson [29], J. Gordon [30]. Недостатками применения сыворотки жерёбых кобыл были чрезвычайная вариабельность эффекта полиовуляции в ответ на применение одинаковых схем, как и при инъекциях хори-

онгонадотропина [20, 31-34], несоответствие между числом овулирующих фолликулов и количеством рождающихся ягнят [20]; применение высоких доз вызывало хорошую полиовуляцию, но при этом значительная часть эмбрионов была непригодна для пересадки [35, 36] и у некоторых животных приводило к кистозным изменениям в яичниках и возрастанию числа животных со скрытой охотой [20]. В разных вариантах для индукции полиовуляции помимо СЖК применяли: фолликулостиму-лирующий гормон (ФСГ) [37-39], фолли-гон с последующей обработкой проста-гландином 2 альфа (РОБ 2 ) [40], человеческий менопаузный гормон [39], комбинацию СЖК и РОБ 2 [41], сочетанное применение СЖК и ФСГ питуитарного [42], гра-фолон [43].

Было также доказано, что на результаты полиовуляции, помимо прочих факторов, влияет фаза полового цикла животного. Обработка доноров во время лютеаль-ной фазы приводит к высокой полиовуляции, обработка во время фолликулярной фазы либо не вызывает полиовуляции, либо дает низкий эффект [20]. При этом концентрация эстрадиола в крови напрямую коррелирует с вероятностью возникновения кист в яичниках [24]. Стало очевидно, что прежде чем индуцировать полиовуляцию, необходимо синхронизировать половые циклы у животных.

Для извлечения эмбрионов или ооци-тов из донора в настоящее время применяют постмортальный, хирургический и нехирургический способы. Постморталь-ное извлечение применяют у лабораторных животных непосредственно из яичников, яйцеводов или рогов матки. Хирургический способ подразумевает собой лапа-ротомию и последующее вымывание эмбрионов. Нехирургический включает в себя пункцию яичников через стенку влагалища (у крупных животных) под контролем УЗИ, либо с помощью лапароскопа (у средних и мелких животных). Метод прижизненного извлечения эмбрионов хирургически способом с помощью промывания разработали Я. МемсзтЬ, Ь. Е. А. Rowson и А. О. Тгоишоп [44]. Применяют маточное вымывание по направлению от рогов матки к воронке яйцевода через катетер и трубное вымывание через ампульную часть яйцевода. В качестве промывной жидкости используют физраствор, среду М 199 или среду Дюльбекко. Разработали также способ нехирургического извлечения эмбрионов у мелких жвачных при по-

мощи лапароскопии и трехконцевого катетера [45, 46], однако эффективность его была недостаточно высокой (35-66 % вымытых эмбрионов от овулировавших фолликулов).

Для того, чтобы принять решение о методе извлечения эмбрионов, необходимо четко представлять, на какой стадии развития и в какой именно части репродуктивного тракта они должны находиться на момент операции. Особая заслуга в исследовании физиологии репродукции мелких жвачных принадлежит А. И. Лопыри-ну и сотрудникам его лаборатории. В норме, незадолго до овуляции фолликула, оо-цит первого порядка, который лежит в граафовом пузырьке, начинает делиться, и в яйцевод он попадает уже на стадии оо-цита второго порядка. Через 4 часа после контакта ооцита со спермиями происходит образование мужского и женского прону-клеусов, их сближение и слияние в общее ядро. Дробление зиготы осуществляется асинхронно. Первое дробление происходит через 22-24 часа после овуляции, второе - через 38-40 часов; через 60-72 часа эмбрион состоит из 7-9 бластомеров. Скорость движения дробящегося эмбриона по яйцеводу не постоянна. Через 20 часов эмбрион достигает середины яйцевода. Затем продвижение эмбриона замедляется. К концу четвертых суток эмбрион попадает в полость матки на стадии 16-18 бла-стомеров [20]. N. Ayalon 1978 в собственных исследованиях также показал, что 75 % эмбрионов перемещается в рога матки на четвертый день, а к пятому дню уже все эмбрионы достигают рогов [47].

По сравнению с естественным половым циклом, при индукции полиовуляции скорость продвижения ооцитов и эмбрионов по яйцеводам увеличивается за счет стимуляции гладкой мускулатуры яйцеводов и матки экзогенными эстрогенами. Также высокая концентрация эстрогенов способствует преждевременному сбрасыванию оболочки эмбрионов и их дегенерации [48].

При трансплантации эмбрионов реципиентам необходимо учитывать место пересадки в зависимости от возраста эмбриона [25]. 2-12-ти клеточные эмбрионы подсаживают в яйцеводы, морулы и бластоци-сты в рога матки [20, 49]. Эмбрионы пересаживают двумя путями: оперативным, посредством лапаротомии [50-52] или с помощью лапароскопии (первые опыты на мелком рогатом скоте провели М. С. Schiewe, S. Walker [39, 53].

В собственных экспериментах мы разработали следующую модифицированную технологию трансплантации эмбрионов у коз [54]. Синхронизацию половых циклов у доноров проводили либо введением интравагинальных имплантов с ацетатом мегестрола в дозе 30 мг/гол. на 12-14 дней [55], либо препаратом Crestar. Во втором случае вводили ушной имплант Crestar (д.в. норгестамет) в дозе 1,5 мг/гол. сроком на 8-12 дней и внутримышечно инъецировали раствора Crestar (д.в. норгеста-мет и эстрадиол), в дозе 1 мл/гол. [56, 57]. Наступление эструса определяли при помощи козлов-пробников. По эффективности первый способ синхронизации уступал второму: 60-80 % и 100 % животных, пришедших в охоту в течение 24 часов после извлечения имплантов соответственно [58]. Для получения эмбрионов in vivo, доноров осеменяли естественным путем, либо с помощью искусственного осеменения дважды, через 6 и 10 ч. после начала охоты [57].

Для индукции полиовуляции по одной из схем донорам инъецировали ФСГ-супер дважды в день в течение 4-х дней по схеме: 8+8, 6+6, 6+6, 4+4 ИЕ в общей дозе 48 ИЕ/ гол, первая инъекция за 60 часов до извлечения импланта плюс фоллигон в дозе 500 ИЕ/гол. одновременно с первой инъекцией ФСГ плюс хорулон в дозе 300 ИЕ/гол. по прихождении коз в охоту. Эффективность данной схемы была следующей: 100 % реакция полиовуляции, 12,6-12,9 желтых тел/ гол., 62,1-64,3 % из полученных эмбрионов были пригодны для трансплантации [59].

Вторая схема индукции полиовуляции заключалась в введении овагена (NIADDK-oFSH-17) в однократной дозе 1 мл/гол. дважды в день в течение 3,5 дней (7 инъекций) плюс инъекция фоллигона в дозе 500 ИЕ/гол. за 60 часов до извлечения импланта, плюс внутривенная инъекция хорулона (д.в. хорионгонадотропин человека) в дозе 500 ИЕ/гол. через 3 часа после начала охоты. Эффективность данной схемы при 100 % реакции полиовуляции составила 15,5-17,5 ж.т./гол. при выходе пригодных эмбрионов 74,3-90,4 % [56, 57].

Эмбрионы получали при помощи лапа-ротомии. При трансплантировании эмбрионов реципиентам ex tempore в качестве промывной жидкости использовали раствор Дюльбекко. Если клетки были предназначены для манипуляций in vitro связанных с их культивированием, введением генных конструкций и пр., использовали KSOM или HEPES-KSOM. Промывание

яичников проводили с учетом места вероятной локализации эмбрионов по методу Newcomb'а с соавторами [44] модифицированному для коз [60]. Для этого стилетом прокалывали стенку рога матки ближе к яйцеводу по большой кривизне. Вводили систему для вымывания эмбрионов в прокол, одновременно пальцами пережимая рог за проколом для предотвращения поступления промывной жидкости в остальную часть матки, и накачивали раствор. Промывная жидкость под давлением проходила через верхушку рога через яйцевод и вытекала из его воронки через вставленный катетер вместе с оцитами и эмбрионо-ми. Затем повторяли манипуляцию со следующим рогом.

Промывную жидкость собирали в пластиковые пробирки, в осадке находили эмбрионы и оценивали их [61]. В качестве среды для культивирования эмбрионов в зависимости от задачи использовали среду К8ОМ или собственную среду для крио-консервации эмбрионов коз [8, 62].

Козам-реципиентам синхронизировали охоту одновременно с донорами по тем же схемам (введением имплантов с норгеста-метом или мегестрола ацетатом). В неполовой сезон дополнительно в день удаления импланта инъецировали 500 ед. фол-лигона [57]. Либо для синхронизации охоты у реципиентов использовали синтетический аналог РОБ 2а эстрофан в дозе 125 мкг/гол. дважды с интервалом 12 дней. [64]. Однако в последнем случае прижив-ляемость эмбрионов была хуже. Трансплантацию эмбрионов проводили при помощи лапаротомии. Подсаживали эмбрионы в зависимости от стадии их развития в рог матки либо в яйцевод через его воронку на глубину 4-5 см по два эмбриона на реципиента со стороны овулировавше-го фолликула [8].

Аналогичные эксперименты авторов на овцах [65] показали следующие результаты. Полиовуляцию индуцировали по схеме: ушные импланты Crestar в дозе 3 мг/гол.; фоллимаг в дозе 1000 ед./гол.; ова-ген внутримышечно, дробно, в общей дозе 7 мл/гол.; хорулон внутривенно, в дозе 700 ед./гол. Овец-доноров осеменяли интра-цервикально свежеполученной спермой в дозе 0,1 мл, трехкратно в течение охоты. Эмбрионы извлекали через 72 ч после удаления имплантов. При 100%-й полиовуляции реакция яичников составила 9,14 фолл./гол., выход эмбрионов пригодных к трансплантации составил 68,4 %. Забеременели 58 % реципиентов, эффективность

вынашивания составила 100 %.

Трансплантация эмбрионов у диких жвачных

Одними из первых серьезных работ по трансплантации эмбрионов у диких животных были исследования M. C. Schiewe с соавторами [66]. С целью оценки эффективности синхронизации эструса, индукции овуляции, нехирургического сбора и крио-консервации эмбрионов у саблерогих орик-сов (Oryx dammah), бонго (Tragelaphus euryceros), канн (Taurotragus oryx), и антилоп куду (Tragelaphus strepsiceros) проводили сравнительные исследования. Для индукции эструса применяли 6а-метил-17а-ацетоксипрогестерон (МАП) и (PGF 2а). Полиовуляцию индуцировали фолликуло-стимулирующим гормоном, инъекции делали дважды в день в течение пяти дней или гонадотропином сыворотки жерёбых кобыл. Затем животных осеменяли. Признаки половой охоты наблюдались у 15 из 33 ориксов (45,4 %), но спаривание с самцами состоялось только у восьми из них. Количество овулировавших фолликулов учитывали по количеству желтых тел. СЖК не сработала, применение же ФСГ вызвало полиовуляцию в 4,6; 4,5 и 10,6 желтых тела/гол. у ориксов, бонго и канн соответственно. Эмбрионы и ооциты извлекали неоперационным путем и криоконсерви-ровали согласно методикам, разработанным для крупного рогатого скота. В качестве сред для криоконсервации использовали 1,5 М раствор диметилсульфокси-да, 1,5 М раствор глицерина или пропи-ленгликоль. 60 % криоконсервированных эмбрионов орикса после оттаивания сохраняли уровень качества «отличное» или «хорошее», однако трансплантация крио-консервированных эмбрионов девяти реципиентам орикса не привела к беременностям. Авторы сделали вывод, что в целом традиционные методики трансплантации эмбрионов подходят африканским антилопам, однако их общая эффективность невысока. Для этих антилоп основными ограничениями эффективной трансплантации эмбрионов, по мнению авторов, являлись отсутствие эстрального поведения и низкая частота спариваний, а также резистентность яичников к стандартным го-надотропным препаратам.

S. J. Waldhalm с соавторами предложил протокол трансплантации эмбрионов у белохвостого оленя (Odocoileus virginianus). Половую охоту вне полового сезона индуцировали с помощью вагинальных пессариев с МПА (положительно отреагиро-

вали 4 животных из 7). Синхронизацию эструса проводили PGF 2а через 7-14 дней после естественной охоты (положительно отреагировали 7 животных из 9). Суперовуляцию обеспечивали введением 1000 ИЕ СЖК после удаления пессариев с МПА (положительно отреагировали 2 животных из 5), либо инъекциями PGF 2а (положительно отреагировали 2 животных из 3). Эмбрионы извлекали хирургическим путем. Трансплантация эмбрионов от 2 доноров к 3 реципиентам привела к сохранению одной беременности до полного срока [67].

P. F. Fennessy с соавторами представили методику трансплантации для благородного оленя (Cervus elaphus) и европейской лани (Dama dama). Протоколы основаны на методиках получения и пересадки эмбрионов у крупного рогатого скота и овец, эффективность их составила 3 беременности на одного донора у благородных оленей и 1,5 беременности у лани [68].

Много работали над технологией трансплантации эмбрионов у оленей и ланей G. W. Asher [68-84], H. N. Jabbour [78, 80, 84], D. K. Berg [70, 71, 73-77], C. J. Morrow [77, 78, 81], J. G. Thompson 70, 71, 7476].

Интересно масштабное исследование H. N. Jabbour с соавторами проведенное в три этапа на 59, 105 и 93 ланях. Авторы искали наиболее эффективные варианты индукции эструса. Применяли следующие протоколы: инъекция 500 мг клопро-стенола на 13-й день полового цикла; инъекция 500 мг клопростенола и 50 либо 100 ИЕ СЖК; введение интравагинального силиконового импланта, содержащего 0,3 г прогестерона (CIDR) на 14 дней; введение CIDR и 50 либо 100 МЕ СЖК в день извлечения имплантов. Половая охота наступила у 29 животных из 30 при использовании импланта с прогестероном и лишь у 12 из 29 при применении простагландина. Применение сыворотки жеребых кобыл индуцировало эструс в среднем на 10 часов раньше и повышало синхронность приходов в охоту в 2,7 раза при применении как импланта, так и клопростенола. Однако от использования СЖК в дозе 100 МЕ отказались, так как большое количество препарата вызывало аномальную лютеиниза-цию. Дальнейшие исследования включали интрацервикальное осеменение ланей с индуцированной охотой свежей и замороженной-оттаянной спермой за 12 часов до предполагаемой овуляции. Было выяснено, что процент осемененных самок вы-

ше, при применении схемы с CIDR (73 % против 52,8 %). При использовании свежей спермы и схемы с CIDR оплодотворя-емость составила 76,3 % [80].

В следующей работе авторы описывают пять различных схем для индукции полиовуляции у благородных оленей в половой сезон. Всем животным вводили им-планты CIDR на 14 дней для синхронизации половой охоты. Первая группа была контрольной, оленям второй - четвертой групп за 72 часа до извлечения имплантов инъецировали СЖК в дозе 1200 ИЕ. Животным третьей и четвертой групп, кроме того, внутривенно вводили 0,4 мг синтетического гонадотропин рилизинг гормона (GnRH) через 12 либо 18 часов после извлечения CIDR соответственно. Самкам пятой группы СЖК инъецировали за 72 часа до извлечения импланта дозе 200 ИЕ, плюс вводили 0,5 ИЕ ФСГ в 8-ми равных дозах с интервалом 12 часов, начиная с момента инъекции СЖК. Наиболее эффективными оказались вторая и пятая схемы, которые в среднем по группам дали 9,1 и 12,7 фолликулов и 8,4 и 8,7 желтых тел соответственно. Для сравнения у оленей контрольной группы было в среднем по группе 1,7 фолликулов и 1,0 желтых тел. Однако, хотя обработка GnRH и дала меньшее количество овуляций, она вдвое ускорила начало эструса (21,1 против 43,6 часов), первой овуляции (41,8 против 71,3 часов) и сократила продолжительность полиовуляций до 12 часов, против 24 часов и более [84].

C. J. Morrow с соавторами опубликовали протоколы трансплантации эмбрионов для европейских и гибридов иранских ланей. Полиовуляцию у доноров индуцировали с помощью импланта CIDR, установленного на 14 дней и введения 0,5 ИЕ овечьего ФСГ (8 x 0,06 ИЕ с 10 по 14 день после введения импланта) и 100 МЕ СЖК (либо с первой, либо с последней инъекцией ФСГ). Синхронизацию охоты у реципиентов осуществляли также с помощью ин-травагинальных имплантов. Доноров осеменяли внутриматочно лапароскопическим способом свежей спермой от самца иранской лани через 36 часов после удаления CIDR. Эмбрионы извлекали посредством лапаротомии на 6-й день полового цикла. В среднем частота овуляции составила 8,3; процент извлечения эмбрионов составил 20,1 % и 33,9 % (при раннем и позднем введении СЖК соответственно). Трансплантацию эмбрионов реципиентам осуществляли лапароскопией, при

этом приживляемость эмбрионов составила 37,5 %. Использование кленбутерола для уменьшения набухания матки привело к более высокой доле зачатия [77].

D. K. Ве^'ом описано успешное оплодотворение и получение потомства благородного оленя при трансплантации эмбрионов, оплодотворенных in vitro. Ооциты собирали при убое и доращивали в течение 24 часов в среде М 199 с добавлением 10%-й эмбриональной телячьей сыворотки, 10 мкг/мл (-1) ФСГ и ЛГ и 1 мкг/мл (-1) эстрадиола. Для оплодотворения эмбрионов in vitro использовали среду IVF-SOF с содержанием 5 мМ Ca (2+), без глюкозы. Для капацитации спермы к среде добавляли 20 % овечьей сыворотки, гепарин, либо бычий сывороточный альбумин (экспериментально доказали преимущество овечьей сыворотки). Пятнадцать 2-х и 4-х клеточных эмбрионов трансплантировали в яйцеводы синхронизированных реципиентов через 28 ч после оплодотворения. Пять из пятнадцати реципиентов, получивших 2-х и 4-х клеточные эмбрионы, были беременными на 45-й день (подтверждено ультразвуковым исследованием), и четыре реципиента впоследствии отелились. Еще четырнадцать эмбрионов (8-ми - 10-ти клеточных) были трансплантированы после 48 часов культивирования либо в SOFaaBSA, либо на монослоях эпителиальных яйцеводов благородного оленя. Одна реципиентка, получившая культивированный в SOFaaBSA эмбрион, была беременна на 45-й день и впоследствии отелилась [76].

D. L. Armstrong и N. М. Loskutoff с соавторами [85, 86] на диких гаурах (Bos gaurus) опробовали метод трансвагинальной аспирации фолликулов под контролем УЗИ, разработанный для коров. Синхронизацию полового цикла и индукцию полиовуляции вызывали введением имплан-тов Syncro-mate-B и последующим введением 200 мг фоллитропина, суспендированного в растворе 1 % карбоксиметил-целлюлозы и 2 % твина 80, чтобы снизить скорость абсорбции, либо 75 МЕ Super-Ov. Трансвагинальная аспирация фолликулов выполнялась через 3 дня после обработки гонадотропинами. Всего от 9-ти доноров было получено 202 ооцита разного качества. Ооциты оплодотворяли in vitro крио-консервированной спермой гаура по стандартной методике для крупного рогатого скота и культивировали на различных средах. Криоконсервировали 9 экспандиро-ванных бластоцист с использованием 1,4 М

глицерина. Одну вылупившуюся бластоци-сту трансплантировали домашней корове с синхронизированным половым циклом и получили развивающуюся беременность, детёныш умер вскоре после рождения.

G. Flores-Foxworth с соавторами получали эмбрионы у самок закавказского горного барана (Ovis orientalis gmelinii) и имплантировали их домашним овцам. Для этого донорам вводили прогестероновый имплант CIDR на 11 дней. За 48 часов до удаления импланта в течение 3-х дней вводили ФСГ-питуитарный два раза в день в общей дозе 22,5 мг. Извлечение и трансплантацию эмбрионов проводили на 5-й день после осеменения. Иначе, после установки импланта CIDR вводили 200 МЕ СЖК и 25 мг ФСГ-питуитарного на 8-й день обработки. Через 60-70 часов после введения СЖК или ФСГ ооциты аспири-ровали посредством лапароскопии. Извлеченные ооциты созревали в среде M 199 (с фетальной телячьей сывороткой, ФСГ, ЛГ, пенициллином и стрептомицином). Через 24 часа ооциты оплодотворяли криоконсервированной спермой. Зиготы помещали в культуральную среду CR2 или BOEC через 20-22 ч после ЭКО. Через 3-4 дня культивирования эмбрионы трансплантировали в рог матки с помощью лапароскопии. В результате экспериментов было получено 6 ягнят-транстплантантов горного барана [87].

Аналогичные эксперименты по межвидовой трансплантации от европейских муфлонов (Ovis gmelini musimon) домашним овцам-реципиентам были проведены T. E. Dixon'ом с соавторами, [88] и J. Santiago-Moreno с соавторами [89]; а также B. C. Вискге11'ом с соавторами от барана Далла (Ovis dalli) домашней овце (в этом случае плоды погибли внутриутробно) [90].

А. Fernбndez-Arias, J. L. Alabart, J. Folch и J. F. Beckers добились межвидовой беременности пиренейского козерога (Capra pyrenaica) и домашней козы. Самок пиренейского козерога суперовулировали 9 мг NIADDK-oFSH-17, эмбрионы собирали хирургическим путем через 5,5 дней после эструса. Каждому реципиенту переносили по два эмбриона. Все четыре беременности закончились абортированием на 110-170 дни. Авторы объясняют аборты аномально высоким плазматическим уровнем гликопротеина при гибридных беременностях [91].

D. R. Bainbridge с соавторами предлагают метод получения эмбрионов из зре-

лых ооцитов, собранных лапароскопиче-ски от самок благородного оленя. Половой цикл синхронизировали путем введения интравагинальных пессариев с прогестероном на 10 дней, полиовуляцию вызывали 1000 ИЕ СЖК за 48 часов до удаления импланта. Ооциты собирали с помощью лапароскопии при седации ксилазином/ке-тамином через 24 часа после удаления им-планта и оплодотворяли in vitro криокон-сервированной спермой оленя. Всего было проведено 39 аспираций процедур на 14 донорах, извлечено 44 ооцита, из них 27 пригодных к оплодотворению. После оплодотворения и культивирования в результате чего получили шесть 2-клеточных эмбрионов, шесть 4-клеточных эмбрионов, четыре 8-клеточных эмбриона и один 16-клеточный [92].

B. S. Rao с соавторами описывают способ доращивания ооцитов, добытых посмертно из яичников антилоп гарна (Antilope cervicapra) и получения эмбрионов. Среднее количество извлеченных оо-цитов на яичник составляло 10,9 и не зависело от наличия желтого тела, стороны, размера и веса яичников. Доля ооцитов хорошего качества, показывающих расширение кумулюса и экструзию первого полярного тельца, составляла 79,3 % и 46,1 % при культивировании с гонадотропина-ми [93].

Доказана возможность оплодотворения in vitro ооцитов ламы (Llama glama), взятых посмертно, в присутствии гепарина и эпидидимальных спермиев [94].

Н. Khatir и A. Anouassi получили первых потомков одногорбого верблюда (Camelus dromedarius) из созревших и оплодотворенных in vitro ооцитов, собранных на бойне [95].

Экстракорпоральное оплодотворение проводил также Wirtu G. G. на антилопах канна (Taurotragus oryx). Все процедуры за исключением извлечения ооцитов осуществляли в станке для фиксации КРС, к которому антилоп приучали заранее. Извлечение ооцитов проводили под седацией ксилазином с буторфанолом. Для синхронизации полового цикла и индукции овуляции применяли 25 мг PGF 2а (25 мг ди-нопроста трометамина), 3-х кратно, с интервалом 11 дней (0-11-22 дни), 3-ю инъекцию делали за 48 часов до намеченного извлечения ооцитов. Для индукции полиовуляции использовали фоллитропин смешанный с 30 % поливинилпироллидоном (ПВП) в дозе 400 мг гормона на 22-й день. Доказали, что однократное введение ФСГ

с 30 % ПВП дает аналогичный результат, что и дробное введение ФСГ в течение пяти дней (12,8 фолликулов и 9,8 ооцитов), соответственно нет необходимости в лишнем стрессировании животных. В качестве другого варианта получения ооцитов антилопам скармливали 6 мл 2,2 % альтреноге-ста в течение 7-ми дней (0-6 дни). На 4 и 6 дни инъецировали 267 мг и 133 мг фолли-тропина с 30 % ПВП соответственно. Инъекцию PGF2a также делали на 6-й день, извлечение ооцитов под контролем УЗИ проводилось на 8-й день. Ооциты извлекали трансвагинально, посредством аспирации яичников под контролем УЗИ. Был отмечен большой процент ооцитов с увеличенными кумулюсными клетками (до 35 %), что связали с повышенным содержанием лютеотропного гормона (ЛГ) (либо увеличенная частота эндогенной пульсации, либо примеси экзогенного ЛГ в фол-литропине). Также было установлено, что стандартные методы оплодотворения in vitro, применяемые у крупного рогатого скота не работают у антилопы канна из-за низкой подвижности спермиев. Интрацел-люлярное оплодотворение ооцитов давало эмбрионы, останавливающиеся в развитии на 2-8-ми бластомерах и только с помощью переноса ядра соматической клетки в энуклеированные ооциты (использовали эпителиальные клетки самца и куму-люсные клетки антилопы-донора) получили четыре бластоцисты. Несмотря ни на какие варианты подбора и усовершенствования сред, улучшить результаты по экстракорпоральному оплодотворению антилоп канна не удалось [96].

Эксперименты A. Thongphakdee с соавторами по трансплантации эмбрионов оленя Эльда (Panolia eldii) закончились рождением живого детеныша. Синхронизацию половой охоты проводили введением имплантов CIDRG на 14 дней и инъекций бусерелина (агониста GnRH). Ооциты получали посредством овариоэктомии через пять дней после удаления имплантов. Оо-циты дорастили и оплодотворили in vitro. Из 133 ооцитов. 63 % сформировали эмбрионы, 5 % достигли стадии бластоци-сты. Также пытались индуцировать полиовуляцию у оленей 80 мг ФСГ, однако обработка не оказала влияние ни на количество фолликулов, ни на процент развивающихся фолликулов после оплодотворения in vitro. Эмбрионы на стадии 2-8-ми бластомер трансплантировали в яйцеводы 11 реципиентам. Три беременности закончились абортами между 90 и 120 днями ге-

стации, два детеныша, родившиеся недоношенными (215 и 224 дни гестации), умерли при рождении, один детеныш родился здоровым на 234 день беременности [97].

Межвидовое клонирование диких животных

В настоящее время проводятся эксперименты по переносу диплоидного набора хромосом из соматических клеток диких животных в энуклиированные ооци-ты домашних животных родственного вида. Эта технология потенциально может быть использована в качестве альтернативы классической трансплантации эмбрионов. Идея межвидового клонирования (переноса ядра соматической клетки, iSCNT) состоит в переносе ядра соматической клетки-донора дикого животного в реципиентный оопласт домашнего животного родственного вида, их слияния, далее доращивания зиготы до необходимой стадии и трансплантации ее также домашнему животному для вынашивания плода. Таким образом, исключаются этапы получения эмбрионов и оплодотворения у диких животных. В ряде случаев это может быть единственной возможностью восстановления исчезающих животных.

K. L. White, T. D. Bunch, S. Mitalipov, W. A. Reed изучали влияние цитоплазмы ооцитов крупного рогатого скота и домашней овцы на ядро фибробласта архара (Ovis Ammon) после трансплантации ядра. Линию фибробластов получили биопсией кожи архара. Ранний анализ кари-отипа клеток между 3-6 пассажами выявил нормальное число диплоидных хромосом, равное 56. Ооциты крупного рогатого скота были собраны посмертно с бойни путем аспирации фолликулов. Ооциты овец собирали из яйцеводов доноров после индукции полиовуляции. Для доращи-вания ооцитов использовали среду M-199 с добавлением 10%-й фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина, 0,5 мкг / мл ФСГ, 5,0 мкг / мл ЛГ и 1,0 мкг / мл эстра-диола. Созревшие MII (в метафазе II) оо-циты крупного рогатого скота были эну-клеированы через 16-20 часов после начала культивирования, ооциты овец - через 2-3 часа после сбора. Энуклеацию подтверждали окрашиванием Hoechst 33342. Донорские клетки архара синхронизировали в фазе G0-G1 путем культивирования в среде DMEM с добавлением 0,5 % FBS в течение 5-10 дней. Слияние клетки-донора ядра с энуклеированным ооцитом (оо-

пластом) индуцировали двумя электрическими импульсами 1,4 кВ / см в течение 30 микросекунд. Слитые гибридные эмбрионы (NT-эмбрионы) активировали через 24 часа созревания путем воздействия ио-номицина (5 мкМ, 4 минуты) с последующей инкубацией в 6-диметиламинопурине (0,2 мМ, 4 часа) и культивировали в микрокаплях среды CRlaa. Из 166 сконструированных NT-пар архар-крупный рогатый скот 128 (77 %) успешно слились, 100 (78 % от слившихся) развились до стадии 8-16 бластомер и 2 (1,56 %) развились до стадии бластоцисты. Из 127 NT-пар архар-овца 101 (80 %) успешно слились, 80 (80 % от слившихся) развились до стадии 16-32 клеток. 28 гибридных эмбрионов (архар-овца) трансплантировали 6-ти реципиентам. У одного из них была подтверждена беременность на 49-й день ультразвуковым исследованием. На 59-й день беременность окончилась изгнанием плода [98].

Xiaoyan Pan, Yanli Zhang, Zhiqin Guo и Feng Wang также получали гибридные эмбрионы архара и домашней овцы посредством межвидового переноса ядер соматических клеток. Ооциты, созревавшие в течение 21-23 часов и энуклеированные с помощью химически поддерживаемой энуклеации (CAE), имели более высокую скорость энуклеации, чем при слепой энуклеации (BE), но одинаковую скорость развития IsNT-эмбрионов. Количество пассажей клеток фибробластов <10, а также стадии клеточного цикла не влияли на скорость развития эмбрионов [99].

Y Kitiyanant, J Saikhun, B Chaisalee, K L White и K Pavasuthipaisit опубликовали результаты экспериментов по клонированию соматических клеток у азиатского буйвола (Bubalus bubalis) [100].

В статье B. Lee и G. G. Wirtu с соавторами описан эсперимент по получению межродовых бластоцистоцист из ядер фибробластов кожи антилопы бонго (Tragelaphus eurycerus isaaci) слитых с эну-клеированными ооцитами крупного рогатого скота [101].

Проведено исследование развития in vitro гибридных эмбрионов гималайского горала (Naemorhedus goral), полученных путем слияния ядер фибробластов кожи горала с энуклеированными ооцитами крупного рогатого скота. После 2-5 пассажей клетки фибробластов переносили в энуклеированные ооциты MII коров. NT-пары были слиты электрическими импульсами и химически активированы, а затем культивированы либо в модифициро-

ванной синтетической жидкости яйцевода (mSOF), либо в среде M-199 с добавлением 10 % FBS. В результате были получены 3 бластоцисты из 202 NT-эмбрионов [102]

Описывается также эксперимент по получению гибридных бластоцист тибетской антилопы оронго (Pantholops hodgsonii) с использованием ооцитов козы [103].

Исследования Yanxin Li с соавторами доказывают возможность получения бла-стоцист такина (Budorcas taxicolor) путем межвидового переноса ядер в ооциты яка (Bos grunniens) и крупного рогатого скота. Показано, что митохондриальная ДНК бластоцисты происходит в основном из оо-цитов реципиента, несмотря на небольшое количество митохондриальной ДНК соматической клетки-донора. Авторы предполагают, что ооциты донора могут репро-граммировать ядра фибробластов реципиента. Также доказывается, что эффективность развития внутривидового клонирования выше, чем межвидового клонирования; чем ближе вид донорской клетки к оо-циту-реципиенту, тем лучше развивается бластоциста in vitro [104].

L. Nel-Themaat и M. C Gуmez с соавторами описывают межродовый ядерный перенос эпителиальных клеток канны (Taurotragus oryx), полученных из спер-миев, в ооциты крупного рогатого скота и сравнивают развитие эмбрионов, полученных путем внутривидового переноса ядра (NT-эмбрионов крупного рогатого скота) и развитие эмбрионов, полученных путем внутриродового переноса ядра (IgNT-канны). Скорости расщепления эмбрионов были сходными (80 % и 83 % соответственно), однако развитие до стадии морулы и бластоцисты было значительно лучше у NT-эмбрионов крупного рогатого скота (38 % и 21 %), чем у IgNT-эмбрионов канны (0,5 % и 0 %). В основном остановка IgNT-эмбрионов канны в развитии происходила перед стадией 8-бластомеров [105, 106].

C. J. Hammer с соавторами проследили влияние iSCNT на последующий неона-тальный исход. Гибридные эмбрионы гау-ра (Bos gaurus) трансплантировали домашним коровам - реципиентам. Четыре беременности закончились нормальными родами. Два теленка были живыми при рождении, а два - мертворожденными. Один из родившихся живыми детенышей умер в течение нескольких минут после рождения, а другой прожил до 26-часового возраста. После рождения регистрировали физиологические показатели: вес, температуру, ча-

стоту сердечных сокращений, частоту дыхания. В крови определяли уровень глюкозы, гематокрит, общий гемоглобин, pH, парциальное давление углекислого газа (PCO2) и кислорода (PO2). Образцы крови теленка, который прожил 26 часов, показали ацидоз и гипогликемию, а также нарушение терморегуляции. Аутопсия обнаружила признаки внутриутробного дыхания и гипоксии у всех телят, что свидетельствует о преждевременном отделении плаценты. Ни одна из коров-реципиентов не показала типичных признаков приближающегося отела. После отела лактоге-нез у всех коров-реципиентов значительно снизился. Плаценты имели анормально низкое количество котиледонов, размеры котиледонов были значительно больше котиледонов нормальной плаценты га-ура [107].

Заключение

Биотехнологии репродукции у сельскохозяйственных животных значительно продвинулись за последние три десятилетия, так что теперь можно производить жизнеспособные эмбрионы почти рутинно. Интерес к использованию таких технологий как искусственное оплодотворение, криоконсервация гамет и эмбрионов, трансплантация эмбрионов, получение эмбрионов in vitro и клонирование, для репродукции исчезающих видов животных также растет.

Теоретически, технология трансплантации эмбрионов и iSCNT у диких животных дают нам возможность восстановить уже практически исчезнувшие виды млекопитающих, если осталось хотя-бы несколько (теоретически даже одна), даже уже неспособных к воспроизводству особей. Получить от одного представителя исчезающего вида в несколько раз большее количество потомков, чем он смог бы дать естественным путем, с помощью индукции полиовуляции, оплодотворения и пересадки ее эмбрионов реципиентам того же или даже другого родственного вида, например, домашнему скоту. Получить ооциты погибшей самки, дорастить, оплодотворить in vitro и так же пересадить суррогатной матери. Получить потомков от редких животных даже в отсутствие их половых клеток, с помощью переноса донорского диплоидного набора хромосом соматической клетки в денуклеированный оо-цит и трансплантации эмбриона домашнему животному - реципиенту.

Однако, как показывают исследования,

прямая экстраполяция методов, разработанных для домашних животных в большинстве случаев приводит к отрицательным или неудовлетворительным результатам [73, 96, 107]. Прежде всего, ввиду видовых особенностей морфологии и физиологии диких жвачных, необходима разработка видоспецифичных протоколов и схем. Существуют также факторы, общие для всех диких животных, которые значительно осложняют проведение исследований и разработку методик.

Прежде всего, присутствие человека, а тем более различные манипуляции вызывают у неодомашненных животных серьезный стресс [108, 109]. Это, как минимум, приводит к нарушению нейрогумо-ральной регуляции (что исключает адекватное реагирование организма на применяемую обработку и снижает прижив-ляемость эмбрионов) [66]. Нередко такой стресс заканчивается развитием злокачественной миопатии и гибелью животных [110-112].

Половая сезонность исчезла, либо значительно сгладилась у сельскохозяйственных животных в результате многовековой доместикации. У диких животных сезонность размножения напротив, четко выражена, так как необходима для выживания потомства в естественной среде обитания [113, 114]. Сезонное отсутствие физиологических половых циклов может серьёзно затруднить создание биотехнологических протоколов для диких животных, потребовать массивной гормональной обработки. При этом, не все виды одинаково лабильно отзываются на гормональное вмешательство вне сезона размножения. В

этом случае в качестве базы для разработки схем индукции эструса и полиовуляции более всего подходят протоколы, разработанные для овец и коз, домашних животных, которые тем не менее также сохранили половую сезонность [5, 115]. Именно поэтому большинство из приведенных выше протоколов, предлагаемых авторами для трансплантации эмбрионов у диких животных (за исключением подсемейства бычьих), разработаны на основе методик для овец и коз [67-69, 71, 73, 77, 80, 84]. Бычьим (антилопы, буйволы) предлагаются протоколы на основе методик для крупного рогатого скота [66, 85, 96, 107].

Межвидовое клонирование может быть ценным методом для сохранения исчезающих видов животных, ооциты которых трудно или невозможно получить путем индукции полиовуляции. В сущности, технология получения гибридных эмбрионов возродила саму идею использования трансплантации эмбрионов для воспроизводства диких животных. Получение потомства путем переноса ядра соматических клеток имеет значительный потенциал для включения новых генов в популяции редких видов, восстановления и сохранения находящихся под угрозой исчезновения животных. Мы видим, что работы в этом направлении достигли определенных результатов, которые свидетельствуют о большом потенциале данной технологии. Однако для того, чтобы технология трансплантации эмбрионов и 18С№Т реально заработали в направлении диких животных требуются дальнейшие исследования и эксперименты.

Библиографический список:

1. https://www.iucnredlist.org/

2. Dotsev A. V. Study of allele pool and genetic structure

of Russian population of lowland-caucasian line of European bison (Bison Bonasus) / A. V. Dotsev, V. V. Volkova, V. R. Kharzinova, O. V. Kostyunina, N.

A. Zinovieva, P. V. Aksenova, R. A. Mnatsekanov // Russian Journal of Genetics: Applied Research. -2018. - Т. 8. - № 1. - С. 31-36.

3. Костюнина О. В. Генетическое разнообразие рос-

сийской популяции европейского зубра (Bison Bonasus) / О. В. Костюнина, В. В. Волкова, И. И. Землянко, П. В. Аксенова, M. С. Форнара, А.

B. Доцев, А. А. Филипченко, Р. А. Mнацеканов, Н. А. Зиновьева // Актуальная биотехнология. -2018. - № 3 (26). - С. 236-238.

4. Mertes K. Management Background and Release Conditions Structure post-release Movements in Reintroduced Ungulates / K. Mertes, J. A. Stabach, M. Songer, T. Wacher, J. Newby, J. Chuven, S. Al. Dhaheri, P. Leimgruber, S. Monfort // Front. Ecol. Evol. - 2019. 7:470. doi: 10.3389/fevo.2019.00470

5. Yan Zeng Genetic variability in relocated Prne David's deer (Elaphurus davidianus) populations - Implications to reintroduction program / Yan

Zeng, Zhigang Jiang, Chunwang Li // Conservation Genetics. - 2007. 8(5):1051-1059 DOI: 10.1007/ s10592-006-9256-0

6. Warwick B. L. Inter-generic and intraspecific embryo

transfers / B. L. Warwick, R. O. Berry // J. Hered. -1949. 40: 297 303.

7. Pincus G. Observations on the development of cow

ova in vivo and in vitro // Proc. Natur. Egg transfer and breeders conf. - San Antario, Texas. - 1949. - N 1. - P. 18.

8. Аксенова П. В. Биология репродукции коз / П.

В. Аксенова, А. М. Ермаков // Монография. -Санкт-Петербург, Москва, Краснодар. - 2015.

9. Айбазов А. М. М. Возможность и перспективы

получения первичных трансгенных животных - продуцентов белков человека / А. М. М. Айбазов, П. В. Аксенова // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2012. - № 3. - С. 38-40.

10. Айбазов М. М. Влияние технологии замораживания на биологическую полноценность спермы баранов / М. М. Айбазов, П. В. Трубникова, И. Г. Сердюков // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2013. - № 4. - С. 9-10.

11. Айбазов М. М. Биологическая полноценность глубокозамороженной спермы баранов в зависимости от сроков хранения / М. М. Айбазов, Д. В. Коваленко, П. В. Аксенова // Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. - 2012. - Т. 2. - № 1. - С. 140-143.

12. Завадовский М. М. Нельзя ли, вызывая искусственную овуляцию у овец, достигнуть многоплодия? / М. М. Завадовский, Л. П. Падучева // Труды по динамике развития. - 1935. - Т. IX. - С. 139-151.

13. Завадовский М. М. Однократная и двукратная (с интервалом в 15-16 дней инъекция гонадотроп-ных агентов овцам в «мертвый» сезон как метод стимуляции «овуляции», «течки» и «охоты» / М. М. Завадовский // Тр. По динадиммике развития.

- М., - Л. - 1939. - Т. XI. - С. 46-51 б.

14. Завадовский М. М. Гормональный метод стимуляции многоплодия овец / М. М. Завадовский //

- М.: Селхозизд, 1941. 47 б.

15. Завадовский М. М. Активизация половой ци-клики у овец в «мертвый» сезон и организация уплотненных окотов / М. М. Завадовский // Вестник Московского университета. - 1945. - Вып. 2.

- С. 18-21.

16. Завадовский М. М. Теория и практика гормонального метода стимуляции многоплодия сельскохозяйственных животных / М. М. Завадов-ский. - М.: Сельхозиздат, 1963. - 677 с.

17. Лопырин А. И. Опыт межпородной пересадки зародышей / А. И. Лопырин, Н. В. Логинова, П. Л. Карпов // Советская зоотехния. - 1950. - № 8. - С. 50-64.

18. Лопырин А. И. Влияние организма матери на изменение экстерьера ягнят при межпородных пересадках зародышей / А. И. Лопырин, Н. В. Логинова, П. Л. Карпов // Труды совещания по биологическим основам повышения продуктивности. - М. - 1952. - С. 120-124.

19. Лопырин А. И. Действие различных прогестаген-ных препаратов при стимуляции синхронизации охоты у овец / А. И. Лопырин, В. И. Донская, Л. П. Рак, П. В. Сурков // Овцеводство. - 1969. - № 8. - С. 27-30.

20. Лопырин А. И. Биология размножения овец / А. И. Лопырин. - М.: Колос, 1971. - 318 с.

21. Rowson L. E. A. Embryo transfer in the sheep: the significance of synchronizing oestrus in the donor and recipient animal / L. E. A. Rowson, R. M. Moor // J. Reprod. Fert. - 1966. 11: 207-212.

22. Averill R. L. W. The production of living sheep eggs / R. L. W. Averill // The Journal of Agricultural Science. - February 1958. - Vol. 50. - Issue 1. - P. 1733 DOI: https://doi.org/10.1017/S002185960002983X Published online by Cambridge University Press: 27 March 2009

23. Moore N. W. Egg transfer in sheep. Factors affecting the survival and development of transferred eggs / N. W. Moore, L. E. A. Rowson, R. V. Short // J. Reprod. Fertil. - 1960. - Vol. 1. - Issue 4. - P. 332-349.

24. Booth W. D. Plasma oestrogen and progesterone in relation to super ovulation and egg recovery in the sheep / W. D. Booth, R. Newcomb, H. Strange L. E. Rowson, H. B. Sacher // Vet. Rec. - 1975. - V. 97. - N 19. - P. 366-369.

25. Betteridge K. J. Embryo transfer in farm animals. A review of techniques and Applications / K. J. Betteridge // Agriculture Canada Monograph. -1977. - 16. - P. 34-41.

26. Падучева А. Л. Гормональные препараты в животноводстве / А. Л. Падучева. - М.: Россельхо-зиздат, 1979. - 102 с.

27. Донская В. И. Сравнительная оценка различных способов стимуляции полиовуляции у овец / В. И. Донская, М. М. Кунижев // Разведение овец и коз. Шерстоведение. Сборник научных трудов. -

Ставрополь, ВНИИОК. - 1983. - С. 87-90.

28. Клинский Ю. Д. Использование простагландинов для регуляции воспроизводительной функции овец / Д. Ю. Клинский, А. Н. Алексеенко // Животноводство. - 1980. - № 4. - С. 54-57.

29. Evans G. The control of fertility in sheep: endocrine and ovarian responses to progestagen-PMSG treatment in the breeding season and in anestrus / G. Evans, T. J. Robinson // J. Agric. Sci. - 1980. 94: 69 88.

30. Gordon J. The use of progesterone and serum gonadotropin (PMS) in the control of fertility in sheep. II. Studies in the extra seasonal production of lambs / J. Gordon // J. Agr. Sci. - 1985. - V. 50. - N 2.

31. Greve Т. Morphological evolution of bovine embryos recovered non-surgically from superovulated dairy cows on days 6,5 to 7,5. A field study / T. Greve, H. Lehn-Jensen, N. O. Rasbech // Ann. Biol. Anim. Biochim. Biophys. - 1979. - V. 19. - N 5. - P. 1599.

32. Greve Т. Egg transfer in sheep effect of injecting PMSG on different days / T. Greve, H. Lehn-Jensen, N. O. Rasbech // Theriogenology. - 1979. - 5 (1) - V. 5. - N 1. - P. 15-19.

33. Maurer R. Superovulation and embryo transfer in sheep / R. Maurer, J. Meat // Animal. - 1986. - N 8. - P. 27-39.

34. Аксенова П. В. Вариабельность ответа яичников при индукции полиовуляции у коз / П. В. Аксенова, М. М. Айбазов, Д. В. Коваленко // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2012. - № 2 (14). - С. 17-21.

35. Mutiga E. R. Ovarian response, ova recovery and fertility in merino ewes superovulated either during the luteal phase of their oestrous cycle or after intravaginal progestagen treatment / E. R. Mutiga, A. A. Baker // Theriogenology. - 1982. - V. 17. - N l. - P. 537-544.

36. Sugie Т. Superovulation of sheep using follicle stimulating hormone and prostaglandin F / Т. Sugie, T. Soma, J. Tsunoda, K. Muzouchi // Theriogenology.

- 1980. - V. 11. - N l. - P. 104.

37. Wright R. W. Jr. Aspects of in vitro fertilization and embryo culture in domestic animals / R. W. Jr. Wright, K. R. Bondioli // J. Anim. Sci. - 1981. 53: 702 729.

38. Moore M. W. Egg transfer in sheep / M. W. Moore, J. N. Shelton // Austral. J. Agric. Rec. - 1963. - V. 13. - N 4. - P. 718-724.

39. Schiewe M. C. Laparoscopic embryo transfer in domestic Sheep: Preliminary study / M. C. Schiewe, M. Bush, L. S. Stuart, D. E. Wildt // Theriogenology.

- 1986. - V. 22.- P. 675-682.

40. Шихов И. Я. Трансплантация эмбрионов у овец / И. Я. Шихов, Л. А. Истомина, Э. Поладов и др. // Овцеводство. - 1985. - № 6. - С. 25-27.

41. Эрнст Л. К. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных / Л. К. Эрнст, Н. И. Сергеев // - М.: Агропромиздат, 1989. - С. 127-129.

42. Ryan J. P. Time of ovulation in Merino ewes superovulated with PMSG and FSH-P / J. P. Ryan, J. R. Hunton, W. M. C. Maxwell // Reprod. Fert. Dev. 1992.-91-7.

43. Касымов К. Трансплантация эмбрионов у овец / К. Касымов, Г. Алимжанов, Н. Науанов и др. // Зоотехния. - 1994. - № 8. - С. 29-30.

44. Rowson L. E. A. Egg transfer in cattle / L. E. A. Rowson // Seminar CEC Luxemburg, EUR / 5491.

- 1976. - P. 393-395.

45. McKelvey W. A. C. Repeated recoveries of embryos from ewes by laparoscopy / W. A. C. McKelvey, J. J. Robinson, R. P. Aitken, I. S. Robertson // Theriogenology. - 1986. - N 25. - P. 855-865.

46. McKelvey W. A. C. Repeated recoveries of ovine ova by laparoscopy / W. A. C. McKelvey, J. J. Robinson // Theriogenology. - 1986. - N 25. - P. 171-173.

47. Ayalon N. Fertility losses in normal cows and repeat

of breeders. Proc. 6th. Int. / N. Ayalon, J. Weis, J. Lewis // Congr. Anim. Reprod. - 1978. - V. 1. - P. 393-396.

48. Harper М. E. K. Some aspects of the biology of mammalian eggs and spermatozoa / М. E. K. Harper, М. C. Chang // Ln. Advances in reproductive Physiology edit. Bishop М. N. H - 1975. - V. 5 - P. 167.

49. Maxwell М. S. Искусственное размножение: трансплантация эмбрионов и клонирование / М.

5. Maxwell, A. Szell, J. R. Hunton, O. R. Ryan // Reproductive Physiology of Merino Sheep. - 1990.

50. Betteridge K. J. Collection, description and transfer of embryos from cattle 10-16 days after oestrus / K. J. Betteridge, M. D. Eaglensome, G. C. B. Randall, D. Nitchell // Reprod and Fert. - 1980. - V. 59. - N l. - P. 205-216.

51. Сергеев Н. И. Биотехника трансплантации эмбрионов / Н. И. Сергеев, С. А. Мазепкин // Овцеводство. - 1987. - № 2. - С. 36-40.

52. Drost М. A fild study on embryo transfer in sheep / V. Drost // J. Amer. Vet. Medic. Assoc. - 1975. - 166.

- № 12. - P. 1176-1179.

53. Walker S. K. Laporoscopic techniques for the transfer of embryos in sheep / S. K. Walker, G. M. Wames, P. Quinn, R. F. Seamark, D. H. Smith // Aust. Vet. J. - 1985. - V. 62. - P. 105-106.

54. Aksenova P. V. Influence of sexual season on implantation of microinjected embryos and birth rate of new born-transplant in experiments on creating transgenic goats carrying human lactoferrin gene / P. V. Aksenova, A. M. Ermakov, S. N. Kartashov, L. P. Mironova, A. I. Klimenko, T. V. Varduni, A. M. M. Aybazov // European Journal of Physical and Health Education. - 2014. - Т. 6. - № 1. - Suppl. 1.

- С. BM-008-14.

55. Аксенова П. В. Результаты синхронизации полового цикла у молочных коз / П. В. Аксенова, М. М. Айбазов, Д. В. Коваленко // Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. - 2012. - Т. 3. - № 1-1. - С. 52-54.

56. Аксенова П. В. Эффективная схема индукции полиовуляции для трансплантации эмбрионов у коз // П. В. Аксенова, М. М. Айбазов, Д. В. Коваленко, Е. Р. Садчикова, И. Л. Гольдман // Сельскохозяйственная биология. - 2013. - Т. 48. - №

6. - С. 63-69.

57. Аксенова П. В. Научные основы интенсификации воспроизводства молочных коз: дис ... д-ра биол. наук (06.02.06) / П. В. Аксенова. - Новочеркасск: СКЗНИВИ, 2012. 58. Аксенова П. В. Научные основы интенсификации воспроизводства молочных коз: автореф. дис. ... д-ра биол. наук (06.02.06) / П. В. Аксенова. - Новочеркасск: СКЗНИВИ, 2012.

59. Аксенова П. В. Разработка эффективных схем индукции полиовуляции у молочных коз с применением различных препаратов / П. В. Аксенова, М. М. Айбазов, Д. В. Коваленко // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2012. - № 4. - С. 18-19.

60. Аксенова П. В. Техника трансплантации эмбрионов у мелких жвачных / П. В. Аксенова, А. М. Ермаков // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 2014. - № 12. - С. 21-24.

61. Аксенова П. В. Оценка качества и устойчивости к криоконсервации эмбрионов коз в зависимости от стадии развития / П. В. Аксенова, А. М. М. Айбазов, М. С. Сеитов // Известия Оренбургского государственного аграрного университета.

- 2013. - № 6 (44). - С. 85-87.

62. Патент на изобретение RU 2396344 C1. Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов коз in vitro / Аксенова П. В., Айбазов А. М. М. 10.08.2010. Заявка № 2008152992/13 от 31.12.2008.

63. Айбазов А. М. М. Возможность и перспективы получения первичных трансгенных животных - продуцентов белков человека / А. М. М. Айбазов, П. В. Аксенова // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2012. - № 3. - С. 38-40.

64. Айбазов А. М. М. Синхронизация половой охоты у молочных коз / А. М. М. Айбазов, Л. С. Малахова, П. В. Трубникова // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2006. - № 2. - С. 32-33.

65. Аксенова П. В. Результаты апробации усовершенствованного метода трансплантации эмбрионов у овец: анализ приживляемости зигот, эффективности вынашивания плода и развития ягнят-трансплантантов / П. В. Аксенова // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2014. - № 1. - С. 11-13.

66. Schiewe M. C. Comparative aspects of estrus synchronization, ovulation induction, and embryo cryopreservation in the scimitar-horned oryx, bongo, eland and greater kudu / M. C. Schiewe, M. C. Bush, L. G. Phillips, S. Citino, D. E. Wildt // J. Exp. Zool. -1991. - Vol. 258. - Issue 1. - P. 75-88.

67. Waldhalm S. J. Bearden Embryo transfer in the White-tailed deer: A reproductive model for endangered deer species of the world / S. J. Waldhalm, H. A. Jacobson, S. K. Dhungel, H. J. Bearden // Theriogenology. - February 1989. - V. 31. - Is. 2. - P. 437-450.

68. Fennessy P. F. Embryo transfer in deer / P. F. Fennessy, G. W. Asher, N. S. Beatson, T. E. Dixon, J. W.Hunter, M. J. Bringans // Theriogenology. - V. 41. - Is. 1. - P. 133-138.

69. Asher G. W. Genetic influences on reproduction of female red deer (Cervus elaphus) (2) seasonal and genetic effects on the superovulatory response to exogenous FSH / G. W. Asher, K. T. O'Neill, I. C. Scott, B. G. Mockett, A. J. Pearse // Anim Reprod Sci. 2000 Apr. 28;59(1-2):61-70. doi: 10.1016/s0378-4320(00)00066-x.PMID: 10804276

70. Berg D. K. The temporal relationship between oocyte maturation and early fertilisation events in relation to the pre-ovulatory LH peak and preimplantation embryo development in red deer (Cervus elaphus) / D. K. Berg, J. G. Thompson, A. J. Peterson, G. W. Asher // Anim Reprod Sci. 2008 May;105(3-4):332-43. doi: 10.1016/j.anireprosci.2007.03.013. Epub 2007 Mar 27. PMID: 17482775

71. Berg D. K. Successful in vitro culture of early cleavage stage embryos recovered from superovulated red deer (Cervus elaphus) / D. K. Berg, J. G. Thompson, P. A. Pugh, H. R. Tervit, G. W. Asher // Theriogenology. 1995 Jul 15;44(2):247-54. doi: 10.1016/0093-691x(95)00174-7.PMID: 16727724

72. Fukui Y. Effects of culture duration and time of gonadotropin addition on in vitro maturation and fertilization of red deer (Cervus elaphus) oocytes / Y. Fukui, L. T. McGowan, R. W. James, G. W. Asher, H. R. Tervit // Theriogenology. 1991 Mar;35(3):499-512. doi: 10.1016/0093-691x(91)90446-k.PMID: 16726919

73. Berg D. K. New developments reproductive technologies in deer / D. K. Berg, G. W. Asher // Theriogenology. 2003 Jan 1;59(1):189-205. doi: 10.1016/s0093-691x(02)01272-4.PMID: 12499028

74. Berg D. K. Development of in vitro embryo production systems for red deer (Cervus elaphus). Part 1. Effect of epithelial oviductal monolayers and heparin on in vitro sperm motility and penetration of in vitro matured oocytes / D. K. Berg, J. G. Thompson, G. W. Asher // Anim Reprod Sci. 2002 Mar 15;70(1-2):65-76. doi: 10.1016/s0378-4320(01)00199-3.PMID: 11841907

75. Berg D. K. Development of in vitro embryo production systems for red deer (Cervus elaphus). Part 2. The timing of in vitro nuclear oocyte maturation / D. K. Berg, J. G. Thompson, G. W. Asher // Anim Reprod Sci. 2002 Mar 15;70(1-2):77-

84. doi: 10.1016/s0378-4320(01)00200-7.PMID:

11841908

76. Berg D. K. Development of in vitro embryo production systems for red deer (Cervus elaphus). Part 3. In vitro fertilisation using sheep serum as a capacitating agent and the subsequent birth of calves / D. K. Berg, P. A. Pugh, J. G. Thompson, G. W. Asher // Anim. Reprod. Sci. 2002 Mar 15;70(1-2):85-98. doi: 10.1016/s0378-4320(01)00201-9.PMID:

11841909

77. Morrow C. J. Embryo transfer in fallow deer (Dama dama): superovulation, embryo recovery and laparoscopic transfer of fresh and cryopreserved embryos // C. J. Morrow, G. W. Asher, D. K. Berg, H. R. Tervit, P. A. Pugh, W. H. McMillan, S. Beaumont, D. R. Hall, A. C. Bell // Theriogenology. 1994 Sep;42(4):579-90. doi: 10.1016/0093-691x(94)90375-s. PMID: 16727564

78. Asher G. W. Laparoscopic intra-uterine insemination of fallow deer with frozen-thawed or fresh semen after synchronisation with CIDR devices / G. W. Asher, C. J. Morrow, H. N. Jabbour, R. C. Mulley,

F. A. Veldhuizen, M. N. Langridge // Z. Vet. J. 1992 Mar;40(1):8-14. doi: 10.1080/00480169.1992.35689. PMID: 16031649

79. Asher G. W. Ultrasonographic monitoring of antral follicle development in red deer (Cervus elaphus) /

G. W. Asher, I. C. Scott, K. T. O'Neill, J. F. Smith, E. K. Inskeep, E. C. Townsend // J. Reprod. Fertil. 1997 Sep;111(1):91-9. doi: 10.1530/jrf.0.1110091.PMID: 9370972

80. Jabbour H. N. Endocrine responses and conception rates in fallow deer (Dama dama) following oestrous synchronization and cervical insemination with fresh or frozen-thawed spermatozoa / H. N. Jabbour, F. A. Veldhuizen, G. Green, G. W. Asher // J. Reprod. Fertil. 1993 Jul;98(2):495-502. doi: 10.1530/ jrf.0.0980495.PMID: 8410816

81. Asher G. W. Luteolytic potency of a prostaglandin analogue at different stages of the oestrous cycle in red deer (Cervus elaphus) hinds / G. W. Asher, M. W. Fisher, D. K. Berg, F. A. Veldhuizen, C. J. Morrow // J. Reprod. Fertil. 1995 Mar;103(2):307-14. doi: 10.1530/jrf.0.1030307.PMID: 7616503

82. Asher G. W. Induction of oestrus and ovulation in farmed fallow deer (Dama dama) by using progesterone and PMSG treatment / G. W. Asher, J. F. Smith // J. Reprod. Fertil. 1987 Sep;81(1):113-8. doi: 10.1530/jrf.0.0810113.PMID: 3668942

83. Asher G. W. Induction of oestrus and ovulation in anoestrous fallow deer (Dama dama) by using progesterone and GnRH treatment / G. W. Asher, K. L. Macmillan // J. Reprod. Fertil. 1986 Nov;78(2):693-7. doi: 10.1530/jrf.0.0780693.PMID: 3543337

84. Jabbour H. N. Effect of exogenous gonadotrophins on oestrus, the LH surge and the timing and rate of ovulation in red deer (Cervus elaphus) / H. N. Jabbour, F. A. Veldhuizen, R. C. Mulley, G. W. Asher // J. Reprod. Fertil. 1994 Mar;100 (2):533-9. doi: 10.1530/jrf.0.1000533.

85. Armstrong D. L. Transvaginal egg retrieval and in vitro embryo production in gaur (Bos gaurus) with establishment of interspecies pregnancies / D. L. Armstrong, C. R. Looney, B. R. Lindsey, C. L. Gonseth, D. L. Johnson, K. R. Williams, L. G. Simmons, N. M. Loskutoff // Theriogenology. 1995, 43, 162

86. Loskutoff N. M. Transvaginal, ultrasound-guided oocyte retrieval and the developmental competence of in vitro-produced embryos in vitro and in vivo in the gaur (Bos gaurus) / N. M. Loskutoff, D. L. Armstrong, C. L. Ohlrichs, D. L. Johnson, D. J. Funk, P. V. VanRoekel, J. A. Molina, B. R. Lindsey, C. R. Looney, S. M. Bellow, C. J. Hammer, H. D. Tyler, L. G. Simmons // Theriogenology. 2000, 53:337

87. Flores-Foxworth G. Interspecific transfer of IVM

IVF-derived red sheep (Ovis orientalis gmelini) embryos to domestic sheep (Ovis aries) / G. Flores-Foxworth, S. A. Coonrod, J. F. Moreno, S. R. Byrd, D. J. Funk, P. V. VanRoekel, J. A. Molina, B. R. Lindsey, C. R. Looney, S. M. Bellow, C. J. Hammer,

H. D. Tyler, L. G. Simmons // Theriogenology. 1995 ct;44(5):681-90. doi: 10.1016/0093-691x(95)00248-7.

88. Dixon T. E. Interspecific embryo transfer from mouflon (Ovis gmelini musimon) to domestic Corriedale sheep in Argentina / T. E. Dixon, J. W. Hunter, J. P. Soler // Anim. Reprod. Sci. 2007 Sep;101(1-2):158-62. doi: 10.1016/j. anireprosci.2006.12.007. Epub 2006 Dec 10.PMID: 17204378

89. Santiago-Moreno J. Procedure for successful interspecific embryo transfer from mouflon (Ovis gmelini musimon) to Spanish Merino sheep (Ovis aries) // J. Santiago-Moreno, A. Gonzölez-Bulnes, A. Gуmez-Brunet, M. J. Cocero, A. del Campo, R. Garcra-Garcra, A. J. Lуpez-Sebastiбn // Zoo Wildl. Med. 2001 Sep; 32(3):336-41. doi: 10.1638/1042-7260(2001)032[0336:PFSIET]2.0. CO;2.PMID: 12785682

90. Buckrell B. C. Failure to maintain interspecific pregnancy after transfer of Dall's sheep embryos to domestic ewes / B. C. Buckrell, C. J. Gartley, K. G. Mehren, G. J. Crawshaw, W. H. Johnson,

I. K. Barker, J. Balke, C. Coghill, J. R. Challis, K. Goodrowe // J. Reprod. Fertil. 1990 Nov;90(2):387-94. doi: 10.1530/jrf.0.0900387.PMID: 2250237

91. Ferndndez-Arias A. Interspecies pregnancy of Spanish ibex (Capra pyrenaica) fetus in domestic goat (Capra hircus) recipients induces abnormally high plasmatic levels of pregnancy-associated glycoprotein / A. Fern5ndez-Arias 1, J. L. Alabart, J. Folch, J. F. Beckers // Affiliations expand. 1999 Jun;51(8):1419-30. doi: 10.1016/s0093-691x(99)00086-2

92. Bainbridge D. R. Successful in vitro fertilization of in vivo matured oocytes aspirated laparoscopically from red deer hinds (Cervus elaphus) / D. R. Bainbridge, S. L. Catt, G. Evans, H. N. Jabbour // Theriogenology. 1999 Apr 1;51(5):891-8. doi: 10.1016/s0093-691x(99)00036-9.

93. Brahmasani Sambasiva Rao Developmental Competence of Oocytes Recovered from Postmortem Ovaries of the Endangered Indian Blackbuck (Antilope cervicapra) / Brahmasani Sambasiva Rao, Yelisetti Uma Mahesh, Uthanda Raman Lakshmikantan, Komjeti Suman, Katari Venu Charan, Sisinthy Shivaji // - 2010. - V. 56. - Is. 6. - P. 623-629.

94. Del Campo M. R. In vitro fertilization and development of llama (Lama glama) oocytes using epididymal spermatozoa and oviductal cell co-culture / M. R. Del Campo, C. H. Del Campo, M. X. Donoso, M. Berland, R. J. Mapletoft // Theriogenology. - 1994. - V. 41. - Is. 6. - P. 12191229.

95. Khatir H. The first dromedary (Camelus dromedarius) offspring obtained from in vitro matured, in vitro fertilized and in vitro cultured abattoir-derived oocytes / H. Khatir, A. Anouassi // Theriogenology. 2006 Jun;65(9):1727-36. doi: 10.1016/j.theriogenology.2005.09.029. Epub 2005 Nov 2.PMID: 16263162

96. Wirtu G. G. Developing embryo technologies for the eland antelope (Taurotragus oryx) (2004). LSU Doctoral Dissertations. - 159 с.

97. Thongphakdee A. The impact of ovarian stimulation protocol on oocyte quality, subsequent in vitro embryo development, and pregnancy after transfer to recipients in Eld's deer (Rucervus eldii thamin) / A. Thongphakdee, D. K. Berg, T. Tharasanit, N. Thongtip, D. J. Funk, P. V. VanRoekel, J. A. Molina, B. R. Lindsey, C. R. Looney, S. M. Bellow, C. J. Hammer, H. D. Tyler, L. G. Simmons

// Theriogenology. 2017 Mar 15;91:134-144. doi: 10.1016/j.theriogenology .2016.12.021. Epub 2016 Dec 23.PMID: 28215678

98. White K. L. Establishment of pregnancy after the transfer of nuclear transfer embryos produced from the fusion of argali (Ovis ammon) nuclei into domestic sheep (Ovis aries) enucleated oocytes / K. L. White, T. D. Bunch, S. Mitalipov, W. A. Reed // Cloning. 1999;1(1):47-54. doi: 10.1089/15204559950020085.

99. Xiaoyan Pan Development of interspecies nuclear transfer embryos reconstructed with argali (Ovis ammon) somatic cells and sheep ooplasm / Xiaoyan Pan, Yanli Zhang, Zhiqin Guo, Feng Wang // Cell Biol. Int. 2014 Feb;38(2):211-8. doi: 10.1002/ cbin.10191

100. Kitiyanant Y. Somatic cell cloning in Buffalo (Bubalus bubalis): effects of interspecies cytoplasmic recipients and activation procedures / Y. Kitiyanant, J. Saikhun, B. Chaisalee, K. L. White, K. Pavasuthipaisit // Cloning Stem Cells. 2001;3(3):97-104. doi: 10.1089/153623001753205052

101. Lee B. Blastocyst development after intergeneric nuclear transfer of mountain bongo antelope somatic cells into bovine oocytes / B. Lee, G. Wirtu, P. Damiani, E. Pope, B. L Dresser, W. Hwang, B. D Bavister // Cloning Stem Cells. 2003;5(1):25-33. doi: 10.1089/153623003321512139.

102. Byoung-Chol Oh Production of blastocysts after intergeneric nuclear transfer of goral (Naemorhedus goral) somatic cells into bovine oocytes // Byoung-Chol Oh, Jung-Tae Kim, Nam-Shik Shin, Soo-Whan Kwon, Sung-Keun Kang, Byeong-Chun Lee, Woo-Suk Hwang // J. Vet. Med. Sci. 2006 Nov;68(11):1167-71. doi: 10.1292/jvms.68.1167

103. Zhen-Jun Zhao Interspecies nuclear transfer of Tibetan antelope using caprine oocyte as recipient Zhen-Jun Zhao, Rui-Chang Li, Heng-Hua Cao, Quan-Jun Zhang, Man-Xi Jiang, Ying-Chun Ouyang, Chang-Long Nan, Zi-Li Lei, Xiang-Fen Song, Qing-Yuan Sun, Da-Yuan Chen // Mol Reprod Dev. 2007 Apr;74(4):412-9. doi: 10.1002/mrd.20608.

104. Li Yanxin Cloned endangered species takin (Budorcas taxicolor) by inter-species nuclear transfer and comparison of the blastocyst development with yak (Bos grunniens) and bovine / Yanxin Li, Yunping Dai, Weihua Du, Chunjiang Zhao, Haiping Wang, Lili Wang, Rong Li, Ying Liu, Rong Wan, Ning Li // Mol Reprod Dev. 2006 Feb;73(2):189-95. doi: 10.1002/mrd.20405

105. Nel-Themaat L. Cloned embryos from semen. Part 1: in vitro proliferation of epithelial cells on embryonic fibroblasts after isolation from semen by gradient centrifugation / L. Nel-Themaat, M. C. Gymez, C. Earle Pope, M. Lopez, G. Wirtu, A. Cole,

B. L. Dresser, L. A. Lyons, K. R. Bondioli, R. A. Godke // Cloning Stem Cells 2008 Mar;10(1):143-60. doi: 10.1089/clo.2007.0067.

106. Nel-Themaat L. Cloned embryos from semen. Part 2: intergeneric nuclear transfer of semen-derived eland (Taurotragus oryx) epithelial cells into bovine oocytes / L. Nel-Themaat, M. C. Gуmez, C. E. Pope, M. Lopez, G. Wirtu, J. A Jenkins, A. Cole, B. L Dresser, K. R Bondioli, R. A Godke // Cloning Stem Cells. 2008 Mar;10(1):161-72. doi: 10.1089/ clo.2007.0069

107. Hammer C. J. Compromised development of calves (Bos gaurus) derived from in vitro-generated embryos and transferred interspecifically into domestic cattle (Bos taurus) / C. J. Hammer, H. D. Tyler, N. M. Loskutoff, D. L. Armstrong, D. J. Funk, B. R. Lindsey, L. G. Simmons // Theriogenology. -2001. - V.55.- P. 1447-1455.

108. Schiewe M. C. Variables influencing the collection and cryopreservation of embryos from nondomestic hoofed species / M. C. Schiewe, M. C. Bush, L. G. Phillips, D. E. Wildt // 11th Int. Cong. Anim. Reprod. Artif. Insemin. - Dublin, Ireland. - 1988. -Vol. 2. - P. 190.

109. Dorn C. G. Application of reproductive technologies in the North American bison (Bison bison) / C. G. Dorn // Theriogenology. - 1995. - 43.

- P.13-20.

110. Аксенова П. В. Риск развития постанетезион-ной миопатии у зубров / П. В. Аксенова // Ветеринарная патология. - 2018. - № 3 (65). - С. 52-60.

111. Аксенова П. В. Ветеринария зубров. Практическое руководство. - Всемирный фонд дикой природы WWF, Москва, 2000/- 224 c., ISBN 9785-6043714-9-7

112. Spraker T. R. Stress and capture myopathy in artiodactylids / T. R. Spraker // In: Fowler M, ed. Zoo and Wild Animal Medicine: Current Therapy 3. Philadelphia: W.B. Saunders Co., 1993: 48-488.

113. Цибизова Е. Л. Особенности проявления репродуктивной функции у зубра европейского (Bison Bonasus) при полувольном содержании в условиях питомников / Е. Л. Цибизова, П. В. Аксенова, А. М. Ермаков // Ветеринарная патология. - 2015.

- № 1 (51). - С. 54-63.

114. Цибизова Е. Л. Методы регуляции половозрастного состава зубров в питомнике Окского заповедника / Е. Л. Цибизова, П. В. Аксенова, А. М. Ермаков // Ветеринарная патология. - 2014. - № 1 (47). - С. 49-54.

115. Айбазов М. М. Результаты стимуляции половой охоты у молочных коз в анэстральный период / М. М. Айбазов, Л. С. Малахова, П. В. Трубникова // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2006. - № 2. - С. 34-35.

References:

1-2. Vide supra.

3. Kostyunina O. V. Geneticheskoe raznoobrazie rossiyskoy populyatsii evropeyskogo zubra (Bison Bonasus) [Genetic diversity of the Russian population of the European bison (Bison Bonasus)] / O. V. Kostyunina, V. V. Volkova, I. I. Zemlyanko, P. V. Aksenova, M. S. Fornara, A. V. Dotsev, A. A. Filipchenko, R. A. Mnatsekanov, N. A. Zinoveva // Aktualnaya biotehnologiya. - 2018. - # 3 (26). - S. 236-238. 4-7. Vide supra.

8. Aksenova P. V. Biologiya reproduktsii koz [Biology

of reproduction of goats] / P. V. Aksenova, A. M. Ermakov // Monografiya. - Sankt-Peterburg, Moskva, Krasnodar. - 2015.

9. Aybazov A. M. M. Vozmozhnost i perspektivyi polucheniya pervichnyih transgennyih zhivotnyih - produtsentov belkov cheloveka [Possibility and prospects of obtaining primary transgenic animals -

producers of human proteins] / A. M. M. Aybazov, P. V. Aksenova // Ovtsyi, kozyi, sherstyanoe delo. -2012. - # 3. - S. 38-40.

10. Aybazov M. M. Vliyanie tehnologii zamorazhivaniya na biologicheskuyu polnotsennost spermyi baranov [Influence of freezing technology on the biological usefulness of sheep sperm] / M. M. Aybazov, P. V. Trubnikova, I. G. Serdyukov // Rossiyskiy veterinarnyiy zhurnal. Selskohozyaystvennyie zhivotnyie. - 2013. - # 4. - S. 9-10.

11. Aybazov M. M. Biologicheskaya polnotsennost glubokozamorozhennoy spermyi baranov v zavisimosti ot srokov hraneniya [Biological usefulness of deep-frozen sheep semen depending on the storage period] / M. M. Aybazov, D. V. Kovalenko, P. V. Aksenova // Sbornik nauchnyih trudov Stavropolskogo nauchno-issledovatelskogo instituta zhivotnovodstva i kormoproizvodstva. -2012. - T. 2. - # 1. - S. 140-143.

12. Zavadovskiy M. M. Nelzya li, vyizyivaya iskusstvennuyu ovulyatsiyu u ovets, dostignut mnogoplodiya? [Is it possible, by causing artificial ovulation in sheep, to achieve multiple pregnancy?] / M. M. Zavadovskiy, L. P. Paducheva // Trudyi po dinamike razvitiya. - 1935. - T. IX. - S. 139-151.

13. Zavadovskiy M. M. Odnokratnaya i dvukratnaya (s intervalom v 15-16 dney in'ektsiya gonadotropnyih agentov ovtsam v «mertvyiy» sezon kak metod stimulyatsii «ovulyatsii», «techki» i «ohotyi» [Single and double (with an interval of 15-16 days, injection of gonadotropic agents in sheep in the «dead» season as a method of stimulating «ovulation», «estrus» and «hunting»] / M. M. Zavadovskiy // Tr. Po dinamike razvitiya. - M., - L. - 1939. - T. XI. - S. 46-51 b.

14. Zavadovskiy M. M. Gormonalnyiy metod stimulyatsii mnogoplodiya ovets [Hormonal method of stimulation of multiple births of sheep] / M. M. Zavadovskiy // - M.: Selhozizd, 1941. 47 b.

15. Zavadovskiy M. M. Aktivizatsiya polovoy tsikliki u ovets v «mertvyiy» sezon i organizatsiya uplotnennyih okotov [Activation of the sexual cycle in sheep in the «dead» season and the organization of compacted lambing] / M. M. Zavadovskiy // Vestnik Moskovskogo universiteta. - 1945. - Vyip. 2. - S. 18-21.

16. Zavadovskiy M. M. Teoriya i praktika gormonalnogo metoda stimulyatsii mnogoplodiya selskohozyaystvennyih zhivotnyih [Theory and practice of the hormonal method of stimulation of multiple births of farm animals] / M. M. Zavadovskiy. - M.: Selhozizdat, 1963. - 677 s.

17. Lopyirin A. I. Opyit mezhporodnoy peresadki zarodyishey [Experience of interbreed transplantation of embryos] / A. I. Lopyirin, N. V. Loginova, P. L. Karpov // Sovetskaya zootehniya. -1950. - # 8. - S. 50-64.

18. Lopyirin A. I. Vliyanie organizma materi na izmenenie eksterera yagnyat pri mezhporodnyih peresadkah zarodyishey [Influence of the mother's organism on the change in the exterior of lambs during interbreed embryo transplantation] / A. I. Lopyirin, N. V. Loginova, P. L. Karpov // Trudyi soveschaniya po biologicheskim osnovam povyisheniya produktivnosti. - M. - 1952. - S. 120124.

19. Lopyirin A. I. Deystvie razlichnyih progestagennyih preparatov pri stimulyatsii sinhronizatsii ohotyi u ovets [The effect of various progestogenic drugs in stimulating hunting synchronization in sheep] / A. I. Lopyirin, V. I. Donskaya, L. P. Rak, P. V. Surkov // Ovtsevodstvo. - 1969. - # 8. - S. 27-30.

20. Lopyirin A. I. Biologiya razmnozheniya ovets [Biology of reproduction of sheep] / A. I. Lopyirin. -M.: Kolos, 1971. - 318 s.

21-25. Vide supra.

26. Paducheva A. L. Gormonalnyie preparatyi v zhivotnovodstve [Hormonal preparations in animal husbandry] / A. L. Paducheva. - M.: Rosselhozizdat, 1979. - 102 s.

27. Donskaya V. I. Sravnitelnaya otsenka razlichnyih sposobov stimulyatsii poliovulyatsii u ovets [Comparative assessment of various methods of stimulating poliovulation in sheep] / V. I. Donskaya, M. M. Kunizhev // Razvedenie ovets i koz. Sherstovedenie. Sbornik nauchnyih trudov. -Stavropol, VNIIOK. - 1983. - S. 87-90.

28. Klinskiy Yu. D. Ispolzovanie prostaglandinov dlya regulyatsii vosproizvoditelnoy funktsii ovets [The use of prostaglandins to regulate the reproductive function of sheep] / D. Yu. Klinskiy, A. N. Alekseenko // Zhivotnovodstvo. - 1980. - # 4. - S. 54-57.

29-33. Vide supra.

34. Aksenova P. V. Variabelnost otveta yaichnikov pri induktsii poliovulyatsii u koz [Variability of the ovarian response during the induction of polio

in goats] / P. V. Aksenova, M. M. Aybazov, D. V. Kovalenko // Aktualnyie voprosyi veterinarnoy biologii. - 2012. - # 2 (14). - S. 17-21.

35-39. Vide supra.

40. Shihov I. Ya. Transplantatsiya embrionov u ovets [Embryo transplantation in sheep] / I. Ya. Shihov, L. A. Istomina, E. Poladov i dr. // Ovtsevodstvo. - 1985. - # 6. - S. 25-27.

41. Ernst L. K. Transplantatsiya embrionov selskohozyaystvennyih zhivotnyih [Transplantation of embryos of farm animals] / L. K. Ernst, N. I. Sergeev // - M.: Agropromizdat, 1989. - S. 127-129.

42. Vide supra.

43. Kasyimov K. Transplantatsiya embrionov u ovets [Embryo transplantation in sheep] / K. Kasyimov, G. Alimzhanov, N. Nauanov i dr. // Zootehniya. -1994. - # 8. - S. 29-30.

44-50. Vide supra.

51. Sergeev N. I. Biotehnika transplantatsii embrionov [Biotechnics of embryo transplantation] / N. I. Sergeev, S. A. Mazepkin // Ovtsevodstvo. - 1987. - # 2. - S. 36-40.

52-54. Vide supra

55. Aksenova P. V. Rezultatyi sinhronizatsii polovogo tsikla u molochnyih koz [Results of synchronization of the sexual cycle in dairy goats] / P. V. Aksenova, M. M. Aybazov, D. V. Kovalenko // Sbornik nauchnyih trudov Stavropolskogo nauchno-issledovatelskogo instituta zhivotnovodstva i kormoproizvodstva. -2012. - T. 3. - # 1-1. - S. 52-54.

56. Aksenova P. V. Effektivnaya shema induktsii poliovulyatsii dlya transplantatsii embrionov u koz [An effective scheme for the induction of poliovulation for embryo transplantation in goats] // P. V. Aksenova, M. M. Aybazov, D. V. Kovalenko, E. R. Sadchikova, I. L. Goldman // Selskohozyaystvennaya biologiya. - 2013. - T. 48. - # 6. - S. 63-69.

57. Aksenova P. V. Nauchnyie osnovyi intensifikatsii vosproizvodstva molochnyih koz [Scientific bases of intensification of reproduction of dairy goats]: dis ... d-ra biol. nauk (06.02.06) / P. V. Aksenova. -Novocherkassk: SKZNIVI, 2012.

58. Aksenova P. V. Nauchnyie osnovyi intensifikatsii vosproizvodstva molochnyih koz [Scientific bases of intensification of reproduction of dairy goats]: avtoref. dis. ... d-ra biol. nauk (06.02.06) / P. V. Aksenova. - Novocherkassk: SKZNIVI, 2012.

59. Aksenova P. V. Razrabotka effektivnyih shem induktsii poliovulyatsii u molochnyih koz s primeneniem razlichnyih preparatov [Development of effective schemes for the induction of polio in dairy goats using various drugs] / P. V. Aksenova, M. M. Aybazov, D. V. Kovalenko // Rossiyskiy veterinarnyiy zhurnal. Selskohozyaystvennyie zhivotnyie. - 2012. - # 4. - S. 18-19.

60. Aksenova P. V. Tehnika transplantatsii embrionov u melkih zhvachnyih [Technique of embryo transplantation in small ruminants] / P. V. Aksenova, A. M. Ermakov // Veterinariya, zootehniya i biotehnologiya. - 2014. - # 12. - S. 21-24.

61. Aksenova P. V. Otsenka kachestva i ustoychivosti k kriokonservatsii embrionov koz v zavisimosti ot stadii razvitiya [Assessment of the quality and resistance to cryopreservation of goat embryos depending on the stage of development] / P. V. Aksenova, A. M. M. Aybazov, M. S. Seitov // Izvestiya Orenburgskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta. - 2013. -# 6 (44). - S. 85-87.

62. Patent na izobretenie RU 2396344 C1. Sreda dlya kultivirovaniya doimplantatsionnyih embrionov koz in vitro [Medium for in vitro cultivation of preimplantation goat embryos] / Aksenova P. V., Aybazov A. M. M. 10.08.2010. Zayavka # 2008152992/13 ot 31.12.2008.

63. Aybazov A. M. M. Vozmozhnost i perspektivyi polucheniya pervichnyih transgennyih zhivotnyih

- produtsentov belkov cheloveka [Possibility and prospects of obtaining primary transgenic animals -producers of human proteins] / A. M. M. Aybazov, P. V. Aksenova // Ovtsyi, kozyi, sherstyanoe delo. -2012. - # 3. - S. 38-40.

64. Aybazov A. M. M. Sinhronizatsiya polovoy ohotyi u molochnyih koz [Synchronization of sexual hunting in dairy goats] / A. M. M. Aybazov, L. S. Malahova, P. V. Trubnikova // Ovtsyi, kozyi, sherstyanoe delo.

- 2006. - # 2. - S. 32-33.

65. Aksenova P. V. Rezultatyi aprobatsii usovershenstvovannogo metoda transplantatsii embrionov u ovets: analiz prizhivlyaemosti zigot, effektivnosti vyinashivaniya ploda i razvitiya yagnyat-transplantantov [Results of testing the improved method of embryo transplantation in sheep: analysis of engraftment of zygotes, the effectiveness of bearing fetuses and the development of transplant lambs] / P. V. Aksenova // Rossiyskiy veterinarnyiy zhurnal. Selskohozyaystvennyie zhivotnyie. - 2014. - # 1. - S. 11-13.

66-109. Vide supra.

110. Aksenova P. V. Risk razvitiya postanetezionnoy miopatii u zubrov [The risk of developing post-anesthetic myopathy in bison] / P. V. Aksenova // Veterinarnaya patologiya. - 2018. - # 3 (65). - S. 52-60.

111. Aksenova P. V. Veterinariya zubrov. Prakticheskoe rukovodstvo [Veterinary bison. A practical guide] - Vsemirnyiy fond dikoy prirodyi WWF, Moskva, 2000/- 224 c., ISBN 978-5-6043714-9-7

112. Vide supra.

113. Tsibizova E. L. Osobennosti proyavleniya reproduktivnoy funktsii u zubra evropeyskogo (Bison Bonasus) pri poluvolnom soderzhanii v usloviyah pitomnikov [Features of the manifestation of reproductive function in European bison (Bison Bonasus) with semi-free keeping in nursery conditions] / E. L. Tsibizova, P. V. Aksenova, A. M. Ermakov // Veterinarnaya patologiya. - 2015. - # 1 (51). - S. 54-63.

114. Tsibizova E. L. Metodyi regulyatsii polovozrastnogo sostava zubrov v pitomnike Okskogo zapovednika [Methods of regulation of the sex and age composition of bison in the nursery of the Oksky reserve] / E. L. Tsibizova, P. V. Aksenova, A. M. Ermakov // Veterinarnaya patologiya. - 2014. - # 1 (47). - S. 49-54.

115. Aybazov M. M. Rezultatyi stimulyatsii polovoy ohotyi u molochnyih koz v anestralnyiy period [Results of stimulation of sexual heat in dairy goats in the anestral period] / M. M. Aybazov, L. S. Malahova, P. V. Trubnikova // Ovtsyi, kozyi, sherstyanoe delo. - 2006. - # 2. - S. 34-35.

DOI: 10.25690/VETPAT.2021.35.40.010 Aksenova P. V.

EMBRIO TRANSFER PERSPECTIVES IN WILD ENDANGERED RUMINANTS

Key words: embryos transplantation, synchronization, estrus, ovulation, corpus luteum, follicle, oocyte, embryo, polyovulation, sexual cycle, cultivation in vitro, fertilization, blastocyst, implantation, donor, recipient, rare and endangered animals, wild animals, interspecies cloning, somatic cell nuclear transfer

Abstract: Embryo transfer may be one of the ways by which it is possible to restore rare and endangered animal species. Obtaining the offspring by interspecies nuclear transfer of somatic cells of wild animals into oocytes of domestic animals and the hybrid embryos transplantation to recipients makes it possible to include new genes in inbred populations of rare species, restore and preserve endangered animals. Work in these areas has achieved serious results, which testify to the significant potential of this technology. This work is an overview of world research in this area.

Сведения об авторе:

Аксенова Полина Владимировна, доктор биол. наук, руководитель Службы здоровья животных «Василиск», главный научный сотрудник Центра научных компетенций ФГБОУ ВО «Донской государственный технический университет»; д. 1, пл. Гагарина, г. Ростов-на-Дону, Ростовская область, Российская Федерация, 344000; e-mail: vasiliskvet@ yandex.ru

Author affiliation:

Aksenova Polina Vladimirovna, D. Sc. in Biology, Head of the Animal Health Service «Vasilisk», Chief Researcher of the Center for Scientific Competencies of the FSBEI HE «Don State Technical University»; house 1, Gagarin square, Rostov-on-Don city, Rostov Region, Russian Federation, 344000; e-mail: [email protected]